骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠认知功能的影响

目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对血管性痴呆大鼠认知功能及海马CA1区域GAD67、GABABR1的表达的影响。 方法成年雄性SD大鼠60只随机分为假手术组(n=20),模型组(n=20)和移植组(n=20)。结扎双侧颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型,2 h后BMSCs尾静脉移植,28 d后水迷宫检测认知变化,Western blotting和免疫组化分析大鼠海马CA1区GAD67和GABABR1的表达变化。 结果(1)Western blotting和免疫组化结果显示,模型组相比假手术组在慢性期海马CA1区GAD67和GABABR1表达水平(蛋白水平以及免疫组化染色强度)下调,差异具有统计学意义(分别为1.347±0.357比2.237±0.956,t=5.478,P=0.0076;0.779±0.181比1.691±0.337,t=4.893,P=0.0073)。(2)移植组GAD67和GABABR1表达水平改变均比模型组轻微,差异具有统计学意义(分别为1.611±1.007比1.347±0.357,t=2.379,P=0.0373;1.009±0.257比0.779±0.181,t=2.678,P=0.0441)。(3)水迷宫认知功能测试显示,移植组比模型组潜伏期缩短(20.817±2.891比30.192±3.472,t=2.743,P=0.0442),且在游泳轨迹方面显示出更好的方向性。 结论BMSCs移植可提升血管性痴呆大鼠认知功能并上调海马CA1区GAD67和GABABR1表达水平。     

骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆

随着组织工程学的兴起,骨髓间充质干细胞在众多疾病的治疗上渐已成为各国学者研究的热点,本文主要介绍其在血管性痴呆治疗方面的研究进展以及血管性痴呆动物模型制作方法的研究近况.     

骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠海马胆碱能系统的影响

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马胆碱能系统的影响.方法 体外分离、扩增大鼠BMSCs,并用BrdU标记.采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将大鼠随机分为3组:A组(BMSCs移植组):于双侧颈总动脉结扎后4周经尾静脉注射BMSCs;B组(对照组):注射同等剂量PBS;C组(假手术组):暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.BMSCs注射后4周,采用免疫荧光染色观察大鼠海马BrdU标记细胞;测定海马结构内乙酰胆碱酯酶(ACHE)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性.结果 BMSCs移植后4周A组大鼠海马结构可见荧光标记的BMSCs;A、B组AChE和ChAT活性均较C组降低(P＜0.05),且A组较B组显著增强(P＜0.05).结论 静脉移植BMSCs可增强VaD大鼠海马胆碱能系统活性.     

骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠的保护作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对血管性痴呆大鼠的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和移植组。采用双侧颈总动脉永久性结扎建立大鼠血管性痴呆(Va D)模型,模型建立24 h后,尾静脉移植第三代BMSC 3×106个。于移植结束后第14 d取海马组织Western blot分析缺氧诱导因子(HIF-1α),血管内皮生长因子(VEGF)和Caspase-3表达量的变化,免疫荧光分析血管密度的变化。结果移植组干预效果显著,VEGF表达量较模型组明显升高(P0.05),Caspase-3表达量较模型组显著下降(P0.05),且血管密度较模型组明显增高(P0.05),而HIF-1α表达量则无明显差异(P0.05)。结论骨髓间充质干细胞促进了血管生成,对血管性痴呆大鼠有一定的保护作用。     

甘露醇对骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马胆碱能系统的影响

目的 探讨甘露醇对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗血管性痴呆(VD)大鼠行为学及海马胆碱能系统活性的影响.方法 体外全骨髓培养结合细胞贴壁法培养大鼠BMSCs.采用双侧颈总动脉结扎法制备VD模型.将大鼠随机分为4组:(1)甘露醇预处理BMSCs组:造模4w后,先进行尾静脉注射20%甘露醇,10～30min后,再尾静脉注射BMSCs;(2)BMSCs组:造模4w后,经尾静脉注射等量BMSCs;(3)培养基组:造模4w后,经尾静脉注射等量BMSCs基础培养基;(4)假手术组:不进行任何干预.BMSCs移植4w后进行Morris水迷宫试验和大鼠海马内胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测.结果 甘露醇预处理BMSCs组的ChAT和AChE活性均比BMSCs组、培养基组有明显提高(P<0.05),同时其行为学亦较BMSCs组、培养基组有明显改善(P<0.05).结论 甘露醇预处理后进行静脉注射移植BMSCs,使VD大鼠模型海马胆碱能系统的活性明显增强,并进一步改善VD大鼠的学习与记忆能力.     

骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马CaM、CaMK Ⅱ表达水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)侧脑室移植治疗血管性痴呆(vascular dementia,VaD)模型对大鼠行为学及海马钙调蛋白(calmodulin,CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法以全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs);流式细胞仪对所培养BMSCs进行表面抗原鉴定;成纤维生长因子(basic fibroblast growth factorbfic,b FGF)和丁羟基茴香醚(beta hydroxy acid,BHA)诱导BMSCs分化为神经元细胞,并对诱导后的细胞,进行神经元特异性的免疫组化鉴定;采用改良四血管法制备Va D模型,设立对照组,造模4 w后将VaD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、BMSCs治疗组。观察4 w后实验大鼠的行为学表现及应用Real-time PCR检测海马CaM、CaMKⅡ表达水平。结果 BMSCs治疗组行为学表现有明显改善。其海马CaM、CaMKⅡmRNA表达比模型组降低(P<0.05)。结论侧脑室移植BMSCs显著改善VaD大鼠行为学表现,并使其海马CaM、CaMKⅡ表达降低。     

神经元型一氧化氮合酶在血管性痴呆大鼠海马中的表达

目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在血管性痴呆(VD)大鼠海马中的表达。方法 将60只大鼠随机分为：对照组、VD12h组、VD1d组、VD3d组、VD7d组。采用反复夹闭双侧颈总动脉方法建立VD大鼠模型，用HE染色观察各组大鼠海马CA1区神经元的数目；应用免疫组化染色和Western印迹方法检测nNOS在大鼠海马中的表达。结果 VD12h组、VD1d组、VD3d组、VD7d组大鼠海马CA1区神经元数均明显下降。nNOS在对照组大鼠海马CA1区中弱表达．在VD12h组表达增强．VD1d组进一步增强，VD3d和7d组表达逐渐减弱。结论 nNOS可能参与缺血早期海马神经元的损害，是VD的发病机制之一。     

金纳多对血管性痴呆大鼠认知功能及生长抑素表达的影响

目的研究金纳多对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能及生长抑素(SS)表达的影响。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型。将100只老龄大鼠随机分为假手术组、模型组和金纳多组。应用水迷宫及免疫组化方法对各组大鼠学习记忆及SS表达进行观察。结果模型组与假手术组学习记忆能力差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,金纳多治疗30 d后大鼠学习记忆能力明显改善(P<0.05),SS阳性神经元表达增加(P<0.05)。结论金纳多可增加SS阳性神经元表达,改善VD大鼠学习记忆能力。     

血管性痴呆大鼠认知功能及nNOS的表达

目的 探讨血管性痴呆(VD)大鼠认知功能、海马神经元结构及nNOS的表达.方法 采用双侧颈总动脉结扎法制备慢性前脑缺血动物模型,40只老龄大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M).应用水迷宫、透射电镜及免疫组化方法对2组大鼠学习记忆、神经元结构、nNOS表达进行观察.结果 与假手术组比较,大鼠水迷宫学习记忆能力在造模2个月后差异有统计学意义(P＜0.05),大鼠海马神经元在造模后变性水肿明显,大鼠海马及颞叶皮层nNOS在造模2个月后表达增加 (P＜0.05).结论 海马及颞叶皮层nNOS表达增加,神经元变性,可能导致血管性痴呆大鼠学习记忆障碍.     

