类胰蛋白酶通过PAR2激活JAK-STAT通路促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1表型转换

 目的  研究类胰蛋白酶促进小鼠巨噬细胞表型转换的作用及其机制。方法 体外分离培养小鼠巨噬细胞(对照组),并诱导为M1和M2亚型,经类胰蛋白酶和PAR2激动剂分别作用后,通过real-time PCR和Western blot检测巨噬细胞亚型标志物以及JAK STAT信号通路的变化。结果  成功分离培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞,并诱导其分化为M1和M2亚型。PAR2激动剂（2-Furoyl-LIGRLO-amide）和类胰蛋白酶分别与M1型巨噬细胞分别作用后,M1型标记物iNOS和IL-12高于对照组,而M2型标记物arg1和mrc1与对照相比无明显变化,提示类胰蛋白酶和PAR2激动剂可以促进巨噬细胞向M1型转化,而不会促进M1型向M2型转化。PAR2激动剂和类胰蛋白酶分别与M2型巨噬细胞作用后,M2型标记物arg1和mrc1明显下降,而M1型标记物iNOS和 iL-12有所增加,提示类胰蛋白酶和PAR 2激动剂均可促进M2型向M1型转化。类胰蛋白酶作用于M1型巨噬细胞后,JAK2磷酸化水平、STAT和p STAT的表达水平均无明显变化。类胰蛋白酶作用于M2型巨噬细胞后,JAK2的磷酸化随着时间延长明显升高,STAT的磷酸化水平同时升高,提示类胰蛋白酶可以通过和PAR2结合而激活JAK2-STAT信号通路,进而引起M2型向M1型转化。结论  类胰蛋白酶可能通过与其受体PAR2相互作用后激活JAK-STAT通路,促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1亚型转化,起到促进炎症发展的作用,从而进一步加重动脉粥样硬化的发展。     

M1/M2型巨噬细胞极化对动脉粥硬化炎症影响的研究进展

炎症是动脉粥样硬化最基本的病理改变之一,贯穿其发生、发展的全过程,并与急性脑血管事件密切相关.M1/M2型巨噬细胞的极化及其对炎症的调控作用,直接影响着动脉粥样硬化的疾病进程.本文对M1/M2型巨噬细胞的极化及其对动脉粥样硬化炎症的影响进行文献综述.     

没食子酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的:体外建立M1型巨噬细胞极化模型,探讨没食子酸(GA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法:选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,取腹腔巨噬细胞进行体外原代培养,通过对细胞培养基进行不同的处理,将实验分为对照组(不做处理)、M1极化模型组[加入脂多糖(LPS,100μg·L-1)和干扰素γ(IFN-γ,20μg·L-1)诱...     

结核性胸膜炎患者胸腔积液M1/M2巨噬细胞比例与预后

目的 分析结核性胸膜炎（tuberculous pleurisy,TP）患者单核细胞中M1/M2巨噬细胞比例与TP预后的关系。方法选取2019年6月至2022年12月浙江大学医学院附属第二医院临平院区诊治的TP患者206例,以单因素与多因素Logistic回归分析影响TP预后的危险因素,采用受试者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评估M1/M2单核–吞噬细胞比例对TP预后不良的预测价值。结果 Logistic分析显示,发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素（P<0.05）;M1及M2巨噬细胞表达水平预测TP患者预后不良的曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.783、0.829,敏感度分别为70.45%、81.47%,特异性分别为79.62%、73.44%,M1/M2巨噬细胞比例预测TP患者预后不良的AUC为0.921、敏感度为92.59%、特异性为84.96%,均明显大于二者单独预测（P<0.05）。结论 ...     

全反式维甲酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的 利用M1型巨噬细胞极化模型,探讨全反式维甲酸(ATRA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法 选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,提取并纯化腹腔巨噬细胞,随机分为M组、M1组、DMSO组和ATRA组.脂多糖(LPS,100 ng/mL)联合干扰素-γ(IFN-γ,20 ng/mL)诱导巨噬细胞构建M1型巨噬细胞极化模型...     

M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的 探讨M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎（CP）患者牙龈组织中的表达及其临床意义。方法 选取2018年10月—2021年6月柳州市人民医院收治的168例CP患者。根据病情严重程度分为轻度组、中度组和重度组,分别有27例、72例和69例。另选取同期该院53例牙龈组织健康者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象牙龈组织中M1型巨噬细胞极化相关因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、信号传导及转录激活因子1(STAT1)及M2型巨噬细胞极化相关因子精氨酸酶1(Arg1)、STAT6的表达。分析不同人群牙龈组织中M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子mRNA相对表达量,分析CP患者病情严重程度的影响因素,分析M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子对CP患者病情严重程度的诊断效能。结果 轻度组、中度组和重度组牙龈组织中iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量较对照组高,中度组和重度组较轻度组高,重度组较中度组高。轻中度组与重度组性别、年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史、饮酒史、偏侧咀嚼、巴氏刷牙、刷牙≥2次/d、刷牙≥3 min...     

