血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大作用研究进展

血管紧张素（Ang）Ⅱ是肾索-Ang系统（RASS）中的一种主要的多功能活性肽，同时也是一种重要的心肌肥大刺激因子，具有生长因子样作用，通过与特异的AngⅡ受体结合，可直接导致心肌肥厚，对心肌的结构、功能产生重大的影响。本文就AngⅡ致心肌细胞肥大作用的最新研究进展作一综述。     

血管紧张素Ⅱ诱导的新生小鼠心肌细胞肥大模型

目的 探索新生小鼠心肌细胞的原代培养方法,建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。方法 使用0.03%的胰酶+0.04%的2型胶原酶多次消化分离心肌细胞,差时贴壁法纯化心肌细胞。1μmol/L AngⅡ刺激心肌细胞肥大,α-actinin染色进行心肌细胞纯度鉴定及面积检测,实时定量RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物的表达,Western blot法检测蛋白质磷酸化水平。结果 培养得到的小鼠心肌细胞具有较高纯度及存活力;AngⅡ刺激后心肌细胞面积增大、蛋白合成增加,ANP、BNP、β-MHC等心肌细胞肥大标志物的mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而α-MHC表达则下降(P<0.05);此外,AngⅡ刺激组ERK、JNK与p38的磷酸化水平较对照组明显上调(P<0.05)。结论 使用改良的新生小鼠心肌细胞原代培养方法,成功培养了具有较高纯度及存活力的小鼠心肌细胞,并建立了AngⅡ诱导的小鼠心肌细胞肥大模型。     

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

【目的】探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用.【方法】原代培养的乳鼠心肌细胞,采用Ang Ⅱ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达,Western blot法检测LC3蛋白的表达.【结果】 Ang Ⅱ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达,自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.【结论】AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大.     

多胺在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨多胺在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法乳鼠心肌细胞原代培养,AngⅡ诱导心肌细胞肥大复制心肌肥大细胞模型。检测心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量,RT-PCR检测ANP mRNA水平作为心肌肥大评价指标;高效液相色谱测定心肌细胞多胺含量。结果AngⅡ100nmol/L作用48h,显著增加心肌细胞表面积,细胞蛋白含量和ANP mRNA表达增加,同时,AngⅡ诱导细胞内腐胺含量明显增加。DFMO干预后,减少细胞内腐胺和总多胺水平,下调AngⅡ诱导的心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量,ANP mRNA水平的增加。结论DFMO预处理耗竭细胞内腐胺,减少多胺含量可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。     

PTEN负性调控血管紧张素Ⅱ刺激所致心肌细胞肥大

目的研究PTEN对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响.方法构建携带PTEN基因的腺病毒载体,感染原代培养的乳鼠心肌细胞,用AngⅡ作为肥大刺激因素,测定ANF、β-MHC与心肌细胞大小.结果对照组与仅携带GFP的腺病毒感染的心肌细胞在AngⅡ作用下,ANF、β-MHC表达与细胞直径显著增高,而PTEN过度表达则对上述改变具有抑制作用.结论 PTEN能够负性调控AngⅡ所致的心肌细胞肥大.     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

[目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

 [目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。     

内源性一氧化碳对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的 探讨内源性一氧化碳（CO）对血管紧张素Ⅱ（AT－Ⅱ）诱导心肌细胞肥大的影响。方法 体外培养新生SD大鼠的心肌细胞，用^3H-亮氨酸（^3H-Leu)掺入法观察AT－Ⅱ对其蛋白质合成的影响，用CO合成的关键酶即血红素氧合酶（HO）的诱导剂－氯化血红素诱导心肌细胞生成CO，观察它对AT－Ⅱ作用的影响。结果 与对照组相比，AT－Ⅱ可使培养的新生SD大鼠心肌细胞对^3H-Leu的摄取明显增多（P＜0．05），用氯化血红素干预后，AT－Ⅱ上述作用被明显抑制（P＜0．05）。结论 内源性CO对AT－Ⅱ诱导的SD大鼠心肌细胞肥大有抑制作用。     

肾上腺素和血管紧张素Ⅱ促心肌细胞肥大的协同作用

目的：探讨肾上腺素和血管紧张素Ⅱ在诱导心肌细胞肥大反应中的协同作用。方法：在培养新生大鼠心肌细胞上,通过测量心肌细胞表面积和[3H]－Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果：肾上腺素和血管紧张素Ⅱ均能明显增加心肌细胞表面积和[3H]－Leu的掺入量,两者合用比它们任一单独使用的效果更显著。结论：肾上腺素和血管紧张素Ⅱ在诱导心肌肥大作用中具有协同作用。     

乌苏里藜芦生物碱对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响

[目的]在原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞上,观察乌苏里藜芦生物碱(Veratrum nigrum L.Var.ussurience Na-kai alkaloids,VnA)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠乳鼠的心肌细胞肥大的影响。[方法]通过BCA法测定心肌细胞蛋白含量和显微测微器测定心肌细胞直径,免疫荧光法分析心肌细胞内钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的表达变化。[结果]在一定剂量范围内VnA能抑制心肌细胞蛋白含量的增加(P<0.01)和细胞体积的增加(P<0.01),细胞内CaN的表达减少。[结论]VnA抑制AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞肥大可能与其抑制细胞内CaN表达有关。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大与凋亡干预的研究

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞^3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，用Westamblot法检测心肌细胞凋亡蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达。结果TSN能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大、心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率的显著增加（P〈0.01）、心肌细胞凋亡率的增加（P〈0．05）、心肌细胞促凋亡蛋白P53和Bax表达的明显增高（P〈0.01），其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦（Valsartan）相似。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其同时抑制了心肌细胞的凋亡有关。     

