m6A修饰相关的长链非编码RNA 对肾透明细胞癌预后和免疫治疗的研究

目的 探究与N6-甲基腺嘌呤(m6A)相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)对肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma, ccRCC)预后和免疫治疗的特征。方法 通过TCGA数据库下载532例ccRCC患者组织和72例正常肾组织的转录组数据和临床特征数据,利用共表达和单因素COX回归分析筛选与预后和m6A相关的lncRNA。基于预后和m6A相关的lncRNA的表达进行聚类分析,分析两种聚类分型与免疫检查点程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)表达的相关性。构建LASSO COX回归风险预后模型,验证其临床应用价值,利用ESTIMATE方法比较ccRCC肿瘤微环境的差异,免疫表观评分(immunophenoscore,IPS)预测ccRCC对免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor, ICI)的敏感度。结果 通过共表达和单因素COX回归分析筛选出29个与预后和m6A相关的lncRNA,大多数在ccRCC组织中表达上调,而COL18A1-AS1、AC007066.2和AC018752.1则表达下调。通过聚类分析将532例ccRCC组织样本分为cluster1组和cluster2组,cluster2组预后更差,PD-L1和CTLA4表达更高。利用LASSO COX回归算法确定8个与预后和m6A相关的lncRNA,建立ccRCC风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。依据模型计算风险值将患者分为高风险组和低风险组。高风险组患者预后更差,富含更多免疫细胞成分,对ICI治疗更敏感。结论 m6A相关的lncRNA对ccRCC患者的预后预测和免疫治疗指导具有重要意义。     

基于数据库分析CCR基因对肾透明细胞癌预后的预测价值

目的 利用信息库资料探讨趋化因子受体家族对肾透明细胞癌(ccRCC)预后的预测价值。方法 下载并分析癌症基因组图谱(TCGA)的基因表达数据,筛选CC趋化因子受体(CCR)亚基因家族在正常组织与ccRCC组织中的差异表达基因。采用COX回归分析构建预后模型并进行相关功能学分析。结果 从TCGA数据库下载包括539例ccRCC组织和72例正常组织的基因转录组数据,筛选出11个差异表达的CCR家族基因。通过多因素Cox回归分析得到2个(CCR3与CCR10)与ccRCC预后相关的CCR基因,并以此构建预后模型。根据模型风险评分的中位值将训练集样本分为高风险组(n=184)与低风险组(n=197)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,低风险组总生存率高于高风险组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 本研究构建的CCR基因预后模型可较好地评估ccRCC患者的预后并指导其个体化治疗。     

m5C甲基化相关基因预测肾透明细胞癌的预后

目的：利用肿瘤基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的数据,构建m5C甲基化相关基因组成的生存预后模型,分析与肾透明细胞癌生存有关的独立预后影响因素以预测肾透明细胞癌患者的预后。方法：从TCGA数据库下载肾透明细胞癌患者资料,从已发表的文献中获取m5C甲基化相关基因并分析其在肿瘤组和对照组间的表达差异。对这些基因进行共识聚类分析以揭示m5C甲基化相关基因与肾透明细胞癌预后之间的关系。通过单变量Cox分析和Lasso?Cox回归分析构建出生存预后模型并分析与肾透明细胞癌相关的预后影响因素,GO和KEGG富集分析进一步探索生物功能和潜在的信号通路。通过qRT?PCR验证m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌细胞系及组织和正常肾细胞系及组织之间的差异表达。 结果：m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌肿瘤组和正常组之间存在差异性表达。共识聚类分析结果显示亚群1的肾透明细胞癌患者预后优于亚群2。构建的生存预后模型将肾透明细胞癌分为高风险组和低风险组,单变量和多变量Cox分析显示分级和分期可能是肾透明细胞癌的独立预后因素,而GO和KEGG分析显示m5C?RNA甲基化修饰可影响肾透明细胞癌的进展。 此外,qRT?PCR实验也证实m5C甲基化相关基因在肾透明细胞癌肿瘤组和正常组之间表达存在差异。结论：本文构建的m5C 甲基化相关基因的生存预后模型可以预测肾透明细胞癌患者的预后。     

