骨髓间充质干细胞对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响。方法 (1)以不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、300μmol/L、500μmol/L和700μmol/L)H₂O₂处理大鼠心肌细胞H9c2 6 h、9 h和12 h,采用CCK-8检测细胞活力，筛选H₂O₂的最佳作用浓度及作用时间以构建氧化应激损伤心肌细胞模型。(2)将大鼠心肌细胞H9c2分为对照组、H₂O₂组、BMSC+H₂O₂组。H₂O₂组和BMSC+H₂O₂组均采用500μmol/L H₂O₂诱导12 h建立氧化应激损伤心肌细胞模型，在此基础上，BMSC+H₂O₂组加入对数生长期大鼠BMSC进行共培养。对照组正常培养而不给予干...     

lncRNA MEG3靶向miR-130a-5p调控人视网膜色素上皮细胞损伤的研究

目的 探讨lncRNA MEG3在年龄相关性黄斑变性(AMD)患者中的表达及其靶向miR-130a-5p对人视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响。方法 选取2020年6月至2021年8月永州职业技术学院附属医院收治的AMD患者38例以及同期的健康体检者38例,收集其空腹静脉血,qRT-PCR检测其血清lncRNA MEG3表达水平。不同浓度(0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L)过氧化氢(H₂O₂)处理人RPE细胞系ARPE-19细胞构建RPE细胞损伤模型,并检测lncRNA MEG3在H₂O₂处理的ARPE-19细胞中表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验分析lncRNA MEG3与miR-130a-5p的靶向关系。ARPE-19细胞分为对照组(常规培养,不进行任何特殊处理)、H₂O₂组(200μmol/L H₂O₂处理24...     

GLP-1通过细胞色素P450表氧化酶途径抑制氧化应激

目的 研究GLP-1在体外对氧化应激的保护作用,并从细胞色素P450(CYP450)表氧化酶途径探讨可能的机制。方法 H₂O₂处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建氧化应激模型;实验分为对照组、H₂O₂组、H₂O₂+7-36a组、H₂O₂+9-36a组、H₂O₂+7-36a+Danazol(CYP2J2蛋白抑制剂)组、H₂O₂+9-36a+Danazol组。CCK8方法检测细胞存活率;荧光探针标记法测定细胞内ROS水平;Western blotting方法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)的表达变化。结果 600μmol/L的H₂O₂处理HUVECs 3 h建立氧化应激模型,与对照组比较,H₂O₂     

S1PR5激动剂减轻H2O2诱导的脑微血管内皮细胞高通透性及氧化应激损伤

目的 鞘氨醇-1-磷酸酯受体5(S1PR5)在急性缺血性卒中(AIS)血脑屏障氧化应激损伤中的作用及机制尚不清楚。文章旨在探讨S1PR5在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧化应激损伤中的作用及分子机制。方法 将bEnd.3细胞分为对照组、H₂O₂组、H₂O₂+5μmol/L A971432(S1PR5特异性选择性激动剂)组、H₂O₂+10μmol/L A971432组、H₂O₂+20μmol/L A971432组。用CCK-8法检测细胞活力改变;FITC-Dextran渗透法检测血管内皮细胞通透性;Western Blot检测S1PR5、ZO-1、VE-Cadherin、Occludin、Bax、Bcl2、Caspase-3、p-Erk1/2、Erk1/2、Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2的蛋白表达水平;免疫荧光观察ZO-1的荧光强度;光学显微镜下观察细胞形态变化;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧水平...     

