mdr1基因转染骨髓造血细胞移植联合超剂量化疗治疗兔VX2肝癌的实验研究

目的　研究mdr1基因转染骨髓造血细胞移植联合超剂量阿霉素化疗在兔VX2肝癌治疗中的骨髓保护和治疗作用。方法　通过逆转录病毒包装细胞PA317 HaMDR1/A作为载体 ,将mdr1基因转入兔骨髓单个核细胞并自体移植到VX2兔肝癌模型体内 ,在阿霉素超剂量化疗中观察骨髓造血功能的保护和肿瘤的治疗效果。结果　mdr1基因成功转入兔骨髓单个核细胞 ,体外 4d转染率达 35 % ;转染细胞移植后能定植于受体骨髓中并功能性表达 ,定植率为 9.5 %。在超剂量化疗中 ,mdr1基因能有效保护受体骨髓的造血功能 ,荷瘤动物能耐受 3倍剂量阿霉素化疗 ,外周血白细胞数能维持在 (4 .2 6± 1.0 3)× 10 9/L ;同时超剂量化疗能迅速杀灭肿瘤细胞 ,使荷瘤动物存活时间明显延长 (P <0 .0 5 ) ,治愈率明显提高 (P <0 .0 5 )。结论　mdr1基因转染骨髓造血细胞移植能明显提高受体骨髓对化疗药物的耐受性 ,联合超剂量化疗能快速、有效的杀灭肿瘤细胞 ,提高恶性肿瘤的治愈率。     

腺病毒介导多药耐药基因1保护骨髓的体外实验研究

目的构建表达多药耐药基因1（MDR1）的重组腺病毒载体，体外实验研究MDR1基因对骨髓的保护作用。方法用基因工程技术将MDR1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上，利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组，然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293细胞，并在其中包装、扩增、收获病毒。进一步采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定，利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因，对病毒滴度进行检测。将收集的重组腺病毒Ad5-MDR1感染小鼠单个核细胞，通过荧光显微镜、免疫组化及流式细胞仪对感染效率及保护作用进行检测，并用Westernblot法检测P-gp的表达。结果酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功，病毒滴度达8．3×10^11pfu／ml。对小鼠单个核细胞的感染效率可达10％～15％，转染小鼠单个核细胞48h后，有P-gp蛋白的明显表达。结论成功构建了表达MDR1的重组腺病毒载体，证实MDR转染对骨髓具有保护作用。     

多药耐药基因转染脐血单个核细胞及其表达与功能的体外研究

目的：为克服白血病化疗中的骨髓抑制，采用含人多药耐药（MDR1）基因全长cDNA逆转录病毒载体转染入脐血单个核细胞，探索一种MDR1基因导入脐血造血细胞稳定、有效的方法，评价MDR1基因转染脐血细胞及其功能的表达，为体内转染MDR1基因保护骨髓免受大剂量化疗药物损伤提供条件。方法：采用含有MDR1基因表达质粒pHaMDR1/A的包装细胞PA317传代培养产病毒法，通过浓缩病毒上清液将MDR1基因导入人脐血单个核细胞，应用聚合酶链反应（PCR）方法、免疫组化法、流式细胞学等方法从基因、蛋白质、功能及细胞生物学特性等不同水平检测MDR1基因在脐血单个核细胞的表达、转染率及其与转染时间的关系和功能的表达；转染行为是否影响脐血细胞生物学特性。结果：（1）建立了一种安全可行、稳定高效的MDR1基因体外转染脐血造血细胞的体系和方法；（2）PCR方法证实外源性MDR1基因可有效性地体外整合到脐血单个核细胞中；（3）免疫组化法测得2日、4日、6日转染率分别为18.0%、29.8％、34.7%;(4)柔红霉素排出试验证实导入的MDR1基因表达产物P-gp有正常的生物学功能；（5）转染后的脐血细胞周期生物学特异性无异常。结论：MDR1基因体外转染脐血造血细胞是安全可行的，且在体外有稳定、有效的表达。这一方法为进一步在化疗骨髓保护的体内实验提供了有利的依据。     

