大网膜脊髓移植对实验性大鼠脊髓损伤治疗作用的研究

目的验证大网膜是否对脊髓损伤有修复作用。方法采用ＳＤ雌性大白鼠２０只，分实验、对照两组。在同等条件及体感诱发电位（ｓｏｍａｔｏｓｅｎｓｏｒｙｅｖｏｋｅｄｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ＳＥＰ）监测下造成截瘫。实验组施行大网膜脊髓移植，对照组致瘫后不作任何处理，动物饲养存活３～８周后进行辣根过氧化酶（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）逆行追踪法研究。结果实验组红核内标记细胞总数为１８４６个，对照组为５５６个，Ｐ＜０．０５，揭示差别显著。结论脊髓损伤后，大网膜脊髓移植对红核脊髓束神经纤维轴浆运输的恢复有促进作用，从形态学的角度进一步肯定了大网膜脊髓移植治疗外伤性截瘫的临床价值。     

同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤

脊髓损伤所造成的截瘫 ,至今仍缺乏有效的治疗方法。本实验采用同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤 ,通过观察植入的胚胎脊髓在宿主脊髓内的分化发育过程及对损伤脊髓再生修复的促进作用 ,为进一步探索脊髓损伤后再生修复的机制和胚胎脊髓移植的临床应用提供可能有用的实验依据。1　材料与方法1.1　动物与分组　　Ｗｉｓｔａｒ大鼠 96只 ,体重 (2 0 0± 2 0 )ｇ ,雌雄不拘。随机分为两组 :①胚胎脊髓移植组 :72只 ;②单纯脊髓损伤组 :2 4只。1.2　截瘫模型制备　　采用大鼠胸腰段 (Ｔ11 Ｌ1)脊髓左侧半横切损伤模型。1.3　胚胎脊髓移植　…     

实验性大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的 探讨胚胎脊髓移植对脊髓损伤（SCI）后细胞凋亡的影响。方法 将实验动物分为损伤对照组（A组），损伤后胚胎脊髓移植组（B组），移植后10周，对SCI区的脊髓切片组织进行细胞凋亡的检测9TUNEL）以及BCL－2蛋白阳性表达的测定（免疫组化法）。结果 两组中均发现凋亡细胞及BCL－2蛋白阳性表达，细胞凋亡率为A＞B，BCL－2蛋白阳性表达A＜B。结论 胚胎脊髓移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

脊髓损伤的移植研究

脊髓损伤（ＳｐｉｎａｌＣｏｒｄＩｎｊｕｒｙＳＣＩ）对人类的生命和健康构成极大威胁,是导致人们患病和死亡的主要原因之一。近年来,ＳＣＩ的发病率和患病率不断增加［１］。脊髓损伤不仅使患者遭受病痛折磨,而且其治疗和康复还要消耗国家和社会大量人力与物力资源。因此有必要对脊髓损伤及其治疗进行深入系统研究。在正常成年哺乳动物中枢神经系统（ＣｅｎｔｒａｌＮｅｒｖｅＳｙｓｔｅｍＣＮＳ）内,大部分细胞是分裂期后的（ｐｏｓｔｍｉｔｏｔｉｃ）。Ｃａｊａ在早期的实验研究中发现这些细胞仅保留有限的自我修复和繁殖能力,这可…     

神经干细胞移植对损伤脊髓细胞的保护作用

目的 观察神经干细胞移植对损伤脊髓细胞的保护作用。方法 将脊髓半横断伤SD大鼠模型，随机分为神经干细胞移植组(A组)、损伤对照组(B组)和正常组(C组)，24小时每组12只动物取伤段标本测水离子含量。其余动物第6周、第12周每组8只动物爬坡试验，评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果 脊髓损伤(SCI)后组织水肿，Na^ 、Ca^ 离子浓度升高，K^ 、Mg^2 离子浓度降低。神经干细胞脊髓内移植后显著改善这些变化，使损伤神经功能有显著恢复。结论 神经干细胞脊髓内移植对SCI有保护作用。其机制可能与减少神经细胞离子失衡、改善细胞内环境有关。     

大鼠嗅鞘细胞移植对脊髓横断损伤的修复作用

目的观察嗅鞘细胞（OECs）移植后在体内的存活情况和对脊髓横断伤的修复作用。方法4月龄SD大鼠,体质量250g左右。显露T9段脊髓,完全横行切断脊髓。A组（20只）在损伤远近端注射由成年SD大鼠嗅球分离、培养、纯化的OECs,B组（20只）在相同位置注射DMEM培养液,C组（10只）单纯做T9节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况,每2周测定1次后肢运动功能（BBB评分法）,共12周。术后3个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗NF和p75免疫组化染色。利用p75免疫组化染色来观察OECs在体内存活情况。结果手术后4周开始有运动功能恢复,在各个时间段BBB运动功能得分A组均显著高于B组（均P〈0.001）。A、B组都有神经纤维进入损伤区,在损伤近端,神经纤维数量A组显著多于B组（P〈0.001）,但都显著少于相应节段的C组（P〈0.001）。经过p75免疫组化的OECs存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘1.0cm处。脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复成正相关（P〈0.01）。结论OECs移植具有明显促进脊髓横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后腓肠肌的影响

