用变性高效液相色谱检测和脱氧核糖核酸测序方法对三个肥厚型心肌病家系β肌球蛋白重链基因突变的分析结果

目的:研究家族性肥厚型心肌病(HCM)的主要致病基因β肌球蛋白重链(MYH7)基因突变情况.方法:用变性高效液相色谱(DHPLC)检测和脱氧核糖核酸(DNA)测序方法对三个肥厚型心肌病家系成员的MYH7基因8、14外显子及附近上下游序列进行检测分析;另选正常对照者50例.结果:三个家系其中一个家系发现MYH7基因14外显子中存在Thr441Met突变,外显子8也存在一个点突变.另外两个家系均存在外显子8的C到T的突变,但表型不一.其中一个家系还存在内含子13和19的多态位点.此外,三个家系MYH7基因第3外显子均发现同义突变.结论:MYH7基因在肥厚型心肌病家系中具有较高的突变率.运用变性高效液相色谱技术,能够快速有效的进行基因突变筛查.     

核纤层蛋白A/C基因LMNA与扩张型心肌病的关系研究

目的研究中国黄种汉族人特发性扩张型心肌病（IDCM）患者LMNA基因的突变情况。方法用基因测序的方法扫描50例散发扩张型心肌病患者LMNA基因的12个外显子及附近部分内含子；对照组为50名健康志愿者。结果LMNA基因存在1种突变，位于第7内含子区域，为单核苷酸多肽性（SNPs）。结论LMNA基因可能不是黄种汉族IDCM患者常见致病基因；LMNA基因存在新的SNPs。     

MUTYH基因多态性与大肠癌的关系

目的探讨MUTYH基因多态性与大肠癌之间的关系。方法应用测序技术、变性高效液相色谱（DHPLC）对200例大肠癌患者及400名正常对照者的MUTYH基因6个外显子区域进行变异筛查。结果在3个外显子区域筛查出突变或变异。Exon14区域为错义突变,即Exon14＋74T〉A,p．V463E。Exon 10区域变异位于Intron10-2A〉G,病例组变异者的平均年龄高于对照组（P〈0．01）。Exon 1区域的变异位点是Exon1-316G〉A、Exon1-292G〉A和Intron1＋11C〉T,病例组变异危险性是对照组的10．23倍。结论MUTYH多态性可能会导致结直肠癌的发生。没有筛查到高加索人群中最常见的Exon 7区域的变异,显示出人种间变异的差异性。     

基于DHPLC技术的Wilson病基因诊断

目的建立并应用高效液相色谱(DHPLC)技术检测Wilson病(WD)ATP7B基因第8外显子突变。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增WD基因第8外显子片段,扩增产物直接进行DHPLC检测分析,根据色谱峰型不同确定测序样品,经测序后确定突变类型。结果203例先证者中WD基因外显子8基因突变阳性检出率为55.2%,Arg778Leu纯合突变22例,杂合突变90例,基因突变频率为33.0%。共发现3种错义突变、1种移码插入突变和1种多态性位点(C2310G),且多态位点C2310G与Arg778Leu突变完全连锁。其中76例先证者带有Arg778Leu杂合错义突变,22例为Arg778Leu纯合错义突变,10例为Arg778Gln杂合错义突变,2例Tyr713Silent错义突变(C2139G),2例为杂合2304C插入突变。结论WD基因外显子8是ATP7B基因的第一突变热区。DHPLC技术是一种高效、灵敏、快速简便的基因突变检测方法。可用于WD的临床基因诊断。     

一例马凡综合征家系患者的临床表现及遗传学分析

目的：通过对1例超声心动图表现为主动脉夹层、二尖瓣前叶脱垂并有主动脉夹层家族史的马凡综合征患者进行基因检测,明确其可能的致病变异基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法：对先证者行全外显子测序,利用生物信息学方法分析遗传性主动脉瘤相关基因,依据美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）指南鉴定候选致病突变;收集患者家系成员共计11人样本,利用Sanger测序对患者及家系成员的候选致病位点进行检测。结果：高通量测序结果提示患者携带原纤维蛋白1基因（FBN1）(NM＿000138.5)c.7412delC杂合变异,位于60号外显子,Sanger测序结果表明该变异在家系内与疾病共分离。该位点为移码突变;依据ACMG指南,该变异为致病性变异[致病变异分类非常强（PVS1）+中等证据2(PM2)+辅助证据1(PP1)]。结论：该马凡综合征家系的致病原因为FBN1基因的c.7412delC突变,本研究为该家系的分子诊断、分子分型及后续遗传咨询及治疗选择提供了理论依据,丰富了中国马凡综合征患者FBN1基因的变异谱。     