骨髓间充质干细胞对移植免疫的影响

背景：近年来研究发现,骨髓间充质干细胞除具有支持体外造血、促进体内造血功能重建外,还具有较低的免疫原性和抑制异体T淋巴细胞增殖的作用,在调节移植免疫方面发挥重要作用,但其机制尚不十分明确。目的：就近年来关于骨髓间充质干细胞的免疫调节特性及其在造血干细胞移植中的作用简要综述。方法：由第一作者检索2000/2008 PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)有关骨髓间充质干细胞对移植免疫影响的文章,检索词为“BMSCs,hematopoietic stem cell transplantation,transplantantion immunity”,排除重复性研究。共保留37篇文献归纳总结。 结果与结论：骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中除了造血干细胞外的另一种干细胞,在免疫反应中可以逃避免疫识别、抑制免疫反应。骨髓间充质干细胞的免疫抑制作用能有效地运用于造血干细胞移植,降低移植物抗宿主病、促进移植物存活等,有广阔的应用前景。但目前为止尚未能建立鉴定骨髓间充质干细胞的统一标准,至今还未能筛选到骨髓间充质干细胞特异性的标记分子;缺乏安全性评价;影响移植物抗宿主病同时是否影响移植物抗白血病效应;以及对肿瘤细胞生长的影响等问题都有待于进一步的研究才能解决。     

A critical survey on nitric oxide synthase expression and nitric oxide function in the retinotectal system

The ongoing research on the roles of the gas nitric oxide (NO) in the nervous system has demonstrated its involvement in neurotransmission, synaptic plasticity, learning, excitotoxicity, neurodegenerative diseases and regulation of the cerebral blood flow. Thus, this molecule has been currently considered an important neuromodulator in CNS. Studies carried out in the visual system, particularly in the retinotectal component, have contributed to this current concept about NO. In the present work, we reviewed critically current data about nitric oxide synthase (NOS) expression in the superior colliculus/optic tectum, as well as the roles of NO in the formation of the retinotopic map and in synaptic plasticity. Several vertebrate species have been used in studies about the NOS expression in the retinotectal system and most of the available results are in agreement with the involvement of NO in the developmental refinement of the retinotectal projections, and its role as a neuromodulator of synaptic function during the processing of visual information. However, the few studies about the functional linkage between NOS expression/NO synthesis and retinotectal topographic refinement/tectal synaptic plasticity are not conclusive and/or sometimes inconsistent, indicating that more experimental data are necessary to improve the understanding about NO functions in this visual subsystem. Predictive models for the involvement of NO as a retrograde messenger in the developmental retinotectal refinement are discussed.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能的影响

背景：一些研究已显示，重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞具有向神经样细胞分化的潜能，且能提高脑缺血模型鼠的神经缺失功能。 目的：拟进一步观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠学习记忆能力的改善。 设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2006-01/2007-06在中山大学一附院神经病学实验室完成。 材料：清洁级8周龄雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、损伤模型组、基因修饰细胞组、未修饰细胞组，12只/组。另取出生3 d的清洁级SD大鼠10只，用于骨髓间质干细胞的分离培养。 方法：取传至第6代的骨髓间质干细胞，双酶切后亚克隆至pcDNA3质粒，行增强型绿色荧光蛋白基因转染，采用电穿孔法得到重组腺病毒Ad-BDNF，转染293细胞进行病毒包装。除正常对照组外，其余3组大鼠均建立阿尔茨海默病模型。造模后12 d，基因修饰细胞组取重组腺病毒脑源性神经营养因子基因修饰的不含血清骨髓间质干细胞悬液，于伤侧侧脑室坐标前囟后1.6 mm、外侧1.5 mm、腹侧4.0 mm注入8 μL；未修饰细胞组移植等量的单纯骨髓间质干细胞悬液。 主要观察指标：Western blotting法鉴定重组病毒在骨髓间质干细胞中表达，流式细胞仪检测基因感染效率。细胞移植后2周采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。 结果：Ad-BDNF感染的骨髓间质干细胞存在Mr14 000的脑源性神经营养因子蛋白条带，2 d后约34%骨髓间质干细胞被感染。基因修饰细胞组、未修饰细胞组大鼠平均逃避潜伏期均明显低于损伤模型组（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。与损伤模型组寻找平台的运动策略比较，基因修饰细胞组与未修饰细胞组趋向式、直线式显著增多（P < 0.01），边缘式、随机式明显减少（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。 结论：移植的骨髓间质干细胞经脑源性神经营养因子基因修饰后，可明显改善阿尔茨海默病模型鼠的记忆能力。     

