盾叶薯蓣多倍体和辐射诱变株系部分生理活性的比较

分别用秋水仙素和60Coγ射线处理盾叶薯蓣愈伤组织和丛生芽,从而获得同源四倍体与辐射株系。移栽至田间生长一年后挖取新鲜根茎,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析过氧化物酶(POD)同工酶与可溶性蛋白,并对各株系叶的叶绿素含量及抗坏血酸酶过氧化物酶(APX)活力进行测定,结果表明:四倍体株系POD同工酶与可溶性蛋白谱带颜色明显深于二倍体株系与辐射株系;辐射株系与对照株系相比,条带有所变化,这可能影响到有关生物学性状的变化。四倍体株系与辐射株系的叶绿素含量及APX活力相对于对照株系均有不同程度的提高。试验结果对盾叶薯蓣优良品种的培育具有一定的意义。     

不同产地盾叶薯蓣质量综合评价比较

目的对采自3个不同产地的盾叶薯蓣的质量进行综合评价研究。方法利用HPLC法对3个不同产地共计12批的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元的含量进行测定。结果湖北郧西、陕西安康、湖南安化3个产地中薯蓣皂苷的含量范围为0.4752%~0.8931%、伪原薯蓣皂苷的含量为0.7348%~1.0023%、薯蓣皂苷元的含量范围为2.3384%~5.6641%,经分析表明3个产地的盾叶薯蓣中有效成分有显著性差异(P<0.05)。结论地理条件对药材的有效成分的含量有显著的影响,由该实验得出陕西安康地区的盾叶薯蓣中3种有效成分含量均较高,质量较好,为盾叶薯蓣GAP的制定提供依据。     

盾叶薯蓣难溶性甾体皂苷的提取及其抑制人肝癌细胞HepG2增殖的研究

目的 研究盾叶薯蓣水难溶性提取物的化学成分及对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法 采用正、反相硅胶柱色谱方法分离纯化水难溶性提取物的单体化合物,并通过波谱学方法鉴定其结构;采用MTT法评价其体外抑制人肝癌细胞的增殖作用.结果 采用化学方法分离并鉴定了5个化合物,分别是薯蓣皂苷元(Ⅰ)、延令草皂苷(Ⅱ)、薯蓣皂苷元纤维二糖苷(Ⅲ)、三角叶皂苷(Ⅳ)和盾叶皂苷Ⅰ(Ⅴ);5个化合物对人肝癌细胞的增值具有明显的抑制作用,其中化合物V对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用最强.结论 盾叶皂苷Ⅰ具有明显的抗癌活性.     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的PLS-NIR法快速测定

利用近红外光谱技术,建立了一种快速测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的方法.运用偏最小二乘法(PLS)建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量与其近红外光谱之间的校正模型,模型的校正集内部交叉验证决定系数(R2)为0.992 1,交互验证均方差(RMSECV)为0.010 4,外部预测均方差(RMSEP)为0.010 5,预测值的平均相对误差为4.12％.     

胡芦巴的化学成分研究

从豆科胡芦巴属植物胡芦巴(Trigonella foerum-graecum L.)的干燥成熟种子中分离鉴定了9个化合物:其中5个为螺甾烷型甾体皂苷,分别为三角叶薯蓣皂苷(1a)和盾叶薯蓣皂苷A3(1b)的混合物(1),fenugreek saponin II(2),fenugreek saponin III(3),薯蓣皂苷(4);4个为黄酮类化合物即chrysoeriol-7-O-[6’’(E)-p-coumaroyl]-β-D-glucopyranoside(5),小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6),牡荆素(7),异荭草素(8)。其中化合物1a、1b、5为首次从葫芦巴属植物中分得。     

纤维素酶辅助提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的工艺优化研究

以薯蓣皂苷元的提取收率为考察指标,采用中心组合试验设计和响应面分析法对纤维素酶酶解提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的工艺条件进行优化,确定其最佳工艺条件:采用盾叶薯蓣与水的料液比为1∶10;酶解pH值为5.75;酶解温度为54℃;酶解作用时间为2.5h;纤维素酶用量为10.8U/g的工艺条件,使得薯蓣皂苷元的提取率达到1.5%以上。结果表明纤维素酶辅助提取法是提高薯蓣皂苷元的有效途径。     