谷氨酰胺抑制过氧化氢诱导的A549细胞凋亡

目的观察谷氨酰胺诱导A549细胞表达HSP70及在抗过氧化氢（H2O2）诱导的细胞凋亡中的作用。方法体外培养A549细胞,随机分为4组：①空白对照组（C组）即生理盐水组;②谷氨酰胺组（Gln组）：以含谷氨酰胺8mmol/L的培养液预处理细胞;③过氧化氢组（H₂O₂组）：以浓度为400μmol/L过氧化氢处理细胞;④谷氨酰胺预处理后过氧化氢刺激组（Gln+H₂O₂组）：以含谷氨酰胺8mmol/L预处理细胞后,再加入400μmol/L过氧化氢处理细胞. 用免疫印记（Western blotting）法检测HSP70蛋白的表达,记录平均灰度值;用流式细胞仪Annexin-V法检测细胞凋亡,计算细胞总凋亡率。结果① 与C组HSP70表达（1.87±0.55） 相比,Gln组（8.42±1.38）、H₂O₂组（9.35±1.57）和Gln+H₂O₂组（13.12±1.85）的HSP70表达分别增高约4.5倍、5倍和7倍（P＜0.01）;与H₂O₂组HSP70表达相比,Gln+H2O2组进一步增高（P＜0.01）;②与C组相比,Gln组细胞总凋亡率无明显变化;H₂O₂组和Gln+H₂O₂组细胞总凋亡率分别为7.48%和6.06%,均明显高于C组（P＜0.01）;与H₂O₂组相比,Gln+H₂O₂组细胞总凋亡率明显降低（P＜0.01）。结论谷氨酰胺诱导A549细胞表达HSP70并可明显地抑制H2O2所致的细胞凋亡作用。     

miR-26a-5p对H2O2诱导的EA.hy926血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-26a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的EA.hy926内皮细胞焦亡和血栓因子(TF)的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度H₂O₂(0,100,300,400,450,500,700μmol/L)刺激EA.hy926内皮细胞后的存活率。为了研究H₂O₂对EA.hy926内皮细胞的影响，分为control组(0μmol/L H₂O₂)和450μmol/L H₂O₂组；为了研究miR-26a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的EA.hy926内皮细胞损伤的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系，分为miR-26a-5p mimic+H₂O₂组，mimic NC+H₂O₂组，miR-26a-5p inhibitor+H     

孤核受体NR4A1在H2O2诱导小鼠肾脏足细胞损伤中的作用

目的 观察双氧水(H₂O₂)诱导的小鼠肾脏足细胞(MPC-5)氧化应激中孤核受体(NR4A1)表达变化,以及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法 MPC-5分为空白对照组(H₂O₂处理浓度为0μmol/L或时间为0 h)和处理组(对应H₂O₂处理各浓度或时间),慢病毒感染后的MPC-5分为过表达组(Ad-NR4A1组)和空载对照组(Ad-Ctrl组)。采用H₂O₂处理MPC-5建立氧化应激模型;采用Q-PCR法检测H₂O₂处理MPC-5后,NR4A1 mRNA表达变化;采用Western blotting法检测NR4A1蛋白、凋亡相关蛋白Caspase 3(17 kDa)表达变化;采用慢病毒感染MPC-5,嘌呤霉素筛选并获得稳定过表达NR4A1的MPC-5细胞(Ad-NR4A1组)与空载细胞(Ad-Ctrl组),H₂O₂处理后,采用...     

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 探讨右美托咪定调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法 体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设置对照组、H₂O₂组、1μmol右美托咪定+H₂O₂组、5μmol右美托咪定+H₂O₂组、10μmol右美托咪定+H₂O₂组。CCK-8法检测各组H9C2细胞增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组H9C2细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量;Western blotting检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,H₂O₂组H9C2细胞存活率、SOD水平、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对...     

二氮嗪通过抑制内质网应激作用降低软骨细胞凋亡的研究

目的 探讨二氮嗪对H₂O₂诱导的软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取3只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为对照组(A组),H₂O₂损伤组(B组),H₂O₂+100 μmol/L二氮嗪组(C组),H₂O₂+200 μmol/L二氮嗪组(D组),H₂O₂+300 μmol/L二氮嗪组(E组),H₂O₂+400 μmol/L二氮嗪组(F组)。A组细胞不做特殊处理,B组用400 μmol/L双氧水在37℃恒温箱内孵育8 h,C、D、E、F组分别用100、200、300、400 μmol/L的二氮嗪在37℃的恒温箱内预处理30 min,再用400 μmol/L的H₂O₂孵育8 h,用CCK8法检测各组软骨细胞的活性,用流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡情况,用RtPCR检测软骨细胞功能情况,用免疫荧光、Western Blot检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达情况。 结果 ①CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组> E组> D组> F组> B组;②流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡率由大至小依次为B组> F组>D组> E组> A组;③RtPCR检测软骨细胞二型胶原蛋白(Coll-Ⅱ)、Caspase-3和聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)表达量,表达量大至小依次为A组> E组> D组> F组> B组;各组聚集蛋白聚糖酶表达量大至小依次为B组> F组> D组> E组> A组;④免疫荧光检测软骨细胞中CHOP蛋白的表达量,各组表达量依次是B组> F组> A组;⑤Western bolt检测各组软骨细胞中Caspase-3、Bax、CHOP蛋白的表达情况,表达量依次为B组> F组> A组。 结论 二氮嗪通过抑制内质网应激作用,从而减少H₂O₂诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。      

