人膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶优势亚型的确定及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶（HAS）的优势亚型，为膀胱移行细胞癌组织中透明质酸的功能研究奠定基础。方法于GeneBank中检索得到三种透明质酸合成酶亚型（HASl、HAS2、HAS3）的mRNA序列，应用Primer5．O软件，根据这些mRNA序列分别设计、合成三对引物；常规分别提取膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞和正常膀胱黏膜组织中成纤维细胞的总RNA，逆转录半定量聚合酶链反应（PCR，25循环）后进行常规琼脂糖凝胶电泳、图像扫描和分析、凝胶DNA回收和序列测定。结果正常膀胱组织中成纤维细胞mRNA中扩增出较明显的HAS1条带，HAS2、HAS3条带不明显，而膀胱癌组织中成纤维细胞mRNA中扩增出非常明显的HAS3条带和较明显的HASl条带，无HAS2条带。扫描图像分析后比较两者HASl条带凝胶灰度值，差异无统计学意义（P〉0．05），膀胱癌组织中成纤维细胞的HAS3条带和HASl条带的凝胶灰度值差异有统计学意义（P〈0．01）。结论膀胱癌组织中成纤维细胞出现HAS3的大量合成，且为其透明质酸合成酶的优势亚型。     

膀胱移行细胞癌组织中环氧化酶-2的表达及其意义

目的　探讨环氧化酶 2 (COX 2 )在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 5 2例膀胱移行细胞癌患者的癌组织及 17例患者距离肿瘤组织 3cm以外的正常膀胱黏膜组织中COX 2mRNA的表达 ,应用Westernblot法检测其中 4 9例膀胱癌组织及全部 17例正常膀胱黏膜组织中COX 2蛋白的表达 ,并应用条带密度分析软件半定量分析Westernblot条带密度。结果　COX 2mRNA在 83% (43/ 5 2 )的癌组织中表达 ,仅在 2 9% (5 / 17)的正常膀胱黏膜组织中表达 (P <0 .0 0 1) ;4 9例膀胱癌组织COX 2蛋白的表达量与肿瘤的分级、分期相关 (P<0 .0 0 1)。结论　COX 2在膀胱移行细胞癌组织中高表达 ,可能在肿瘤的发生发展中起一定的作用 ,可能成为膀胱癌化学预防的一个靶点。     

RNAi阻断人膀胱癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3的表达研究

目的探讨RNA干扰技术阻断人膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞内透明质酸合成酶3（hyaluronic acid synthase 3,HAS3）的表达与膀胱移行细胞癌生物学行为之间的关系。方法设计、体外化学合成HAS3 mRNA序列特异性、非特异性小干涉双链RNA（small interferencing RNA,siRNA）,分别与脂质体LipofectamineTM 2000结合后转染体外培养的人膀胱移行细胞癌组织中的成纤维细胞。实验分为A、B、C、D四组：孵育48h后,取各组细胞培养液进行放免法透明质酸浓度测定、免疫细胞化学染色了解透明质酸的合成、RT—PCR法检测HAS3 mRNA的表达。结果与A组相比,D组细胞HAS3 mRNA表达减少了78．2％,HA染色明显变淡,细胞培养液中HA浓度下降了60．3％（P〈0．01）;B、C组mRNA表达分别减少了4．7％、5．4％,HA染色几乎无变化,HA浓度分别下降了5．2％、5．8％（P〉0．05）。结论RNA干扰技术可以显著地减少膀胱移行细胞癌组织中成纤维细胞的HAS3的表达,从而大幅度地降低该细胞内透明质酸的合成。     

膀胱移行细胞癌中Survivin与Ki-67、p53的表达及临床意义

目的 探讨膀胱移行细胞癌中Survivin、p53及Ki-67的表达与膀胱移行细胞癌临床病理特征的关系及其临床意义. 方法 用免疫组织化学方法 检测88例膀胱移行细胞癌与10例正常膀胱黏膜组织中Survivin、p53及Ki-67的表达,并用RT-PCR方法 验证其中30例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜组织中Survivin的表达. 结果 免疫组织化学方法 显示在膀胱移行细胞癌中Survivin、p53阳性表达率分别为63.6%(56/88)和45.5%(40/88),正常膀胱黏膜组织中均无表达,差异有统计学意义(P<0.01),且Survivin的表达与膀胱癌的临床分期密切相关(P<0.05).膀胱癌组织中Ki-67增殖指数(PI)为20.4士10.7,正常膀胱黏膜组织中为0.RT-PCR方法 显示在30例膀胱移行细胞癌中Survivin阳性表达率为100%,而正常膀胱黏膜组织中均无表达.结论 Survivin与膀胱癌的恶性程度有关,与p53及Ki-67共同参与了膀胱移行细胞癌的发生、发展及进程.     