PTEN与肾透明细胞癌预后的关系

目的探讨PTEN在肾透明细胞癌中的表达情况与生物学意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测84例肾透明细胞癌(TNM病理分期:Ⅰ期45例,Ⅱ期29例,Ⅲ期8例,Ⅳ期2例;细胞核分级:1级49例,2级21例,3级11例,4级3例)中PTEN的表达情况,分析PTEN的表达与肾透明细胞癌TNM病理分期、细胞核分级之间的关系。结果 PTEN的表达与肾透明细胞癌的TNM病理分期、细胞核分级呈负相关(r=-0.354,P=0.001;r=-0.402,P=0.000 1),即PTEN的表达随着TNM病理分期和细胞核分级的增高逐步降低。结论肾透明细胞癌中PTEN的表达是了解其预后的重要指标。     

肾透明细胞癌患者预后危险因素分析

目的 探讨术前纤维蛋白原和血小板计数在预测肾透明细胞癌患者(CCRCC)预后中的价值.方法 回顾性分析我院2005年1月至2015年1月行手术治疗的300例非转移性CCRCC患者的临床资料.应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行单因素生存分析,比较患者临床病理特征与肿瘤特异性生存(CSS)和无复发生存...     

肾透明细胞癌PDCD5表达及与预后的关系

目的探讨PDCD5在。肾透明细胞癌发生、发展巾的作用及与预后关系。方法采用免疫组织化学方法．对46例肾透明细胞癌组织中PDCD5表达进行研究，对患者存活率进行回顾性随访：结果癌旁。肾组织中PDCD5阳性表达率显著高于肾癌组织。PDCD5阳性表达率随肾透明细胞癌病理分级和临床分期的上升而下降，染色强度也减弱。PDCD5阳性表达组3年及5年存活率高于阴性表达组：结论PDCD5为肾透明细胞癌的负性调节因子，对抑制肾透明细胞癌的恶性转化和进展可能有重要的意义。     

肾透明细胞癌中survivin和PCNA表达及其相关性研究

目的 探讨survivin基因表达与肾遗明细胞癌生物学行为及与PCNA表达的关系。方法 利用免疫组化法检测58例肾透明细胞癌和10例正常肾组织中survivin和PCNA的表达。结果 survivin和PCNA的表达阳性检测率分别为65．5％（38／58）和77．6％（45／58），而在10例正常肾组织阳性表达率分别为0（0／10）和30．0％（3／10）。survivin和PCNA的阳性表达均与肾透明细胞癌病理分级、临床分期、有无淋巴结转移密切相羌。survivin的阳性表达与PCNA的阳性表达呈正相关。结论 survivin和pCNA基因在肾透明细胞癌的发生、发展中起着协同的作用。它们的检测可能对肾透明细胞癌恶性程度的判定、预后和进一步治疗提供有效的依据。     

染色质调节因子相关的lncRNA肾透明细胞癌预后模型的构建和验证

目的 构建染色质调节因子（CR）相关长链非编码RNA（lncRNA）的肾透明细胞癌（ccRCC）预后模型,提高ccRCC的预后管理。 方法 从TCGA数据库下载ccRCC的转录组数据和临床数据,并通过“caret”R包将ccRCC样本以7∶3的比例分为训练集（166例）和验证集（71例）。基于“DESeq2”R包筛选出差异表达的CR及相关的lncRNA。构建CR与lncRNA的共表达网络,并筛选出相关系数|rs|＞0.3且P＜0.05的差异lncRNA。利用单因素Cox、Lasso和多因素逐步Cox回归分析,构建CR相关的lncRNA预后模型。计算训练集和验证集样本的风险评分,根据风险评分的中位数将ccRCC患者分为高、低风险组。K-M曲线和受试者操作特征（ROC）曲线评价模型,单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分的独立预测性能。“DynNom”和“shiny”R包开发在线预测工具。单样本基因集富集分析探索风险评分与免疫微环境及免疫检查点的关系。 结果 本研究最终纳入237个肿瘤样本和72个癌旁正常组织样本,鉴定了1 025个CR相关的lncRNA,最终筛选得到7个CR相关lncRNA（DUXAP8、AC026462.3、LINC01460、AL592494.1、AL353804.2、AC012462.1、AC009518.1）构建预后模型,并将其开发成在线工具（https://xzlmodelshiny.shinyapps.io/DynNomapp/）。高危组患者的生存率低于低危组（P＜0.05）,ROC曲线表明模型预测效能较好,单因素分析和多因素分析中风险评分的HR值分别为4.058（95%CI：2.530~6.508,P＜0.001）和3.096（95%CI：1.887~5.080,P＜0.001）。高风险组MDSC和Tregs细胞等免疫抑制细胞的浸润比例高于低风险组,趋化因子、免疫检查点及副炎症等通路的富集水平高于低风险组（P＜0.05）。此外,风险评分与免疫检查点TNFRSF25和TNFSF14呈正相关（r＞0.3,P＜0.05）。 结论 本研究构建的CR相关的lncRNA风险模型可独立有效地预测ccRCC患者的预后。     