黄芪甲苷促M2型巨噬细胞极化的作用研究

目的 探讨黄芪甲苷对M2型巨噬细胞极化的影响.方法 黄芪甲苷体外作用小鼠原代巨噬细胞,用流式细胞仪检测其表面分子(CD206、MHCⅡ和CD80/86)表达,Real time-PCR检测M1/M2型巨噬细胞特征基因(iNOS、YM1和Arg1)的表达,ELISA测定炎症相关细胞因子(TNF-α、IL-6、TGF-β)的表达.结果 黄芪甲苷单独处理未能诱导M2型巨噬细胞生成,但其与IL-13联合处理可明显上调M2型巨噬细胞标志CD206、YM1和Arg1的表达,下调抗原提呈相关分子MHCⅡ和CD80/86的表达,促进抑炎细胞因子TGF-β的分泌.结论 黄芪甲苷通过协同作用方式促进M2型巨噬细胞极化.     

宫颈癌细胞培养上清液诱导THP-1巨噬细胞M2表型

目的：研究宫颈癌细胞培养上清液诱导并维持THP-1巨噬细胞M2表型的作用。方法：培养宫颈癌 细胞系HeLa细胞至第3天,收集细胞培养上清液用以检测肿瘤相关细胞因子（IL-4、IL-6及IL-10）及生长因 子（ANG -2、HGF、VEGF）分泌情况。将培养至对数生长期的巨噬细胞分为空白对照组（Mθ组）、M2细胞诱导组（M2组）以及HeLa细胞培养上清液处理组（Mθ+sHeLa组）。其中M2组予以20ng/mLIL-4、20ng/mLIL-10处理 使其向M2细胞极化,Mθ+sHeLa组加入50%HeLa细胞培养上清液处理培养3d。随后,利用流式细胞术检测 各组细胞表面HLA-DR、CD163、CD206的变化;同时,收集细胞培养上清液并检测其中相关细胞因子、生长 因子及TGF-β3的含量。最后,采用流式细胞术及Westernblot检测巨噬细胞中JAK-STAT6信号通路的变化。 结果：HeLa细胞培养上清液中IL-6、HGF、VEGF含量较多。经过HeLa细胞培养上清液处理后的巨噬细胞表面 CD163和CD206含量升高（ P ＜0.05）。相较于Mθ组,M2组及Mθ+sHeLa组的巨噬细胞培养上清液中的相关细胞 因子（IL -4、IL-6及IL-10）、生长因子（ANG -2、HGF、VEGF）及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。去除HeLa细胞培 养上清液后48h后,相较于Mθ组,Mθ+sHeLa组分泌相关细胞因子、生长因子及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。 流式细胞术及Westernblot结果显示,与Mθ组比,Mθ+sHeLa组的pSTAT6水平升高（ P ＜0.05）。结论：HeLa 细胞培养上清液可通过激活JAK-STAT6信号通路诱导的THP-1巨噬细胞向M2表型的极化促进肿瘤的生长和血 管生成。     

肝细胞生长因子对动脉粥样硬化模型兔巨噬细胞M1、M2亚型及斑块成分的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对动脉粥样硬化(AS)模型兔血脂、巨噬细胞M1型标志物诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、巨噬细胞M2型标志物精氨酸酶Ⅰ(Arg Ⅰ)表达和AS斑块成分的影响.方法 24只4月龄雄性新西兰大白兔随机分为正常组、AS模型组、重组腺病毒-肝细胞生长因子(Ad-HGF)组,分别给予普通饲料、高胆固醇饲料、高胆固醇饲料喂养.其中Ad-HGF组分别于喂养4、5、6周后肌肉注射1 ml Ad-HGF(5×109 PFU/ml),正常组和AS模型组同时给予生理盐水(1 ml/只)肌肉注射.12周后处死模型兔,分别测定血脂、主动脉内膜/中膜厚度比值(IMT)、胶原纤维、血管平滑肌细胞(VSMCs)和巨噬细胞的含量,主动脉HGF、间质-上皮转化因子(c-Met)、iNOS、Arg Ⅰ的蛋白表达.结果 与正常组比较,AS模型组血脂水平、主动脉iNOS表达、IMT、胶原纤维及巨噬细胞含量明显增加(P<0.05),主动脉HGF、c-Met、Arg I的蛋白表达、VSMCs含量明显降低(P<0.05);与AS模型组相比,Ad-HGF组血脂水平无明显差别,主动脉iNOS表达、IMT及巨噬细胞含量明显降低(P<0.05),主动脉HGF、c-Met、Arg Ⅰ的蛋白表达及胶原纤维含量、VSMCs含量明显增加(P<0.05).结论 HGF通过抑制M1型巨噬细胞浸润,诱导M2型巨噬细胞分化,增加斑块胶原纤维和VSMCs含量而促进斑块稳定,抑制AS进展.     

lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用及其机制

目的：探讨lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养THP-1细胞,将过表达（LV-MIAT）与下调lncRNA-MIAT表达（LVshMIAT）的慢病毒颗粒及空载体（LV-Vector）转染入THP-1细胞中,将THP-1细胞诱导活化为巨噬细胞,并采用Transwell共培养体系将活化后的巨噬细胞与骨肉瘤（OS） MG63细胞共培养,将上述共培养体系分为MG63+LV-Vector组（阳性对照组）、 MG63+LV-shMIAT组、 MG63+LVMIAT组和IL-4+LV-Vector组。检测各组THP-1细胞中lncRNA-MIAT表达水平,流式细胞术检测各组细胞中M2型巨噬细胞百分率,ELISA法检测各组THP-1细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、、白细胞介素4 (IL-10)和转化生长因子β1 (TGF-β1)水平,检测各组HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2 (VEGFR2)、Notch1和δ样蛋白4 (DLL4)表达水平。取各培养体系中的巨噬细胞与人脐静脉内皮血管细胞（HUVEC）共培养,EDU染色法检测各组...     

M1型、M2型巨噬细胞及肿瘤相关巨噬细胞中miR-146a表达的差异

目的：探讨微小RNA-146a（miR-146a）在M1型、M2型巨噬细胞及肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中表达的差异。方法：将单核细胞系（ THP-1）细胞诱导为M1型、M2型巨噬细胞及TAMs,应用流式细胞仪检测表型后,采用实时荧光定量PCR方法分别检测THP-1、M1型和M2型巨噬细胞及TAMs中miR-146a的表达情况。结果：THP-1细胞中miR-146a的表达量为（0．838±0．030）,M1型巨噬细胞中的表达量为（1．788±0．384）,M2型巨噬细胞中的表达量为（2．760±0．561）,TAMs中的表达量为（2．974±0．661）,差异有统计学意义（F＝12．847,P＝0．002）。其中M1型（P＝0．040）、M2型（P＝0．001）巨噬细胞及TAMs（P＝0．001）中miR-146a的表达量高于THP-1细胞, TAMs（P＝0．015）与M2型巨噬细胞（P＝0．036）中的miR-146a表达量高于M1型巨噬细胞,TAMs与M2型巨噬细胞中miR-146a的表达差异无统计学意义（P＝0．595）。结论：miR-146a在M1型、M2型巨噬细胞中的差异性表达可能与其分化和（或）细胞功能相关;TAMs的表型特征可能与M2型巨噬细胞类似,同时可能具有与M2型巨噬细胞相同的细胞功能。     

重组白细胞介素2对骨髓造血祖细胞体外增殖的影响

为了了解重组白细胞介素２对骨髓造血祖细胞体外增殖的影响，应用体外半固体培养法研究了ｒｈＩＬ－２及其与ＧＭ－ＣＳＦ和Ｅｐｏ组合对骨髓祖细胞集落形成的调节作用。结果：ｒｈＩＬ－２单独对骨髓造血祖细胞的体外增殖无刺激作用；当其与ＧＭ－ＣＳＦ联合应用时，在浓度为１０．０×１０４～４０．０×１０４Ｕ·Ｌ－１时，ＣＦＵ－ＧＭ集落数明显高于ＧＭ－ＣＳＦ对照组；当其与Ｅｐｏ联用时，在浓度为１０．０×１０４～４０．０×１０４Ｕ·Ｌ－１时ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ集落数明显高于Ｅｐｏ单用组；但当其浓度升至１０．０×１０５Ｕ·Ｌ－１时，各种集落数均明显减少。重组人白介素２（ｒｈＩＬ－２）对骨髓造血祖细胞体外增殖的研究结果显示，在一定的浓度范围内，ｒｈＩＬ－２与ＧＭ－ＣＳＦ和Ｅｐｏ联合对骨髓造血祖细胞的体外增殖具有协同的刺激作用，单独应用无集落形成能力，大剂量应用可能会抑制骨髓造血。     

基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应

目的 骨髓是机体重要的造血器官,其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞,骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用,为提高骨形成蛋白（ＢＭＰ）修复骨缺损的能力。方法 本实验观察了基因重组人骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ－２,ｒｈＢＭＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结果 低浓度的ｒｈＭＢＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结     