BMSCs移植对大鼠脑梗死后神经功能恢复及Nogo-A表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）静脉移植对大鼠脑梗死后神经功能恢复及对Nogo-A表达的影响。方法将大鼠随机分成假手术组、模型对照组、溶剂对照组和移植组。全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,线栓法制作大鼠MCAO模型;移植组自尾静脉注射BMSCs悬液,溶剂对照组注射磷酸盐缓冲液;造模成功后第3、7、14和21 d通过神经功能缺损程度评分,观察其恢复状况;RT-PCR法检测Nogo-AmRNA的表达水平,免疫组化方法检测Nogo-A蛋白的表达水平。结果移植组第7、14和21 d神经功能恢复优于对照组;移植组第3、14和21 d脑组织损伤区周边组织中Nogo-AmRNA表达水平和Nogo-A蛋白的表达水平较对照组降低（P〈0.05）。结论 BMSCs移植可促进大鼠脑梗死后的神经功能恢复,其作用机制可能与下调Nogo-A的表达水平有关。     

Thy1.1干细胞对损伤动脉一氧化氮合成酶的影响

背景：目前干细胞移植对血管成形后再狭窄的影响存在争议。 目的：观察大鼠Thy-1.1干细胞局部移植对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响,探讨干细胞移植对内皮型一氧化氮合成酶及诱生型一氧化氮合成酶的影响,并评价干细胞移植对再狭窄的影响与一氧化氮合成酶的关系。 方法：4~6周龄雄性SD大鼠用于制备骨髓Thy-1.1干细胞。雌性SD大鼠随机抽签法法分为3组,干细胞组：于颈总动脉球囊损伤后即刻将约5×106 Thy-1.1干细胞注入至损伤血管局部;损伤组：颈总动脉球囊损伤后局部注入等量生理盐水;对照组：与损伤组共用大鼠,损伤组取材左侧损伤颈总动脉,对照组取右侧未损伤颈总动脉。各组各于术后即刻、3,7,14,21,28 d麻醉并处死大鼠,留取两侧颈总动脉标本。应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析,RT-PCR方法检测内皮型一氧化氮合成酶及诱生型一氧化氮合成酶的表达情况。 结果与结论：①干细胞组内膜面积低于损伤组(P < 0.05)。②损伤组内皮型一氧化氮合成酶mRNA明显低于对照组,诱生型一氧化氮合成酶mRNA表达高于对照组(P < 0.05)。③干细胞组内皮型一氧化氮合成酶mRNA及诱生型一氧化氮合成酶mRNA表达均明显高于损伤组(P < 0.05)。提示Thy-1.1干细胞局部移植可抑制内膜增生,对球囊损伤具有修复作用,这可能与Thy-1.1干细胞增加一氧化氮合成酶的表达,促进大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化有关。     

氟哌啶醇对雄性大鼠阴茎勃起功能和一氧化氮合酶基因表达及其活性的影响

目的探讨氟哌啶醇对雄性大鼠阴茎勃起功能和一氧化氮合酶（NOS）基因表达及其活性的影响。方法将40只3月龄雄性Sprague-Dawley大鼠随机均分为氟哌啶醇组（20只）和蒸馏水对照组（20只，以下简称对照组）。对两组鼠均每日连续灌胃给药，氟哌啶醇组鼠为氟哌啶醇2mg／kg体质量，对照组鼠为与氟哌啶醇组同等容积的蒸馏水。分别在给药第3，6周时每组各随机取10只大鼠与发情期雌鼠进行交配实验，并判断阴茎勃起功能。以逆转录-聚合酶链反应法测定雄鼠阴茎海绵体组织神经型（nNOS）、内皮型（eNOS）、诱导型（iNOS）NOS的mRNA表达情况，并以NOS活性试剂盒测定总NOS活性（tNOS）以及结构型NOS（cNOS，包括nNOS、eNOS）和iNOS的活性。结果氟哌啶醇组鼠给药第3，6周时雄鼠骑跨次数（U均=6．5，P均〈0．001）、阴茎插入次数（第3周：U=8．0，P=0．001；第6周：U=10．0，P=0．02）低于对照组鼠，差异有统计学意义；两者比率（插入命中率）在给药第6周时亦低于对照组鼠，差异有统计学意义（U=19，P=0，019）。给药第3周时氟哌啶醇组鼠阴茎海绵体组织eNOS mRNA表达低于对照组鼠，差异有统计学意义（t=-3，379，P=0，003）；给药第6周时eNOS及nNOS mRNA表达均低于对照组鼠，差异有统计学意义（eNOS：t=-3．846，P=0，001；nNOS：t=-5，773，P〈0．001）；iNOS mRNA表达在给药第3，6周均未见有明显影响。氟哌啶醇组鼠给药第3，6周阴茎海绵体组织tNOS、cNOS活性低于对照组鼠，差异有统计学意义（t=-2，173 - -4，184；P=0，001—0，048），iNOS活性的差异无统计学意义。结论结构型NOS基因表达以及NOS活性降低，可能是氟哌啶醇长期应用后阴茎勃起障碍的发生机制之一。     

骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死患者血管内皮功能的影响

背景：移植干细胞可以分化形成心肌细胞、血管内皮细胞改善心脏功能。但有些学者认为干细胞移植会加重梗死心肌的炎症反应及内皮功能不全，从而增加支架内再狭窄的发生率。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植后急性心肌梗死患者血清可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管内皮细胞黏附分子1、可溶性E-选择素含量的变化，评价干细胞移植的安全性。 设计、时间及地点：随机对照临床试验，于2006-06/2007-06在唐山市工人医院完成。 对象：急性前壁心肌梗死患者40例，随机分为2组：干细胞移植组20例，男12例，女8例，平均年龄（63.7±10.2）岁；单纯经皮冠状动脉介入组20例，男11例，女9例，平均年龄（65.3±11.5）岁。选取20名健康体检者作为正常对照组，男10名，女10名,平均年龄（62.4±10.7）岁。 方法：干细胞移植组患者急诊行经皮冠状动脉介入治疗开通罪犯血管后7~10 d行干细胞移植术，单纯经皮冠状动脉介入组患者急诊经皮冠状动脉介入治疗开通罪犯血管，未行干细胞移植。 主要观察指标：采用ELISA法测定急诊经皮冠状动脉介入前、干细胞移植术后及术后1，3，6月患者血清中可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管内皮细胞黏附分子1、可溶性E-选择素的变化。 结果：随访6个月中，干细胞移植组与单纯经皮冠状动脉介入组炎性因子表达量均呈下降趋势。术后1，3，6月干细胞移植组可溶性细胞间黏附分子1均低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05）；术后1，3月干细胞移植组可溶性血管内皮细胞黏附分子1均低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05），术后6个月两组间比较差异不显著(P > 0.05)；术后1，3月干细胞移植组可溶性E-选择素与单纯经皮冠状动脉介入组比较差异无显著性意义(P > 0.05)，术后6个月干细胞移植组低于单纯经皮冠状动脉介入组（P < 0.05），说明干细胞移植组下降更为显著。 结论：骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死较安全，不会加重炎性反应及血管内皮功能损伤，相反可能会带来有益影响。     

Expression of endothelial nitric oxide synthase in the ischemic penumbra: relationship to expression of neuronal nitric oxide synthase and vascular endothelial growth factor

Expressional patterns of the endothelial and neuronal forms of nitric oxide synthase (NOS) in cerebral ischemia were studied utilizing a permanent middle cerebral artery occlusion (PMCAO) model. Motor performance and infarct volumes were determined in the rats. Immunohistochemical staining for eNOS, nNOS and neurofilament were performed at 1, 2, 3, 5, 7 and 14 days after PMCAO. Vascular endothelial growth factor (VEGF) expression was determined by in-situ hybridization. PMCAO caused a reproducible cortical infarct with motor deficits in the rats. Double immunohistochemical stainings indicated that eNOS and nNOS were induced in ischemic neurons. Most stained neurons were positive for both NOS forms but some reacted with only one NOS antibody. nNOS expression peaked at 24-48 h after PMCAO, stained mainly the cytoplasm of core neurons, and disappeared after the 3rd day. eNOS expression increased until the 7th day, stained mainly the cytoplasm and membrane of penumbral cells and disappeared by the 14th day after PMCAO. VEGF expression was significantly induced in the penumbral zone in a similar distribution to eNOS. The anatomical and temporal pattern of VEGF and eNOS induction in the brain after permanent ischemia suggest that these mediators may play a role in protecting penumbral tissue from additional ischemic damage.