φC31位点特异性整合酶系统在生物医学上的应用

理想的基因转移系统是成功实现基因治疗的关键因素。噬菌体φC31位点特异性整合酶体系集有效性和安全性于一体,通过介导特异性识别位点间的同源重组反应,将外源基因整合到基因组中,使转基因的表达达到持续、高效的目的,为非病毒载体转移系统在遗传病基因治疗上的应用开辟了新的途径。     

фC31位点特异性整合酶系统在生物医学上的应用

理想的基因转移系统是成功实现基因治疗的关键因素。噬菌体фC31位点特异性整合酶体系集有效性和安全性于一体，通过介导特异性识别位点间的同源重组反应，将外源基因整合到基因组中，使转基因的表达达到持续、高效的目的，为非病毒载体转移系统在遗传病基因治疗上的应用开辟了新的途径。     

基因打靶技术及其发展和应用

通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定位点的基因打靶技术,已经成为哺乳动物遗传学领域的重要工具。本文拟针对胚胎干细胞和体细胞的基因打靶的原理、技术路线及基因打靶技术的发展和应用作一综述。     

基因打靶技术及其发展和应用

通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定位点的基因打靶技术，已经成为哺乳动物遗传学领域的重要工具。本文拟针对胚胎干细胞和体细胞的基因打靶的原理、技术路线及基因打靶技术的发展和应用作一综述。     

同源重组在基因定点整合应用中的评估

通过同源重组纠正基因缺陷是基因治疗研究的理想方式。与反转录病毒基因治疗相比，该方法有其独特的优点，也有其局限性。但经过研究探索，该方法将有可能成功地用于基因治疗。     

同源重组在基因定点整合应用中的评估

通过同源重组纠正基因缺陷是基因治疗研究的理想方式。与反转录病毒基因治疗相比，该方法有其独特的优点，也有其局限性。但经过研究探索，该方法将有可能成功地用于基因治疗。     

包装细胞系及其在基因治疗研究中的应用

以逆转录病毒作载体的基因转移系统是基因治疗最基本的手段之一包装细胞系的构建是这一系统的重大突破它的主要特性是能将重组逆转录病毒载体包装成具一次感染性的缺失性病毒粒子,以此感染靶细胞,即能将外源基因稳定地整合到靶细胞的基因组上。通过改良,得到了能产生具广泛宿主范围的重组病毒的包装细胞系,并杜绝了辅助病毒的产生。以重组逆转录病毒载体-包装细胞系这一系统已建立了很多体外以至整体动物内基因转移及表达的模型,有力地促进了基因治疗研究的发展。     

φC31整合酶与生物医学

来源于链霉菌噬菌体фC31的整合酶可通过介导链霉菌attB序列与多种生物内源性特异性序列产生重组反应,将外源基因定点整合到生物基因组中。在基因治疗研究中应用φC31整合酶,可使外源基因长期高水平表达,从而达到较好的治疗效果;且由于外源基因定点整合,故安全隐患较小。此外,фC31整合酶还可以用来生产外源基因定点整合的转基因动物,在基础研究和应用研究领域都有很高的潜在应用价值。     

靶向性基因治疗

靶向性基因治疗是一种理想的基因治疗模式，本文总结了近年来这一领域的发展情况，并从细胞水平及分子水平分别加以阐述，着重介绍受体介导的基因治疗和基因的同源重组。     

靶向性基因治疗

靶向性基因治疗是一种理想的基因治疗模式，本文总结了近年来这一领域的发展情况，并从细胞水平及分子水平分别加以阐述，着重介绍受体个导的基因治疗和基因的同源重组。     

腺相关病毒载体研究进展

腺相关病毒作为基因治疗的载体,具有感染范围广,可长效稳定地表达外源基因,可定点整合至宿主基因组等诸多优点而备受青睐.近年来,有关腺相关病毒及重组腺相关病毒的生物学特点有不少研究进展,本文就此做一综述.     

腺相关病毒载体研究进展

腺相关病毒作为基因治疗的载体，具有感染范围广，可长效稳定地表达外源基因，可定点整合致宿主基因组等诸多优点而备受青睐。近年来，有关腺相关病毒及重组腺相关病毒的生物学特点有不少研究进展，本文就此做一综述。     

嵌合性RNA／DNA寡核苷酸位点特异性修复基因损伤—一种新的单基因病治疗途径

近年来，无论是在RNA或是DNA水平，基因治疗的有关技术方法的研究发展迅速，但仍有许多缺陷。最近，一种新的用于准确修复基因组DNA中单个碱基因突变或缺失的方法正日趋完善，该方法利用同源重组原理，使用一段含有DNA和RNA残基的嵌合寡核苷酸直接修复基因损伤，能够在DNA水平直接转换基因组中的碱基，以达到永久性修复遗传性损伤的目的且克服了一些目前存在的缺陷。本就此作一综述。     