糖蛋白(MUC1与MUC7)基因在膀胱移行细胞癌的表达研究

目的 探讨糖蛋白MUC1与MUC7基因在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织及细胞株中的表达及意义。方法 采用MUC1与MUC7特异性巢式逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）对分离的4种组织标本及3种细胞株的mRNA样本进行检测。结果 所有4种组织标本及3种膀胱癌细胞株的MUC1基因表达均为阳性。MUC7基因表达仅见于3种膀胱癌细胞株和侵袭性移行细胞癌标本。半定量结果显示MUC1 mRNA基因表达在正常膀胱黏膜同腺性膀胱炎及各期膀胱癌之间差异有统计学意义（P〈0．05）。浅表性膀胱癌与侵袭性膀胱癌之间差异有统计学意义（P〈0．05）。不同细胞系BIU-87与T24之间表达差异无统计学意义（P〉0．05），耐药细胞株BIU-87／A同敏感细胞株BIU-87与T24之间表达差异有统计学意义（P〈0．05）。MUC7 mRNA基因表达在3种细胞株及侵袭性膀胱癌组织之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 MUC1基因的上调表达与MUC7基因的差异性表达可能影响膀胱癌细胞的生物学行为，导致相应的临床后果-恶性转变、侵袭转移、耐药。MUC7基因表达是尿路上皮恶性侵袭性转化的开始。     

膀胱移行细胞癌VEGF-C/VEGFR-3的表达及临床意义

目的:探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中VEGF-C与VEGFR-3表达在癌细胞淋巴结转移机制中的作用。方法:采用RT-PCR与免疫组化检查36例BTCC和8例正常膀胱组织中VEGF-C与VEGFR-3表达情况,及其与膀胱移行细胞癌各项临床病理因素的关系。结果:VEGF-C、VEGFR-3在BTCC肿瘤细胞表达,在正常膀胱细胞未见表达。随着肿瘤细胞恶性程度的增加,VEGF-C、VEGFR-3表达明显增强;并且,VEGFR-3与VEGF-C的表达显著相关,继而,膀胱移行细胞癌淋巴浸润也明显增多。结论:膀胱移行细胞癌VEGF-C/VEGFR-3的表达促进肿瘤淋巴管浸润;阻断VEGF-C/VEGFR-3通路将抑制BTCC向恶性进展。     

MT-3和bcl-2在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中金属硫蛋白亚型(MT-3)的表达及其与bcl-2的相互关系。方法:采用逆转录多聚酶链式反应和原位杂交技术,对11例正常膀胱黏膜和23例BTCC进行MT-3和bcl-2分析。结果:11例正常膀胱黏膜中MT-3和bcl-2mRNA表达阳性率分别为0%(0/11)和18.2%(2/11),23例膀胱癌中MT-3和bcl-2mRNA表达阳性率分别为78.3%(18/23)和39.1%(9/23);在MT-3和bcl-2组正常膀胱组织与BTCC组织表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。MT-3的表达与bcl-2的表达密切相关(P<0.05)。结论:MT-3的表达与BTCC的早期诊断相关,可能成为一种新的肿瘤标志物;MT-3与bcl-2呈负相关,可能通过下调bcl-2的表达参与细胞调亡。     

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义

目的：研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法：运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测五种肾癌细胞（ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6）透明质酸合成酶三种亚型（HAs1、HAS2、HAs3）mRNA的表达,运用Westernblot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的蛋白表达。结果：在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞（HK-2）,其中在。肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高（均P〈0．05）,HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞（均P〉0．05）,而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞（P〉0．05）。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常‘肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAs2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论：透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。     

