MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究

目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础。方法 荧光实时定量PCR（RT-PCR）检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控。结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibitor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达。结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用。     

miR-296靶向FGFR1对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR-296靶向成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人SK-OV-3细胞,并将细胞分为对照组、miR-296 NC组、miR-296 mimics组、miR-296 mimics+FGFR1 NC组、miR-296 mimics+FGFR1组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-296、FGFR1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)法检测增殖、迁移和侵袭蛋白的表达;双荧光素酶报告实验分析miR-296与FGFR1的靶向关系。结果 与对照组比较,miR-296 mimics组miR-296表达显著升高,FGFR1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与miR-296 mimics组比较,miR-296 mimics+FGFR1组miR-296表达差异无统计学意义(P>0.05),FGFR1 mRNA表达显著升高(P<0.05)。与对照组比较,miR-296 mimics组细胞活力、迁移和侵袭细胞数目、...     

miR-4660对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的 探讨miR-4660对肝癌细胞SK-HEP-1侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法 利用癌症数据在线分析网站UALCAN分析肿瘤基因组图谱数据库TCGA中肝细胞癌组织中半乳糖凝集素3结合蛋白(LGALS3BP)基因表达,miRNA靶基因预测网站Targetscan在线预测miR-4660与LGALS3BP基因3′非翻译区(3′UTR)的结合关系。利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-4660与LGALS3BP基因之间的调控关系。分别将miR-4660模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照(miR-NC)转染至人SK-HEP-1细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测LGALS3BP基因及PI3K/Akt信号通路蛋白p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt的表达水平。细胞划痕及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。结果 UALCAN分析显示,相对于正常组织,在肝细胞癌组织中LGALS3BP显著高表达(P<0.05)。Targetscan预测到,miR-4660在LGALS3BP 3′UTR区有两个结合位点。双荧光...     

miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移

目的 探讨miR-10a-5p是否通过靶向维甲酸受体相关孤儿受体A(RAR-related orphan receptor A,RORA)对胃癌细胞侵袭、迁移产生影响及其作用机制.方法 qRT-PCR检测人正常胃黏膜细胞GES-1与三株胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823中miR-10a-5p的表达水平....     

LncRNA SNHG7靶向调节miR-146a-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNASNHG7)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制.方法:培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16;将si-NC、si-SNHG7分别转染至 NCI-N87细胞中,记为 si-NC 组、si...     

miR-197靶向调节CD82对结肠癌细胞侵袭转移的影响

【摘要】 目的 探讨下调microRNA-197 (miR-197)对结肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法 将对数生长期HCT 116细胞随机分为miR-197反义寡核苷酸（inhibitor）组、无义序列阴性对照（NC）组、空白对照（Mock）组,采用脂质体介导转染法,将miR-197反义寡核苷酸（miR 197 inhibitor）转染HCT116细胞。运用荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-197的表达水平;通过生物信息学预测miR-197靶基因,应用Western blot法检测CD82蛋白的表达;采用transwell小室实验检测HCT116细胞的侵袭、迁移能力的改变。结果 miR-197反义寡核苷酸转染HCT116细胞后,inhibitor组miR-197的表达较NC组和Mock组明显降低(P＜0.05);下调miR-197的表达后,inhibitor组的CD82蛋白表达较其余两组显著增加(P＜0.05);转染miR-197反义寡核苷酸的HCT116细胞的侵袭与迁移能力inhibitor组较NC组、Mock组均降低 (P＜0.05)。结论 下调结肠癌HCT116细胞中miR-197的表达能抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,其机制可能与其靶点CD82表达增加有关,这将为结肠癌的治疗提供新的靶点。     

