NLRP3炎症小体介导的巨噬细胞极化在ITP中的作用

目的 探讨在免疫性血小板减少症(ITP)中NLRP3炎症小体的活化水平及抑制NLRP3介导的炎症小体活化对M1型巨噬细胞极化与免疫功能的影响。方法 RT-qPCR法检测ITP患者(ITP组)和健康对照组(Control组)外周血单个核细胞(PBMC)与CD14⁺单核细胞中NLRP3 mRNA的表达；ELISA法检测两组血清中IL-1β与IL-18的含量；Pearson相关系数分析NLRP3、IL-1β与IL-18表达水平与血小板计数的相关性；将ITP患者来源的M0型巨噬细胞(MDMs)分为4组：IgG对照组(IgG组),MCC950处理组(MCC950组),LPS、IFN-γ与IgG处理组(LPS+IFN-γ+IgG组)和LPS、IFN-γ与MCC950处理组(LPS+IFN-γ+MCC950组);RT-qPCR与Western blot检测4组MDMs中M1型巨噬细胞标志物CD86、iNOS、MCP-1 mRNA与蛋白水平；Western blot检测各组MDMs中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、cleaved caspase-1与IL-β的表达；...     

M2型巨噬细胞与支气管哮喘研究进展

<正>巨噬细胞在体内分布广泛,根据活化后细胞表面标志及功能的不同,巨噬细胞大体可分为M1和M2型巨噬细胞~([1])。M1型巨噬细胞即经典活化巨噬细胞(classically activated macrophages,CAM),主要发生在Thl细胞的免疫应答中,由IFN-γ、LPS和TNF-α等诱导,活化后释放活性氧(ROS),诱导生成一氧化氮合成酶(iNOS),合成大量促炎因子(IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α等)。M2型巨噬细胞即替代活化巨噬细胞(alternatively activated macrophages,AAM),由IL-4、IL-1 3     

巨噬细胞极化为M1型或M2型对铁代谢的影响

目的探讨巨噬细胞极化形成M1型或M2型对铁代谢的影响。方法应用脂多糖（LPS）20ng/mL或IL-410ng/mL诱导RAW264.7巨噬细胞极化,电子显微镜下观察处理后的巨噬细胞极化形态特征,采用免疫荧光染色法及Westernblot法检测M1型标志物TNF-α和一氧化氮合酶（iNOS）及M2型标志物精氨酸酶1（Arg-1）的表达情况;LPS或IL-4处理后的巨噬细胞与红细胞及铁剂共培养,通过瑞氏染色和铁染色,评价其铁摄入功能;ELISA法检测LPS或IL-4处理后巨噬细胞内及培养液中铁蛋白含量,以评价其铁储存功能。结果LPS处理后巨噬细胞由圆形向多形性转化;同时,TNF-α和iNOS的表达水平明显增加;可见吞噬红细胞现象,胞质中吞噬的铁颗粒明显增多。IL-4处理后巨噬细胞形态也呈多形性改变,同时Arg-1表达水平增加,但未见吞噬红细胞现象,且胞质内吞噬的铁颗粒较少。此外,LPS处理后巨噬细胞胞内铁蛋白含量较IL-4处理后明显增多。结论LPS与IL-4可诱导巨噬细胞形成不同极化亚型,其铁代谢存在明显差异。LPS处理的M1型巨噬细胞对铁的摄入及储存较IL-4处理的M2亚型巨噬细胞增加,有固铁优势。     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。     

