亚甲蓝对LPS诱导巨噬细胞炎性反应的影响

目的观察亚甲蓝对脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW246.7巨噬细胞炎性反应因子表达和细胞NF-κB活性的影响,以初步探讨亚甲蓝在LPS诱导巨噬细胞炎性反应中的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,利用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞建立体外内毒素炎性反应模型。进行实验分组:Ⅰ组(对照组):完全无血清培养基孵育;Ⅱ组(模型组):在无血清培养基中加入浓度为1 g/m L的LPS进行孵育;Ⅲ组(亚甲蓝组):完全无血清培养基中加入亚甲蓝20μmol/L,2 h后加入1 g/m L的LPS孵育,细胞培养24 h后:1实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)观察IL-6、IL-8、MCP-1 m RNA的表达;2酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-6、IL-8、MCP-1蛋白水平;3荧光素酶报告实验(luciferase activity assay)检测细胞中NF-κB的活性。结果LPS刺激巨噬细胞后,细胞中炎性反应因子m RNA和蛋白表达增高,而亚甲蓝预处理能够减弱LPS对炎性反应因子的诱导作用;LPS可以诱导巨噬细胞NF-κB活化,亚甲蓝能够抑制NF-κB的激活。结论亚甲蓝可以通过抑制NF-κB的激活调控LPS诱导的炎性反应。     

不同照射方式对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞极化的影响

目的探讨不同照射方式对白细胞介素4(IL-4)诱导的RAW264.7细胞向M2型巨噬细胞极化的影响。方法以IL-4刺激RAW264.7细胞诱导其向M2型极化,在IL-4诱导细胞前、后分别进行不同剂量的照射,采用Westernblot检测不同刺激条件下RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的表达水平,采用流式细胞术(FCM)检测不同刺激条件下RAW264.7细胞表面CD206和CD209的表达。结果不同的照射方式均上调IL-4诱导的RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的蛋白表达水平,在IL-4诱导细胞后进行照射比在IL-4诱导细胞前进行照射显著上调细胞YM-1和Arg-1的蛋白表达;照射能抑制IL-4诱导下细胞表面CD206和CD209的表达。结论不同的照射方式促进IL-4诱导的RAW264.7细胞向M2型巨噬细胞极化,但抑制RAW264.7细胞的功能分子CD206和CD209的表达。     

miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用机制

目的 探究miR-212-3p在乙肝病毒感染诱导的巨噬细胞激活中的作用及其机制。方法 CCK-8法检测不同浓度乙型肝炎E抗原(HBeAg)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力,分别转染miR-212-3p mimic和miR-212-3p inhibitor,检测miR-212-3p mRNA相对表达量、细胞活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平及mRNA相对表达量,采用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂预处理细胞后再用HBeAg刺激,检测PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白表达。结果 RAW264.7细胞活力随HBeAg浓度增加而上升(P<0.05),HBeAg浓度为2 000 ng/ml时细胞活力最高,miR-212-3p mRNA相对表达量上调,24 h时达到峰值,随后降低(P<0.05); HBeAg刺激后,转染miR-212-3p mimic的细胞中miR-212-3p的mRNA相对表达量上调(P<0.05),且IL-6、TNF-α水平和mRNA相对表达量上升(P<0.05);渥曼青霉素预处理RAW264.7细胞后m...     

盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞PGE_2、COX-2表达的影响

目的研究盐酸小檗碱对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响,探讨盐酸小檗碱的抗炎作用机理。方法MTT法测定盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞生长增殖的影响;酶联免疫法(ELA)检测盐酸小檗碱对PGE2生成的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达;蛋白印迹法(Western Blotting)检测COX-2的蛋白表达。结果盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用;盐酸小檗碱抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞PGE2的生成;但是对COX-2 mRNA及COX-2蛋白表达均无明显影响。结论盐酸小檗碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞有生长增殖抑制作用,盐酸小檗碱不是通过抑制COX-2生成的途径来影响PGE2的生成的。     