miR-599靶向YAP1对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨miR-599靶向Yes相关蛋白1(YAP1)对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响。方法：采用qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80与卵巢癌细胞SKOV3中miR-599的表达;将SKOV3细胞分为6组：空白组、miR-NC组、miR-599 mimics组、siRNA-NC组、YAP1 siRNA组、YAP1 siRNA+miR-599 inhibitor组,划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell实验检测各组细胞侵袭;Western Blot检测各组细胞中YAP1蛋白表达;双萤光素酶实验验证miR-599与YAP1的关系。结果：miR-599在SKOV3细胞中的表达水平显著低于IOSE-80细胞（P<0.05）;过表达miR-599或沉默YAP1均可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭;miR-599可靶向调控YAP1表达;抑制miR-599可逆转沉默YAP1对SKOV3细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论：过表达miR-599通过下调YAP1来抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

miR-3188对胃癌细胞恶性生物学行为的作用及机制研究

目的 探究miR-3188对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其潜在分子机制。方法 通过qRT-PCR法检测正常人胃黏膜细胞(GES-1)及人胃癌细胞系(HGC-27、MGC-803、BGC-823、MKN-45)中miR-3188表达水平,通过生物信息学分析及双荧光素酶报告实验确定NRAGE是否为miR-3188的靶基因,分别将miR-3188 mimic、miR-3188 inhibitor及阴性对照物miR-NC,antimiR-NC转染至胃癌细胞HGC-27中,通过Western blot及qRT-PCR法检测NRAGE蛋白及mRNA表达水平,将miR-3188 mimic, NRAGE过表达质粒(pc-NRAGE)及其阴性对照物miR-NC、pc-control分别或共转染至胃癌细胞HGC-27中,利用CCK-8、流式细胞术、Transwell实验检测各组细胞增殖活性、凋亡率、侵袭及迁移的能力,通过Western blot检测各组细胞上皮-间质转化(EMT)、增殖、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白[细胞周期蛋白D 1(CyclinD 1),基质金属蛋白酶9(MMP 9),B-ce...     

HPSE2在胃腺癌组织中的表达及对胃癌细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨HPSE2在胃癌组织中的表达及其对胃癌生存预后及胃癌细胞侵袭迁移的影响.方法 将胃腺癌组织芯片进行HPSE2的免疫组化染色,检测其在癌及癌旁组织中的表达,分析其表达水平与胃癌临床特征、生存预后及预后影响因素的关系.构建HPSE2过表达载体,转染胃癌细胞建立HPSE2过表达细胞,Transwell实验检测HPS...     

miR-485-5 p介导SOX5基因表达对肝细胞肝癌细胞活力及迁移侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-485-5 p靶向性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对肝细胞肝癌(HCC)细胞活力和迁移侵袭能力的影响及作用机制.方法 采用Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-485-5 p对SOX5基因的靶向调控作用.qRT-PCR检测HCC组织中miR-485-5 ...     

miR-3685通过靶向CTTN抑制宫颈癌细胞的迁移、侵袭及生长

目的:微小RNA (microRNA,miRNA)通常通过与其靶基因的3′非翻译区（3′UTR）结合而调控肿瘤细胞的恶性行为,目前miR-3685对肿瘤细胞恶性行为的影响鲜有报道,本文旨在探讨miR-3685对宫颈癌细胞恶性行为及其分子机制的影响。方法:生物信息学软件预测miR-3685的靶基因,用EGFP报告系统验证。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测miR-3685和CTTN(cortactin)在人类宫颈癌细胞中的表达,用transwell迁移/侵袭实验、Western blot实验、集落形成实验、细胞周期进程实验分别检测了miR-3685和CTTN对HeLa细胞和SiHa细胞的迁移、侵袭能力、EMT进程、细胞增殖能力及细胞周期进程的影响。结果:与对照组相比,过表达miR-3685可抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,封闭miR-3685,得到相反的结果。过表达CTTN可促进宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,EGFP报告系统验证CTTN是miR-3685的直接靶基因（*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001）。结论:miR-3685通过抑制CTTN的表达而抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长。     