小花盾叶薯蓣中的甾体成分

目的研究小花盾叶薯蓣的化学成分。方法运用正相和反相硅胶柱色谱对其化学成分进行分离，用IR，NMR，MS等方法进行结构鉴定。结果从乙醇提取物中分离鉴定出11个甾体化合物，分别鉴定为去酰百合皂苷(deacylbrownioside，I)、薯蓣皂苷元-双葡糖苷(diosgenin-diglucoside，II)、前薯蓣皂苷A(prosapogenin A of dioscin，III)、薯蓣皂苷(dioscin，IV)、三角薯蓣皂苷宁(deltonin，V)、三角薯蓣皂苷(deltoside，VI)、甲基三角薯蓣皂苷(methyl deltoside，VII)、薯蓣皂苷元 3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→3)- β -D-吡喃葡糖基-(1→4)-［ α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)］- β -D-吡喃葡糖苷{diosgenin 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)- β -D-glucopyranosyl-(1→4)- ［α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)］- β -D-glucopyranoside，VIII}、小花盾叶薯蓣苷(parvifloside，IX)、甲基小花盾叶薯蓣苷(methyl parvifloside，X)、薯蓣皂苷元(diosgenin，XI)、以及β-谷甾醇(β-sitosterol)和豆甾醇(stigmasterol)的混合物。结论化合物X为一新化合物，VII与X分别为VI和IX的甲醚衍生物，可能为分离过程中所产生。I系首次从薯蓣属植物中分离得到，II和IV均为首次从小花盾叶薯蓣中分离得到。     

近红外漫反射光谱法快速测定盾叶薯蓣药材醇浸出物的含量

目的应用近红外光谱(NIR)技术和化学计量学分析软件,对盾叶薯蓣药材中醇浸出物的含量进行快速测定。方法应用偏最小二乘法(PLS)对盾叶薯蓣醇浸出物的结果与NIR建立定量校正模型。结果建立的模型内部交叉验证决定系数(R2)为0.991 09,内部交叉验证均方差(RMSECV)为0.010 13,预测均方差(RMSEP)为0.004 59。结论近红外漫反射光谱技术的运用具有快速方便、结果准确的特点,该方法可应用于盾叶薯蓣药材醇浸物的快速检测,对于其他的中药材指标成分测定也有一定的参考价值。     

HPLC—ELSD法测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量

目的:建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC—ELSD),Allti-ma C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(52:48),流速1.0 mL·min~(-1);蒸发光散射检测器参数:漂移管温度40℃,气压3.5 kPa。结果:薯蓣皂苷在0.24～4.80μg(r=0.9995)范围内线性关系良好,平均回收率为97.9%(RSD=1.1%,n=6)。结论:该方法简便、快速、灵敏、准确、重现性好,可作为盾叶薯蓣的质量控制方法。     

植物生长调节剂对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的大田条件下,研究几种植物生长调节剂对盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元含量及根茎产量的影响。方法采用单因素施肥方法,结果采用SPSS17．0统计软件包进行分析。结果发现施用萘乙酸、多效唑、烯效唑和2,4-D均可大大提高盾叶薯蓣根茎产量,但对于薯蓣皂苷元含量的影响较小。对薯蓣皂苷元含量的影响,2,4-D〉膨大素〉NAA〉稀效唑〉多效唑：对盾叶薯蓣根茎产量的影响,2,4-D〉NAA〉多效唑〉稀效唑〉膨大素。结论喷施一定浓度的2,4-D,对优质、高产盾叶薯蓣的栽培,具有重要的实践意义。     

Characterization of steroidal saponins in crude extracts from Dioscorea zingiberensis C. H. Wright by ultra-performance liquid chromatography/electrospray ionization quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry

Steroidal saponins are the major bioactive constituents of Dioscorea zingiberensis C. H. Wright (D. zingiberensis). In this work, ultra-performance liquid chromatography/electrospray ionization quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry (UPLC/Q-TOF-MS/MS) was applied to the separation and characterization of steroidal saponins in crude extracts from D. zingiberensis. The results showed that fragment ions from glycosidic and cross-ring cleavages gave a wealth of structural information related to aglycone skeletons, sugar types and the sequence of sugar units. According to the summarized fragmentation patterns, identification of steroidal saponins from D. zingiberensis could be fulfilled, even when reference standards were unavailable. As a result, a total of thirty-one saponins with five aglycone skeletons, including fourteen new trace saponins, were identified or tentatively elucidated in crude extracts from D. zingiberensis based on their retention times, the mass spectrometric fragmentation patterns, and MS and MS/MS data.     

