筋脉通胶囊对高糖培养雪旺细胞睫状体神经营养因子表达的影响

目的探讨筋脉通胶囊对糖尿病周围神经病变的作用及其机制。方法以Wistar大鼠按成人剂量15倍给药分别制成筋脉通和神经妥乐平含药血清。实验分为空白对照组(不加细胞)、正常对照组(加入正常大鼠血清)、高糖组(加入葡萄糖)、筋脉通组(加入筋脉通含药血清和正常大鼠血清)、神经妥乐平组(加入神经妥乐平含药血清),除空白对照组和正常对照组之外,其余各组均加入50mmol/L葡萄糖培养高糖雪旺细胞模型。采用免疫荧光法检测高糖培养雪旺细胞睫状体神经营养因子(CNTF)的表达,实时荧光定量PCR法检测CNTF-mRNA的表达。结果与正常对照组相比,高糖组、筋脉通组、神经妥乐平组雪旺细胞CNTF及CNTF-mRNA的表达均降低(P0.01);与高糖组相比,筋脉通组与神经妥乐平组雪旺细胞CNTF及CNTF-mRNA表达均增高(P0.01);且筋脉通组雪旺细胞CNTF-mRNA表达较神经妥乐平组增高(P0.05)。结论筋脉通胶囊可以上调高糖培养雪旺细胞CNTF蛋白及其mRNA的表达,从而对糖尿病周围神经病变具有一定的改善作用。     

筋脉通对高糖培养雪旺细胞炎性因子及神经营养因子的影响

目的探讨中药筋脉通(JMT)对高糖条件下雪旺细胞(SCs)炎性因子及神经营养因子蛋白表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为3组,分别以筋脉通胶囊、神经妥乐平(Ntp)及等体积蒸馏水灌胃制备含药血清和正常大鼠血清;原代培养SCs,分为正常组、高糖组、JMT组和Ntp组,48 h后用CCK-8法检测各组SCs细胞增殖,免疫印迹法检测各组SCs细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、NGF及NT-3蛋白的表达,夹心法酶联免疫吸附法测定各组SCs上清液中IL-6、TNF-α、NGF的表达。结果与正常组比较,高糖组SCs增殖活性减低(P0.01),TNF-α蛋白表达上调、分泌量增加(P0.05),IL-1β、L-10蛋白表达上调(P0.05,P0.01),NGF的蛋白表达下调、分泌量减少(P0.05,P0.01),NT-3蛋白表达下调(P0.05)。与高糖组比较,JMT组细胞增殖活性提高(P0.01),TNF-α蛋白表达量及分泌量减少(P0.05),IL-1β、L-10蛋白表达量减少(P0.01),NGF蛋白表达量、分泌量及NT-3蛋白表达增加(P0.05);JMT组SCs细胞增殖活性提高,SCs中TNF-α表达及分泌受到抑制,IL-1β表达量减少,NGF蛋白表达增加,其作用优于Ntp组(P0.05,P0.01)。IL-6蛋白表达和分泌在各组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 JMT含药血清能够提高高糖培养SCs的增殖活性,降低TNF-α、IL-1β、L-10等炎性因子表达,抑制TNF-α分泌,提高NT-3表达,促进SCs分泌NGF,从而起到防治DPN的作用。     

中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响

目的:探讨中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响。方法:运用原代培养的方法,在高糖环境下建立大鼠SCs模型,以弥可保药物组作为对照,并使用Western blot检测糖痹康含药血清对高糖环境下大鼠坐骨神经雪旺细胞NGF蛋白的表达,Real-time PCR检测SCs中NGF mRNA的表达,ELISA检测各组雪旺细胞上清NGF的表达。结果:大鼠雪旺细胞在高糖的环境下培养,其增殖的能力受到显著抑制,同时雪旺细胞NGF的合成显著减少,与糖痹康含药血清培养后的细胞对比,经糖痹康组培养的雪旺细胞,其细胞NGF的表达、合成水平和增殖能力均显著提高。结论:中药糖痹康对高糖条件下大鼠雪旺细胞的增殖能力、NGF mRNA表达和NGF合成的抑制性变化具有显著改善作用。     

消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/eNOS分子信号通路的影响

目的:观察消渴通痹颗粒含药血清对高糖环境下EPCs PI3K/Akt/e NOS分子信号通路的影响。方法:体外培养并鉴定大鼠骨髓EPCs,制备消渴通痹颗粒含药血清,对EPCs进行不同高糖血清或PI3K抑制剂Wortmannin及e NOS抑制剂L-NAME的干预,检测EPCs的增殖及小管形成能力,Western-blot检测Akt、p-Akt及e NOS、p-e NOS蛋白表达。结果:与对照组比较,消渴通痹颗粒含药血清能促进EPCs的增殖及小管形成,不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清预处理后在一定程度上阻止了AKT,p-AKT,e NOS,p-e NOS水平的下降(P0. 05)。结论:消渴通痹颗粒可能通过上调PI3K/Akt/e NOS分子信号通路相关蛋白的表达水平,促进高糖环境下EPCs增值和小管形成。     

