腹足纲Helix pomatia βC-血清蛋白的功能单位e中碳水化合物的定位和糖基化位置的鉴定

对腹足纲软体动物罗曼蜗牛Helix pomatia的氧运输蛋白(βc-血清蛋白)的功能单位e中的碳水化合物进行了研究。以该βc-血清蛋白为载体，通过限制性胰蛋白酶水解，产生片段a-c，ef，以及功能单位d，g，和h。以片段ef降解后的产物为研究对象，通过亲合色谱的分离纯化，得到功能单位e的一个馏分e2。该馏分经还原、吡啶乙基化和胰蛋白酶水解后，通过柱色谱的分离纯化，得到一个含有糖肽的成分。对该糖肽中糖组分和肽序列的分析，最终确定了功能单位e的两个糖基化位置：Asn-lll和Asn-387。通过与功能单位d和g的糖基化位置的比较得出结论：Asn-387为一恒定的糖基化位置。     

麻醉方式和S100β蛋白与老年患者腹部手术后认知功能障碍的关系

目的：分析老年患者腹部手术术后认知功能障碍（POCD）与麻醉方式和血清S100β蛋白的关系。方法：择期腹部手术的老年患者（≥60岁）40例，随机分为静吸复合麻醉（G组，n=22）及椎管内麻醉（E组，n=18）两组，于术前1d，术后1d用《简易智能量表》（MMSE）测量患者认知功能；并于麻醉诱导前、术后4h、24h抽颈内静脉血测量血清S100β蛋白水平。结果：G组与E组术后1d的POCD发生率无差异，血清S100β蛋白术后4h，24h均高于术前（P〈0．05），发生POCD患者的血清S100β蛋白要高于未发生POCD患者的（P〈0．05）。结论：麻醉方式对POCD的发生率没有影响，手术前后血清中S100β蛋白水平变化显著。说明麻醉手术可能对神经系统有影响。术后出现认知功能障碍患者的血清S100β蛋白水平的变化要大于未出现认知功能障碍的患者。     

AmpC β-内酰胺酶的分子生物学研究进展

AmpCβ－内酰胺酶是属Bush功能分类I群，Ambler分子分类C类的头孢菌素酶，主要由染色体介导产生，不被克拉维酸抑制，能水解和三代头孢菌素，头霉素待广谱β－内酰胺类抗生素，AmpCβ-内酰胺酶的表面受amp复合操纵子调控，与肽聚糖合成密切相关，amp复合操纵子由ampC,ampR,ampD和ampG构成，分别编码AmpC-β内酰胺酶，转录调了因子AmPR,N-乙酰葡萄糖爱－L－丙氨酸酰胺酶AmpD和膜结合转运蛋白AmpG，其中AmpR与UDP－N－乙酰胞壁酰五肽结合可抑制ampC转录，与N－乙酰胞壁酰酐三肽结合可激活ampC转录，调控基因突变与β－内酰胺类抗生素的诱导作用均可使肽聚糖合成与水解反应失衡，导致N－乙酰胞壁酰肝肽积聚，从而使AmpCβ-内酰胺酶的产量提高，近年来，质粒编码的AmpCβ-内酰胺酶逐渐增多，源于肠杆菌科细菌，与染色体编码的AmpC-β内酰胺酶在分子结构上具有不同程度的同源性，AmpCβ-内酰胺酶的诱导产生及质粒编码的AmpC-β内酰胺酶的出现是细菌针对抗生素造成的选择压力而进化的结果，临床实践中必须慎用超广谱β－内酰胺类抗生素。     

人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建

目的为满足寻找可能影响淀粉样β蛋白(Aβ)在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求,建立共表达人淀粉样蛋白前体(APP)695基因和烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)α4β2亚单位基因的细胞模型。方法用脂质体转染方法把APP695基因转染进已稳定转染nAChRα4β2亚单位基因的SH-EP1细胞。用500mg.L-1G418加压筛选,并挑选细胞单克隆。用RT-PCR和Western蛋白印迹法对转染后的细胞单克隆进行鉴定,挑取成功转染并高表达APP695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑细胞克隆的α4β2受体功能。结果挑出成功稳定转染人APP695基因及人nAChRα4β2亚单位基因的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克隆株上nAChRα4β2存在活性。结论成功制备了共表达人APP695基因及人nAChRα4β2亚单位基因的细胞模型,为探讨神经元nAChRα4β2亚型对Aβ加工影响的药物实验提供了条件。     

