MACS检测胃癌腹腔冲洗液游离癌细胞的研究

目的 探讨胃癌腹腔微转移情况的检测方法及意义。方法 手术中切除肿瘤前收集腹腔冲洗液，采用磁激活细胞分离术（MACS）对不同病理分期胃癌患者腹腔冲洗液中癌细胞进行富集并检测。分别标记带磁珠的细胞角蛋白（CK）抗体，经磁柱富集CK^＋上皮细胞，用流式细胞仪检测其含量，并比较胃癌组与胃平滑肌瘤组（对照组）以及胃癌不同分期之间、磁富集前后CK^＋上皮细胞含量的差异。结果 在未经MACS富集的标本中较少发现CK^＋ CD45^-细胞；在富集后的标本中其含量在胃癌组与对照组有显著差异（41／50，1／10，P〈0．001）；pTNMⅠ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间（0．67％，3．42％，P〈0．001）差异有非常显著性。结论 MACS能有效地富集上皮来源细胞，提高上皮源细胞的检出率，并能反映腹腔游离癌细胞数量；上皮细胞数量与胃癌的存在及临床病理分期有关，其有利于判断肿瘤转移和预后并指导治疗。     

腹腔镜下进展期胃癌根治术中腹腔游离癌细胞检测的意义

目的探讨腹腔镜下进展期胃癌根治术对腹腔脱落肿瘤细胞检测的影响,并探讨提高腹腔游离癌细胞检出率的方法。方法选取华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科35例初治的进展期胃癌病人,行腹腔镜下胃癌根治术。所有病人分别在术中探查前及关腹前各行一次腹腔冲洗,并收集灌洗液。比较两组灌洗液中肿瘤脱落细胞阳性检出率及肿瘤标志物上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)、癌抗原(carbohydrate antigen,CA)125、CA19-9和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达情况。结果35例进展期胃癌病人探查前腹水或腹腔灌洗液中涂片细胞学检查中检出阳性率为5.7%(2/35),关腹前为5.7%(2/35),两者统计比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学法检测探查前与关腹前腹水或腹腔灌洗液中EMA的表达(4/35,3/35)比较,差异无统计学意义(P>0.05);两个时间点CA125的表达(1/35,3/35)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。探查前腹水或腹腔灌洗液中,腹腔灌洗液脱落细胞学法游离癌细胞检出阳性率为5.7%(2/35),而免疫组织化学法检测EMA的阳性率为11.4%(4/35),两者比较差异有统计学意义(P=0.010);免疫组织化学法检测CA125的阳性率为8.6%(3/35),与腹腔灌洗液脱落细胞学法(2/35)比较,差异有统计学意义(P=0.005);免疫组织化学法联合检测EMA及CA125的阳性率为11.4%(4/35),与腹腔灌洗液脱落细胞学法(2/35)比较,差异有统计学意义(P=0.010)。结论腹腔镜下进展期胃癌根治术并不会增加癌细胞脱落风险,且肿瘤脱落细胞发生率低。但腹腔镜下胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的诊断,需要更为有效的检测方法。     

浆膜浸润胃癌中肝细胞生长因子、转录因子SP1、血管内皮生长因子和CD34表达与胃癌细胞脱落及预后关系

目的 观察肝细胞生长因子(HGF)、转录因子SP1、血管内皮生长因子(VEGF)及CD34在浆膜浸润胃癌(T3)中表达及其与病理生物学行为关系,同时探讨胃癌细胞腹腔脱落的分子基础及其对预后的影响.方法 采用大剂量生理盐水(1000 ml)腹腔灌洗方法,选择性收集2007年4月至12月80例浆膜浸润胃癌(T3)手术患者腹腔冲洗液,进行细胞学检测和细胞角蛋白18(CK18)免疫化学检测寻找癌细胞;运用免疫组织化学方法,对石蜡包埋的浆膜浸润胃癌(T3)癌组织中HGF、SP1、VEGF和CD34[以微血管密度(MVD)值表示]进行检测;同时进行严密随访.结果 患者腹腔冲洗液细胞学检测阳性率为63.8%(51/80),CK18免疫化学检测阳性率为75.0%(60/80).腹腔冲洗液细胞学检测阳性病例CK18检测均为阳性,腹腔冲洗液细胞学检测阴性患者有9例CK18检测为阳性,其中6例经病理科医师会诊确定为游离癌细胞阳性,本组病例脱落细胞阳性率为71.3%(57/80).胃癌组织中HGF、SP1和VEGF阳性率分别为57.5%、52.5%和55.0%,与MVD值的相关性具有统计学意义(P<0.05).HGF、SP1、VEGF和MVD值与脱落细胞阳性率等临床特征相关(P<0.05).经单因素分析发现HGF、SP1、VEGF和MVD值与预后相关(P<0.05),Logistic回归分析显示HGF、SP1和VEGF是预后的独立影响因素(P<0.05).结论 浆膜浸润胃癌(T3)中HGF、SP1、VEGF及MVD表达与胃癌生物学行为关系密切,检测几种因子对预测胃癌细胞腹腔脱落和术后复发具有一定的参考价值.     