大黄酸对过氧化氢致心肌细胞线粒体损伤的保护作用机制

目的 探讨大黄酸是否通过调节线粒体功能保护过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤。方法 应用H₂O₂建立心肌细胞损伤模型,实验分为3组：对照组(不用H₂O₂处理)、H₂O₂组(以H₂O₂诱导心肌细胞H9c2损伤)、大黄酸组(H₂O₂刺激心肌细胞H9c2造模,1μg/mL大黄酸干预)。采用噻唑蓝法检测细胞活力,电镜检测线粒体超微结构,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测蛋白p-Drp1、Drp1、OPA1、Bax、Bcl-2及Caspase 3表达水平。结果 与对照组相比,H₂O₂组能明显抑制细胞活力(P<0.05),大黄酸组中3个浓度均能显著增加细胞活力,大黄酸浓度为1μg/mL细胞活力最显著(P<0.01)。对照组线粒体轮廓完整,棱嵴清晰;H_...     

过氧化氢通过内质网应激信号通路对Hela细胞自噬和凋亡的诱导作用

目的:利用过氧化氢(H₂O₂)构建人宫颈癌Hela细胞体外氧化应激模型,观察其对Hela细胞自噬和凋亡的影响,并探讨H₂O₂与内质网应激(ERS)信号通路之间的关系。方法:以1 mmol·L^-1 H₂O₂构建体外氧化应激模型;实验分为对照组、H₂O₂ 4 h组、H₂O₂ 8 h组和H₂O₂ 12 h组,各组细胞分别以H₂O₂作用0、4、8及12 h后,利用Western blotting法检测各组Hela细胞中ERS及凋亡、自噬相关蛋白表达。结果:与对照组比较,各H₂O₂组Hela细胞中Cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05),Cleaved Caspase-4表达水平亦明显升高(P<0.05);各H₂O₂ 组Hela细胞中LC3-Ⅱ表达水平高于对照组(P<0.05),GRP78表达水平亦高于对照组(P<0.05);随着H₂O₂作用时间的延长,各H₂O₂组Hela细胞中IRE1a表达水平明显升高(P<0.01),p-JNK表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:在H₂O₂所构建的体外氧化应激模型中H₂O₂能够诱导Hela细胞发生自噬和凋亡,且该诱导作用由ERS信号通路介导。     

热休克处理对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的研究热休克预处理对热休克蛋白27（HSP27）在视网膜色素上皮细胞（RPE）中表达的影响,探讨热休克预处理对RPE氧化损伤的保护作用及其机制。方法培养的RPE随机分成正常对照组、热休克预处理组、H₂O₂损伤组及热休克预处理加H₂O₂损伤组,将热休克预处理、热休克预处理加H₂O₂损伤组细胞置于42℃水浴中孵育20min进行热休克处理,于37℃体积分数5%CO₂细胞培养箱中继续培养,分别于0h,2h,4h,8h,12h,24h后终止培养,用于实验。H₂O₂损伤组及热休克预处理加H₂O₂损伤组细胞600μmol·L^-1H₂O₂处理造成RPE氧化损伤模型;应用免疫细胞化学法检测热休克预处理前后细胞HSP27的表达;流式细胞术检测H₂O₂损伤前后RPE的凋亡情况。结果热休克预处理后RPE HSP27表达出现不同程度增高,与对照组比较,预处理后4h及8h组表达明显增强,Q值分别为9.9133,11.6842,P<0.01;流式细胞仪分析检测结果显示,H₂O₂可以显著降低细胞的活性,与对照组比较,Q值为51.7561,P<0.01。热休克预处理后的RPE表现出时H₂O₂损伤的耐受性,与H₂O₂损伤组比较,预处理后4h加H₂O₂损伤组及8h加H₂O₂损伤组RPE凋亡率明显降低,Q值分别为24.1271,25.5848,P<0.01,且程度与细胞中HSP27表达高低呈一定的相关性（r=-0.9856,P<0.01）。结论热休克预处理可诱导RPE HSP27的高表达并能明显减轻RPE的H₂O₂损伤,其机制可能主要是通过高表达的HSP27保护RPE抑制其凋亡来实现。     