mir-34a模拟物转染人脑胶质瘤细胞U87对Dll1基因表达的影响

目的 观察mir-34a对人脑胶质瘤细胞U87中Dll1基因和蛋白表达水平的影响,探讨Dll1是否为mir-34a的靶基因.方法 将人脑胶质瘤U87细胞分为mir-34a模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组,根据人源mir-34a序列,设计并合成其双链模拟物(mir-34a mimics).将mir-34a mimics以脂质体Lipofectamine 2000包裹,并转染至人脑胶质瘤细胞U87中,转染后48 h采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内Dll1基因mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞内Dll1蛋白表达水平.实验数据采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析.结果 转染后48 h模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组细胞内Dll1基因 mRNA 相对表达水平分别为1.26±0.09、1.29±0.03、1.10±0.12和1.39±0.08;转染后48 h模拟物组、阴性对照组、脂质体组和空白对照组细胞内Dll1蛋白相对表达水平分别为0.011 34±0.041 90、0.628 09±0.035 00、0.913 28±0.036 20和0.868 60±0.039 00.模拟物组Dll1蛋白表达水平均明显低于阴性对照组、脂质体组和空白对照组(Pa＜0.05);而模拟物组Dll1的mRNA表达水平与其他3组比较差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 人脑胶质瘤细胞U87中,mir-34a可通过下调Dll1蛋白而非基因表达水平发挥该靶基因转录后翻译水平的负性调控作用.     

胃液稳定微泡实验早期诊断早产儿呼吸窘迫综合征

目的：早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)需要做出早期诊断才能指导呼吸机和肺表面活性物质的及时使用。该研究的目的是明确胃液稳定微泡实验(stab le m icrobubb le test,SMT)早期诊断早产儿RDS的价值,为预防性使用肺表面活性物质提供指导。方法：对101例收治于日本岩手医科大学新生儿重症监护室的早产儿,胎龄31±3.5周,(24~35周,)生后30 m in内取胃液做SMT,低倍镜下数出每mm2中直径<15μm的稳定微泡数;1 h内拍胸片,以临床表现及X线结果作为诊断早产儿RDS的金标准。计算SMT早期诊断早产儿RDS的敏感度、特异度及阳性、阴性预测值,观察以SMT结果指导肺表面活性物质使用的临床价值。结果：101例早产儿中诊断为RDS者31例,其中微泡数<10个/mm2者22例,10~20个/mm2者7例,>20个mm2者2例;非RDS者共70例,其中<10个/mm2者仅1例,10~20个/mm2者2例,>20个mm2者67例。以胃液微泡数<10个/mm2作为界值,SMT预测并早期诊断RDS的敏感度及特异度分别为70.97%和98.57%,阳性预测值及阴性预测值分别为95.65%和88.46%;以胃液微泡数<20个/mm2作为界值,SMT预测并早期诊断RDS的敏感度及特异度分别为93.55%和95.71%,阳性预测值及阴性预测值分别为90.63%和97.10%。微泡数<10个/mm2者均接受肺表面活性物质替代治疗,临床效果显著。结论：SMT法简便、快速、经济,敏感度高,特异性好,能预测并早期诊断早产儿RDS,有助于指导肺表面活性物质的预防性使用,有极高的临床应用价值,值得在国内推广。     