LiCl对七氟醚引起的神经细胞凋亡的缓解作用

目的 研究氯化锂(LiCl)对中枢神经系统发育期七氟醚神经毒性的影响,以及β-arrestin2/AKT信号通路在其中所起的作用。方法 对离体培养7 d的海马神经细胞及出生后7 d的Sprague-Dawley幼鼠进行七氟醚处理(3%,6 h),制备七氟醚神经毒性模型。离体实验中给予LiCl或LiCl+β-arrestin2 siRNA转染处理后,应用流式细胞仪、MTT及Hoechst染色检测细胞凋亡;应用免疫印迹检测total AKT、Phospho-AKT、total GSK3β、Phospho-GSK3β、Bax及Bcl-2的蛋白表达水平;应用条件恐惧实验及Morris水迷宫检测实验动物的情绪及空间学习记忆功能变化。结果 七氟醚处理(3%,6 h)使海马神经细胞凋亡增加,应用LiCl则可明显缓解七氟醚神经毒性。七氟醚处理可降低Phospho-AKT及Bcl-2的蛋白表达,增加Phospho-GSK3β及Bax的蛋白表达;LiCl可增加Phospho-AKT及Bcl-2表达,降低Phospho-GSK3β及Bax表达水平。LiCl的神经保护作用可被转染β-arrestin2 siRNA、SH-5或LY294002所逆转。LiCl明显缓解了中枢神经系统发育期七氟醚处理引起的情绪及空间学习记忆功能异常。结论 LiCl可缓解中枢神经系统七氟醚神经毒性,其机制可能与β-arrestin2依赖的AKT/GSK3β信号通路有关。     

七氟醚与丙泊酚复合麻醉对心内直视术患者S-100β蛋白、NSE和认知功能的影响

目的 探讨七氟醚与丙泊酚复合麻醉对心内直视术患者S-100β蛋白、NSE和认知功能的影响.方法 分析我院2015年2月~2016年3月收治的心内直视术患者60例临床资料,依据麻醉方式不同进行分组,麻醉S组30例和麻醉P组30例.结果 两组患者T0、T5时间段S-100β蛋白、NSE均无明显差异,P>0.05,麻醉S组T1、T2、T3、T4时间段S-100β蛋白、NSE均低于麻醉P组,P<0.05,差异有统计学意义.两组患者术前1d认知功能评分均无明显差异,P>0.05,麻醉S组术后2d MMSE评分高于麻醉P组,麻醉S组认知功能障碍发生率低于麻醉P组,P<0.05,差异有统计学意义.结论 七氟醚对心内直视术患者S-100β蛋白、NSE和认知功能的影响较小,值得临床推广应用.     

益脑胶囊治疗阿尔茨海默病大鼠模型病理改变的研究

目的观察益脑胶囊治疗AICl3鞘内注射对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型大鼠学习记忆功能及病理改变,探讨其对AD大鼠的治疗机制。方法SD大鼠鞘内注射AlCl3,5d后拔管,末次注药28d后采用一次性避暗回避实验及病理学观察判断造模成功,益脑胶囊灌胃6个月后处死3组大鼠观察海马CA1区、顶叶皮层神经元形态、分布及利用免疫组化及原位杂交技术观察β-AP、β-APP、tau蛋白的阳性表达改变。结果AD模型组在避暗回避实验中错误次数增多,潜伏期缩短,免疫组化染色及原位杂交后β—AP、β—APP、tau蛋白阳性表达明显增多,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,治疗组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论益脑胶囊中人参皂甙及五味子酚抗氧化损伤作用可能是改善AD大鼠学习、记忆能力及病理改变的机制之一。     

左旋丁苯酞对低灌注大鼠脑皮质Tau蛋白磷酸化的影响

目的通过观察左旋丁苯酞(1-NBP)对脑低灌注大鼠学习记忆的改善作用,并研究其皮质β-淀粉样肽(Aβ1-42)水平以及Tau蛋白磷酸化变化,以探讨1-NBP改善认识功能的作用机制。方法大鼠双侧颈总动脉结扎90d,制备脑低灌注模型。实验分假手术组,溶剂对照组,1-NBP 30、120mg/kg组。1-NBP治疗组连续给予45d后,用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习和记忆能力,后取大鼠脑皮质组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Aβ1-42含量,用蛋白印迹法检测Tau蛋白的磷酸化水平。结果在水迷宫空间探索实验中1-NBP明显增加脑低灌注大鼠在目标象限活动时间的百分比。1-NBP明显减少了大鼠皮质Aβ1-42含量,降低低灌注大鼠皮质Tau蛋白的磷酸化水平。结论 1-NBP改善了脑低灌注大鼠的学习记忆缺陷,可能是通过减少皮质Aβ1-42的水平,从而减轻Tau蛋白的磷酸化,最终保护了神经元免受损伤。     