嵌合性RNA／DNA寡核苷酸位点特异性修复基因损伤——一种新的单基因病治疗途径

近年来 ,无论是在 RNA或是 DNA水平 ,基因治疗的有关技术方法的研究发展迅速 ,但仍有许多缺陷。最近 ,一种新的用于准确修复基因组 DNA中单个碱基突变或缺失的方法正日趋完善 ,该方法利用同源重组原理 ,使用一段含有 DNA和RNA残基的嵌合寡核苷酸直接修复基因损伤 ,能够在 DNA水平直接转换基因组中的碱基 ,以达到永久性修复遗传性损伤的目的且克服了一些目前存在的缺陷。本文就此作一综述     

腺相关病毒载体介导乳腺癌BA46基因转移的实验研究

目的　评价腺相关病毒 (AAV)为载体介导乳腺癌BA4 6基因转导树突状细胞 (DC)的可行性。方法　构建重组质粒d16 95 /BA4 6 p5/NeoSV40 (简称rAAV/BA4 6 /Neo) ,并制备该病毒。分离外周血单核细胞 (DC前体细胞 ) ,采用GM CSF、IL 4、TNF α诱导 ,以rAAV/BA4 6 /Neo病毒感染DC前体细胞 ,感染后 72h ,流式细胞仪检测rAAV/BA4 6 /Neo病毒感染效率及BA4 6表达情况 ,6d后 ,RT PCR分析BA4 6mRNA转录情况 ,PCR/Southernblot分析BA4 6基因染色体整合情况。结果　AAV成功介导BA4 6基因转导DC ,BA4 6在DC内良好表达 ,病毒基因整合入DC基因组内。结论　AAV载体成功介导BA4 6基因转导DC ,为以DC为基础的乳腺癌的基因治疗打下基础。     

BLM转染培养的Bloom综合征细胞可减少姐妹染色单体交换率至正常水平

隐性遗传病中 ,异常的细胞表型是由于缺乏正常的等位基因。这可以通过实验将正常等位基因导入突变细胞来纠正。当正常的等位基因表达 ,且其编码的蛋白产量足够多的情况下 ,异常的细胞表型能被纠正或逆转。隐性传递的 Bloom综合征 (BS)中异常体细胞表型特征产生于一种特殊类型的基因组不稳定性。其重要表现是高重组率和姐妹染色单体交换(SCE)数目的增加。 BLM是 Bloom综合征中突变的一种基因 ,编码 1 41 7个氨基酸的蛋白质 ,包括一个与 DNA解旋酶 Rec Q亚基同源的结构域。Rec Q基因在维持基因组稳定性的细胞机制中有一定作用。观察到 …     

哺乳动物细胞DNA非同源末端连接及其生物学意义

DNA双链断裂是发生在哺乳动物细胞基因组水平上最严重的损伤。双链断裂得不到修复,细胞将会死亡或发生染色体断裂、丢失,若是错误修复将导致基因突变或基因组不稳定,增加癌症的风险度。哺乳动物细胞有两种重要的DNA双链断裂修复方式:非同源末端连接和同源重组。非同源末端连接途径除了在DNA双链断裂修复中起重要作用外,在V(D)J重组、HIV-1病毒整合宿主基因,以及假基因和重复序列的插入上也起着重要作用。由于非同源末端连接参与了机体许多重要的生理过程,因而其研究受到极大关注,并取得突破性的进展。     

Rep蛋白介导的定点整合研究进展

建立安全可靠的、治疗基因能长期表达的系统是基因治疗的重要目标,这一目标可以通过促进目的DNA序列定点整合至宿主基因组的特定位置而达到。腺相关病毒的非结构蛋白Rep与顺式元件联合运用可以介导外源基因定点整合至人类基因组19号染色体AAVS1位点,本文就Rep蛋白的特性、介导整合机制及近年来在介导定点整合方面的研究作一综述。     

含人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1重组腺病毒的构建与体外表达

从人肝癌组织中提取总RNA，RT—PCR合成hTIMP-1的全长cDNA，克隆到腺病毒载体AdEasy系统的穿梭质粒pAdTraek—CMV上，与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183受体菌中进行同源重组，成功构建含hTIMP-1全长eDNA的重组腺病毒载体，经293细胞的包装、扩增，生成含hTIMP-1基因的重组腺病毒AdhTIMP-1并实现体外表达，为进一步研究肝癌浸润和转移机理以及肝癌的基因治疗提供实验基础。     

遗传病的转基因动物模型

以小鼠为主要实验对象建立的转基因动物遗传病模型,结合同源重组技术和YAC大片段基因分离、克隆技术,将为基因调控研究和基因治疗研究带来光明前景。