血小板源性生长因子-D在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 观察血小板源性生长因子-D(PDGF-D)在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达,探讨PDGF-D与膀胱移行细胞癌的发生发展之间的关系及其临床意义.方法 分别采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测62例膀胱移行细胞癌组织、10例癌旁正常膀胱组织中PDGF-D mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理之间的关系.结果 PDGF-D mRNA在BTCC中的表达量是正常对照组的1.89倍,PDGF-D蛋白在癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(相对吸光度比值:正常组0.231±0.041,癌症组0.689±0.083,P＜0.05).而且随着肿瘤病理分级的升高及淋巴结转移的出现,PDGF-D mRNA和蛋白的表达水平均逐渐升高,各组问差异有统计学意义(P＜0.05).但不同分期的癌组织中PDGF.D mRNA和蛋白的表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDGF-D表达增强与膀胱癌的发生及分化、转移密切相关,可能在膀胱癌的发生发展中发挥重要作用.     

人膀胱移行细胞癌上皮间质转化与胸腺素β4的关系

目的 探讨人胸腺素β4(Tβ4)与膀胱移行细胞癌(BTCC)上皮-间质转化的相关性,以及与临床病理特征之间的关系.方法 选用膀胱移行细胞癌手术切除标本60例,每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组织化学技术检测切除标本中的Tβ4、整合素连接激酶(ILK)、E-cadherin和β-catenin的表达,并分析与各临床病理因素之间的关系.结果 Tβ4在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(91.7%比15.0%,P<0.05),其在深层浸润组中的表达高于浅层浸润组(97.4%比81.00,P<0.05);ILK在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(80.0%比18.3%,P<0.05);β-catenin在BTCC组织中的表达高于正常黏膜(76.7%比26.7%,P<0.05);E-cadherin在BTCC组织中的表达明显低于正常黏膜(30.0%比90.0%,P<0.05);Tβ4与E-cadherin表达呈负相关,与ILK、β-catenin表达呈正相关.结论 胸腺索β4与膀胱移行上皮癌分化和转移有关,可能通过调控上皮-间质转化从而在膀胱移行上皮癌的侵袭转移过程中发挥作用.     

Expression of hyaluronan synthases in articular cartilage

OBJECTIVE: To investigate the mRNA expression profiles of three mammalian hyaluronan synthases (HAS1, HAS2 and HAS3) in chondrocytes from normal (undiseased) animal cartilage and osteoarthritic human cartilage maintained in experimental culture systems and exposed to catabolic or anabolic stimuli provided by cytokines, growth factors and retinoic acid. DESIGN: Chondrocytes isolated from normal bovine, porcine or from osteoarthritic human cartilage were cultured as monolayers or embedded in agarose. Cultures were maintained for 3-5 days in the presence or absence of catabolic stimuli (IL-1, TNF-alpha or retinoic acid) or anabolic stimuli (TGF-beta or IGF-1) followed by extraction of RNA and analysis of HAS mRNA expression by RT-PCR. RESULTS: Whereas mRNA for HAS1 was not detected in any sample, the mRNAs for HAS2 and HAS3 were expressed in human, bovine and porcine chondrocytes. HAS2 mRNA was present in chondrocytes from all cartilages and under all culture conditions, whereas HAS3 did not show such constitutive expression. In agarose cultures of bovine and porcine chondrocytes HAS2 mRNA was present in control, IL-1 and retinoic acid treated cultures, whereas HAS3 mRNA was only detected in IL-1 stimulated cultures. Mature bovine chondrocytes cultured in monolayers expressed mRNAs for both HAS2 and HAS3 in the presence of IL-1, TNF-alpha, TGF-beta and IGF-1, however immature bovine chondrocytes in monolayer cultures displayed virtually no HAS3 mRNA expression in the presence of these cytokines and growth factors. HAS2 and HAS3 mRNAs were also expressed by bovine chondrocytes isolated from either the superficial or deep zone of articular cartilage, and by human chondrocytes cultured either in the absence or presence of IL-1 and retinoic acid. CONCLUSIONS: Our data indicate that HAS2 and HAS3 (but not HAS1) mRNAs are expressed in several mammalian cartilages. Chondrocyte HAS2 mRNA appears to be constitutively expressed while chondrocyte HAS3 mRNA expression can be differentially regulated in an age-dependent fashion, and may be affected by local and/or systemic catabolic or anabolic stimuli provided by cytokines or growth factors.     

