大鼠局灶脑缺血/再灌注损伤后细胞凋亡及TNF-α表达的研究

目的　探讨大鼠局灶脑缺血再灌注损伤与细胞凋亡及肿瘤坏死因子 (TNF -α)表达的关系。方法　用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型 ,观察局灶脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及TNF -α的表达 ,并与假手术对照组作比较。结果　局灶脑缺血再灌注损伤后TNF -α表达及细胞凋亡数均比对照组明显增加 ,神经功能缺陷评分及脑含量水平亦明显上升 ,P均 <0 .0 1。结论　脑缺血再灌注损伤与TNF -α表达及细胞凋亡有密切关系     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后P-erk表达及神经元凋亡的变化

目的 研究磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-excelluar signal-regulated kinase,P-erk)在局灶性脑缺血再灌注中的作用. 方法 建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化ERK的表达;TUNEL染色检测神经元凋亡. 结果在脑缺血再灌注大鼠检测到磷酸化ERK在梗死中心灶和缺血半暗带都存在阳性表达,于再灌注6 h达到峰值,12 h后逐渐下降;而凋亡细胞于再灌注24 h开始有明显的阳性细胞增加,48 h细胞凋亡达到高峰(P<0.01). 结论 局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加,提示缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋亡和非程序性死亡过程.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、STAT3蛋白表达及细胞凋亡

目的 观察磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白在局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达及细胞凋亡的变化.方法 采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,应用免疫组织化学及Western blotting检测大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达水平的变化.利用原位缺口末端标记法研究神经细胞凋亡的变化.结果 与假手术组大鼠相比,脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达明显增强,以缺血周边区表达最明显,再灌注24 h达高峰,之后开始下降,再灌注168h仍有少量表达.缺血再灌注损伤后凋亡细胞也显著增多,再灌注24h达高峰,凋亡细胞的变化与磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达变化一致.结论 脑缺血再灌注损伤后引发JAK2、STAT3的活化及超量表达可能与神经细胞生存和凋亡有关,JAK2/STAT3信号通路可能参与了脑缺血再灌注损伤与修复的病理生理过程.     

GM-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas蛋白的表达与细胞凋亡的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Fas在海马区表达的变化，进一步探讨脑缺血再灌注后细胞凋亡的机制和GM-1的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，同时给予GM-1治疗，采用TUNEL和免疫组化方法观察细胞凋亡及Fas蛋白在脑缺血再灌注后的变化规律。结果脑缺血再灌注后海马区神经细胞过度地表达Fas蛋白，并且该区出现明显的神经细胞凋亡；GM-1能够使Fas蛋白的表达高峰及神经细胞凋亡高峰下调。结论Fas的过度表达可能是脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的重要原因。GM-1可能通过抑制Fas的表达，减少神经细胞凋亡发挥脑保护作用。     

转化生长因子β1对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型，立体定向下侧脑室内注入。TGF—β1，观察不同剂量TGF—βl对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡、肿瘤坏死因子(TNF—α)表达的影响。结果TGF—β1小剂量、高剂量治疗组TNF—a表达及细胞凋亡较对照组均明显降低，神经功能缺陷评分明显下降，小剂量与高剂量组比较无明显差异。结论TGF—β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，且与剂量无明显关系；其机制可能为抑制TNF-α表达及细胞凋亡。     

细胞外信号调节激酶在局灶性脑缺血中的表达

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)在局灶性脑缺血再灌注海马神经元中的表达.方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.大鼠随机分成假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(I/R组),每组根据再灌注时间不同再分为3,6,24,48和72 h亚组,每亚组各6只鼠.在预定时间点进行HE染色观察组织学变化;TUNEL法检测CA1区细胞凋亡的动态变化规律;免疫组织化学方法研究ERK的表达特征.结果:MCAO后海马神经元存活数量较假手术组明显减少;凋亡细胞大量出现,以48 h为高峰;MCAO后3 h,磷酸化ERK在局灶性脑缺血大鼠脑组织中显著升高,6 h达到最高峰,72 h恢复到正常水平.结论:脑缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋亡过程.     

大鼠局灶性脑缺血BCL-2及BCL-XL蛋白的表达

目的 :探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中bcl- 2及bcl-xl蛋白的表达。方法 :采用健康雄性大鼠大脑中动脉阻断 (MCAO)模型 ,阻断大脑中动脉 (MCA)血流 2h后再灌注 ,再灌注 0 .5h ,3h ,6h ,12h ,2 4h和 4 8h断头取脑后 ,进行bcl- 2、bcl-xl蛋白免疫组化染色。结果 :①Bcl- 2、Bcl-xl蛋白在脑缺血再灌注早期表达较强 ,3h - 6h达到高峰 ,2 4h～ 4 8h逐渐转阴。②bcl- 2及bcl-xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边 ,梗死中心区及正常区无表达。结论 :局灶性脑缺血再灌注损伤时 ,bcl- 2及bcl-xl表达对神经细胞的凋亡可能起着抑制作用     