联合转染A20、HO-1基因对大鼠胰岛抗凋亡能力影响的研究

目的 研究A20基因、血红素加氧酶1基因(heme oxygenase 1 gene,HO-1)转染在大鼠胰岛细胞中的表达情况及对体外培养条件下胰岛活性、拮抗放线菌酮(CHX)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的胰岛细胞凋亡作用的影响.方法 构建A20、HO-1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒转移载体,荧光显微镜连续观察EGFP表达情况,评估转基因效率、确定诱导凋亡时机.Western印迹测定A20和HO-I蛋白表达.超敏ELISA试剂盒检测胰岛素浓度.胰岛经CHX+ TNF-α处理48 h进行TUNEL、流式细胞仪检测凋亡率.Western印迹检测半胱氨酸蛋白酶-3的活化.结果 (1)分别以A20和HO-1慢病毒转染胰岛检测表明A20和HO-1蛋白均呈高表达.(2)胰岛细胞经培养48h和96 h,转基因各组胰岛素浓度高于空白对照组(P＜0.01).(3)CHX+ TNF-α诱导胰岛细胞凋亡后,转A20组胰岛素浓度为(93.58 ±4.12) μg/ml、转HO-1组胰岛素浓度为(88.98±4.77) μg/ml,联合转A20和HO-1组胰岛素浓度(103.33 ±3.16) μg/ml,均高于转EGFP组[(9.03±0.65) μg/ml]和空白对照组[(8.86±0.38) μg/ml,P＜0.001].Western印迹法检测显示联合转A20/HO-1基因组活化型半胱氨酸蛋白酶-3表达水平最低.结论 原代胰岛细胞中高效表达的A20和HO-1蛋白具有抗CHX+ TNF-α诱导的胰岛凋亡作用,联合转A20和HO-1基因有协同抗凋亡效应.     

Prohibitin基因转染对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨转染外源性Prohibitin(PHB)基因对体外培养的肾小管上皮细胞株(NRK-52E)表型转化的影响。方法将构建的pcDNA3.1(+)-PHB1、pcDNA3.1(+)-PHB2质粒转染体外培养的NRK-52E细胞作为转染组,以空载体转染NRK-52E细胞为阴性对照组,以正常NRK-52E细胞为空白对照组,分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染24 h、48 h、72 h各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白表达。结果 1.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA及其蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组增高(Pa<0.05),且48 h表达量最高,而阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义。2.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞α-SMA mRNA和蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组降低(Pa<0.05),48 h表达量最低,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义。3.转染组48 h NRK-52E细胞PHB1、PHB2蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量均呈负相关(r=-0.942、-0.869,Pa<0.05)。结论转染外源性PHB基因可以抑制体外培养的NRK-52E细胞的表型转化。     

急性白血病患儿mdr1基因定量表达的研究

目的应用新型MGB探针的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分析方法,研究mdr1 mRNA在K562细胞系和其耐药细胞系K562/A02细胞及急性白血病(AL)患儿细胞中的表达水平。方法运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,设立实时FQ-PCR反应体系,研究mdr1 mRNA在不同类型、不同分期AL患儿白血病细胞中的表达;并就AL患儿初治组、难治复发组、完全缓解组分别与正常对照组比较其mdr1 mRNA表达率和表达量,且在AL患儿3组间再作mdr1 mRNA表达率及其表达量比较,数据均作统计学处理。结果初治和完全缓解期AL患儿mdr1 mRNA表达阳性率和表达水平均较正常对照组升高。难治复发组AL患者白血病细胞mdr1 mRNA表达阳性率和表达水平较其他AL各组明显升高;AL完全缓解患者维持期化疗的随访观察中,部分患儿mdr1 mRNA表达量渐升高,尤其是复发AL患儿升高更显著。结论AL患儿化疗耐药的发生与mdr1 mRNA表达有较密切的联系,应用Taq Man-MGB荧光探针进行实时FQ-PCR检测人类mdr1基因在AL细胞中表达,可为AL患儿个体化化疗方案的合理制定、化疗疗效和预后判断及针对性逆转由于mdr1基因表达导致的多药耐药提供有价值的实验室依据。     