异噻唑（啉）酮取代的间苯二甲酸衍生物的设计、合成及其抑制β-分泌酶活性

目的发现新结构的β-分泌酶抑制剂。方法基于β-分泌酶抑制剂的构效关系,设计合成了含羟乙胺结构片段的间位1,1-二氧代-2,3-（2H）-异噻唑酮和1,1-二氧代-异噻唑啉酮取代的间苯二甲酸衍生物;利用时间分辨荧光法（TRF）和中国仓鼠卵巢细胞（CHO,APP/BACE1基因）模型分别评价这些化合物体外抑制β-分泌酶和Aβ40的活性。结果合成了16个新目标化合物,利用MS和1H-NMR对化合物的结构进行了确证,利用HPLC对化合物的纯度进行了测定,利用旋光仪测定了化合物的比旋光度。活性数据显示,化合物2d、2e、2f、2g、2h和3d、3h抑制β-分泌酶活性的IC50值在10 nmol.L-1以下,化合物2c和3c、3g抑制β-分泌酶活性的IC50值在25 nmol.L-1以下;化合物2c、2d和2h在浓度为0.01μmol.L-1时,对双转APP/BACE1基因CHO细胞Aβ40产生的抑制率分别为58.3%、43.7%和42.1%。结论发现了新的β-分泌酶抑制剂,分析了其初步的构效关系,为进一步的结构优化以及发现活性更好的化合物提供了指导。     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔（７０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，８ｗｋ）对大鼠心脏β肾上腺素受体（β－ＡＲ）及其亚型，外周血淋巴细胞β２－ＡＲ和血浆儿茶酚胺水平的影响．结果表明长期饮用普萘洛尔后：（１）心脏β－ＡＲ密度从对照组的４１±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调到６１±９ｐｍｏｌｇ－１蛋白，ＣＧＰ２０７１２Ａ竞争抑制曲线２位点分析结果显示为β１和β２－ＡＲ同等程度上调；（２）心脏β１－ＡＲｍＲ－ＮＡ水平不变而β２－ＡＲｍＲＮＡ水平显著增加；（３）β－ＡＲ及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β２－ＡＲ的功能改变更为显著；（４）血淋巴细胞β２－ＡＲ数目从对照组的１９±７ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调至３２±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白；（５）血浆去甲肾上腺素水平（０．２１±０．１２μｇＬ－１）明显低于对照组（０．３８±０．１５μｇＬ－１）．     

β-肾上腺素受体遗传多态性与疾病易感性及药物反应差异的关系

β-肾上腺素受体是G蛋白偶联受体的一个亚家族，它们以儿茶酚胺为内源性配体，介导机体的重要生理功能；同时，β-肾上腺素受体也是许多药物的作用靶点。本文重点阐述β-肾上腺素受体常见的遗传多态性与疾病易感性及药物反应差异的关系。     

脑灵汤组方联合针灸治疗对阿尔茨海默病患者肿瘤坏死因子α、淀粉样β蛋白和 MMSE 评分的影响

目的：研究脑灵汤组方联合针灸治疗对阿尔茨海默病（ AD ）患者肿瘤坏死因子α、淀粉样β蛋白和MMSE评分的影响。方法65例AD患者根据就诊日期的单双号，随机分为治疗组（ n ＝33）和对照组（ n ＝32）。对照组采用多奈哌齐治疗，2垐．5～5．0 mg/次，1次/d，睡前服用，临床效果肯定后可以将剂量增加到10 mg/次，1次/d，治疗组在对照组治疗基础上联合应用脑灵汤组方和针灸治疗，脑灵汤组方口服，1剂/d，分2次服用，连续治疗3个月。针灸：局部取穴和远端配穴相结合，隔日治疗1次，3个月为一个疗程。结果2组治疗前肿瘤坏死因子α、淀粉样β蛋白和MMSE评分比较，差异无统计学意义（ P ＞0．05），治疗后2组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）。治疗组治疗后肿瘤坏死因子α和MMSE评分与治疗前比较，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。对照组治疗后淀粉样β蛋白水平与治疗前比较，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论脑灵汤级方联合针灸治疗AD可降低炎性因子表达、减少淀粉β沉淀聚积，改善AD患才认知。     