目的：探讨神经干细胞（NSCs）移植对脊髓损伤后腓肠肌的影响。方法：30只Wistar大鼠随机分为正常组（A组）、损伤组（B组）和NSCs移植组（C组），每组10只；将培养的大鼠神经干细胞悬液注入C组切断脊髓处，B组注射等量的生理盐水。术后2个月，进行腓肠肌肌电位、肌湿重测定，观察腓肠肌运动终板的变化。结果：①与A组比较，B组和C组腓肠肌肌电位的峰值下降，时限延长（P＜0．01），C组电位有所恢复。②与A组比较，B组的腓肠肌肉湿重下降近70％，C组肌肉湿重有所恢复，但仍未达到正常水平（P＜0．01）。③B组和C组的运动终板形状变得单一，运动终板的总数量减少，其中C组比B组减少数目为主。结论：神经干细胞移植入脊髓损伤的横断处，能延缓肌肉的萎缩，有助于其功能的恢复。     

急性脊髓损伤后胎鼠脊髓的脊髓内移植及其影响因素

本文利用显微外科技术建立了大鼠急性脊髓损伤后胎鼠脊髓的移植方法,并用形态学技术研究了胎龄及其他因素对移植物的影响。结果表明,在E_(14)～E_(20)胎龄中,以取自E_(14)的移植物存活率最高,为70.83％。E_(16)以后,无一例移植物存活。附于移植物的结缔组织严重阻碍移植物的存活与生长。脊髓损伤及继发的病理反应也对移植物的存活与生长带来不良影响。我们认为,胚胎神经组织移植时,除注意技术操作和改善脊髓损伤外,事先确定移植物的分化程度至关重要。     

骨髓基质细胞体外诱导分化移植治疗大鼠脊髓损伤的研究

目的 探讨大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在体外由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)联合诱导下分化成的神经细胞样细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,利用bFGF+EGF+RA在体外诱导BMSCs向神经细胞样细胞分化.在倒置相差显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体鉴定.实验动物分为3组:细胞移植组(A组)、模型对照组(B组)、正常对照组(C组).A、B组采用改良Allens法建立大鼠急性脊髓损伤模型.A组在造模后立即将诱导后的BMSCs悬液多点缓慢注入到损伤节段的头侧和尾侧,B组同法注射等量磷酸盐缓冲液.C组不造模,于相同部位注射等量磷酸盐缓冲液.于伤后1～5周,按照BBB法观察脊髓神经功能恢复情况并处死动物取材,用HE染色观察脊髓病理变化.结果 诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达;细胞移植后1～5周,A、B组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,BBB评分差异有统计学意义(P<0.05);组织形态学观察示A组损伤脊髓恢复较好.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向神经干细胞分化,并可调控神经元分化,将其移植于大鼠脊髓损伤区,可促进脊髓损伤的恢复.     

大黄对大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的保护作用

目的 观察不同浓度大黄对大鼠脊髓损伤(SCI)后血-脊髓屏障(BSCB)的影响,筛选大黄煎药灌服的最佳浓度,拟为临床治疗SCI提供一定的依据.方法 成年健康SD大鼠125只,随机分为假手术组(Sham组)、模型组及大黄低、中、高剂量组.大黄各剂量组用大黄水溶液灌胃,其余两组用等量生理盐水.记录大鼠SCI后双后肢运动功能(BBB)评分、脊髓含水量以及荧光显微镜观察注入伊文思蓝(EB)后的BSCB情况.结果 (1)BBB评分:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(2)脊髓含水量的测定:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(3)荧光显微镜下观察到Sham组没有EB染出,模型组EB大量染出,以3 d时染出最多,大黄各剂量组EB染出较模型组有不同程度减少,以大黄中剂量组EB染出最少.结论 中剂量组大黄有效地降低了大鼠SCI后BSCB的通透性,对其保护作用最为明显.     