腺病毒介导的p21基因转染肺动脉高压大鼠模型的研究

目的 探讨腺病毒介导的抗增殖性p21基因转染对左向右分流肺动脉高压大鼠模型的肺动脉高压形成的影响.方法 将携带目的 基因的重组腺病毒AdCMV-p21采用脂质体转染法包装、扩增,并稀释成滴度为1.67×108 pfu/L的溶液.将大鼠随机分为空白对照组(n=10)、模型组(n=15)、实验组(n=10)、实验对照组(n=10).模型组和实验组采用套管连接法建立左向右分流肺动脉高压模型,实验组和实验对照组均采用气管吸入法转染AdCMV-p21.测量各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室平均压(mRVP)、右心肥厚指数(RVHI),比较肺高压程度,左肺行免疫组化染色,观察转染效果,右肺HE染色观察肺动脉形态学改变,计算管壁厚度与血管外径比值(WT%).结果 模型组大鼠的mPAP、mRVP、RVHI、WT%较空白对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),表示肺动脉高压模型建立成功;实验组和实验对照组经免疫组化染色可见大鼠肺血管壁平滑肌细胞核内含棕黄色颗粒,表示转染重组腺病毒成功,实验组转基因阳性细胞率为(42.8±11.6)%,与实验对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);实验组大鼠mPAP为(20.06±3.40)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),mRVP为(22.53±2.53)mm Hg,管壁厚度为(9.64±2.14)μm,WT%为(30.8±3.5)%,与模型组各指标相比水平较低(P＜0.05),与实验对照组和空白对照组相比水平偏高(P＜0.05).结论 腺病毒介导的p21基因可通过气管吸入法成功转染至肺高压大鼠模型的肺动脉平滑肌细胞内,并可在一定程度上抑制肺动脉高压的发展.     

婆娑双树基因4干扰载体对儿童睾丸卵黄囊瘤的转染及干扰效果评价

目的 构建婆娑双树基因SALL4的特异性干扰载体并转染儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,评价干扰效果,为研究SALL4基因功能提供实验工具.方法 针对不同干扰位点,设计4条特异性siRNA和1条阴性对照序列.构建SALL4干扰质粒载体pGPU6/GFP/Neo-SALL4 shRNA,分空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)、单加转染试剂组(MOCK组)、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110),分别转染体外培养的儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,采用荧光定量PCR和Western bolt技术比较各组细胞SALL4基因mRNA及蛋白表达情况,筛选出最佳干扰序列.结果 荧光定量PCR结果显示,Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110) SALL4基因mRNA的表达水平分别为100％、(118.0±18.0)％、(128.0±15.0)％、(91.0±21.0)％、(25.0±8.0)％、(59.0±11.0)％、(49.0±13.0)％.SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110相比Blank组、NC组、MOCK组mRNA表达下降,差异有统计学意义(F=3.63,P＜0.05).Western bolt的检测结果显示Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110)SALL4基因蛋白表达水平分别为1、1.1±0.1、1.3±0.3、1.7±0.4、0.2±0.1、0.9±0.2和0.4±0.1.相对Blank组、NC组、MOCK组,SALL4干扰组中SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能降低蛋白表达,其中SALL4-homo-951降低最多,差异有统计学意义(F=7.96,P＜0.05).结论 SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能有效干扰SALL4基因在儿童卵黄囊瘤中的表达,其中SALL4-homo-951干扰效果最佳,可用于下一步实验研究.     

多药耐药基因转染小鼠骨髓细胞及在化疗中骨髓保护的研究

目的 探讨多药耐药基因（mdrl)对骨髓细胞在化疗中的保护作用，寻找一种防治化疗中抗癌药物所致骨髓抑制的有效方法。方法 以小鼠骨髓细胞为靶细胞，通过逆转录病毒介导，采用mdrl表达质粒PHamdrl/A，将mdrl基因转入骨髓细胞。并通过将转染mdrl基因的骨髓细胞回输入同种小鼠体内的骨髓移植动物模型，观察了移植小鼠对抗癌药物的对抗性。同时分别采用PCR技术、免疫组化和柔红霉素排泄试验检测mdrl基因在小鼠体外及体内的表达和功能。结果 ①成功地将mdrl基因导入小鼠骨髓细胞之中，转染率达到35％；②采用程序性移植方法成功建立了mdrl转基因鼠骨髓移植模型；③mdrl基因转染的骨髓细胞在化疗中有明显的骨髓保护作用，对紫杉醇耐受性高于正常6倍，对环磷酰氨耐受高于正常6－7倍；④PCR、免疫组化、柔红霉素排出试验证实mdrl基因在体内有有效整合及表达。结论 mdrl基因转染骨髓细胞在化疗中可保护骨髓细胞免受抗癌药物的损伤。     