益气活血方对气虚血瘀证脑缺血再灌注损伤大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响

目的：探讨益气活血方对气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠Fas、FasL蛋白表达的影响。方法：采用气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉复制局部脑缺血再灌注模型,缺血2h后再灌注l,3,7d。用免疫组化染色法分别检测缺血皮质Fas、FasL蛋白表达。结果：与模型组比较。益气活血方组Fas、FasL蛋白表达显降低。结论：益气活血方可能通过抑制Fas、FasL蛋白表达,减轻气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注损伤。     

金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤后Fas和Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及对Fas、Bcl-2表达的影响。 方法：建立大鼠全脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察不同再灌注时间脑组织fas、bcl-2的表达,以及金纳多给药后的变化。 结果：单纯缺血及再灌注3 h均有Fas蛋白表达,再灌注6 h Fas蛋白表达达高峰,再灌注24 h Fas蛋白表达减少。Bcl-2表达于再灌注3 h达高峰,再灌注6 h呈下降趋势,24 h表达明显减少。金纳多给药组相应时间点Fas蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多。 结论：金纳多对脑缺血再灌注后的细胞凋亡有抑制作用,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

针刺对脑缺血大鼠神经元凋亡的影响

目的观察针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元内细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）和神经元凋亡的影响。方法大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,再灌后针刺大鼠,应用免疫组化、免疫印迹法和流式细胞计数法分别检测CDK4和细胞凋亡。结果缺血组再灌注48h后海马CDK4表达升高,凋亡细胞增多,针刺组CDK4表达和凋亡细胞明显减少（P〈0．01）。结论针刺对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与调控细胞周期因子从而抑制凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后VEGF及VEGFmRNA的表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及VEGFmRNA的表达及意义.方法:制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,动物分为缺血2h再灌注6h、12h、24h、48h、72h及假手术对照组.应用免疫组化法检测VEGF蛋白的表达;RT-PCR法检测VEGF mRNA的动态变化.结果:大鼠缺血再灌注6h,缺血侧脑组织梗死灶周边VEGF免疫阳性反应已出现,24h明显增多,48h达高峰;VEGF mRNA在6h开始上升,12h达高峰,24h开始下降,48～72h接近正常水平.结论:脑缺血再灌注损伤可以诱导VEGF表达增强,提示VEGF对缺血性脑损伤有保护作用.     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响.方法:SD大鼠60只,体质量290～310 g,随机分为假手术组、异丙酚组和对照组,每组20只.用改良Longa法制成鼠脑缺血/再灌注模型(缺血2 h,再灌2 h),光镜下观察细胞形态学变化,TUNEL法观察细胞凋亡变化.结果:光镜检查异丙酚组细胞肿胀坏死明显减轻,凋亡细胞及坏死细胞明显减少.再灌2 h后对照组凋亡细胞比率、凋亡细胞阳性率、TUNEL阳性率均较假手术组高(P＜0.01),异丙酚组凋亡细胞阳性率、TUNEL阳性率较对照组减少(P＜0.05).结论:异丙酚能减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,具有抑制神经细胞凋亡坏死的作用.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后血清中TNF-α变化及雷公藤多甙的影响

目的：研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脑缺血再灌注损伤后的动态变化及雷公藤多式(GTW)对其影响。方法：用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，用放免法到定血清中TNF-α含量变化，灌胃法给药。结果：大鼠脑缺血lh再灌注比，血清中TNF-α无变化，3h升高，6h达高峰，12h后下降，24h仍高于假手术组。GTW能抑制TNF-α水平升高，生理盐水治疗组与缺血再灌注组水平相同。结论：大鼠脑缺血再灌注损伤后，TNF-α合成、分泌增加，GTW能降低血清中TNF-α含量。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Jak1的表达

目的　探讨Jak基因在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其在缺血性神经细胞损伤中的可能作用。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的模型 ,用免疫组化方法观察Jak1蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑组织中的表达。结果脑缺血再灌注损伤后 12h在栓塞侧梗死区神经元可见少量Jak1蛋白阳性表达 ,2 4h达高峰。梗死周边区表达最显著 ,表达持续时间达 1周。结论Jak1在脑缺血后表达增加 ,表明Jak1可能参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理过程。     

脑缺血再灌注后内皮细胞凋亡与p53表达的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡及其与p53蛋白表达的关系。方法 采用原位末端标记法和免疫组化法分别观察脑缺血再灌注不同时间后血管内皮细胞凋亡和p53蛋白的表达。结果 脑缺血再灌2h在缺血周围区即有凋亡内皮细胞出现，12－24h达高峰，之后逐渐下降，至21d与假手术组已无显性差异。脑缺血再灌注6h在缺血周围区p53蛋白开始表达，24－48h达高峰，之后逐渐下降，至7d与假手术组已无显性差异。p53蛋白表达高峰时间迟于内皮细胞凋亡24h。结论 脑缺血再灌注损伤中凋亡是血管内皮细胞的死亡形式之一，p53表达蛋白参与缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡机制的调节。     