Safety investigation on total steroid saponins extracts from Dioscorea zingiberensis C.H. Wright: Sub-acute and chronic toxicity studies on dogs

Sub-acute and chronic toxic effects of total steroidal saponins (TSSN) extracts from Dioscorea zingiberensis C.H. Wright on various internal organs and biochemical indicators have never been studied before and this study is the first of its kind to demonstrate sub-acute and chronic toxicities of TSSN on dogs. Administration of TSSN extracts at doses up to 3000 mg/Kg daily for 14 days, no biochemical and organ changes were observed on the experimental groups of dogs. Further, chronic toxicity study through oral administration of TSSN extracts at the gradual doses of 50, 250 and 500 mg/Kg for 90 days followed by a 2-week recovery assay revealed absence of significant architectural and morphological changes in internal organs which were confirmed through histopathological examination and merely no significant alteration in the biochemical indicators including hematologic and urine analysis and electrocardiogram compared to the control dogs. This toxicological evaluation came across with the finding that the herbal preparation can be considered as nontoxic and animals could tolerate the extracts at doses up to 500 mg/Kg with LD₅₀ greater than 3000 mg/Kg. It may serve as a preliminary scientific evidence for further therapeutic investigations.     

盾叶薯蓣四倍体及辐射株系薯蓣皂苷元含量分析

目的提高盾叶薯蓣药材的品质。方法通过组织培养,分别用秋水仙素和Co60射线处理盾叶薯蓣愈伤组织和丛生芽,获得盾叶薯蓣四倍体和辐射株系,并分别对其试管苗和部分株系一年生田间苗根茎中的薯蓣皂苷元含量进行分析。结果经诱导获得的大部分四倍体和辐射株系试管苗根茎中薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系;四倍体株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量有较强的相关性,而辐照株系试管苗与一年生苗根茎中薯蓣皂苷元含量相关性不明显。但整体看,根茎中薯蓣皂苷元含量高的试管苗在田间生长1年后,薯蓣皂苷元含量一般也较高。结论在组织培养的基础上,利用多倍体和辐射诱变育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

滇黄芩化学成分的分离与鉴定

目的研究滇黄芩 (ScutellariaamoenaC .H .Wright)化学成分。 方法利用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果分离得到 8个化合物 ,分别鉴定为 :5 ,7 二羟基 6 甲氧基二氢黄酮 (dihydrooroxylinA ,Ⅰ )、5 ,7,4′ 三羟基 8 甲氧基黄酮 ( 5 ,7,4′ trihydroxy 8 methoxyflavone ,Ⅱ )、千层纸素A(oroxylinA ,Ⅲ )、汉黄芩素 (wogonin ,Ⅳ )、白杨素 (chrysin ,Ⅴ )、黄芩素 (baicalein ,Ⅵ )、去甲汉黄芩素 (norwogonine ,Ⅶ )、( 2S) 5 ,7,2′ ,6′ 四羟基二氢黄酮 [( 2S) 5 ,7,2′ ,6′ tetrahydroxyflavanone ,Ⅷ ]。 结论化合物Ⅰ、Ⅱ为该植物中首次分得     

栀子过氧化物酶、酯酶同工酶的遗传多样性分析

目的 应用同工酶技术研究不同种及居群栀子的亲缘关系和遗传多样性.方法 采用聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直板电泳系统,测定了12份不同居群栀子的过氧化氢酶(POD)、酯酶(EST)同工酶酶谱.结果 12份供试材料在2个同工酶系统中均有栀子物种的共同特征谱带,同时又蕴涵着丰富的多态性.结论 栀子居群间的遗传变异较大,而居群内部的分化程度很低.不同居群的栀子与种的特性和地理分布具有一定相关性.该结果为栀子的品种鉴定和合理利用提供了实验依据.     