Comparison of gadobenate dimeglumine (Gd-BOPTA) with gadopentetate dimeglumine (Gd-DTPA) for enhanced MR imaging of brain and spine tumours in children

Background: Gadobenate dimeglumine (Gd-BOPTA) demonstrates superior enhancement of brain tumours in adult patients than Gd-DTPA. Objective: To determine whether Gd-BOPTA has advantages over Gd-DTPA for enhanced MR imaging of paediatric brain and spine tumours. Materials and methods: Sixty-three subjects, aged 6 months to 16 years, who were enrolled in a prospective, fully blinded, randomized parallel-group phase III clinical trial, received 0.1 mmol/kg doses of either Gd-BOPTA (n=29) or Gd-DTPA (n=34). The MR images were acquired before and within 10 min of contrast agent injection. The primary objective was to compare the difference from pre-dose to post-dose lesion visualization between Gd-BOPTA and Gd-DTPA. Lesion visualization was determined as the sum of individual scores for three criteria of lesion morphological characteristics (lesion border delineation, internal morphology, and contrast enhancement), each assessed qualitatively using 4-point scales. Quantitative evaluation compared changes in lesion-to-background (LBR) and contrast-to-noise (CNR) ratios and per cent enhancement. Monitoring for adverse events and evaluation of vital signs and laboratory values was performed. Results: Pre-dose to post-dose changes in lesion visualization were significantly better for Gd-BOPTA for both lesion level (2.68±2.17 vs. 1.05±1.90, P=0.0106) and patient level (2.55±2.18 vs. 1.14±1.68, P=0.0079) comparisons. The mean pre-dose to post-dose change in CNR was greater for Gd-BOPTA (9.13±15.36) than Gd-DTPA (2.18±9.90), but the difference was only marginally significant (P=0.0779; 95% CI: –0.553, 14.454) because of wide variations of signal intensity between lesions. Similar findings were obtained for LBR and per cent enhancement. No differences between the agents were noted in terms of safety parameters. Conclusions: At an equivalent dose Gd-BOPTA is significantly better than Gd-DTPA for visualization of enhancing CNS tumours in paediatric patients.Presented at the 47th annual meeting of the Society for Pediatric Radiology, May 2004, Savannah, Georgia, USA.     

高渗及低渗造影剂对儿童肾脏功能影响的临床研究

目的初步探讨高渗及低渗造影剂对儿童肾脏功能的影响,以及水化对造影剂相关性肾病(CAN)的预防作用。方法将行静脉肾盂造影或增强CT检查的患儿分为高渗造影剂组(HOCM)27例和低渗造影剂组(LOCM)33例,各组患儿随机分为水化组和非水化组。水化组于造影后立即给予1/5张含钠维持液20ml/kg于3h内静脉滴入,非水化组不给予静脉补液。结果(1)HOCM组造影前,非水化组与水化组相比,SCr、Ccr差异均无统计学意义。造影后,HOCM非水化组SCr[(59·71±12·49)μmol/L]较造影前[(49·91±6·09)μmol/L]显著增高(P<0·05),而Ccr造影后[(71·33±7·51)ml/(min·1·73m2)]较造影前[(97·81±15·10)ml/(min·1·73m2)]明显降低(P<0·05);HOCM水化组SCr、Ccr在造影前、后差异无统计学意义(P>0·05)。HOCM非水化组有3例(23·1%,3/13)发生CAN,HOCM水化组无1例发生CAN(P>0·05)。(2)LOCM水化和非水化组造影前、后SCr、Ccr差异均无统计学意义。LOCM非水化组CAN发生率为6·7%(1/15),LOCM水化组11·1%(2/18)(P>0·05)。(3)HOCM非水化组与LOCM非水化组相比,造影后SCr显著升高(Z=-2·42,P<0·05),而Ccr降低(Z=-2·83,P<0·05)。(4)HOCM与LOCM组共计6例CAN在2周内SCr及Ccr恢复至造影前水平。结论(1)肾功能正常的儿童应用高渗或低渗造影剂均可发生可逆的造影剂肾病;(2)高渗造影剂对儿童血肌酐及肌酐清除率的影响大于低渗造影剂;(3)水化可减轻高渗造影剂对儿童肾脏功能的损害;(4)儿童应用低渗造影剂水化后仍可发生CAN。     