二氧化硅诱导巨噬细胞中核转录因子Sp1的表达活化

目的 研究二氧化硅（SiO2）刺激的巨噬细胞中核转录因子（Sp1）表达和定位的动态变化.方法 将40只健康SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组各20只.采用非暴露式气管插管,实验组每只大鼠一次性注入1 ml无菌生理盐水与SiO2混悬液（0.2 g/kg）;对照组大鼠注入等量的无菌生理盐水;分别于灌注后第1、7、14、21和28天各处死4只.免疫组织化学检测体内SiO2刺激的肺巨噬细胞中Sp1蛋白表达的定位及其动态变化.体外培养小鼠腹腔巨噬细胞系（RAW264.7细胞）,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测体外SiO2刺激的巨噬细胞中Sp1 mRNA的动态变化;免疫细胞化学、Western blot法检测体外SiO2刺激的巨噬细胞中Sp1蛋白表达的定位及其动态变化.结果 实验组与对照组比较,肺巨噬细胞中Sp1蛋白表达上调,于第14天达高峰;体外SiO2作用RAW264.7细胞30～960 min,Sp1 mRNA表达明显升高,呈现先升高而后下降的趋势,峰值位于240 min;Sp1总蛋白和核蛋白表达亦呈现先升高而后下降的趋势,总蛋白表达峰值位于240 min,核蛋白峰值位于480 min;Sp1蛋白于120 min开始发生明显的核移位,480 min时核移位最明显.结论 SiO2能激活巨噬细胞中Sp1,Sp1可能在矽肺的发生发展过程中起重要的调控作用.     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。     

A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期大量诱生SOCS-1蛋白的机制研究

摘要:目的　本研究利用A族链球菌（GAS）感染小鼠巨噬细胞,来分析SOCS-1的表达情况,以此探索GAS进行免疫逃逸的可能机制。方法　同时培养RAW264.7巨噬细胞和C57小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）,以感染复数（MOI）100∶1加入对数生长期GAS及经热灭活处理的GAS（70℃加热处理60 min）刺激RAW264.7及BMDMs巨噬细胞1 h,弃去细菌后,继续培养2,4,6,8,10 h,分别收集细胞,通过RT-PCR及Western blot 方法检测JAK/STAT通路的活化及SOCS-1的表达情况。结果　GAS感染RAW264.7及BMDMs细胞4 h后p-STAT1的水平明显高于热灭活组（P＜0.05）,6 h达到高峰,8 h后开始降低;同时,两组细胞SOCS-1基因的表达,GAS组4 h开始明显升高,6 h达到高峰,8 h开始降低;而热灭活GAS组SOCS-1基因在感染后6 h后开始升高,且升高的幅度明显小于GAS组（P＜0.05）。SOCS-1蛋白在GAS感染后6 h可以检测到,而热灭活GAS刺激细胞10h检测不到SOCS-1的表达。结论　GAS感染小鼠初期通过快速活化JAK/STAT通路引起SOCS-1的表达,以此来逃避机体的免疫攻击。     

巨噬细胞RAW264.7诱导共培养HL60细胞凋亡的实验研究

目的研究巨噬细胞RAW264.7诱导共培养HL60细胞凋亡的作用机理。方法用佛波脂(phorbol-1,2-myristate-1,3-acetate,PMA)、脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)诱导培养的巨噬细胞RAW264.7,并与HL60细胞共培养12 h。采用MTT法、流式细胞计量术、DNA琼脂糖凝胶电泳及蛋白印迹技术,观察巨噬细胞与肿瘤细胞共培养体系中,RAW264.7细胞对HL60细胞的作用。结果与巨噬细胞RAW264.7共培养的HL60细胞存活率减少,表现出凋亡细胞特有的标志,即"G1亚峰"和DNA梯状电泳条带,在这一过程中还伴随有促凋亡基因P53和P21表达。结论诱导刺激巨噬细胞RAW264.7导致了共培养HL60细胞的凋亡。     