人参皂甙对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及其机制

目的 探讨人参皂甙（Ginsenodides,Gs）对急性脊髓损伤的保护作用及其机制。方法采用改良Allen’s重物打击法制作急性脊髓损伤模型。大鼠随机分为对照组、损伤组和Gs治疗组。每组36只,分别于术后6h、12h、1d、3d、7d、14d完整取大鼠Tq脊髓段。斜板实验和BBB行为学评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;TUNEL法标记脊髓组织凋亡细胞;Westernblot方法检测B细胞淋巴瘤／白血病基因-2（Bcl-2）和Bcl伴随蛋白x（Bax）蛋白表达;RT—PCR方法检测半胱氨酸基天冬氨酸-特异性蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达。结果损伤组和Gs组大鼠术后14d内脊髓功能均有不同程度恢复,Gs组恢复优于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;损伤组大鼠脊髓TUNEL标记的阳性细胞数于术后3d达高峰,Gs组于相应各时间点均低于损伤组（P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓Bcl-2蛋白表达高于损伤组（P〈0．01）,术后12h、1d、3d、7d、14dGs组大鼠脊髓Bax蛋白表达均低于损伤组（P〈0．05或P〈0．01）;术后各时间点Gs组大鼠脊髓caspase-3mRNA表达低于损伤组（P〈0．01）。结论通过提高Bcl-2／Bax比值并抑制caspase-3mRNA表达减少脊髓损伤后神经元凋亡是Gs对脊髓损伤后具有保护作用的可能机制之一。     

Effects of MK-801 on apoptosis of spinal cord neurons after cord injury and fetal cord transplantation in rats

It has been reported that spinal cord injury consistsOf P~ and seconds damages. Most of the pridamages result fIDm exogenous factors such as mechanicalimpact and foe intensity of secontw daxnages is influenced by many internal factors such as ederna, ischenda,inchhed level of neurobosndtters and intheellular calci.urn ions, Presence Of free I'adicals and nixon oalde(NO), etc. Pwhctilarly, excitatory piano acids are considend to Play an important role in the SeCondary autodestrUction of th…     

人脐血单个核细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察人脐血单个核细胞移植入大鼠脊髓损伤部位后的分化、迁移情况和损伤后功能的修复.方法:建立SD大鼠T10脊髓节段损伤模型.随机分为移植组和对照组,每组20只.分离人脐血单个核细胞,Ho-echst33258标记后移植入脊髓损伤部位,观察迁移情况,并用免疫荧光双标法观察移植细胞是否可以表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP),同时采用BBB运动功能评分观察脊髓功能的修复情况.结果:人脐血单个核细胞在移植区脊髓内存活,并有GFAP和NSE阳性表达的移植细胞,移植细胞沿脊髓长轴发生迁移,10周时最多町向脊髓头尾两侧迁移7 mm.BBB评分结果显示,移植组4周后与对照组相比[(11.55±1.05)vs (5.93±0.80)]、10周后与对照组相比[(13.50±0.88) vs (8.07±0.82)],差异均有统计学意义(P<0.05).结论:人脐血单个核细胞对脊髓损伤的功能修复有促进作用,可能是一种治疗脊髓损伤的新的种子细胞.     

Brain-derived neurotrophical factor after olfactory ensheathing cells transplantation in spinal cord injury of rats

<正>Objective To observe the expression of brain - derived neurotrophical factor ( BDNF) in injury spinal cord after transplantation olfactory ensheathing cells ( OECs) , and to investigate the mechanism of OECs repairing spinal cord injury. Methods OECs from GFP transgenic rats were separated and cultured for transplantation. Spinal cord injury rats were separated two groups by random     

丙泊酚对颈髓损伤大鼠心肌的保护作用

 目的 研究丙泊酚对高位脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)大鼠心肌的保护作用。方法 SD大鼠（96只）随机分为3组：对照组（未损伤组,输入乳酸钠林格氏液12mL&#8226;kg-1&#8226;h-1）,乳酸钠林格氏液组（C7脊髓损伤后输入乳酸钠林格氏液12mL&#8226;kg-1&#8226;h-1）,丙泊酚组（C7脊髓损伤后输入丙泊酚15mg&#8226;kg-1&#8226;h-1）。在损伤后1h测定心肌c-fos蛋白的表达;4h、24h测定心肌酶;72h观察心肌镜下结构的变化。每组每个时点为8只大鼠（n＝8）结果 同对照组相比,输注乳酸钠林格氏液的损伤组大鼠心肌c-fos蛋白表达增加,心肌酶增高（P<0.05）,超微结构有异常改变。丙泊酚组上述改变亦较对照组明显,但显著低于乳酸钠林格氏液组（P<0.05）。结论 高位SCI后的大鼠存在心肌损伤,早期使用丙泊酚可以显著减轻心肌的损伤。     