内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响

目的:观察内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响。方法:对在位和异位内膜间质细胞进行体外分离原代培养,免疫细胞化学法鉴定。制备大鼠含药血清,分为内异消癥汤组、米非司酮组、空白血清组,用MTT法检测含药血清对间质细胞的生长抑制率,并用Elisa法检测对间质细胞分泌的Ang-2水平。结果:体外原代细胞培养方法可培养出纯度较高的间质细胞,与空白血清组相比内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖(P0.01),同时可以显著减少Ang-2的分泌水平(P0.01)。结论:内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖,显著减少Ang-2的分泌水平。     

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法：体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-［4,5-dimethylthylthiazol-2-yl］-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果：与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论：高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

解聚复肾宁对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨解聚复肾宁(黄芪、地黄、黄连、丹参、姜黄、葛根等)(JJFSN)治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:高糖诱导系膜细胞(MC)增殖以及细胞外基质(ECM)分泌,制备不同浓度JJFSN含药血清作用于体外培养的MC,用MTT法检测细胞增殖,放射免疫技术(RIA)检测细胞培养上清中Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(Ln)的含量。结果:JJFSN含药血清可抑制高糖诱导的MC过度增殖(P0.05),并且这种作用具有药物剂量和时间依赖关系。同时,JJFSN可逆转高糖对ColⅣ和Ln分泌的影响,降低MC培养上清中ColⅣ和Ln的含量(P0.05),并且这种作用随着JJFSN剂量的增加而增强。结论:JJFSN抑制高糖诱导的MC过度增殖并减少ECM的过量分泌,可能是其防治DN早期的作用机制。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

六味地黄丸含药血清减弱高糖环境下肾系膜细胞的增殖和炎性因子表达

目的:观察六味地黄丸含药血清对高糖环境下培养的大鼠系膜细胞增殖和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:制备不同剂量大鼠六味地黄丸含药血清,并培养高糖诱导的大鼠系膜细胞。分别给予以下分组处理:空白(NG)组,高糖(HG)组,HG+对照血清组(10%对照血清),HG+低剂量组(2.5%六味地黄丸血清+7.5%对照血清),HG+中剂量组(5%六味地黄丸血清+5%对照血清),HG+高剂量组(10%六味地黄丸血清)。六味地黄丸含药血清处理24,48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法观察系膜细胞活性和增殖的变化,使用ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1和ICAM-1分泌量,RT-PCR法检测系膜细胞MCP-1和ICAM-1 mRNA表达。结果:与空白组比较,高糖组在培养的24,48 h内系膜细胞的增殖活性、上清液中MCP-1和ICAM-1的含量,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达显著上调(P0.01)。与高糖组比较,5%和10%六味地黄丸含药血清均能逆转上述变化(P0.05),且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖关系。结论:高糖可致系膜细胞增殖活性和MCP-1和ICAM-1的表达上调,六味地黄丸可降低增殖活性,减少MCP-1和ICAM-1分泌,下调MCP-1和ICAM-1 mRNA表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化的进展。     

通冠胶囊对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的采用血清药理方法观察通冠胶囊对体外培养的兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法给SD大鼠灌胃通冠胶囊水煎剂,每日1次,连续9d,制备含药血清;培养并传代兔的VSMC,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察通冠胶囊含药血清对VSMC增殖的影响。结果通冠胶囊含药血清组测得的MTT值小于对照组,两者之间差异有显著性。结论通冠胶囊可以明显抑制VSMC增殖。     

丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响.方法:(1)体内实验:雄性Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组.除正常组外,其余各组采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周.实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比.(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT比色法测定原代HSCs增殖情况.结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及HSCs增殖明显减轻.(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,且此作用呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外HSCs增殖.     

壮骨颗粒含药血清对兔骨髓基质干细胞体外增殖及分化的影响

研究壮骨颗粒含药血清对骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响。方法:采用体外细胞培养技术,采用壮骨颗粒对细胞进行体外诱导培养,并设置空白血清对照组,进行MTT、免疫组织化学染色及ALP测定,观察壮骨颗粒对骨髓基质细胞的诱导作用。结果:在促细胞增殖方面:实验组作用显著(P<0.01),在第3d开始增殖,第6d达到平台期;而对照组对数增殖期明显延长(P<0.01);在促细胞分化方面:壮骨颗粒血清组在2d、3d、5dALP活性水平高于对照组(P<0.01)。常规形态学观察,壮骨颗粒组诱导的细胞在形态上类似于成骨细胞,免疫组化染色提示诱导细胞具有骨细胞表型。结论:壮骨颗粒组应用可促进细胞增殖,并诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。     