胃癌患者骨髓转移癌细胞的检测和临床观察

作者自１９９２年１１月至１９９４年６月应用膜上皮抗原（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ，ＥＭＡ）单克隆抗体为探针，连续对８８例胃癌患者进行了１１３次骨髓中转移癌细胞的检测。８８例中查出阳性癌细胞者５８例，阳性率为６５．９％。癌细胞阳性率与胃癌分化程度有关，以低分化腺癌和粘液腺癌阳性率较高，分别为６０．９％和９３．９％。胃癌ＴＮＭ分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期阳性率分别为４２．９％、５７．１％、７３．７％和６９．０％。骨髓转移癌细胞与淋巴结转移无明显关系。单纯手术、手术＋化疗以及手术＋化疗＋免疫治疗三组癌细胞转阴率分别为２５．０％、４２．８％和６２．５％。     

腹腔冲洗细胞学检查对胃癌预后的临床评估及意义

目的 评估腹腔冲洗细胞学检查(PLC)对胃癌预后判断的价值.方法 收集胃癌及对照组患者的腹腔冲洗液标本,采用不同方法检测其中的游离癌细胞,并评价其与临床病理参数的关系.结果 PLC检测阳性率为31.8%,经相关分析,胃癌患者PLC阳性率与下列4种参数均成正相关:肿瘤分化程度(P＜0.05),浸润深度(P＜0.01),淋巴结转移(P＜0.01),TNM分期(P＜0.05).而与肿瘤的大小无关;肿瘤大小分组间差异无统计学意义(P＞0.05).检测阳性组与阴性组术后1年复发率和生存率比较,差异均有统计学意义.结论 PLC检测可作为判断胃癌侵袭转移、术后复发情况及患者预后的参考指标之一.     

腹腔镜胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的变化及意义

目的 对比研究腹腔镜与开腹胃癌根治术后腹腔游离癌细胞的变化,探讨腹腔镜胃癌根治术的安全性及可行性.方法 收集2006年4月至2008年6月间63例腹腔镜、61例开腹胃癌根治术患者术前、术后腹腔灌洗液,分别运用细胞学和荧光定量PCR方法 检测腹腔游离癌细胞的阳性率和癌胚抗原(CEA)mRNA的表达变化,观察胃浆膜受侵面积与腹腔游离癌细胞阳性率的关系.结果 腹腔镜组术后腹腔灌洗液游离癌细胞的阳性率为25.4%,与开腹组(29.5%)比较差异无统计学意义(P＞0.05);腹腔镜组术后腹腔灌洗液CEA mRNA阳性率为41.3%,与开腹组(40.3%)比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).腹腔镜组术前、术后腹腔游离癌细胞均为阳性的病例,其浆膜平均受侵面积为(16.2±2.2)cm2,而术前、术后游离癌细胞均为阴性的病例,其浆膜平均受侵面积为(5.3±0.8)cm2,腹腔游离癌细胞的阳性率与浆膜受侵面积呈正相关(R2=0.874,P=0.000).结论 腹腔镜胃癌根治术并不增加腹腔游离癌细胞的阳性检出率.     

巢式RT-PCR方法检测胃癌病人周围静脉血癌细胞及其意义

探讨胃癌患者外周血癌细胞的检测及其意义。方法：以CK19作指标,用巢式RT-PCR方法检测42例胃癌患者术前外周血中癌细胞。结果：健康人外周血中不能检测出CK19mRNA表达,用巢式RT-PCR方法检测外周血中胃癌细胞的敏感性可达1/106;42例胃癌病人外周血中检测出CK19mRNA阳性表达13例,阳性率30.9%,阳性结果与肿瘤大小、浸润深度和肿瘤分期密切相关。结论：巢式RT-PCR方法检测胃癌外周血癌细胞具有高度的特异性和敏感性,检测外周血癌细胞有助于判断肿瘤的进展程度。     