热疗对巨噬细胞M2极化作用及其对肺癌细胞侵袭、迁移影响的体外实验研究

背景　热疗是一种安全的辅助治疗方法,通过抑制肿瘤细胞DNA修复、促进其凋亡、提高机体免疫等作用阻碍其发生、发展。但是,对于热疗是否可以通过干预巨噬细胞间接影响肿瘤细胞的研究并不多。目的　通过体外模拟热疗产生的温热作用,探讨在热疗条件下M2型肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞（LLC）的调控作用。方法　本研究于2019年6-12月实施。10 000 ng/L的干扰素γ（INF-γ）和100 000 ng/L的脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞48 h成为M1型巨噬细胞,20 000 ng/L 白介素（IL）-4诱导RAW264.7细胞48 h成为M2型巨噬细胞;通过流式细胞术和ELISA法分别检测M1、M2巨噬细胞表面标志抗原CD86、CD206的表达率和细胞因子IL-10、IL-12的分泌水平;采用CCK-8法检测不同热疗温度（41 ℃、42 ℃、43 ℃）干预对M2型巨噬细胞在24 h、48 h和72 h的增殖活性作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测M0、M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1 mRNA相对表达水平;Western blotting法检测M2型巨噬细胞及热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1蛋白相对表达水平;Transwell法检测LLC+M2、LLC+M2+热疗（42 ℃）中LLC的侵袭、迁移能力。结果　IFN-γ和LPS可诱导RAW264.7细胞向M1型极化,IL-4可诱导RAW264.7细胞向M2型转化。流式细胞术检测结果显示,M2型巨噬细胞CD86、CD206的表达率高于M0型巨噬细胞和M1型巨噬细胞（P<0.001）。ELISA法检测结果显示,M2型巨噬细胞IL-10的分泌水平较M0、M1型巨噬细胞高（P<0.001）;M1型巨噬细胞IL-12分泌水平较M0、M2型巨噬细胞高（P<0.001）。CCK-8法检测结果显示,42 ℃时热疗抑制巨噬细胞的能力高于41 ℃及43 ℃时（P<0.001）。RT-PCR检测结果显示,与M0型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1、Fizz-1 mRNA相对表达水平升高（P<0.001）。热疗（42 ℃）后M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1 mRNA和蛋白相对表达水平降低（P<0.001）。Transwell法检测结果显示,M2型巨噬细胞与LLC共培养后LLC侵袭、迁移数量增加（P<0.001）;热疗（42 ℃）后LLC侵袭、迁移数量减少（P<0.001）。结论　热疗可能通过下调M2型巨噬细胞的Arg-1、Ym-1 mRNA的表达水平从而抑制LLC的侵袭与迁移能力。     

人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用研究

目的：探讨Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用。方法：培养人单核细胞株THP-1细胞,提取人外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）、小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophage,BMDM）。随机分为对照组和实验组,实验组用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,100 ng/mL）复合干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ,20 ng/mL）干预（THP-1 18 h,PBMC、BMDM 24 h）构建巨噬细胞M1型极化模型。qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测2组M1型极化相关标志物,同时利用qRT-PCR和Western blot检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平。结果：与对照组相比,实验组在LPS+IFN-γ刺激后,qRT-PCR检测THP-1细胞M1型极化标志物：肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）（t=-4.360,P=0.007）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）（t=-8.329,P=0.000）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）（t=-2.924,P=0.033）、CD14（t=-2.858,P=0.035）、CD80（t=-3.433,P=0.019）,PBMC细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-2.893,P=0.034）、IL-1β（t=-3.606,P=0.015）、IL-6（t=-2.895,P=0.034）、CD14（t=-2.645,P=0.046）、CD80（t=-3.648,P=0.015）,BMDM细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-6.123,P=0.002）、IL-1β（t=-2.697,P=0.043）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）（t=-4.335,P=0.007）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）（t=-3.607,P=0.015）均明显增加,Western blot检测THP-1细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-3.827,P=0.031）、IL-1β（t=-4.189,P=0.025）、IL-6（t=-5.345,P=0.002）均明显增加,流式细胞术检测THP-1细胞M1型极化标志物HLA-DR（t=-3.270,P=0.017）、BMDM细胞M1型极化标志物F4/80+CD11c+（t=-3.833,P=0.009）均明显增加,提示M1型极化模型构建成功;在构建成功的M1型极化模型中,qRT-PCR检测THP-1细胞、PBMC细胞和BMDM细胞MEFV基因表达水平较对照组明显增加（t=-3.226,P=0.023;t=-2.989,P=0.030;t=-2.891,P=0.034）,Western blot检测THP-1细胞Pyrin蛋白表达水平较对照组明显增加（t=-8.591,P=0.000）。结论：巨噬细胞M1型极化中Pyrin表达增加,Pyrin可能与巨噬细胞M1型极化相关。     

哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征分析

目的:观察哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征。方法:12只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常组,每组6只。哮喘组和正常组分别采用卵清白蛋白和PBS致敏和激发。流式细胞仪检测肺间质巨噬细胞和M2型肺间质巨噬细胞的数量;RT-PCR检测肺间质巨噬细胞精氨酸酶1(Arg1)、转谷氨酰胺酶2(TG2)、白细胞介素(IL)-10和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平;ELISA法检测肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL-10和IL-12水平。结果:哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞占肺单个核细胞的百分数和M2型肺间质巨噬细胞占肺间质巨噬细胞的百分数明显高于正常组(均P<0.01)。哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞Arg1和TG2mRNA表达水平明显高于正常组(均P<0.01),IL-10mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.01),iNOS mRNA表达水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL-10水平明显低于正常组(P<0.01),IL-12水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘肺间质巨噬细胞表现为替代活化巨噬细胞的表型特征,并高表达TG2。     

健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌细胞侵袭作用的研究

目的 探讨健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响。方法 使用佛波酯诱导THP-1细胞成M0型巨噬细胞,通过Transwell法构建HCT116细胞与M0型巨噬细胞共培养体系,设立空白血清对照组、健脾消癌方含药血清组、IL-4+空白血清组、IL-4+健脾消癌方含药血清组。RT-PCR法检测巨噬细胞M2极化相关基因C-C基序趋化因子22(C-C motif chemokine22, CCL22)、精氨酸酶-1(arginase-1, Arg-1)表达,Transwell法检测HCT116侵袭转移能力,Western blot法检测HCT116中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP-9)蛋白表达水平。结果 与空白血清对照组比较,IL-4+空白血清组能上调CCL22、Arg-1表达（P<0.01）,下调HCT116细胞E-cadherin表达、上调Vimentin、MMP-9表达（P<0.01）,增加结直肠癌HCT116细胞侵袭数（P<...     

Cl-amidine通过JAK3-STAT5抑制巨噬细胞M1型极化在强直性脊柱炎中的作用

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义。方法 选择60例AS患者，根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组，同期纳入30例健康受试者作为对照组。EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平，皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性；流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68⁺CD86⁺)比例。培养THP-1单核细胞系，体外诱导为M1型巨噬细胞，期间加入Cl-amidine共孵育，分组为：M0组、M1组、M1+Cl-amidine组，Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平。RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析，Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平。结果 与对照组相比，低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高，BGP水平降低，M1型巨噬细胞比例升高；...     

子宫内膜异位症相关巨噬细胞的提取和鉴别

目的：探究分离提取子宫内膜异位症（EMs）相关巨噬细胞的方法。方法：免疫组织化学法检测正常子宫内膜切片以及EMs切片中CD68和CD163的表达。收集3例经腹腔镜确诊为EMs患者病灶,通过机械法结合IV型胶原酶消化法分离EMs相关巨噬细胞,并利用流式细胞术检测细胞CD11b、CD163、CD80的表达情况。结果：EMs组织中可见2型巨噬细胞高表达,提取的EMs原代巨噬细胞具备巨噬细胞的形态特征,其中CD11b和CD163双阳性比例为6.46%,且未见CD80阳性细胞表达。结论：本研究采用的方法可有效提取EMs组织相关巨噬细胞,提高了纯度,对进一步研究EMs相关巨噬细胞特性及其生物学行为具有重要价值。     

小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型的建立

目的：体外建立小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型,为体外研究中药抗炎机制提供实验模型。方法分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞;形态学观察巨噬细胞的生长;流式细胞术鉴定所分离细胞的纯度;以不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/mL)的脂多糖(LPS)作用细胞24 h及1μg/mL的LPS作用细胞不同时间(0、4、8、16、24、48 h),荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结果获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态特征,纯度为84.55%;在一定范围内,LPS以浓度依赖和时间依赖的方式上调IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。结论1μg/mL的LPS作用细胞24 h能建立较为合理的炎症模型。     

肿瘤相关巨噬细胞的研究新进展

巨噬细胞来源于CD34^＋骨髓髓样前体细胞，后者不断增殖并以前单核细胞的形式进入血液循环，成为单核细胞并移行到组织称为巨噬细胞。单核细胞／巨噬细胞参与多种不同的生命活动，包括组织重塑、炎症、免疫调节与抗肿瘤、清除凋亡细胞及创伤愈合等。本文仅就目前肿瘤相关巨噬细胞的研究新进展做简要概述。     