白藜芦醇对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的：建立Allens脊髓模型,探讨白藜芦醇（Res）对大鼠脊髓损伤（SCI）的保护效果.方法：将24只SD大鼠随机分为假手术组（A组）,脊髓打击损伤组（B组）,Res组（C组）,每组8只.A,B组根据自制改良的Allens装置制备脊髓急性打击损伤动物模型.脊髓打击损伤后即刻腹腔注射Res100mg/kg,观察并检测3组大鼠SCI后24,48,72h3个不同时间点后肢运动功能评分变化及脊髓组织病理学、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量改变.结果：术后A组大鼠功能完全恢复.B组和C组大鼠后肢运动功能24,48,72h3个时间点均有所改善.但24h时差异明显（P〈0.05）;48,72h时差异更为显著（P〈0.01）.A组神经组织结构完好,神经元轮廓清楚,核仁清晰可见,胞质均匀深染.脊髓打击损伤后72hB组神经组织多灶性出血并出现广泛的神经元坏死,尼氏体溶解消失,核固缩变小.C组神经组织结构损伤轻微,细胞轻度肿胀,胞质均匀.术后A组脊髓组织SOD活性升高,而MDA含量则处于较低水平.B组SOD活性明显降低,MDA含量明显升高,与A组相比较差异显著（P〈0.01）.C组与B组相比较,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.01）.结论：Res能明显促使SCI后的功能恢复,对SCI具有一定的保护作用.     

TAT-PEG-磁性纳米脂质体跨脊髓损伤大鼠血脊髓屏障的观察

目的 探讨TAT-PEG-磁性纳米脂质体作为一种药物载体通过尾静脉注入跨越大鼠血脊髓屏障(BSCB)并在脊髓损伤局部聚集的情况.方法 通过反向蒸发法制备新型磁性纳米脂质体,通过表面功能基团连接TAT、PEG而形成TAT-PEG-磁性纳米脂质体,使其兼备跨膜功能、长循环功能及核磁活体示踪功能;36只成年Wistar大鼠以Impactor Model-Ⅱ法建立T10急性脊髓损伤模型,随机分为3组,Ⅰ组:对照组,Ⅱ组:PEG-多功能脂质体组,Ⅲ组:TAT-PEG-多功能脂质体组,各组均12只.将制备出的TAT-PEG-多功能脂质体,通过尾静脉注入Ⅲ组大鼠脊髓损伤模型体内,将PEG-多功能脂质体按同样剂量尾静脉注入Ⅱ组大鼠体内,Ⅰ组尾静脉注入等量生理盐水,通过核磁共振(MRI)动态观察TAT-PEG-多功能脂质体在脊髓损伤局部的靶向聚集与扩散情况、通过普鲁士蓝染色、电镜观察、火焰原子吸收分光光度法检测,分析其在脊髓损伤局部的聚集情况.结果 TAT-PEG-磁性纳米脂质体可以穿过BSCB聚集在脊髓损伤局部,MRI动态观察显示,这种药物载体逐渐在损伤局部浓集,主要呈现T2WI低信号.普鲁士蓝染色观察到聚集在损伤局部组织的蓝染铁颗粒,电镜进一步观察到脊髓组织神经细胞内聚集的铁颗粒,火焰原子吸收分光光度法分析显示Ⅲ组脊髓损伤局部铁元素含量相对升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TAT-PEG-磁性纳米脂质体作为一种新型药物载体,通过静脉途径注入体内,可以跨越BSCB聚集在脊髓损伤局部,并能将其包裹的物质释放入损伤局部的神经细胞内,可作为脊髓损伤的治疗的新思路.

Abstract：

Objective To evaluate the ability of a kind of novel magnetic liposomes modified with polyethylene glycol(PEG) and transactivating-transduction protein (TAT) to cross the blood spinal cord barrier (BSCB) so as to demonstrate whether or not they can accumulate at the lesions of injured spinal cord. Methods The novel liposomes were made through reverse-phase evaporation method modified with polyethylene glycol (PEG) and transactivating-transduction protein (TAT) with an iron core. Thirty-six Wistar rats subject to spinal cord injury (SCI) at T10 were randomly divided into three groups (Groups Ⅰ ,Ⅱ and Ⅲ ). The rats of Group Ⅲ were injected with TAT-PEG loaded magnetic liposomes (4.55 mg/kg).The rats of Group Ⅱ received an injection of the equivalent PEG loaded magnetic liposomes while those of control group ( Group Ⅰ ) the equivalent normal saline. The accumulation of liposomes was observed by MRI (magnetic resonance imaging), Prussian blue staining, electron microscope and flame atomic absorption spectrophotometer. Results This kind of TAT-PEG loaded magnetic liposomes could croas the BSCB and enter into the cells around the injured tissue. A low signal of T2WI on MRI could also be found in Group Ⅲ.The results of flame atomic absorption spectrophotometer showed that the iron content accumulated around the lesion site in Group Ⅲ was obviously higher than the other two groups (P＜0.05). Conclusion The TATPEG loaded magnetic liposomes may be employed as one kind of novel drug carrier to cross the BSCB and accumulate at tissue cells of spinal cord. It is likely to become a new therapy for SCL