氧氟沙星通过抑制β1整合素诱导关节软骨的细胞凋亡

目的本研究将以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象,以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型,从β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路方面探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。方法藻酸微囊包被3周龄新西兰兔关节软骨细胞,培养4d后给予10μg/ml的氧氟沙星,用免疫共沉淀试验、荧光双染凋亡定量试验以及Westernblot研究氧氟沙星是否会对软骨细胞β1整合素功能和ERK/MAPK信号通路有影响。结果与对照组相比,各个时间点的β1整合素mRNA水平基本没有变化;但是,在同样条件下,从作用48h开始,氧氟沙星就使β1整合素的蛋白表达明显下降;10μg/ml的氧氟沙星作用48h后,β1整合素的胞浆域不能与胞内激活的信号蛋白进行相互作用;在补充足够镁离子的条件下,10μg/ml氧氟沙星不能诱导微囊包被软骨细胞凋亡以及使β1整合素表达下降;从作用48h开始,10μg/ml氧氟沙星就使ERK/MAPK通路的关键信号蛋白Grb2和phospho-ERK1/2的表达显著降低;在同样的时间点,尽管对Caspase-3进行了特异性抑制,但是氧氟沙星还是显著地降低了phospho-ERK1/2和β1整合素的表达水平;ERK/MAPK信号通路的特异抑制剂U0126以浓度依赖的方式引起微囊包被软骨细胞凋亡。但是,在同样条件下,β1整合素的表达水平则没有改变。结论氧氟沙星可能通过影响关节软骨细胞的β1整合素功能而抑制了ERK/MAPK信号通路,从而最终导致凋亡。     

乌司他丁应用于脊柱内固定手术对围术期免疫功能和肾功能的影响

目的：研究乌司他丁应用于脊柱内固定手术对患者围术期免疫功能和术后病人肾功能的影响。方法：60例行脊柱内固定手术的患者随机分为三组，每组20例，A组乌司他丁10万单位。B组乌司他丁20万单位，C组对照组，采集肘静脉9血测定围术期NK细胞活性，白细胞介素-2，白细胞介素-6，以及可溶性白细胞介素-2受体；采集血，尿标本测定血尿素氮清除率，血肌酐清除率，尿α1球蛋白，尿β2微球蛋白的含量，结果：术后1d。术后3d。A组，B组NK细胞活性，白细胞介素-2浓度明显高于对照组，术后1d，术后3d，B组的白细胞介素-6明显低于A组和C组，手术结束时，术后1d，术后3d。B组的可溶性白细胞保素-3受体明显高于乌司他丁A组和C组，术后1d，术后3d，血尿素氮清除率，血肌酐清除率B组优于A组和C组；乌司他丁A组，B组术后尿β2微球蛋白明显低于C组，然而尿α1球蛋白与C组比较无明显改变，其它各时间段各指标比较无显著性差异。结论：乌司他丁应用于应用于脊柱内固定手术，有益于病员术后免疫功能和肾功能的改善。     

丙泊酚与异氟醚麻醉对老年患者术后认知功能的影响

目的比较丙泊酚与异氟醚对不同年龄段患者血清神经组织蛋白质S100β(S100β蛋白)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度的变化及其对患者术后认知功能的影响。方法选取笔者所在医院在全身麻醉下行脊柱手术、ASAI-II级的患者180例,按年龄从小到大分为3组后,每一组又随机分为两个亚组:1组(丙泊酚组)、2组(异氟醚组)。分别于麻醉前、术后6 h、术后1、2、5 d测定患者简易智力状态检查(MMSE)评分、血清S100β蛋白和NSE浓度。结果 20~40岁和40~60岁两个年龄段的患者中无术后认知功能障碍(POCD)的病例出现,60岁以上的患者中出现了术后认知功能障碍(POCD)10例。与麻醉前比较,1组的老年患者术后6 h、1 d MMSE评分显著降低(P<0.05),血清S100β蛋白、NSE浓度显著升高(P<0.05);2组老年患者术后6 h、1 d、2 d较术前及1组对应时间点MMSE评分显著降低(P<0.05),血清S100β蛋白、NSE浓度显著升高(P<0.05)。结论 POCD的发生可能与NSE及S100β蛋白浓度升高有关。丙泊酚与异氟醚均可引起老年患者术后早期认知功能障碍,但丙泊酚的影响较异氟醚的程度更轻且持续时间更短。     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔(70 mg·kg^-1·d^-1，8 wk)对大鼠心脏β肾上腺素受体(β-AR)及其亚型，外周血淋巴细胞β₂-AR和血浆儿茶酚胺水平的影响. 结果表明长期饮用普萘洛尔后：(1)心脏β- AR密度从对照组的41±8 pmol·g^-1蛋白上调到61±9 pmol·g^-1蛋白，CGP20712A竞争抑制曲线2位点分析结果显示为β₁和β₂-AR同等程度上调；(2)心脏β₁-AR mRNA水平不变而β₂-AR mRNA水平显著增加；(3)β-AR及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β₂-AR的功能改变更为显著；(4)血淋巴细胞β₂-AR数目从对照组的19±7 pmol·g^-1蛋白上调至32±8 pmol·g^-1蛋白；(5)血浆去甲肾上腺素水平(0.21±0.12 μg·L^-1)明显低于对照组(0.38±0.15 μg·L^-1).     

