miR-34a-5p过表达靶向抑制MET对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响

目的探究miR-34a-5p过表达对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响。方法荧光素酶实验检测miR-34a-5p与MET靶向关系。构建MET pcDNA载体过表达MET,将miR-34a-5p与pcDNA-MET单独或联合转染HepG2,将细胞随机分为4组:Control、mimic、MET和mimic+MET组进行后续实验。克隆形成法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell检测细胞侵袭、Western blot检测Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;构建肝癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为Control组和mimic组,检测裸鼠30 d肿瘤体积变化和第30天肿瘤重量,通过免疫组化方法检测Ki67阳性表达率、TUNEL染色细胞凋亡。结果结果表明,miR-34a-5p和MET存在直接靶向作用关系。与Control组相比较,mimic组细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、PCNA蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Ca...     

miR-199a-3p靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的 探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151 pcDNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcDNA-CD151单独或联合转染至B-CPAP细胞,将细胞随机分为4组：Control组、miR-199a-3p mimic组、pcDNA-CD151组和miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组。BrdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;流式分选检测细胞周期分布;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测MMP-2、Ki-67、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果 CD151与miR-199a-3p存在靶向作用关系。与Control组比较,miR-199a-3p mimic组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G₂/M、G₁期比例降低,S期比例...     

miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响

目的:探究miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响。方法:将miR-133 mimic转染至SW480细胞,将细胞分为3组:对照组、Scramble组和miR-133 mimic组。RT-PCR检测miR-133表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western 印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、c-Myc蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖倍数;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;裸鼠右侧腋窝处皮下注射SW480细胞悬液建立裸鼠移植瘤模型,检测肿瘤重量,RT-PCR检测肿瘤组织miR-133表达水平,免疫组化检测Caspase-3、Ki67阳性细胞数。结果:与对照组相比,miR-133 mimic组miR-133表达升高（F=136.70,P＜0.05）,细胞凋亡率升高（F=59.995,P＜0.05）,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9表达升高（F=726.85、138.76、55.85,均P＜0.05）,c-Myc蛋白表达水平降低（F=88.98,P＜0.05）,细胞活力降低（F=48.50,P＜0.05）,克隆形成率降低（F=42.63,P＜0.05）,肿瘤重量降低（t=1.788,P＜0.05）,肿瘤组织miR-133表达水平升高（t=1.043,P＜0.05）,Caspase-3阳性细胞数升高（t=1.167,P＜0.05）,Ki67阳性细胞数降低（t=1.557,P＜0.05）。结论:miR-133过表达诱导SW480细胞凋亡,抑制SW480细胞增殖和裸鼠肿瘤的形成。     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

miR-181a-5p和BACH2表达对白血病CCRF-CEM细胞凋亡和侵袭的影响

目的：探讨微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向BTB与CNC同源基因2 (BACH2对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞凋亡和侵袭的调控作用,并阐明其作用机制。方法：体外构建BACH2过表达重组质粒(overExpBACH2)、miR-181a-5p inhibitor和inhibitor-NC,转染人ALL T淋巴细胞CCRF-CEM,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和免疫荧光染色检测转染效果。将CCRF-CEM细胞分为对照组、 inhibitor-NC组、 miR-181a-5pinhibitor组、 BACH2过表达(overExpBACH2)组、 miR-181a-5pinhibitor+空载体(EV)组和miR-181a-5pinhibitor+overExpBACH2组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测G2期细胞百分率和细胞凋亡率。Western blotting法检测各组细胞中细胞周期蛋白D3 (CyclinD3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3...     

miR-221-3p靶向TIMP-2对腹主动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、凋亡影响

目的分析miR-221-3p靶向基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法对人VSMC细胞进行培养,10μmol/L血管紧张素(Ang Ⅱ)对VSMC进行处理,将VSMC细胞分为miR-221-3p inhibitor组(转染miR-221-3p inhibitor)、阴性对照组(转染miR-221-3p inhibitor NC)、空白组(未经转染的VSMC细胞),对照组(未进行Ang Ⅱ处理及转染的VSMC细胞),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-221-3p、TIMP-2 mRNA的表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹(WB)法检测增殖蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)及蛋白TIMP-2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-12的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-221-3p与TIMP-2的靶向关系。结果与对照组比较,空白组、阴性对照组miR-221-3p表达、细胞凋亡率、蛋白Bax、MMP-2、MMP-12表达显著升高,TIMP-2 mRNA表达水平、细胞活力、蛋白β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、TIMP-2表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);与空白组、阴性对照组比较,miR-221-3p inhibitor组miR-221-3p表达、细胞凋亡率、蛋白Bax、MMP-2、MMP-12表达显著降低,TIMP-2mRNA表达水平、细胞活力、蛋白β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、TIMP-2表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。miR-221-3p靶向调控TIMP-2。结论 Mi R-221-3p可能靶向抑制TIMP-2的表达,抑制VSMC的增殖,促进其凋亡,进而参与AAA的发病。     