膀胱移行细胞癌Id-1表达的实验研究

目的　探讨正常膀胱移行上皮和不同分化程度膀胱移行细胞癌 (BTCC)Id 1的表达 ,分析膀胱癌生物学行为与Id 1的关系。方法　免疫组化ABC法检测 111例BTCC和 12例正常膀胱组织Id 1表达。结果　Id 1正常膀胱组织 3例表达阳性 ,阳性率 2 5 % ;BTCC 97例表达阳性 ,阳性率 87.38% ,膀胱癌G1、G2 、G3 阳性率分别为 88.89%、87.5 %、85 .72 % ,与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1) ,病理分级间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌表达阳性率分别为 82 .76 %、92 .4 5 % ,两者比较具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论　膀胱移行细胞癌Id 1过表达 ;Id 1与膀胱癌发生和侵袭性有一定关系 ;Id 1可能作为膀胱癌的一种肿瘤标记物为膀胱癌的筛查、早期诊断和术后随访提供帮助。     

环氧合酶-2在膀胱癌中的表达及临床意义

目的检测环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX～2）在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化法检测50例膀胱癌组织和10例正常组织中COX-2蛋白的表达,并结合临床资料进行分析。结果正常组织中COX-2蛋白的表达水平明显低于肿瘤组织（P〈0．001）。G1级和G2～G3级膀胱癌中COX-2蛋白表达的阳性率分别为20％、60％,差异有统计学意义（P=0．022）。非肌层浸润性膀胱癌和浸润性膀胱癌中COX-2蛋白表达的阳性率为36．8％和83．3％,差异有统计学意义（P=0．005）。COX-2表达与患者的年龄、性别、肿瘤的数目及大小无明显相关性（P〉0．05）。结论COX-2在高分级膀胱移行细胞癌和侵袭性膀胱移行细胞癌中阳性表达率显著上升,表明COX-2可能在膀胱移行细胞癌的形成中起重要作用,有望为膀胱癌的靶向治疗提供新的途径。     

应用基因芯片技术筛查膀胱移行细胞癌差异表达基因的研究

目的:研究膀胱移行细胞癌(BTCC)中差异表达基因,初步探讨这些基因与BTCC发生、发展的关系。方法:提取3例膀胱移行细胞癌(分别为G1Ta、G1T1和G2T2)组织块和1例正常膀胱黏膜组织块RNA,对样品RNA进行荧光标记,用包含21522条70mer长度的OligoDNA表达谱芯片3张进行检测。结果:21522条相关基因中,3例肿瘤标本共同出现的差异表达基因有307条,占总基因条数的1.42%,其中表达上调198条,表达下调109条。这些差异基因按其功能主要可以分为以下几类:原癌基因和抑癌基因、细胞周期调节蛋白、细胞信号和传递蛋白、细胞粘附分子、生长因子、免疫相关基因、细胞受体、离子通道和运输蛋白、细胞骨架和运动相关蛋白、细胞凋亡相关蛋白以及一些未知功能基因。结论:基因芯片技术为研究膀胱癌的分子生物学特性提供了一个比较理想的方法;膀胱癌的发生、发展与多个肿瘤相关基因的异常表达有关,是多基因、多途径作用的结果;BTCC明显表达异常的基因包括GJB2、DKFZP434K0410、NESCA、CKS2、ALB、MYOC、PCOLCE2、AREG、DPT等,其具体机制有待进一步研究。     