术中腹腔游离癌细胞检测用于胃癌TNM分期

目的 探讨术中腹腔游离癌细胞的检测在胃癌TNM分期中的应用.方法 用实时荧光RT-PCR方法检测胃癌患者术中腹腔游离癌细胞(free cancer cell,FCC),并进行5年的随访.用MedCalc软件分析FCC最佳阳性判定值,大于此值表示FCC的存在,标记为FCC(+),然后把FCC(+)当作远处转移(M1)重新进行分期,并作新的生存曲线图.结果 (1)在最佳阳性判定值为31.21拷贝/ml时约登指数最高;(2)把FCC(+)当作M1重新进行分期,各分期之间的5年生存曲线显示:Ⅰ～Ⅱ期P=0.134;Ⅱ～Ⅲ期P=0.004;Ⅲ～Ⅳ期P=0.022.新分期各分期的5年生存率分别为Ⅰ期100%(18/18),Ⅱ期88%(7/8),Ⅲ期24%(4/17),Ⅳ期9%(2/22).结论 (1)FCC最佳阳性判定值为31.21拷贝/ml;(2)现行TNM分期中加入FCC检测结果则可使其更加完善,能更准确地评估进展期胃癌患者的手术预后.     

胃癌组织中Livin的表达及意义

目的 检测胃癌组织以及胃癌细胞株中Livin的表达,研究其与胃癌发生、发展的关系.方法 (1)采用免疫细胞化学染色确定Livin在胃癌中表达的部位.(2)用RT-PCR和Western blot检测Livin mRNA和蛋白在胃癌、癌旁、胃溃疡组织中的表达.结果 Livin在胃癌细胞株SGC-7901的细胞核和细胞质中均有表达.30例胃癌组织中Livin-α阳性表达率为67%(20/30).癌旁和胃溃疡组织中没有Livin-α、Livin-β表达.胃癌组织中Livin-α阳性表达率随TNM分期增加而增高(x2=11.719,P<0.05).Livin的表达率在胃癌的分化程度、生长部位、年龄、性别等方面比较差异无统计学意义(x2=1.607,0.000,0.156,0.419,P>0.05).结论 Livin-α在胃癌组织中的高表达,与胃癌的临床病理分级、分期有关,并在胃癌的发生、发展过程中起重要作用.     

VEGF-C在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其意义

目的:检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胃癌组织及胃癌细胞株SGC-7901中的表达,分析其与肿瘤淋巴结转移的关系.方法:56例胃癌标本和一株恶性程度较高的胃癌细胞株SGC-7901,用免疫组化方法检测VEGF-C在胃癌细胞中的表达及定位情况.结果:56例胃癌标本中有18例VEGF-C呈阳性表达,阳性率32%,SGC-7901胃癌细胞株中VEGF-C强阳性表达;阳性物质主要位于肿瘤细胞胞浆内,在有淋巴结转移的胃癌组织中明显高于无淋巴结转移组织,低分化胃癌中的表达明显高于高、中分化胃癌.结论:VEGF-C的表达与胃癌的分化程度及肿瘤细胞的淋巴结转移密切相关.     

胃癌腹腔游离癌细胞的检出及灭活研究

目的　探讨游离癌细胞与胃癌生物学行为的关系 ,灭活、双路化疗对预后的影响。方法　开腹后观察原发灶生物学特征 (浆膜受侵范围、形态分型、浸润深度、生长方式、淋巴转移 ) ,冲洗、涂片镜检癌细胞 ,阳性者行高温腹腔灌洗 ,术后次日行腹腔温热化疗及静脉化疗。对照组只行静脉化疗。结果　游离癌细胞检出率为 37.5 8% (5 6 /149) ,灭活率达 10 0 % ,5年生存率为 12 .5 % (7/5 6 )。对照组 5年生存率为 2 .5 % (1/40 )。结论　胃癌腹腔游离癌细胞阳性必须行灭活处理 ,早期腹腔温热化疗 ,对提高术后 5年生存率具有重要作用。     

三种水解酶在胃癌细胞中的分布及意义

采用酶组织化学，免疫组织化学法及电镜技术研究芳香硫酸酯酶，β－半乳糖苷酶及溶菌酶在胃癌细胞中有的分布与癌细胞的分化和浸润的关系，结果及发现粘液细胞癌的超微结构特点是易见内质网，高尔基复合体及多量的分泌颗粒，三种水解酶的反应强度均高于低分化及高分子化腺癌（Ｐ〈０．０１），其癌周的纤维组织及平滑肌消失，结果提示粘液细胞癌的ＧＥＲＬ系统分化较成熟，能分泌多种水解酶，破坏癌周间质，有利于癌细胞的浸润和扩散     