金钗石斛生物总碱对脂多糖诱导大鼠学习记忆功能减退的改善作用

目的探讨金钗石斛生物总碱(DNLA)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠学习记忆功能减退的改善作用及可能的作用机制。方法成年雄性SD大鼠经Morris水迷宫训练合格后,随机分为模型组和假手术组。模型组大鼠左侧脑室微量注射LPS(10.gL-1)5μL后分为LPS,LPS+布洛芬(Ibu,40 m.gkg-1),LPS+DNLA(20,40和80 mg.kg-1)组,假手术组左侧脑室注射5μL生理盐水。大鼠清醒后ig给予Ibu或DNLA,每天1次,连续14 d。用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察海马神经元形态改变;免疫组织化学法检测海马淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)含量;实时荧光定量PCR检测海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3/8 mRNA表达水平。结果侧脑室注射LPS后,大鼠水迷宫逃避潜伏期及搜索距离明显延长,海马出现神经元凋亡和坏死改变。Ibu和DNLA均能明显缩短模型大鼠水迷宫逃避潜伏期和搜索距离,减轻神经元凋亡和坏死,降低海马Aβ1-42含量和caspase 3/8 mRNA表达水平。结论DNLA可改善LPS诱导的大鼠学习记忆功能减退,其机制可能与降低海马caspase 3/8 mRNA表达、减少Aβ1-42产生有关。     

NLRP3炎症小体在眼科疾病的研究进展

NOD样受体家族中的NLRP3蛋白小体是先天免疫系统的一个重要组成部分,其可被多种刺激激活,包括离子通量、线粒体功能障碍、活性氧的产生和溶酶体损伤,通过介导含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)激活及促炎细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的分泌,从而导致各种类型的细胞焦亡。在眼科疾病中,很多发病机制及其激活方式目前尚未清楚,但通过对NLRP3炎症小体的研究探索,使年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、干眼症、青光眼等疾病的发病过程和机制更加清晰。现就NLRP3炎症小体的生物学特征及其激活和调控机制,及其对相关眼部疾病的关系和最新研究现状做一综述。     

己酮可可碱和咯利普兰对淀粉样β蛋白诱导脑损伤后学习记忆功能的影响

目的探讨磷酸二酯酶抑制剂对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的脑损伤大鼠学习记忆功能的改善作用及可能机制。方法SD大鼠分为假手术对照组、模型组、己酮可可碱(PTX)16.5mg.kg-1组和咯利普兰1mg.kg-1组。模型组及给药组大鼠两侧海马内分别注射Aβ25-355μL,术后24h给药组ip给药,每日1次,连续14d。给药7d后进行避暗实验,14d后进行Morris水迷宫实验观察行为学变化。之后处死大鼠,用放射免疫法测定海马组织cAMP含量。结果与模型组比较,PTX组和咯利普兰组大鼠在避暗实验中潜伏期明显延长,在水迷宫实验中寻台时间明显缩短,海马组织cAMP水平显著升高。结论升高脑内cAMP水平可能是磷酸二酯酶抑制剂PTX和咯利普兰增强Aβ脑损伤大鼠学习记忆功能的机制之一。     

一种淀粉样蛋白电镜标本制备的新方法

阿尔茨海默病（AD）的发病机制尚不确定且无特效治疗药物，普遍认为淀粉样蛋白（Aβ）产生和聚集是AD的重要病理学特征。在以Aβ为靶点进行体外实验阶段的药物研究过程中．通常采用透射电镜观察Aβ的形态改变来推断药物能否抑制AB聚集．这也是体外间接了解药物治疗AD机制的一个重要方面。一般制备淀粉样蛋白的透射电镜标本时。常会发生含碳铜网不能均匀和完全地吸附样本溶液的情况。使标本上出现斑块盲视野区和无样本区。染色达不到预期的效果，电镜下观察淀粉样蛋白超微结构质量较低。为此。本研究提出了一种扣滴延时染色法，即：采用样本溶液扣滴．延长样本与含碳铜网接触时间和延长醋酸双氧铀染色时间的方法，并通过实验证明了这种新方法的有效性。