MDR1基因转染K562细胞株及人骨髓干祖细胞的研究

目的 研究应用基因工程技术将外源性ＭＤＲ１基因转染Ｋ５６２及人骨髓干祖细胞,使其获得多药表型,抵抗化疗中出现的骨髓抑制的可行性。方法 采用磷酸钙沉淀法建立产病毒包装细胞有液法分别感染Ｋ５６２细胞和人骨髓干祖细胞;集落筛选法、流式细胞仪、ＳＰ免疫组化法检测基因转染率;ＭＴＴ法、柔红霉素泵出实验检测Ｐｇｐ的功能;流式细胞仪分析细胞周期及ＳＰ法检测ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ基因表达,了解转染行为对靶细胞增殖     

MDR1基因转染的骨髓单个核细胞对放疗后造血功能重建的研究

目的 研究BALB/c小鼠放射治疗后经尾静脉回输携带多药耐药MDR1基因的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BM-MNCs)对造血功能重建的影响.方法 BAB/c近交系小鼠32只,随机分为4组:正常对照组、空白对照组、阴性对照组和实验组.正常对照组不做任何处理,其他3组首先接受1.5Gy60Co-γ射线全身照射,空白对照组尾静脉回输等量生理盐水,阴性对照组经尾静脉回输未转染MDR1基因BM-MNCs,实验组回输已转染MDR1基因BM-MNCs.动态观察各组外周血变化.结果 同种异体回输后第七天,阴性对照组和实验组与空白对照组比较均表现为白细胞恢复提前.实验组7、10、14 d白细胞计数分别为(2.9±0.3)×109/L、(3.2±0.2)×109/L、(4.2±0.3)×109/L,阴性对照组为(2.7±0.2)×109/L、(2.8±0.2)×109/L、(3.5±0.3)×109/L,实验组与阴性对照组比较,白细胞数量增加,差异有统计学意义(t=2.21、3.53、4.73,P＜0.05),14 d后差异无统计学意义(t=0.79,P＞0.05).结论 同种异体携MDR1基因的骨髓单个核细胞移植,能在早期显著提高外周血白细胞数量,利于骨髓造血微环境恢复,加快辐射损伤后骨髓早期造血功能重建.     

尿道下裂的MAMLD1基因研究

目的分析尿道下裂患儿MAMLD1基因突变的比例,探讨该基因在尿道下裂发病中的作用。方法收集100例单纯尿道下裂患者进行MAMLD1基因检测,为实验组,随机选取健康人群来源的200条x染色体为对照组。直接测序检测MAMLD1基因编码区外显子的序列。结果发现2个位点碱基改变（c．1699C〉T,c．1985A〉G）,其中C．1985A〉G为已报道的SNP;c．1699C〉T未报道过,通过Fisher精确概率法比较正常和尿道下裂患者中出现的频率,结果无统计学意义（P=0．625）。结论MAMLD1基因不是我国单纯尿道下裂发生的热点基因。c．1699C〉T是MAMLDl基因新发现的SNP。