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨微小RNA（microRNA,miRNA）-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移及凋亡的影响和潜在分子机制。方法：利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系（NC为对照组）,利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验、Transwell实验以及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果：miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异具有统计学意义（P< 0.01）;与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（分别为：t = 6.11,8.90,11.53,均P< 0.05）,且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡;miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+ 空质粒组比较,miR-193a-3p+ TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（分别为：t = 3.43,2.88,9.32,均P< 0.05）。结论：miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的 探讨CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响.方法 构建shRNA CD98载体转染至B16-F10细胞,将细胞随机分为3组:Con-trol 组、shRNA-NC组、CD98-shRNA3组进行后续实验.克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Tran-swell 检测细胞侵袭;Western blot 检测 CD98、Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达水平.结果 与Control组比较,CD98-shRNA3组CD98蛋白表达水平降低(P＜0.05),克隆形成率降低(P＜0.05),Ki67、PCNA蛋白表达水平降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3值升高(P＜0.05),侵袭细胞数降低(P＜0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT值降低(P＜0.05).结论 沉默CD98可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制黑色素瘤B16-F10细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡.     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

异丙酚通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞增殖、迁移及凋亡

目的:探讨异丙酚是否通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞的增殖、迁移及凋亡。方法:将胃癌MKN-28细胞系分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、异丙酚组、miR-NC组、miR-133a-3p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-133a-3p组、si-NC组、si-FTL组、异丙酚+anti-miR-NC+si-NC组、PBS+anti-miR-NC+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-FTL组。应用RT-qPCR检测miR-133a-3p和铁蛋白轻链(FTL)mRNA的表达水平;应用MTT法与克隆形成实验测细胞增殖;应用流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡及蛋白表达水平;应用双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与FTL的靶向关系;应用划痕实验与Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与PBS组比较,异丙酚组细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移、侵袭细胞数均减少(P<0.05);细胞凋亡率、p53、Bcl-2相...     

miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。 方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。 结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P＜0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P＜0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P＜0.05)。 结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

miR-181a-5p靶向HMGB1调节急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-181a-5p调控HMGB1的表达在雨蛙素(cerulein)联合脂多糖(lipopolyasccharide, LPS)诱导的严重急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常组,1×10^-8 mol/L的cerulein联合10μg/mL的LPS诱导AR42J细胞24 h建立体外严重AP组,用脂质体转染法将miR-NC(空载体)和miR-181a-5p mimic转染至严重AP组作为miR-NC对照组和miR-181a-5p过表达组。采用qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 m RNA的表达水平;Western Blot检测HMGB1和Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-181a-5p和HMGB1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 与正...     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

miR-135a-5p通过Smad4基因调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡

目的探讨微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)通过调控SMAD家庭成员4(Smad4)表达而调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖及凋亡。方法体外培养人卵巢颗粒细胞KGN与人正常卵巢上皮细胞IOSE80,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-135a-5p、Smad4的表达量;分别用anti-miR-con、anti-miR-135a-5p、anti-miR-135a-5p与si-con、anti-miR-135a-5p与si-Smad4转染至卵巢颗粒细胞;甲基噻唑基四唑法(MTT)检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测过表达miR-135a-5p对野生型和突变型Smad4荧光素酶活性的影响;Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖蛋白激酶2(CDK2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,KGN细胞中miR-135a-5p的表达水平显著升高,Smad4 mRNA及蛋白表达量显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与anti-miR-con组比较,anti-miR-135a-5p组细胞活力显著降低,克隆形成数显著减少,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、CDK2、Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-135a-5p能够抑制Smad4的3′-UTR区荧光素酶活性;与anti-miR-135a-5p+sicon组比较,anti-miR-135a-5p+si-Smad4组细胞活力显著升高,克隆形成数显著增多,细胞凋亡率显著降低,Cyclin D1、CDK2、Bcl-2蛋白水平显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论干扰miR-135a-5p可能通过靶向调控Smad4的表达从而抑制卵巢颗粒细胞增殖及促进细胞凋亡。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法 使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平；Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量；ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系；Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高，结果有统计学意义，提示转染成功。与空白组及NC组相比，mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P&...