低氧对RAW264．7细胞中糖皮质激素受体表达的调节

目的 观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞在低氧培养箱(1% O2)内不同时间段糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA和蛋白表达的变化,探讨低氧对RAW264.7细胞中GR表达的调节.方法 采用体外培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,将细胞接种于60 mm dish内,细胞长至50%时,将培养液置换为含5%无激素胎牛血清的无糖DMEM培养液,放入低氧培养箱内,同时输入含1% O2、5% CO2、94% N2 的混合气体,分别于低氧处理4、8、12 h后将细胞取出,抽提RNA或者蛋白,应用real-timePCR 和Western印迹分析测定GRmRNA和蛋白的表达水平,以未低氧处理RAW264.7细胞为对照.结果 低氧处理4 h可使RAW264.7细胞中GR mRNA的表达明显上调为对照的1.8倍(P<0.05),处理至12 h GRmRNA的表达仍高于对照,约为对照的2.7倍(P<0.05);低氧处理RAW264.7细胞8 h GR蛋白的表达也明显升高,约为对照的1.7倍(P<0.05),至低氧处理12 h,GR蛋白的表达仍高于对照.结论 低氧可以上调体外RAW 264.7细胞GR mRNA和蛋白的表达.     

白藜芦醇对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子影响研究

[目的]观察白藜芦醇对脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞炎症因子的影响.[方法]体外培养小鼠RAW264.7细胞,脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度白藜芦醇进行干预,ELISA法检测培养上清液中IL-10和PGE2含量.[结果]白藜芦醇可抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进抗炎因子IL-10表达,并呈一定量效关系,其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关.[结论]自藜芦醇呈浓度依赖性地抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进IL-10表达.     

苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌的影响

目的研究苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α的影响,探讨苜草素对巨噬细胞免疫功能的影响机制。方法以不同浓度的苜草素和10 g/ml的脂多糖(LPS)分别处理巨噬细胞RAW264.7,采用中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性,ELISA检测TNF-α分泌量。以不同浓度的苜草素处理LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7,采用Griess分析法测定NO含量,ELISA检测IL-6分泌量,半定量RT-PCR方法测定巨噬细胞中iNOS、IL-6、TNF-αmRNA水平。结果苜草素在0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时能显著提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性(P<0.05);在0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著增加TNF-α的分泌量(P<0.01),显著降低LPS诱导的巨噬细胞NO产生量(P<0.05);在0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著降低LPS诱导的巨噬细胞IL-6的产生量(P<0.01)。苜草素可抑制LPS诱导的iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达,增加TNF-αmRNA的表达。结论苜草素可以提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,在转录水平上影响小鼠巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α的基因表达,对巨噬细胞免疫功能起调节作用。     

激活蛋白-1介导二氧化硅诱导的巨噬细胞细胞因子的表达

目的 探讨SiO2诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达改变是否与激活蛋白-1(AP-1)活化有关.方法 用AP-1的抑制剂姜黄素处理巨噬细胞后,用Western blotting检测核蛋白AP-1(c-jun/c-fos)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β1蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、TGFβ1 mRNA的表达.结果 10和20 μmol/L姜黄素处理组c-jun的核蛋白表达为1.150±0.020、1.010±0.108,c-fos的核蛋白表达为0.430±0.023、0.256±0.015,明显低于SiO2刺激组(1.550±0..029、0.860±0.036),差异有统计学意义(P《0.01),且呈剂量依赖关系.20μmo/L姜黄素处理组TNF-α、TGFo-β1蛋白表达分别为123.58±45.78、32.12±5.34,明显低于SiO2刺激组(1582.18±437.52、55.60±5.51);TNF-α、TGF-β1 mRNA表达水平分别为0.74±0.01、0.22±0.04,也明显低于SiO2刺激组(2.27±0.33、2.96±0.15),差异均有统计学意义(P《0.01).结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α、TGF-β1与AP-1的活化有关.     