多层螺旋CT辅助术中判断胃癌浆膜侵犯的价值

目的探讨多层螺旋CT辅助术中判断胃癌浆膜侵犯的价值。方法回顾性分析2009年8月至2011年6月间中国医科大学附属第一医院收治的206例胃癌患者的临床资料。将术前CT和术中判断胃癌浆膜侵犯情况与术后病理对照．以比较术前CT与术中判断胃癌浆膜侵犯的诊断价值。结果术前CT和术中判断胃癌浆膜侵犯的敏感性分别为88．5％和98．9％,特异性分别为81．5％和61．3％．CT判断浆膜侵犯的准确率高于术中判断．但差异未达到统计学意义（84．5％比77．2％,P=0．060）。术中判断胃癌浆膜面为正常型、反应型、结节型、腱状型和多彩弥漫型者浆膜侵犯率分别为0（0／29）、2．5％（1／40）、40．5％（15／37）、59．2％（29／49）和82．4％（42／51）。对于浆膜呈腱状型表现者,术中判断胃癌浆膜侵犯的准确率为61．2％．明显低于术前CT的87．8％（P=0．002）。结论术前CT检查能够辅助术中判断胃癌浆膜有无侵犯．对浆膜呈腱状型的胃癌．手术医生应重视术前CT诊断。     

胃癌术中腹腔游离癌细胞检测方法的对比研究

目的探讨检测腹腔游离癌细胞的方法及临床意义。方法应用细胞学检查(PLC)、流式细胞术(FCM)、实时荧光定量RT-PCR分别检测50例胃癌患者术中腹腔冲洗液(腹水)中游离癌细胞、CK20蛋白和CK20mRNA表达阳性率,比较三种方法对腹腔游离癌细胞检测的敏感度。结果 50例胃癌患者腹腔冲洗液(腹水)中,PLC检测腹腔游离癌细胞阳性率为20.0%(10/50),FCM检测CK20蛋白表达阳性率为36.0%(18/50),实时荧光定量RT-PCR检测CK20mRNA表达阳性率为58.0%(29/50);实时荧光定量RT-PCR检测腹腔冲洗液(腹水)中CK20mRNA表达阳性率高于FCM检测CK20蛋白表达阳性率及PLC检测腹腔游离癌细胞阳性率(P0.05或P0.001);FCM检测腹腔冲洗液(腹水)中CK20蛋白表达阳性率与PLC检测游离癌细胞阳性率相比较,差异无统计学意义(P0.05)。腹腔冲洗液(腹水)中检测CK20mRNA表达阳性率与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR检测CK20mRNA表达是检测腹腔游离癌细胞的有效方法。     

腹腔冲洗细胞学检查对判断胃癌预后的价值

目的探讨胃癌患者腹腔游离癌细胞形成的相关因素及其与胃癌根治术后预后的关系。方法对61例胃癌手术患者施行术中腹腔冲洗液细胞学检测,分析其临床病理特征与腹腔游离癌细胞形成的相关性,通过多元回归分析和累积生存曲线分析预后及相关因素。结果61例胃癌患者腹腔冲洗液细胞学阳性率为36%,Ⅲ、Ⅳ期胃癌、浆膜受累、淋巴结受侵及血管癌栓、术后腹膜转移者阳性率分别为50%、47%、45%、65%、88%,明显高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌(19%)、浆膜未侵(22%)、无淋巴结受侵(12%)、无血管瘤栓(18%)及其他转移者(33%)。腹腔游离癌细胞是胃癌预后的独立危险因素(RR=3·614,P=0·02),腹腔冲洗液细胞学阳性组的生存时间明显缩短(P<0·01)。结论腹腔游离癌细胞形成微转移灶是胃癌根治术后腹腔复发转移及预后的危险因素,术中腹腔冲洗液细胞学检测有助于判断预后。     

胃癌根治术中肝动脉变异及意义

目的介绍胃癌根治术时发现肝动脉变异情况。方法回顾性分析208例胃癌根治术时遭遇的肝动脉变异情况。结果208例中发现肝动脉变异3例,术中游离时注意保留肝脏、胆囊的血供分支。结论胃癌根治术时应注意肝动脉变异可能,避免损伤邻近器官的血供。     

从腹腔游离癌细胞中分离胃癌干细胞的可行性及其意义

目的:探讨从腹腔游离癌细胞中分离胃癌干细胞的可行性及其意义。方法:随机选择35例胃癌患者,术中发现有腹膜转移5例,无腹膜转移30例。用流式细胞仪检测腹腔灌洗液中CD44和CK20的表达,并比较有、无腹膜转移两组之间差别是否有差异。结果:⑴有、无腹膜转移组之间腹腔游离癌细胞中CD44+CK20+差异有统计学意义(P=0.009);⑵CD44在胃癌组织中的阳性表达率为36.8%,胃癌组织中CD44阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关;该两因素分组间差异有统计学意义(P=0.000)。结论:从胃癌腹腔灌洗液游离癌细胞中分离胃癌干细胞是可行的,这种可行性为人胃癌干细胞的分离提供了新的思路,为制定胃癌腹膜转移的靶向治疗提供了一定的实验基础。