EHD2和E-cadherin蛋白低表达与肾透明细胞癌预后不良相关

目的：探讨EHD2和E-cadherin蛋白在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况及其 临床意义。方法：采用蛋白质印迹法检测4对新鲜的ccRCC组织和癌旁组织中EHD2蛋白和E-cadherin蛋白的表达。选 取65例ccRCC患者的石蜡切片标本,采用免疫组织化学技术检测标本中EHD2与E-cadherin的表达情况,分析两者表达 相关性及与ccRCC各临床及病理指标的关系,并进一步探讨EHD2和E-cadherin蛋白与ccRCC患者预后的关系。结果： 蛋白质印迹法实验结果显示EHD2和E-cadherin蛋白在4对ccRCC癌组织中呈低表达,在癌旁组织中呈高表达。免疫组 织化学结果显示：EHD2与E-cadherin蛋白在局限性ccRCC癌组织中表达水平明显高于转移性ccRCC癌组织。两种蛋白 表达水平随着临床TNM分期及Fuhrman病理分级的升高而显著降低(分别为P<0.01和P<0.05)。Spearman分析结果显示： EHD2与E-cadherin蛋白在ccRCC中的表达水平呈正相关(r=0.390,P<0.01)。生存分析显示EHD2和E-cadherin蛋白同时低 表达的ccRCC患者其生存率明显低于二者单独或同时高表达ccRcc患者(P<0.05)。结论：EHD2和E-cadherin蛋白低表达 与ccRCC的预后不良相关。     

SETD2在肾透明细胞癌中的表达及对患者预后的影响

目的 探究组蛋白甲基化转移酶(SETD2)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其对患者预后的影响,讨论其可能的调控机制。方法 从肿瘤基因组计划数据库(TCGA)中下载ccRCC患者的基因突变数据、转录组数据和临床数据,使用R软件v 4.0.3对基因表达差异进行统计分析,用Kaplan-Meier绘图仪研究并比较不同免疫浸润情况及对应SETD2表达情况与患者总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)等方面预后的关系,结合临床数据进行验证,揭示SETD2突变调控ccRCC进展的潜在机制。结果 TIMER2分析结果显示,SETD2表达在ccRCC中显著下调且与免疫浸润相关,ccRCC基因突变景观图显示SETD2突变频率达12.5%,位列体细胞突变频率第4。ccRCC患者中,SETD2高表达组较低表达组预后更佳,高免疫浸润组患者较低免疫浸润组患者预后更佳。结论 SETD2高表达可增加ccRCC患者中免疫细胞的浸润及其对肿瘤的杀伤作用,从而对患者预后发挥积极作用。     

FBXO11蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的 探讨FBXO11在透明细胞性肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）中表达的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测77例CCRCC患者肿瘤及35例癌旁组织FBXO11蛋白的表达,分析FBXO11蛋白表达与患者临床病理特征的关系。将CCRCC患者临床病理特征及FBXO11蛋白表达进行COX单因素分析。将单因素分析中有统计学意义的因素引入COX多因素模型,分析影响CCRCC患者总生存期（overall survival,OS）缩短的独立危险因素。结果 FBXO11蛋白阳性表达率在CCRCC中为48.1%,明显高于癌旁组织的25.7%（P<0.05）。FBXO11蛋白阳性表达率在无静脉内癌栓组明显低于有静脉内癌栓组（P<0.05）。COX单因素分析显示高组织学分级、伴有远处转移和高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的危险因素（P<0.05）。COX多因素分析显示高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的独立预后因素。结论 FBXO11蛋白的高表达可能与CCRCC进展快及患者生存时间短密切相关,检测FBXO11蛋白对CCRCC患者的预后判断有参考价值。     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

人肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达

目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系.方法:标本离体后分成三组,(Ⅰ)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)证常肾组织组,应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究.结果:(1)HE染色结粜:肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核同缩,间质富有毛细血管和血窦.(2)TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生.凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩.正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少.(3)PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁阳性表达增加,肾癌组织阳性表达明显增多.(4)Caspase-3、Caspase-9免疫组化结果:Caspase_3 Caspase-9在难常肾组织中可见少量弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少.结论:癌旁细胞组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达最少.癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制.Caspase-3、Caspase-9、PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性.     