肝素钠对骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响

目的 观察肝素钠对成人骨髓基质细胞增殖及成骨转化的影响。方法 从成人来源的骨髓基质细胞在含不同浓度肝素钠的１６４０培养液中培养４８、７２小时,ＭＴＴ比色法观察肝素钠对其增殖的影响;采用碱性磷酸酶细胞化学染色,计数成骨细胞转化率。结果 肝素钠在６０、１５０Ｕ／ｍｌ时,光吸收值明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）,其余浓度组无明显差异;对成骨转化率无影响。结论 肝素钠有一定浓度范围内对骨髓基质细胞增殖及成骨转化无抑制作用。     

Effect on cochlea function of guinea pig after controlled release recombinant human bone morphogenetic protein 2

Background The recombinant human bone morphogenetic protein 2 （rhBMP-2） has been used to induce osteogenesis in animals＇ middle ear and this technique is possible to be used to reconstruct the defects of ossicles. The side effects of the rhBMP-2 in middle ear should be observed before using in clinic. Thus we prepared the controlled release rhBMP-2 and implanted it into the acoustic bulla of guinea pigs. The effect on the cochlea was observed. Methods We prepared the acellular cancellous bone, accompanied with rhBMP-2. The material accompanied with rhBMP-2 was implanted into one acoustic bulla of the animal and the opposite side of the acoustic bulla was implanted with acellular cancellous bone without rhBMP-2. Totally 20 guinea pigs were undergone this procedure. After the operation, the auditory brainstem response （ABR） of the animals was tested according to the time sequence. Three months after the operation, the animals were sacrificed. The osteogenesis induced by rhBMP-2, the acoustic bulla and cochlea affected by rhBMP-2 were observed. The structures of hair cells were observed after silver nitrate staining. Results The animals were recovered soon after surgery. The hearing thresholds of the animals were declined slightly just after the surgery and come back completely after 3 months. Also, the bulla and cochlea were normal in shape. The osteogenesis occurred in the pore of the acellular cancellous bone with rhBMP-2. There was not any abnormal hyperplasia of bone in the bulla and cochlea. The articulation between the stapes and oval window was not merged. The shapes of the hair cells were normal and there was no obvious deletion of the hair cells compared with control group. Conclusions The controlled release rhBMP-2 transplanted into the middle ear could induce osteogenesis in the bulla of the animals. It did not affect the shape of the bulla and the hearing threshold of the animal, and did not induce the abnormal hyperplasia of bone in the bulla and might be used to reconstruct the defects of ossicles.     

骨形态发生蛋白微球对兔骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的研究骨形态发生蛋白微球对兔骨髓基质细胞生物学行为的影响。方法将壳聚糖与海藻酸钠制成复合微球,包裹或不包裹骨形态发生蛋白。采用体外细胞培养技术,将两种微球分别与细胞一起培养,通过对细胞增殖率及碱性磷酸酶活性、考马斯亮蓝的检测,观察两种微球对培养细胞的影响。结果两种微球对骨髓基质细胞的增殖均无明显影响,但骨形态发生蛋白微球对细胞的分化及分泌功能有明显的促进作用。结论骨形态发生蛋白能够提高骨髓基质细胞的体外成骨能力,且壳聚糖海藻酸钠微球可作为骨形态发生蛋白的良好载体。     

重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞的实验研究

目的 体外研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质于细胞(MSCs)的方法.方法 用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体Ad-GFP转染,荧光显微镜检测其转染效率,CCK-8法检测转染细胞的增殖能力.结果 Ad-GFP对大鼠MSCs的感染率高达90.0%,感染1月后仍有稳定表达;转染细胞的增殖能力与未转染细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重组腺病毒载体Ad-GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖能力不受影响,可作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法.     

IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用

 目的 探讨IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)诱导的肝细胞损伤中的保护作用及其相关分子机制。方法 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot检测在不同极化类型的人单核巨噬细胞THP-1中IL-37 mRNA和蛋白质水平。通过慢病毒转染构建稳定过表达IL-37的细胞株,qRT-PCR检测CD206、CD86、ARG1和iNOS mRNA水平,流式细胞术检测CD163、CD86蛋白质水平。通过Transwell法将THP-1细胞与人肝细胞L02细胞共培养并构建H/R模型,CCK-8法及流式细胞术检测L02细胞存活率及凋亡率,ELISA检测细胞培养液中谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)含量,HE染色观察细胞形态变化。Western blot检测THP-1细胞中STAT6及其磷酸化水平。结果 M2型巨噬细胞中IL-37 mRNA及蛋白质水平上调。IL-37促进巨噬细胞M2型极化。IL-37诱导的M2型巨噬细胞与L02细胞共培养,在H/R状态下显著提高肝细胞存活率(P=0.015),并降低细胞凋亡率和ALT、AST水平(P＜0.001),减轻细胞损伤。 Western blot提示过表达IL-37的 THP-1细胞中STAT6蛋白质磷酸化水平上调(P＜0.01)。结论 IL-37能促进巨噬细胞M2型极化,并对H/R诱导的肝细胞损伤有保护作用,其机制可能与STAT6信号通路有关。