基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2 mRNA及基质金属蛋白酶抑制剂2 mRNA在人膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌中基质金属蛋白酶（MMP）9、MMP2及基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）mRNA表达与膀胱肿瘤恶性程度和侵袭性之间的关系及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测36例膀胱移行细胞癌及5例正常膀胱组织MMP9、MMP2、TIMP2mRNA的表达。结果MMP9、MMP2mRNA随着肿瘤分级分期的增高，表达明显增强[x^-值（MMP9）G1：1．218，G2：1．681，G3：1．811；T2～T4：1．840，Tis～T1：1．399；P〈0．01；（MMP2）G1：1．323，G2：1．694，G3：2．060；T2～T4：1．950，Tis-T1：1．505；P〈0．01]，且明显高于正常膀胱组织中的表达[互值（MMP9）0．455，（MMP2）0．461；P〈0．01]。TIMP2mRNA随肿瘤分级的增高而明显减少（x^-值：G1：1．489，G2：1．391，G3；0．580；P〈0．01）。结论（1）MMP9、MMP2mRNA的高表达与BTCC的恶性程度呈正相关；（2）TIMP2mRNA的表达与BTCC的恶性程度呈负相关。     

Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的比较Survivin在正常组织与膀胱移行细胞癌中表达的差异，分析其表达与膀胱移行细胞癌生物学特性及预后的关系。方法选用中山大学附属第三医院2001年至2006年间外科切除及活检的膀胱癌石蜡块标本40例，其中24例为浅表性膀胱癌组织，16例为浸润性膀胱癌组织。另取10例正常膀胱组织石蜡块标本，用免疫组化染色显示组织中Survivin表达，并对结果进行相应的统计学分析。结果10例正常膀胱组织中未见Survivin表达。于G，级、G：级、G，级膀胱癌组织中Survivin的表达率分别为20％（2／10）、38．9％（7／18）、75％（9／12）。经多因素分析，Survivin的表达与膀胱癌细胞的病理分级及患者的无瘤生存时间相关，而与其肿瘤分期及生存率不相关。结论正常膀胱组织不表达Survivin。Survivin的表达率随肿瘤细胞分化程度的降低而升高。Survivin的表达水平反映患者的无瘤生存率，是预测膀胱癌复发的独立预后因子。     

生长分化因子-9在人膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨生长分化因子-9（growth differentiation factor-9,GDF-9）在人膀胱癌组织中的表达及其与膀胱癌病理分级和临床分期的关系。方法：运用免疫组化技术检测GDF-9在50例不同分期分级的膀胱癌组织和15例正常膀胱组织之间的蛋白表达情况。结果：①正常人膀胱组织中GDF-9呈高表达,且GDF-9蛋白主要定位于膀胱移行上皮细胞的胞浆中。而膀胱癌组织中GDF-9呈低表达或不表达。②GDF-9阳性表达率在膀胱癌病理分级间分别：I级47．6％（10／21）,II级26．7％（4／15）,III级7．1％（1／14）,差异具有统计学意义（P〈0．05）。GDF9阳性表达率在膀胱癌临床分期间分别：Ta～T1期40．6％（13／32）,T2～T3期11．1％（2／18）,差异具有统计学意义（P％0．05）。结论：GDF-9在膀胱癌组织中低表达或不表达,且与膀胱癌病理分级和临床分期呈负相关。GDF-9可能是一个潜在的人膀胱肿瘤抑癌基因。     

膀胱移行细胞癌E—Cadherin和α—Catenin的表达及临床意义

目的：探讨上皮钙粘素（E－Cadherin)和α－连环素（α-Cadherin)在膀胱移行细胞癌中的表达及其生物学行为之间的关系。方法：采用免疫组织化学SABC法检测E－Cadherin和α-Catenin在65例膀胱移行细胞癌石蜡标本中的表达。结果：E－Cadherin在G1、G2、G3级和Tis-T1,T2-T4期肿瘤中的正常表达率分别为76．2％、34．8％、4．8％和54．1％、17．9％,α-Catenin在G1、G2、G3级和Tis-T1,T2-T4期肿瘤中的正常表达率分别为71．4％、34．8％、4．8％和51．4％、17．9％,二者的表达情况均与肿瘤的病理分级和临床分期密切相关（P＜0．01）;65例肿瘤标本中E-Cadherin 和α-Catenin表达同时正常或异常者占83．1％,二者表达之间具有显著相关性（P＜0．01）;E－Cadherin或α-Catenin正常和异常表达者间癌复发差异具有显著性意义（P＜0．05）。结论：E－Cadherin和α-Catenin的表达情况可以作为监测膀胱移行细胞癌恶性程度及复发的重要指标。