变性高效液相色谱法检测非小细胞肺癌患者外周血及肿瘤组织表皮生长因子受体突变

目的 建立变性高效液相色谱(DHPLC)法检测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血与肿瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子19和21突变的技术平台.方法 同时收集2004年4月至2007年1月在北京肿瘤医院接受治疗的230例晚期NSCLC患者的血浆和肿瘤组织标本,采用DHPLC法检测EGFR外显子19和21突变并用测序法验证,应用x2检验分析EGFR突变与患者临床病理特征的关系,以调整比值比(OR)及95%可信区间(CJ)表示相对危险度,所有统计检验均为舣侧概率检验.分析在血浆和肿瘤组织标本中基因突变的一致性及DHPLC法与测序法的一致性.结果 230例血浆标本中EGFR突变率为34.3%(79/230),肿瘤组织中为33.5%(77/230).血浆和肿瘤组织突变阳性检出一致性为79.7%(63/79,k值为0.74).与测序法相比,DHPLC法的灵敏度和特异度分别为96.9%和91.9%(k值为0.88).肿瘤组织及外周血中EGFR突变与病理类型(OR=3.38,95%CI 1.81～6.36,P＜0.05)、吸烟史(OR=1.61,95% CI 1.13～2.28,P＜0.05)相关,而与年龄、性别、病理分期无明显相关性.结论 晚期NSCLC患者血浆EGFR突变率与肿瘤组织的突变率具有高度一致性,DHPLC法可作为EGFR突变检测的初筛方法.     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体新突变类型与表型关系的研究

目的　检测中国汉族家族性高胆固醇血症 (FH)家系低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因突变类型 ,研究基因型与表型间的关系 ,探讨FH发病的分子病理机制。方法　先证者及家系成员进行血脂测定、心电图、心脏及大血管彩色多普勒超声检查后采用聚合酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR) 变性高效液相色谱 (DHPLC)法结合扩增产物直接序列分析检测LDLR基因启动子和全部 18个外显子片段 ,结果与GenBank公布的该基因正常序列比对找出突变并检索FH突变数据库(www .ucl.ac .uk/fh)。此外 ,采用PCR 限制性内切酶技术 ,检测载脂蛋白B10 0 (ApoB10 0 )基因Q35 0 0R突变 ,以排除家族性ApoB10 0 缺陷症 (FDB)。结果　DHPLC分析发现该患儿及其父母LDLR基因第 3外显子存在一异常波峰 ,DNA测序证实该患儿第 3内含子 5′剪接位点存在G→A纯合剪接突变 ,其父母相同位点表现为野生型和突变型杂合现象 ;同时未检测出患儿及其父母ApoB10 0Q35 0 0R突变。结论　国内首次发现LDLR基因第 3内含子G→A纯合剪接突变 ;该突变可能是FH发病的分子基础并导致其严重的临床表型 ;PCR DHPLC法可用于FH可疑人群的确诊     