活性氧促使L6成肌细胞的分化

目的 探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响。方法 MTT法检测H₂O₂对L6细胞活力的影响;观察H₂O₂引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平。结果 在较短的处理时间内(1h),低浓度的活性氧(50μmol/LH₂O₂)有利于细胞的生长(P<0.05);H₂O₂处理12h后,50和150μmol/L的H₂O₂能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H₂O₂能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化。结论 活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子。     

NALP3炎性复合体及ERK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制

目的 探讨氧化应激时人肺上皮细胞（A549）中NALP3炎性复合体、细胞外调节蛋白激酶（ERK）的表达变化,阿魏酸钠（SF）的干预作用及其可能的机制。方法 培养A549细胞,分为空白对照组,H₂O₂刺激组,阿魏酸钠组,caspase-1抑制剂（Z-VAD）组,ERK阻断剂（PD98059）组, 阿魏酸钠+H₂O₂组。其中H₂O₂刺激组用H₂O₂ 200 μmol/L培养细胞2 h,阿魏酸钠组用阿魏酸钠400 μg/mL处理细胞30 min,Z-VAD组、PD98059组、阿魏酸钠+H₂O₂组分别用Z-VAD 20 μmol/L、PD98059 50 μmol/L、阿魏酸钠 400 μg/mL预处理A549细胞30 min后加入H₂O₂ 200 μmol/L培养2 h,采用实时荧光定量PCR检测各组A549中caspase-1、NALP3 mRNA的表达,Western blot检测caspase-1、NALP3、磷酸化ERK（p-ERK）、ERK蛋白含量;ELISA法检测各组A549 上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）含量。结果 与空白对照组比较,H₂O₂ 可使A549细胞caspase-1 、NALP3 mRNA及caspase-1、NALP3、p-ERK/ERK蛋白水平表达增强,IL-1β分泌增加（P 均< 0.05）,而阿魏酸钠组与空白对照组差异无统计学意义（P >0.05）。与H₂O₂刺激组比较, Z-VAD组、PD98059组和阿魏酸钠+H₂O₂组caspase-1、NALP3 mRNA及蛋白表达降低,p-ERK/ERK蛋白表达降低,IL-1β分泌下降（P 均<0.05）,Z-VAD组或PD98059组与阿魏酸钠+H₂O₂组间上述作用差异无统计学意义（P >0.05）。结论 阿魏酸钠可能通过抑制ERK活化,减少caspase-1、NALP3及IL-1β的表达,从而减轻氧化应激导致的炎症级联反应。     

体外不同条件诱导L02肝细胞损伤模型的构建

目的 探讨不同条件下诱导L02肝细胞损伤的最佳条件,建立稳定可靠的体外肝细胞损伤模型。方法将常规培养的L02细胞分别设置为正常对照组、过氧化氢(H₂O₂)组、对乙酰氨基酚(APAP)组和乙醇组;H₂O₂组用不同浓度梯度(300、400、500和600 mol/L)的H₂O₂分别诱导6、12和16 h;APAP组以不同浓度梯度(1、10、20和40 mmol/L)分别诱导3和6 h;乙醇组加入不同浓度梯度(0.5%、1%、1.5%和2%)的乙醇分别孵育6和24 h;在上述损伤条件下用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测各组L02细胞的存活率。在确定的最佳损伤条件下,建立不同肝损伤模型,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等损伤指标。结果 除300 mol/L H₂O₂诱导12 h以外,其余不同浓度H₂O₂组的...     