筋脉通对糖尿病大鼠周围神经组织神经生长 因子表达的影响

目的：观察中药复方筋脉通对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠坐骨神经神经生长因子(nerve growth factor，NGF )mRNA和蛋白表达的影响。方法：采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射大鼠的方法造模，简单随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量和大剂量组、神经妥乐平组及正常对照组。成模后即开始灌胃给药，筋脉通低、中、高组分别按成人剂量的5，10，20倍给药；神经妥乐平组按成人剂量的10倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠于灌胃16周后处死。检测各组治疗前及治疗后4，8，12，16周的体重和血糖变化，并进行热水甩尾试验和机械痛阈检测，采用实时荧光定量PCR法检测坐骨神经NGF mRNA的表达，免疫组化染色法测定坐骨神经NGF蛋白的表达。结果：糖尿病大鼠血糖值均显著高于正常组(P<0.01)；各治疗组血糖在各时间点与模型组相比无明显差异。造模及灌胃前后，各组大鼠之间的体重无明显差异。模型组和各治疗组较正常组甩尾潜伏期延长、机械痛阈下降，坐骨神经NGF mRNA和蛋白表达减少(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比，筋脉通中剂量组与神经妥乐平组的甩尾潜伏期显著缩短、痛阈值显著升高，坐骨神经NGF mRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。筋脉通中剂量组与神经妥乐平组相比无显著差异。结论：筋脉通能够增加糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经NGF mRNA的转录和蛋白的表达。     

大黄与虫对药含药血清对胰岛素样生长因子-I和表皮生长因子促进人子宫肌瘤细胞增殖的影响

目的:观察大黄虫对药不同剂量含药血清对胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和表皮生长因子(EGF)促进原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响。方法:原代培养并建立人子宫平滑肌瘤细胞系,采用中药血清药理学方法处理细胞,以MTT比色法检测不同剂量含药血清作用于经IGF-I、EGF处理的子宫肌瘤细胞12、24、48、72h的光密度值,计算细胞存活率。结果:大黄虫对药含药血清可抑制IGF-I、EGF对子宫肌瘤细胞的促增殖作用。结论:大黄虫对药含药血清通过抑制IGF-I、EGF对子宫肌瘤细胞的增殖作用,发挥其抑制肌瘤生长的作用,这可能是该对药治疗子宫肌瘤的机理之一。     

益胃饮含药血清对胃癌细胞MFC增殖凋亡及NR4A3/HGF表达的影响

目的:探讨不同浓度益胃饮对体外培养的胃癌细胞MFC的增殖、凋亡及NR4A3蛋白表达的影响。方法:MFC细胞经不同浓度益胃饮含药血清处理后,采用MTT法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,显微镜观察细胞形态学改变;采用流式细胞仪及Annexin V/PI染色的方法检测益胃饮含药血清对MFC胃癌细胞周期及凋亡的影响,并以RT-PCR芯片技术(Mouse TumorM etastasis PCR Array)分析该方对胃癌细胞MFC肿瘤相关基因表达的影响;结果:益胃饮含药血清浓度在4%~12%时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而RT-PCR芯片技术分析结果显示NR4A3表达则随之增强而HGF显著下调。结论:益胃饮含药血清对人胃癌细胞MFC增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,其作用机制可能是益胃饮通过促进Nr4 a3表达,下调HGF而达到的。     

筋脉通胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经形态测量学及核转录因子κB蛋白表达的影响

目的观察中药筋脉通胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经形态测量学及核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)蛋白表达的影响。方法采用链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和筋脉通组及神经妥乐平组,设立正常对照组。灌胃16周后取坐骨神经进行形态测量学分析,免疫组化法测定其NF-κB蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠的有髓神经纤维密度、小纤维密度减少,小纤维比率下降,有髓神经纤维平均横截面积、轴索平均横截面积增大,差异显著(P<0.01);筋脉通组、神经妥乐平组的有髓神经纤维密度、小纤维密度、小纤维比率均较模型组显著改善(P<0.05);筋脉通组的有髓神经纤维平均横截面积、轴索平均横截面积较模型组改善显著(P<0.05)。模型组大鼠NF-κB蛋白的表达较正常组显著升高(P<0.01);筋脉通组、神经妥乐平组上值均较模型组降低(P<0.05)。结论筋脉通胶囊可改善糖尿病大鼠坐骨神经的形态测量学异常,减少NF-κB的异常高表达。     

药浴对慢性肾脏病系膜细胞增殖的影响

目的:探讨药浴对慢性肾脏病(CKD)发展中系膜细胞增殖的影响。方法:运用药浴疗法作用于CKD患者后的含药血清及药浴液分别作用于体外培养的肾脏系膜细胞,观察其增殖情况。结果:含药血清及药浴液对肾脏系膜细胞的增殖皆有有明显抑制作用,其中含药血清的抑制作用更强。结论:药浴改善肾功能与其延缓系膜细胞的增殖有关。     

菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。     

用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 :采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素 (ET)致兔胸主动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖凋亡的影响。方法 :分离正常兔胸主动脉SMC ,并传代培养 ,用ET造成胸主动脉SMC增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液 10天 ,制备含药血清 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对SMC增殖凋亡的影响。结果 :ET能明显促进SMC增殖 ,芎芍胶囊含药血清可减少S +G2 期SMC所占比例 ,对ET所致SMC增殖有明显抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,大剂量时尚可诱导SMC凋亡。结论 :芎芍胶囊可明显抑制ET所致SMC增殖 ,并有一定的诱导SMC凋亡的作用。这可能是其临床用于预防冠状动脉介入治疗后再狭窄的作用机制之