肾部分切除术对Ⅰ期局限性肾透明细胞癌患者预后的影响研究

背景　目前,T1a期局限性肾透明细胞癌（ccRCC）患者首选肾部分切除术（PN）,而对于T1b期局限性患者是否首选PN方案尚存在争议。目的　分析PN对Ⅰ期局限性ccRCC患者总体生存率（OS）和肿瘤特异生存率（CSS）的影响。方法　2020年4-5月申请获得监测、流行病学和最终结果（SEER）数据库使用权限并从数据库下载1975-2016年经病理诊断为Ⅰ期局限性ccRCC患者的临床病理资料（诊断年份、年龄、性别、人种、婚姻、肿瘤患侧性、病理分级、T分期、手术方式）,根据手术方式不同将患者分为PN组与根治性肾切除术（RN）组。采用Cox比例风险回归模型分析Ⅰ期局限性ccRCC患者CSS的独立预后因素;采用多因素Logistic回归分析探讨患者手术方式的影响因素;采用倾向性评分匹配法校正样本,Kaplan-Meier曲线和多因素Cox比例风险回归模型分析匹配前后两种手术方式对患者OS和CSS的影响。结果　单因素Cox比例风险回归模型结果显示,年龄、婚姻、病理分级、T分期、手术方式均是Ⅰ期局限性ccRCC患者CSS的预后因素（P<0.05）;多因素Cox比例风险回归模型结果显示,年龄、婚姻、病理分级、T分期、手术方式均是Ⅰ期局限性ccRCC患者CSS的独立预后因素（P<0.05）。在总体生存人群及肿瘤特异性生存人群中,两组T1b期局限性ccRCC患者诊断年份、年龄、肿瘤患侧性、病理分级比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistic回归分析结果显示,诊断年份、年龄、肿瘤患侧性、病理分级是T1b期局限性ccRCC患者手术方式的影响因素（P<0.05）。与RN相比,匹配前后的Kaplan-Meier曲线发现,PN对患者OS有益（P<0.05）,而对CSS无明显影响（P>0.05）;PSM调整后的多因素Cox比例风险回归模型分析发现PN是患者OS独立保护因素（HR=0.695,P=0.009）,对CSS无明显影响（HR=0.804,P=0.301）。结论　基于患者的远期生存角度,在手术可行的情况下,建议Ⅰ期局限性ccRCC患者优先考虑PN治疗。     

MXD3基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究MXD3基因在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况,初步评价其与临床病理学参数之间的关系及对患者预后的影响。方法 从癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达汇编数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)下载ccRCC中MXD3表达数据和临床病理参数,分析MXD3表达与肾透明细胞癌临床病理学参数之间的相关性及对预后的影响。结果 在TCGA数据库(P=0.000)与GEO数据库(P=0.000)中,MXD3在ccRCC组织中的表达量较癌旁组织显著增加,其差异表达可以作为ccRCC的潜在诊断标志物。同时,MXD3表达与T分期(P=0.001)、M分期(P=0.001)、TNM分期(P=0.000)以及病理分级(P=0.001)均密切相关。除此之外,MXD3高表达患者总生存率(overall survival,OS)较低表达患者明显缩短(P=0.000)。单因素(HR=2.287,95%CI:1.670~3.132,P=0.000)和多因素(HR=2.249,95%CI:1.387~3.648,P=0.000)COX回归分析表明MXD3表达是ccRCC患者的独立预后指标。结论 在肾透明细胞癌中,MXD3高表达与肿瘤的恶性程度呈正相关,是一个预后不良因素,有望作为判断患者预后的潜在生物学标志物。     