神经节苷脂GM-1对大鼠缺血性脑损伤保护作用的实验研究

目的:研究神经节苷脂GM-1对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及Fas、Bcl-2表达的影响。方法:建立全脑缺血再灌注模型,应用二苯胺法和免疫组织化学方法观察脑缺血后3h、6h、24h脑组织DNA裂解率变化及Fas、Bcl-2表达,以及GM-1给药后的变化。结果:随着再灌注时间的延长,DNA裂解率变化明显增加,24h达高峰,Fas蛋白表达于再灌注6h达高峰,Bcl-2表达于再灌注3h达高峰,以后逐渐呈下降趋势;GM-1给药组相应时间点的DNA裂解率及Fas蛋白表达明显减少,Bcl-2表达增加。结论:GM-1能抑制脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生,对脑缺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后TNF-α及ICAM-1的相关性分析

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脑缺血再灌注损伤不同时间段的表达规律,探讨ICAM-1、TNF-α在脑缺血再灌注损伤中的关系.方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠大脑中动脉阻塞2 h,分别再灌注2、6、12、24、48、96h,免疫组织化学法测定ICAM-1、TNF-α表达水平.并设正常组、假手术组及永久缺血组对照.结果ICAM-1的表达永久缺血组、缺血再灌注组ICAM-1明显高于正常对照组和假手术组(P＜0.01);与永久缺血组比较,缺血再灌注组除再灌注2 h时段外,ICAM-1表达明显增高(P＜0.05);脑缺血再灌注2 h组局部脑组织ICAM-1的表达于再灌注48h达到峰值,再灌注96h仍保持较高水平.TNF-α的表达缺血再灌注组大鼠缺血侧半球TNF-α的表达于再灌注2 h开始升高,再灌注12 h,阳性细胞显著增多,24h达到高峰,其后逐渐下降,96h达基础水平;缺血再灌注组TNF-α的表达较正常组、假手术组有显著差异(P＜0.01),比永久缺血组TNF-α阳性细胞低,但无统计学意义(P＞0.05).缺血再灌注组TNF-α的表达与ICAM-1的表达在24、48、96h时间段呈正相关(r分别为0.765、0886、0.787,P＜0.05);TNF-α的表达早于ICAM-1的表达,且TNF-α与ICAM-1表达部位相同.结论大鼠脑缺血再灌注损伤后,ICAM-1、TNF-α参与了脑缺血后的炎症反应,且二者有明显的相关性TNF-α可能诱导了ICAM-1的上调,在神经元迟发性坏死中起着重要作用.     

转化生长因子β_1对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法　用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型 ,立体定向下侧脑室内注入TGF - β1,观察不同剂量TGF - β1对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡、肿瘤坏死因子 (TNF -α)表达的影响。结果　TGF - β1小剂量、高剂量治疗组TNF -α表达及细胞凋亡较对照组均明显降低 ,神经功能缺陷评分明显下降 ,小剂量与高剂量组比较无明显差异。结论　TGF - β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用 ,且与剂量无明显关系 ;其机制可能为抑制TNF -α表达及细胞凋亡。     

穴位埋药对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪缓释剂穴位埋药（后简称埋药法）对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas蛋白表达的影响。方法用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,免疫组化法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas的表达。结果穴位埋药组各时相组Fas蛋白表达均显著低于模型组,与电针组和腹腔注射组比较差异也较显著。结论川芎嗪缓释剂穴位埋药法能下调促凋亡基因Fas的表达,发挥神经保护作用,可能是穴位埋药抗局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡的机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织神经细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl蛋白检测

目的：探讨Bcl-2、Bcl-xl与神经细胞凋亡在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织中的表达。方法：栓线法阻断健康雄性大鼠大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注,分别于再灌注0．5h,3h,6h,12h,24h和48h断头取脑,在前联合处连续切片,分别进行TUNEL染色及Bcl-2、Bcl-xl蛋白免疫组化染色。以假手术组作对照。结果：①脑缺血区部分神经细胞发生凋亡,再灌注0．5∽48h,凋亡细胞逐渐增多,凋亡指数随再灌注时间的延长而逐渐升高。至48h时达高峰。②Bcl-2、Bcl-xl蛋白在脑缺血再灌注早期开始表达,36∽h达到高峰,24h开始逐渐降低,至48h时与对照组差异无统计学意义。③凋亡细胞,Bcl-2及Bcl-xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边,梗死中心区及正常区无表达。结论：局灶性脑缺血再灌注损伤过程中神经细胞凋亡起着重要的作用,而Bcl-2及Bcl-xl抑制神经细胞的凋亡。