高温及内毒素复合因素对IL-1 βmRNA表达影响

目的 探讨高温和内毒素(LPS)复合因素对RAW 264.7细胞IL-1β mRNA表达的影响.方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW 264.7细胞,分为37,40℃对照组,37,40℃LPS组.用RT-PCR方法检测RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达.结果 RAW264.7细胞在37和40℃加或不加LPS条件下随着时间的变化IL-1 βmRNA表达各不相同,在37℃条件下,LPS组随着时间的不断延长,IL-1 βmRNA表达不断增强;40 ℃条件下对照组IL-1βmRNA表达亦表现出不断增强,而LPS组IL-1 βmRNA表达表现为先增强后减弱.结论 高温和内毒素复合因素能够下调RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达,考虑其原因与高温和内毒素复合因素诱导产生的热休克蛋白及该条件下RAW 264.7细胞的大量凋亡有关.     

活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用

研究活化T细胞核因子(NFAT)在环境内分泌干扰物双酚A(BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌白细胞介素-10(IL-10)蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫毒作用机制提供理论依据。将不同剂量的BPA(0.1、1、10、100及1000μmol/L)作用于RAW264.7细胞24 h、48 h,用CCK8试剂盒检测细胞活性。以1μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,以1、10、50、100μmol/L BPA作用细胞24 h,ELISA试剂盒检测细胞上清液中IL-10蛋白含量。10、100μmol/L BPA作用细胞4 h、12 h,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达。与对照组比较,1000μmol/L BPA无论作用24 h还是48 h均能明显抑制细胞活性(P0.01);LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白,50和100μmol/L BPA作用细胞24 h,与LPS组比较,显著抑制IL-10蛋白的分泌(P0.01);10μmol/L、100μmol/L BPA染毒4 h能明显促进NFATp mRNA表达(P0.01);染毒12 h时,IL-10 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示本实验条件下,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用。     

HCMV IE1蛋白对小鼠Raw264．7细胞株TNF-α、IL-1β表达的影响

目的构建人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)立即早期蛋白1(IE1)真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1,将其转染小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞株,观察IE1蛋白在细胞中的表达及其对小鼠巨噬细胞Raw264.7分泌细胞因子功能的影响。方法双酶切pQE30-IE1,回收目的基因IE1,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),筛选、鉴定阳性克隆得pcDNA3.1(-)-IE1;提取质粒pcDNA3.1(-)-IE1,通过Super FectTM脂转染试剂将质粒pcDNA3.1(-)-IE转染Raw264.7细胞,Western-blot鉴定IE1蛋白的表达,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β的表达水平。结果与结论①成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1;②pcD-NA3.1(-)-IE1能在Raw264.7细胞中表达;③IE1的表达可上调巨噬细胞TNF-α、IL-1β的表达水平。     

Fe2O3纳米粒子对RAW264．7细胞活力影响

目的 探讨Fe2O3纳米粒子对小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)的活力与凋亡的影响.方法 Fe2O3纳米粒子对RAW264.7细咆染毒,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法确定受试物的染毒剂量.用0.24,0.48,0.96mg/ml Fe2O3纳米粒子染毒,并设阴性对照组.分别对各个组行乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化及凋亡.结果 MTT试验结果表明,Fe2O3纳米粒子在0.816～3.523 mg/ml范围内均可抑制RAW264.7细胞增值,半数抑制浓度(IC50)为1.76 mg/ml.Fe2O2纳米粒子在0,0.24,0.48,0.96 mg/ml剂量组的细胞外液中LDH活力高于对照组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果表明,剂量组细胞线粒体膜电位均较对照组有所下降,且细胞凋亡率显著增高.结果 Fe2O3纳米粒子可以抑制RAW264.7的增殖并导致细胞膜通透性的增加,在一定剂量范围内引起线粒体膜电位的降低最终导致细胞凋亡.     