肿瘤相关巨噬细胞研究进展

【摘要】 肿瘤相关巨噬细胞（Tumour associated macrophages,TAMs）是浸润于肿瘤组织内巨噬细胞的统称,近年来,随着对肿瘤微环境（Tumor microenviroment,TME）研究的进一步深入,发现TAMs在TME中对于肿瘤的发生发展乃至转移复发均有一定的促进作用。TAMs的形成、效应与治疗逐渐成为肿瘤研究中的热点方向。本文旨在对TAMs的最新研究进展作一综述。     

肿瘤相关巨噬细胞在多发性骨髓瘤发病机制中的作用

多发性骨髓瘸（multiple myeloma,MM）是一种起源于B细胞系的恶性单克隆性浆细胞疾病,临床主要表现为贫血、溶骨性病变、骨痛、免疫缺陷和肾功能不全等.MM的发病机制目前尚未明确,但其发生发展与骨髓微环境密切相关.肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）作为骨髓微环境的一类炎性细胞,对MM的发病起着重要作用.TAMs主要由循环中的单核细胞募集进入肿瘤组织中,在肿瘤细胞来源的一些细胞因子的刺激作用下,分化为成熟的巨噬细胞,具有不同于炎症环境中的巨噬细胞的特定表型及功能.TAMs可分泌多种细胞因子,促进肿瘤生长、侵袭、转移以及血管新生;TAMs也具有免疫抑制作用,抑制适应性免疫应答,促进肿瘤免疫逃逸;TAMs还可通过促进异常血管新生、影响药物在血液中的运输以及削弱肿瘤细胞凋亡信号等途径诱导肿瘤细胞耐药.因此,TAMs可能成为治疗MM的一个靶点.现就TAMs及其在MM发病机制中的作用作一述评.     

巨噬细胞在溃疡性结肠炎癌变中的作用

溃疡性结肠炎是病因不明的肠道非特异性炎症,其癌变风险呈逐年上升的趋势。巨噬细胞是机体免疫系统的重要组成,在炎症时发挥积极的免疫作用;但在肿瘤微环境中出现表型及功能的改变,其释放的大量细胞因子作用于结肠癌细胞,能促进结肠癌细胞增殖、抑制其凋亡、促进血管生成等。受肿瘤影响的巨噬细胞,还通过与其他炎症细胞相互作用,改变机体的免疫功能,形成免疫抑制。故巨噬细胞的改变与溃疡性结肠炎癌变的过程密不可分。     

巨噬细胞在骨折愈合过程中的作用

巨噬细胞是重要的炎症细胞之一,因其具有强大的吞噬功能而得名。在炎症反应中,巨噬细胞吞噬组织碎片和异物在组织的愈合过程中发挥重要作用。巨噬细胞亚型M1、M2分别参与促炎和抗炎作用,M2又有4个亚型,协同作用促进损伤组织的愈合。当暴力导致骨折后释放细胞因子,如白细胞介素-4（IL-4）、IL-10、IL-13、肿瘤坏死因子-α等,招募巨噬细胞等炎症细胞到骨折处,吞噬组织碎片及异物并释放抗炎因子、血管内皮生长因子,以及其他生长因子为骨折愈合创造良好的条件。因此探讨巨噬细胞在骨折愈合过程中的作用至关重要,并为以后骨不连的研究及治疗提供新的思路。     

壳寡糖结合并激活巨噬细胞机制的研究

目的：研究壳寡糖结合并激活巨噬细胞的机制。方法：RT-PCR和ELISA检测壳寡糖对巨噬细胞及经γ干扰素（IFN-γ）预刺激巨噬细胞的白介素1β（IL-1β）基图表达水平的影响；钙离子脂化探针Fluo-3／AM检测壳寡糖对巨噬细胞胞浆游离Ca^＋浓度的影响；用四甲基异硫氰酸罗丹明标记甘露聚糖，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察标记糖结合及进入巨噬细胞的情况；通过竞争性抑制实验探讨巨噬细胞摄取壳寡糖的可能途径。结果：壳寡糖对巨噬细胞IL-1β基因表达的影响呈浓度与时间依赖性，IFN-γ预刺激巨噬细胞有增强作用；高浓度壳寡糖引起巨噬细胞胞浆游离Ca2^＋浓度升高；壳寡糖竞争性抑制巨噬细胞内吞甘露聚糖，抑制强度达44％。结论：壳寡糖可能是经由巨噬细胞表面的甘露糖受体介导结舍并激活巨噬细胞，钙离子相关的信号转导途径可能参与这一过程。