胃癌中miR-216 a表达的变化及其对胃癌细胞侵袭的靶向调控作用

目的:研究胃癌中微小RNA-216a(miR-216a)表达的变化及其对胃癌细胞侵袭的靶向调控作用。方法:收集胃癌组织及癌旁组织,检测miR-216a的表达量;培养SGC7901细胞株并分为转染阴性对照(NC)模拟物的NC组、转染miR-216a模拟物的miR-216a组,检测穿膜细胞数、侵袭基因基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及信号通路分子Janus相关激酶2(JAK2)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)的表达量。结果:胃癌组织中miR-216a的表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),且TNM分期、低未分化Ⅲ期、有淋巴结转移的胃癌中miR-216a的表达量明显低于TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的胃癌(P<0.05);miR-216a组SGC7901细胞的穿膜数目明显少于NC组,细胞中MMP2、MMP9、N-cadherin、p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量及MMP2、MMP9、N-cadherin、JAK2、STAT3的mRNA表达量均明显低于NC组(P<0.05)。结论:胃癌中miR-216a的低表达能够靶向促进胃癌细胞的侵袭,且与JAK2/STAT3信号通路有关。     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

miRNA-100对胃癌细胞侵袭迁移力及放射敏感性的影响

目的 探究miRNA-100对胃癌细胞NCI-N87侵袭转移能力及放射敏感性的影响.方法 实时荧光定量PCR定量检测miR-100在NCI-N87细胞中的表达量.克隆形成实验、MTT实验、Transw ell侵袭实验、流式细胞仪、细胞划痕实验及Western blot检测miR-100对胃癌细胞NCI-N87放射敏感性、增殖、侵袭、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达的影响.结果 实时荧光定量PCR结果显示miR-100在NCI-N87细胞中的表达明显改变;克隆形成实验、MTT实验、Transwell侵袭实验、流式细胞仪、细胞划痕实验及Western blot结果证实miR-100可抑制NCI-N87细胞增殖、侵袭、迁移及侵袭相关蛋白的表达,促进细胞凋亡,提高其辐射敏感性.结论 miR-100可抑制NCI-N87细胞的生长增殖侵袭迁移能力,促进其凋亡,且提高其辐射敏感性.     

Twist对胃癌细胞系MKN28迁移和侵袭能力的影响

目的:研究Twist基因对人胃癌细胞株MKN28迁移和侵袭能力的影响.方法:利用脂质体介导转染技术和遗传霉素筛选得到稳定高表达的Twist蛋白的细胞克隆Twist -MKN28;采用Western免疫印迹检测细胞中Twist,上皮细胞钙黏蛋白(ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达;用基质胶侵袭小室检测细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:阳性质粒组Twist -MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PcDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist -MKN28组细胞中ecadherin蛋白减少,而vimentin蛋白表达上调;Twist -MKN28组细胞迁移、侵袭能力明显增强.结论:Twist基因可能通过上皮-间质转型促进胃癌细胞的迁移和侵袭.     

薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制

目的:研究不同浓度薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移能力及CD44、CD133表达的影响。方法:以不同浓度薏苡仁酯作用于BGC-823细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,黏附试验、Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞黏附、侵袭、迁移能力,RT-PCR法检测细胞CD44、CD133 mRNA表达水平。结果:薏苡仁酯可抑制BGC-823细胞增殖,其抑制效应呈剂量-时间依赖性;经薏苡仁酯作用后BGC-823细胞的侵袭、迁移及黏附能力降低;CD44、CD133 mRNA的表达与薏苡仁酯浓度亦呈负相关。结论:薏苡仁酯能降低胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移、黏附能力,其机制可能与通过下调CD44、CD133表达有关。     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

miR-124抑制胃癌MKN-45细胞的侵袭与转移

目的探讨miR-124对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。方法使用脂质体将miR-124mimics转染MKN-45细胞．以无关序列（scramblemimics）作为阴性对照。采用细胞划痕实验观察miR-124过表达对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响。结果细胞划痕实验显示,转染miR-124mimics24h、48h后伤IZl愈合率分别为（0．313±0．005）、（0．369±0．031）．与各自对照组（0．413±0．035）、（0．852±0.024）比较能明显减缓MKN-45细胞划痕伤口的愈合,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-124能抑制胃癌细胞侵袭能力,它可能在胃癌的发生和进展中发挥重要作用。