番茄红素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应影响

目的 探讨番茄红素对脂多糖(LPS)所诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 采用Griess法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测一氧化氮(NO)和白介素-6(IL-6)的生成水平,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-blot)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的基因表达量及iNOS的蛋白表达量.结果 番茄红素中、高剂量组NO分别生成(40.6±1.5)、(26.6±1.3) μmol/L,均明显低于阳性对照组的(56.3±2.5) μmol/L(F=18.3,P＜0.01);番茄红素低、中、高剂量组IL-6分泌量分别为(508.3±39.5)、(469.2±66.9)、(335.5±72.9)pg/mL,均明显低于阳性对照组的(603.4±16.8) pg/mL(F=92.6,P＜0.05或P＜0.01),且其iNOS和IL-6基因及蛋白表达水平也均明显低于阳性对照组.结论 番茄红素能够降低LPS所诱导的RAW264.7巨噬细胞中iNOS、IL-6及其产物NO、IL-6的表达水平,提示其可能对于治疗各种炎症相关性疾病如动脉粥样硬化等有着重要意义.     

mm9_circ_010490在PM2.5诱导小鼠单核巨噬细胞炎症反应中的功能

目的探究mm9_circ_010490在PM_(2.5)暴露小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中的表达改变及其在炎症反应中的作用。方法使用0、50、100、150、200μg/ml的PM_(2.5)悬液暴露RAW264.7细胞24、48 h,收集细胞提取总RNA,用qRT-PCR技术检测炎症因子IL-6、TNF-α和mm9_circ_010490表达水平的差异。设计并合成mm9_circ_010490的3条干扰序列(siRNAs)对细胞进行转染,以si-NC空载体作为对照组,联合PM_(2.5)暴露后检测上述指标。结果与对照组相比,PM_(2.5)暴露RAW264.7细胞后,IL-6和TNF-α炎症因子及mm9_circ_010490的水平升高,具有时间、剂量依赖性,且差异具有统计学意义(P0.05);使用mm9_circ_010490的siRNA转染RAW264.7细胞后,IL-6、TNF-α炎症因子和mm9_circ_010490表达水平下调,差异具有统计学意义(P0.05);联合PM_(2.5)暴露后,与si-NC+PM_(2.5)组相比,上述指标呈现低表达趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 mm9_circ_010490表达水平在PM_(2.5)暴露后的RAW264.7细胞中明显上升,且在PM_(2.5)诱导细胞炎症反应中发挥着促炎作用。     

甲醛对小鼠源性巨噬细胞DNA损伤作用

目的 探讨甲醛对小鼠源性巨噬细胞(RAW264.7细胞)DNA的损伤作用.方法 用0,20,40,80,160,320 μmol/L甲醛处理RAW264.7细胞1 h.采用单细胞凝胶电泳技术检测甲醛对RAW264.7细胞DNA的损伤作用.结果 甲醛剂量为20,40,80,160 μmol/L时,RAW264.7细胞DNA的迁移率和尾长分别为33.0%,49.7%,82.3%,38.3%和11.2,22.6,30.1,18.9μm,与空白对照组4.3%和9.7μm比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当甲醛浓度达320 μmol/L时,细胞DNA的迁移率和尾长分别为6.3%和9.3 μm,与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低浓度甲醛可造成RAW264.7细胞DNA的损伤.     

巨噬细胞IL-1β mRNA在高温和内毒素复合影响下的表达

目的 研究高温和内毒素(LPS)双重因素对巨噬细胞IL-1β mRNA表达的影响.方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为常温(37℃)对照组,高温(40℃)对照组,37℃ LPS组,38℃ LPS组,39℃ LPS组和40℃ LPS组.在含95%O2和5%CO2条件下培养1、2、3 h后,TRIZOL提取细胞总RNA,核酸蛋白分析仪检测RNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性,RT-PCR方法检测巨噬细胞IL-1β mRNA的表达.结果 在提取的总RNA无降解、无蛋白质污染的前提下,温度升高和内毒素都能引起IL-1β mRNA表达上调,内毒素在38℃时对IL-1β mRNA表达的上调作用最大,但高温和内毒素复合影响可下调RAW264.7细胞IL-1β mRNA表达.结论 单纯的高温或内毒素均能上调RAW264.7细胞IL-1β mRNA表达,但高温复合内毒素却下调IL-1β mRNA表达.