组织非特异性碱性磷酸酶基因突变与低磷酸酶血症：2个新突变位点

目的：对2例低磷酸酶血症（HPP）患者及家系进行分析和基因突变检测,拓展国人HPP致病基因库,探讨HPP的致病机制。方法对HPP家系先证者和其父母进行生化指标[血常规、肝肾功能、碱性磷酸酶（ALP）、甲状旁腺素（PTH）、钙、磷等]和骨密度检测。同时对所有研究对象进行alkaline phospatase,live/bone/kidney（ALPL）基因全部12个外显子和外显子内含子交界区直接测序。结果来自家系1的先证者为36岁成年男性,身高131.0cm,体重35.0kg。X线提示多发性胸腰椎骨折和骨盆畸形,生化检测示血清ALP27U/L。测序发现ALPL基因6号外显子532位杂合突变（c.532T＞C）,致ALPL成熟多肽中酪氨酸被组氨酸替代。该先证者母亲身高140.5cm,体重39.5kg,血清ALP30U/L,基因测序证明也是该杂合突变携带者。来自家系2的先证者5岁,其外祖父母为近亲结婚。该患儿身高100.0cm,体重18kg。血清ALP55U/L[低于同龄儿童正常范围（＜10岁）75～344U/L],牙齿发育不良并脱落,有左股骨中下端骨折史。测序发现该患儿存在ALPL基因2个错义突变,其中9号外显子c.871G＞A突变。4号外显子269位突变（c.269A＞G）是一个新的错义突变,该突变导致成熟ALPL多肽中天冬氨酸被甘氨酸所替代。该患儿母亲亦是4号外显子c.269A＞G错义突变携带者,但其生化指标正常,无骨骼和牙齿异常。结论ALPL基因6号外显子c.532T＞C突变和4号外显子c.269A＞G突变是以往未曾报道过的新错义突变,为上述2例HPP患者致病基因。     

中国散发Brugada综合征患者SCN5A基因突变位点的检测

目的 对5例中国散发Brugada综合征患者进行SCN5A基因突变位点检测.方法 采用直接测序法对5例散发Brugada综合征患者进行SCN5A基因碱基突变位点的检测,测序结果用Chromas软件进行BLAST分析,再将测序峰与网上检索结果重新比对.结果 1例Brugada患者发现了一个同义杂合变异,即SCN5A基因第20外显子上发现一个碱基变异（C3549T）,其所编码的第1 183位苏氨酸没有发生改变（T1183T）.结论 在中国散发Brugada综合征患者的SCN5A基因上发现了1个新的碱基杂合同义突变.     

湖南地区肝豆状核变性基因突变热区的序列检测与分析

目的检测湖南地区汉族人群肝豆状核变性患者（WD）ATP7B基因常见突变种类和形式。方法提取22例WD患者外周血基因组DNA，聚合酶链反应（PCR）扩增ATP7B基因第5、8、12及13号外显子并进行DNA直接测序检测，应用在线BLAST软件分析。结果22例患者中共发现15例患者存在基因突变。其中10例患者存在8号外显子2273G→T杂合突变（即Arg778Leu），且均伴有2250C→G多态（即Leu770Leu，均为杂合子），未发现纯合突变。12号外显子中共发现2855G→A多态（即Arg952Lys）7例（杂合突变4例，纯合突变3例），其中1例合并12号外显子2828G→A杂合突变（即Gly943Asp），另3例合并Arg778Leu杂合突变。13号外显子2975C→T杂合突变（即Pro992Leu）1例。5号外显子未发现突变。结论Arg778Leu是湖南地区汉族WD患者的突变热点，5号外显子为非突变热点。     

高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变的研究

目的：建立低密度脂蛋白－受体（ＬＤＬ－Ｒ）基因点突变监测方法,从基因水平对３０例原发性高胆固醇血症患者进行筛选、明确诊断。 方法：将聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）与银染技术相结合,用１９对引物对ＬＤＬ－Ｒ基因的全部１８个外显子进行检测,３０例患者中,对筛查出的突变用ＰＣＲ产物直接测序或克隆测序的方法明确突变的性质和位置。 结果：确立的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ条件稳定,银染方法灵敏度高、重复性好,且避免了同位素污染。３０例患者中,发现１例定位于外显子１４的杂合子点突变患者,ＰＣＲ产物直接测序证实第６７１位密码子发生错义突变：ＣＣＣ→ＣＧＣ,导致脯氨酸→精氨酸;１例纯合子家族性高胆固醇血症患者外显子７发生点突变,克隆测序证实密码子３０８位发生错义突变：ＴＡＣ→ＴＧＣ,导致半胱氨酸→酪氨酸;２例杂合子患者外显子４的３’部分ＳＳＣＰ出现相同异常带型。查阅文献,测序证实的突变皆是新的突变。 结论：建立的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可用于高胆固醇血症患者ＬＤＬＲ基因点突变的筛检。研究结果从基因水平证实中国家族性高胆固醇血症患者ＬＤＬ－Ｒ基因突变具有多样性的特点。     