透明细胞乳头状肾细胞癌6例临床病理观察

目的探讨透明细胞乳头状肾细胞癌（CCPRCC）的临床病理学特点、免疫表型、诊断及鉴别诊断。方法对6例CCPRCC的石蜡标本行HE及免疫组织化学染色,并对其中3例行荧光原位杂交（FISH）检测,随访患者并复习相关文献,分析其临床表现及病理学特征。结果肿块最大径1.5~4.2cm,切面呈囊实性或实性。镜下观察,肿瘤包膜完整,瘤细胞排列成腺管状、乳头状、腺泡状、囊状、巢状或缎带状结构,囊内或腺腔内见分泌性蛋白。肿瘤细胞呈立方形或低柱状,具有丰富的透明胞质。细胞核圆形或卵圆形,较为一致,远离基底膜呈线状排列,Fuhrman核级低,其中4例为1级,2例大部分区域为1级、局灶为2级。2例肿瘤间质内见局灶平滑肌成分。6例均未见核分裂象及肿瘤性坏死,未见血管侵犯。免疫组织化学染色示,6例肿瘤细胞均弥漫强表达CK7、CAⅨ、缺氧诱导因子-１α、高分子角蛋白、PAX-2、PAX-8及波形蛋白;不表达CD10、α-甲酰基辅酶A消旋酶及TFE3;Ki-67阳性指数约1%~5%。3例FISH检测显示均无第7和17号染色体的获得,也无Y染色体及3p的缺失。3例患者获得随访,随访时间7~16个月,均无局部复发及转移。结论CCPRCC是一种新分类的惰性肿瘤,具有独特的形态学特点和免疫表型,需与具有透明细胞和乳头状结构的肾癌进行鉴别。     

肾透明细胞癌相关特异性miRNAs差异表达谱

目的研究证实肿瘤组织miRNAs表达水平较正常组织可特异性下调或上调,这一现象揭示miRNA在肿瘤发生、发展等过程中扮演重要角色。文中就肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)肿瘤相关特异性微小RNA(mi-croRNAs,miRNAs)表达谱及意义进行探讨。方法取手术切除新鲜肾透明细胞癌及其癌旁正常肾组织,提取总RNA,进行RNA质量检测后采用微阵列基因芯片对其相关特异性miRNAs进行分析,应用荧光定量RT-PCR方法验证。结果Ⅰ级ccRCC与癌旁正常肾组织共有24个差异表达miRNAs,其中12个上调,12个下调;Ⅱ级共有35个差异表达miRNAs,其中18个上调,17个下调;Ⅲ级共有34个差异表达miRNAs,其中18个上调,16个下调;Ⅰ级+Ⅱ级+Ⅲ级ccRCC与癌旁正常肾组织共有81个差异表达miRNAs,其中33个上调,48个下调;以表达差异在2倍及以上为标准进行比较,ccRCC与癌旁正常肾组织共有11个差异表达的miRNAs,其中,hsa-miR-487a、hsa-miR-491-3p、hsa-miR-452表达上调,hsa-miR-142-3p、hsa-miR-22、hsa-miR-299-3p、hsa-miR-29a、hsa-miR-429、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-125b表达下调。结论与癌旁正常肾组织中存在肿瘤相关特异性miRNAs表达谱,这种miRNAs差异可能导致ccRCC的发生及发展。     

微小RNA204在人肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的：研究微小RNA204（miR‐204）在人肾透明细胞癌（RCCC）中的表达及临床意义。方法收集泌尿外科行手术切除的RCCC及对应癌旁正常肾脏组织标本共65例,运用qRT‐PCR技术检测miR‐204在RCCC及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR‐204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;采用人工合成的miR‐204模拟物转染人RCCCCaki‐1细胞,分别采用qRT‐PCR及Western‐Blot检测转染后 miR‐204下游潜在靶点Bcl‐2及SIRT1 mRNA 及蛋白的表达变化。结果 miR‐204在RCCC组织中表达水平显著低于对应癌旁正常肾组织（P＜0．05）;miR‐204低表达与肿瘤体积增大（＞3 cm ,P＜0．05）、肿瘤淋巴结转移（P＜0．05）及高TNM分期（Ⅲ＋Ⅳ期,P＜0．05）显著相关;miR‐204转染人RCCCCaki‐1细胞后可显著降低细胞内Bcl‐2及SIRT1 mRNA及蛋白的表达水平（P＜0．05）。结论 miR‐204在RCCC组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关, miR‐204可能通过下调Bcl‐2及SIRT1的表达来抑制RCCC的发生、发展过程。