羟基红花黄色素A对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞焦亡的影响

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号通路探讨羟基红花黄色素A(Hydroxy saffloweryellow A,HSYA)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡及肥大的影响。方法 体外培养H9c2细胞,分别设空白对照组、模型组(1μmol/L AngⅡ)、HSYA低剂量组(1μmol/L AngⅡ+6.25μmol/L HSYA)、HSYA中剂量组(1μmol/L AngⅡ+12.5μmol/L HSYA)、HSYA高剂量组(1μmol/L AngⅡ+25μmol/L HSYA)、单给HSYA组(25μmol/L HSYA)。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率;罗丹明标记的鬼笔环肽细胞染色法检测细胞面积;BCA法测定心肌细胞内总蛋白质含量;ELISA试剂盒检测细胞培养液中白细胞介素-1β(Interleukin1β,IL-1β)的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白表达水平。结果 HSYA可明显提高AngⅡ诱导H9c2细胞活力下降;改善AngⅡ诱导的H9c...     

血管紧张素ⅡⅠ型受体反义寡核苷酸体外逆转心肌细胞肥大

目的:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1R)反义寡核苷酸(AS ODN)逆转心肌细胞肥大。方法:将培养的乳鼠心肌细胞分为正常组、AngⅡ组、AT1R AS ODN组,观察AngⅡ及AT1R AS ODN对心肌细胞 c jun基因表达、总蛋白合成、体积、搏动频率的影响。结果:AngⅡ可引起心肌细胞 c jun基因表达增多、搏动频率增快、体积增大、总蛋白合成增加。AT1R AS ODN能逆转 AngⅡ的上述作用。结论:AT1R AS ODN能有效逆转 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用

目的 通过观察κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的作用,研究κ阿片受体激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用.方法 以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用血管紧张素Ⅱ1 μM诱导心肌肥大,观察U50488H1 μM对它的作用,并和洛沙坦(los)1 μM组做对比观察κ阿片受体的激活对心肌肥大的作用.用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;用[3H]-leueine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成.结果 AngⅡ1 μM使心肌细胞总蛋白含量,蛋白表迭及细胞体积明显增加;U50488H1 μM能够降低由AngⅡ引起的心肌细胞蛋白含量,蛋白表达,以及体积的增加,从而抑制心肌肥大,并且抑制程度与los1 μM相似.结论 κ阿片受体激动剂U50488H能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.     

橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响

目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素（0.125、0.25、0.5、1μmol/L）和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白（α-actinin）荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的探讨传统中药人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）所诱发心肌肥大的影响。方法采用酶消化法分离新生大鼠心室肌细胞,培养心肌细胞随机分为3组：正常对照组、Ang Ⅱ组、AngⅡ＋Rg1组。在接受药物处理24h后,检测心肌细胞总蛋白含量,β-MHC、TNF-α和IL-1β的mRNA表达量。结果 Ang Ⅱ处理导致培养心肌细胞的总蛋白含量以及β-MHC mRNA表达量显著增加,提示心肌肥大的发生;人参皂苷Rg1显著抑制了Ang Ⅱ的促心肌细胞肥大作用。同时,AngⅡ增加心肌细胞对TNF-α和IL -1βmRNA表达的效应也被人参皂苷Rg1所抑制。结论人参皂苷Rg1抑制了 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大以及心肌细胞对炎性介质TNF-α、IL-1β的释放,这可能是人参皂苷Rg1对心脏疾病具有保护作用的细胞学基础。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大及c-fos表达的影响

目的 在培养的新生大鼠心肌细胞上观察环孢素A(CsA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大和c-fos表达增加的作用，借以探讨CsA抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥厚的机制。方法 用Bradford比色法测量心肌细胞总蛋白的含量；用Western Blot方法定量测定心肌细胞c-fos蛋白含量。结果 ①AngⅡ可明显增加心肌细胞的蛋白总量，CsA可以浓度依赖地抑制AngⅡ诱导的心肌蛋白含量的增加；②AngⅡ可诱导rfos蛋白表达增加，CsA可浓度依赖性抑制AngⅡ的这一作用。结论 CsA可以抑制AngⅡ诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大，抑制AngⅡ引起的心肌细胞c-fos蛋白表达增加可能是其作用机制之一。     

一氧乙酰旋覆花内酯对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞的保护性作用

目的 探讨ABL在心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法 体外培养H9C2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）构建心肌细胞肥大模型;模型组给予1μmol/L AngⅡ刺激24h、ABL处理组给予AngⅡ刺激,同时给予5μmol/L和10μmol/L ABL处理24h。采用心肌细胞肌动蛋白α-actinin染色评价心肌细胞大小,采用RT-PCR检测肥厚相关基因心房利钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）、肌球蛋白重链β（β-MHC）的表达;蛋白印迹（Western blot）法检测信号通路蛋白的表达。结果 与模型组比较,5μmol/L和10μmol/L ABL处理组心肌细胞面积明显降低（P<0.05）;ANP、BNP、β-MHC肥厚相关基因表达降低（P<0.05）,且其抗心肌细胞肥大呈现剂量依赖性（P<0.05）。Western blot法检测结果显示ABL处理组AMPKa磷酸化水平增高（P<0.05）,而Akt、mTOR、GSK3β的磷酸化明显抑制（P<0.05）;AMPKa拮抗剂Compound C可阻断ABL的心肌保护作用。结论 ABL可通过激活AMPKa信号通路,调节Akt/Mtor/GSK3β对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大发挥保护性作用。