一个中国大家系Brugada综合征相关基因SCN5A的突变位点检测

目的：研究一个中国大家系Brugada综合征相关基因SCN5A的突变情况。方法：收集一个Brugada家系（43例）的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对此家系进行SCN5A基因突变检测,同时对136名家系外健康对照者的该位点进行单链构象多态性（SSCP）分析。结果：在Brugada家系中发现了一个杂合变异,即SCN5A基因第12外显子上发现一个错义变异（A1685G）,导致代表组氨酸的558位密码子突变为精氨酸（H558R）。结论：在中国人Brugada综合征患者的SCN5A基因上发现了一个已经报道的错义多态位点（H558R）。     

甲状腺癌复发与BRAF基因突变的关系探讨

目的 探讨甲状腺癌患者复发与BRAF基因突变的关系.方法 收集20例复发性甲状腺乳头状癌患者（复发组）的原发灶和复发灶标本及20例无复发生存的甲状腺癌患者（无复发组）的肿瘤组织标本,对BRAF基因进行测序,观察T1799A位点的V600E突变情况.结果 复发组原发与复发病灶BRAF基因T1799A位点V600E突变率为分别为55％ （11/20）、50％（10/20）.1例原发灶BRAF基因为突变型,而复发灶为野生型.无复发组BRAF基因1799A位点V600E突变率为25％（5/20）.复发组BRAF突变率高于无复发组（P均＜0.05）.结论 BRAF基因突变患者术后复发风险高,复发病灶基因表型与原发灶并不完全一致.     

心脏肌球蛋白结合蛋白C基因1811518116insGCAGG突变导致肥厚型心肌病特点分析

目的观察肥厚型心肌病（HCM）患者中心脏肌球蛋白结合蛋白C基因（MYBPC3）插入突变的特点。方法在100例HCM患者中对MYBPC3的所有外显子及其侧翼内含子序列进行基因扫描,聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,双脱氧末段终止法测序。对突变患者进行家系调查,分析其表型特点。结果在一先证者及其一个家系成员中发现一个位于外显子29的五核苷酸插入突变（18115-18116ins-GCAGG）,序列分析发现1032位缬氨酸后发生了移码突变（p.Vall032fs）,造成先证者60岁发病,超声心动图上表现为室间隔重度不对称性心肌肥厚（35mm）。结论插入突变是MYBPC3基因突变的特点,18115-18116insGCAGG导致的HCM表型发病晚,心肌肥厚程度重。     

中国一家系Brugada综合征相关基因SCN5A突变位点的检测

目的研究一个中国家系Brugada综合征相关基因SCNSA的突变情况。方法收集一个Brugada家系的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对该家系进行SCN5A基因突变检测,同时对136例家系外健康对照者的该位点进行单链构象多态性分析。结果在Brugada家系中发现了两个杂合变异,即SCN5A基因第二外显子上发现一个同义变异（A129G）,没有导致氨基酸的改变（A29A）;第26外显子发现一个错义变异（T4492A）,导致代表酪氨酸的1494位密码子突变为天门冬酰胺（Y1494N）。结论在中国人Brugada综合征患者的SCNSA基因上发现了一个已经报道的同义多态位点（A29A）及一个新的错义突变位点（Y1494N）。     

脑梗死患者血浆型血小板活化因子乙酰水解酶基因9号外显子突变的研究

目的研究血浆型血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因9号外显子突变与动脉硬化性脑梗死(ACI)的关系。方法应用多聚酶链反应(PCR)及变性高效液相色谱(DHPLC),分析150例ACI患者[ACI组(其中分进展组50例,无进展组100例)]和100例健康体检者(对照组)血浆型PAF-AH 9号外显子基因型及突变等位基因频率。结果ACI组血浆型PAF-AH 9号外显子突变(VaL279Phe)基因型及突变等位基因的频率高于对照组,差异有显著性(P<0.05);伴不同危险因素ACI患者基因突变的差异无显著性(P>0.05)。结论ACI患者血浆型PAF-AH基因9号外显子突变基因型及突变等位基因显著增高。     