不同来源黄芩药材HPLC指纹图谱比较

目的对不同来源黄芩药材进行HPLC指纹图谱的比较研究。方法选择HPLC UV指纹图谱分析条件 :天津深航ZirchromKromasilC8色谱柱 (5 μm,2 0 0mm× 4 6mm) ;流动相为甲醇 水 (V∶V =5 2∶48) ,含 8mmol·L-1四丁基溴化铵 ,磷酸调pH2 8;检测波长为 2 76nm。以系统聚类分析进行分类 ,用计算机辅助相似度计算软件进行指纹图谱相似度比较。结果系统聚类分析将样品分为 5类 ,正品黄芩、滇黄芩、甘肃黄芩各分为 1类 ;2份粘毛黄芩各分为 1类。滇黄芩与正品黄芩的指纹图谱差异较明显 ,而粘毛黄芩、甘肃黄芩与正品黄芩指纹图谱无明显差异 ,不同产地正品黄芩间指纹图谱无明显差异。结论该方法能较好地识别黄芩药材的种类 ,为黄芩药材质量评估提供有益的信息。     

滇黄芩中滇黄芩新素的结构研究

前已报道自四川产滇黄芩Scutellaria,amoena C.H.Wright中分离出五种黄酮成分和从云南产的中得到另八个黄酮类化合物。本文继续报道从云南产滇黄芩中得到的六个化合物和从四川产本种植物中得到一个黄酮化合物的结构鉴定。     

盾叶薯蓣中水溶性甾体皂苷成分

为研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分，用溶剂提取，色谱法分离，光谱法鉴定结构。从盾叶薯蓣的水溶液中分离到5个甾体皂苷(I～V)，经分析¹H NMR、 ¹³C NMR、¹³⁵DEPT、 HMQC、 HMBC和TOCSY谱，鉴定了化合物的结构，其中4个为原甾体皂苷，1个为甾体皂苷。化合物V为(25R)-26-O-(β-D-glucopyranosyl)-furost-5-en-3β,22ξ,26-triol-4β-acetoxyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-［α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)］-β-D-glucopyranoside，为1新化合物，命名为zingiberenin G，化合物I、II、III在盾叶薯蓣中为首次报道。     

Neuroprotection of total steroid saponins from Dioscorea zingiberensis C.H.Wright against transient focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats via its anti-inflammatory and anti-apoptotic effects

OBJECTIVE The total steroid saponins(TSSN) isolated from Dioscorea zingiberensis C. H. Wright(D.zingiberensis) has shown a variety of beneficial bioactivities. However, there are no reports about the neuroprotective effects of the TSSN until now. Therefore, we explored the neuroprotective effects of TSSN on rats against transient focal cerebral ischemia-reperfusion(I/R) and the underlying mechanisms. METHODS The healthy adult Sprague-Dawley rats were randomly assigned into six groups. After pre-treatment with the TSSN intragastrically for six days, the rats were subjected to the ischemia injury by the surgery of middle cerebral artery occlusion(MCAO) for 90 min. Some indexes were evaluated and detected. RESULTS As compared to the I/R group, TSSN group of rats, especial y given the 30 mg·kg~(-1) of TSSN, not only marked reduction in the neurological deficit scores, cerebral infarct volume, and brain edema, but also an increase in neuron survival(Nissl bodies) in the hippocampal cornuammons 1(CA1) and cortex hemisphere of the ipsilateral ischemia. At the same time, the inflammatory cytokines in serum induced by MCAO were significantly alleviated by the TSSN pre-administration. What′s more, the increase of caspase-3 was evidently reduced in the CA1 and cortex of the hemisphere injured brain. Final y, the down-regulating anti-apoptotic Bcl-2 and up-regulating pro-apoptotic Bax proteins were obviously suppressed. CONCLUSION TSSN plays a potential neuroprotective role against a severe injury induced by transient focal cerebral ischemic reperfusion in a rat experimental model, and this role may be mediated by its antiinflammatory and anti-apoptotic actions.