H2O2诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁死亡模型的构建

目的 构建并鉴定H₂O₂诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁死亡模型。方法 常规培养TM3细胞,采用MTS法选择H₂O₂的处理浓度,设置TM3细胞常规培养组(T组)、2 mmol·L-1H₂O₂处理TM3细胞1 h组(H₂O₂-T组)、1μmol·L-1GSH过氧化物酶4抑制剂(RSL3)处理TM3细胞1 h组(RSL3-T组)和3μmol·L-1i FSP1处理TM3细胞24 h组(i FSP1-T组);采用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;检测试剂盒检测细胞的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物(LPO)含量,Phen-Green-SK荧光探针经激光共聚焦显微镜检测Fe2+含量;采用透射电镜观察线粒体形态结构。结果 根据MTS法选择2 mmol·L-1H₂O₂处理TM3细胞;与T组相比,H₂O₂-T组...     

NR4A1通过IκBα/NF-κB通路调控过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨过氧化氢(H₂O₂)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)氧化应激中孤核受体NR4A1表达变化,以及其对细胞凋亡的影响及机制。方法 使用不同浓度及时间梯度H₂O₂处理HUVECs,采用CCK-8法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting法检测Bcl-2、Bax与NR4A1蛋白表达;采用siRNA转染建立敲低NR4A1与对照的HUVECs,分为si-NC组及si-NR4A1组,H₂O₂处理后检测各组细胞抑凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax表达,TUNEL法检测细胞凋亡;采用慢病毒感染建立稳定过表达NR4A1与对照的HUVECs,并进行H₂O₂处理,分为空载对照组(NC组)、过表达组(OV组)、NC+H₂O₂组及OV+H₂O     

羊毛硫氨酸合成酶C样蛋白2在细胞抗氧化中的作用及机制研究

目的 探讨羊毛硫氨酸合成酶C样蛋白2(LanCL2)在细胞抗氧化过程中的作用及相关机制。方法 采用不同浓度(0、30、75、100、150、200μmol/L)的过氧化氢(H₂O₂)诱导处理人胚胎肾细胞(HEK293T) 24 h以诱导氧化应激,通过蛋白质印迹技术检测LanCL2的表达;分别转染GFP、GFP-LanCL2过表达质粒至HEK293T细胞,在200μmol/L H₂O₂刺激条件下,通过PI/Hoechst 33342染色检测细胞死亡;向HEK293T细胞中转染Myc、Myc-LanCL2、Myc-GSTP1、Myc-LanCL2-His和GSTP1-His质粒,分别作为Myc组、Myc-LanCL2组、Myc-GSTP1组、Myc-LanCL2-His组(诱导纯化后)和GSTP1-His组(诱导纯化后),将未经任何处理的细胞作为Ctrl组,采用紫外分光光度计检测各组谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性及Myc组与Myc-LanCL2组的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果 与无H_...     

冰片对过氧化氢损伤后大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用

目的 研究冰片对心肌微血管内皮细胞的保护作用。方法 体外培养的大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMECs),采用CCK-8(cell counting kit-8)检测细胞活力,建立过氧化氢H₂O₂损伤CMECs模型,确定实验适宜的H₂O₂浓度及冰片治疗浓度。将CMECs分为对照组、H₂O₂损伤组及冰片治疗组。通过检测氧化应激反应多种中间产物含量及线粒体功能等,观察比较冰片对H₂O₂诱导的CMECs损伤的保护作用。结果 H₂O₂损伤组与对照组比较,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、NADPH氧化酶、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione, GSSG)含量明显增加,还原型谷胱甘肽(reduced ...     

温度对过氧化氢抑制前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨温度对过氧化氢(H₂O₂)抑制前成骨细胞增殖和成骨分化的影响。方法 取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂干预组,分别给予0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂溶液干预2 h。另取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为对照组、模型组、低温组和高温组。对照组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h;模型组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;低温组细胞置于32℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;高温组细胞置于40℃、含体积分数5%CO₂培...