甲状腺髓样癌患者RET原癌基因突变的研究

目的研究甲状腺髓样癌(MTC)的RET原癌基因突变情况。方法从12例病理诊断的MTC患者和2例临床上怀疑MTC患者提取外周血基因组DNA,对RET原癌基因第10、11、16外显子进行PCR产物直接测序。结果发现8例患者存在基因突变。1例是第10外显子618密码子TGC/CGC突变;2例是第11外显子634密码子TGC/TAC突变;3例是634密码子TGC/CGC突变;2例是第16外显子918密码子ATG/ACG突变。结论直接基因测序分析能在基因水平诊断MTC,分子遗传学分析使术前诊断该疾病成为可能。     

中国人A型胰岛素抵抗家系与胰岛素受体基因突变研究

目的探讨胰岛素受体基因突变在严重胰岛素抵抗综合征中的发病机制。方法采用PCR对一临床拟诊A型胰岛素抵抗综合征患者胰岛素受体的22个外显子进行扩增并直接测序,测得突变所在外显子后,将其一级亲属的相应外显子进行扩增并直接测序。结果先证者及其父亲均为胰岛素受体第20号外显子R1174W杂合错义突变,另发现先证者胰岛素受体3处外显子纯合同义突变及6处内含子变异。胰岛素受体第20号外显子R1174W杂合子突变引起胰岛素受体β亚基酪氨酸激酶活性下降和自身磷酸化缺陷。结论胰岛素受体第20号外显子R1174W杂合子突变是导致该家系先证者及其父亲严重胰岛素抵抗的主要原因,不排除环境因素及其它基因突变的合并存在造成临床表型差异的可能。     

Gilbert综合征患者血UGT1A1基因检测及临床意义

目的 观察Gilbert综合征（GS）患者血UGT1A1基因遗传变异情况,并探讨其意义.方法 采用Sanger 双脱氧链终止法对4例GS患者（包括1家系）进行外周血UGT1A1基因检测,检测内容包括UGT1A1基因的启动子TATA盒、c-3279位点及全部5个外显子核酸序列.结果 1例UGT1A1第5号外显子存在Tyr486Asp纯合突变;1例UGT1A1启动子TATA盒TA插入杂合变异,且c-3279T＞G杂合突变;1例UGT1 A1基因无遗传变异;1例家系中先证者为UGT1A1启动子TATA盒TA插入纯合变异,患者父亲、母亲为A（TA）6TAA/A （TA） 7TAA杂合基因型.结论 GS属染色体隐性遗传疾病,其UGT1A1基因遗传变异包括启动子TATA盒TA插入变异、c-3279T＞G以及外显子碱基突变,在GS诊断中有重要意义.     

Floating-harbor综合征的临床及遗传特点(附2例分析)

目的 总结SRCAP基因突变引起的常染色体显性遗传病Floating-harbor综合征（FHS）的临床及遗传特点。方法 回顾性分析2例FHS患者的临床资料及遗传资料。结果 2例患者均身材矮小,面容异常（三角脸、深眼窝、长睫毛、鼻头宽大呈球形、嘴型宽大、下唇略外翻、鼻小柱低垂、短人中、低耳位）,骨龄落后,语言发育落后并伴有骨骼畸形。全外显子组基因测序发现SRCAP基因2个新生无义变异,其中患者1为新发现的无义变异,文献数据库中未有该位点的相关性报道。患者1第34号外显子c. 7255C>T(p. Q2419X)杂合无义变异,患者2第34号外显子c. 7466C>G(p. S2489X)杂合无义变异,Sanger测序验证2例患者的父母均未携带这2个位点的变异。2个无义变异经MutationTaster和PROVEAN预测结果均提示为有害变异。利用Clustal Omega网站分析显示SRCAP基因编码蛋白第2419位Gln和第2489位Ser在哺乳动物中高度保守。Pubmed CD-search系统分析显示SRCAP蛋白在2419位或2489位终止编码导致蛋白质截断突变,虽未...