抗淋巴细胞球蛋白联合环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血的临床研究

目的探讨进一步提高重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）疗效的方法。方法采用前瞻性同期对照研究方法,比较抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）单用（ＮＩＳＴ方案）或联合环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）（ＩＳＴ方案）治疗ＳＡＡ的疗效。结果ＩＳＴ方案组不仅疗效（８３７％）显著高于ＮＩＳＴ方案组（５７６％）,且可降低早期死亡率、缩短脱离红细胞输注时间,治疗有效者骨髓ＢＦＵＥ和ＣＦＵＧＭ数量恢复更为良好。结论ＡＬＧ联合ＣｓＡ治疗ＳＡＡ疗效明显优于单用ＡＬＧ,且治疗有效者骨髓造血功能恢复更为完全。     

脐血CD_(34)~ CD_(19)~－细胞与体外培养集落的相关性分析

用两种单克隆抗体（单抗）标记脐血造血祖细胞表面抗原（ＨＰＣＡ，ＣＤ＿（３４））用流式细胞仪分析，并比较两种单抗标记的细胞与体外培养的粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）和混合集落形成单位的相关性，结果表明脐血有核细胞中，抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性的细胞占１．０５１０．７２％，Ｔｕｋ３（纯抗体）阳性细胞占２．０６±１．２５％，差别显著（Ｐ＜０．０５），每μｌ脐血两种单抗标记的细胞分别为９６．５６±５６．６４和２３１．４０±１６３．９３（Ｐ＜０．０５），变异系数依次为５８．４７％和６８．４３％。尽管抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ阳性细胞与阳性细胞数量呈显著正相关，但前者与ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｍｉｘ以及ＣＦＵｓ（ＣＦＵ－ＧＭ＋ＢＦＵ－Ｅ＋ＣＦＵ－Ｍｉｘ）均呈正相关，而后者仅与ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵｓ呈正相关。研究结果提示在检测造血祖细胞时，用抗ＨＰＣＡ－２－ＦＩＴＣ代替可降低假阳性，获得较好的细胞与ＣＦＵ间的线性关系。     

脐血造血干／祖细胞集落产率的研究

对３１例脐血及３１例正常成人骨髓细胞进行体外培养，分别检测其ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ），粒、红、巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭ），粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）及初始造血祖细胞——粘附于基质的原始细胞集落形成单位（ｓＣＦＵ－Ｂｌ），对比分析其造血细胞的层次结构。发现脐血晚期祖细胞含量接近骨髓，早期祖细胞含量则高于骨髓。经推算２１天时ｓＣＦＵ－Ｂｌ含量可达骨髓的１０倍左右。提示脐血长期重建造血的能力优于骨髓，一份脐血重建成人造血理论上是可能的。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者T淋巴细胞对造血祖细胞的影响

目的：研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的影响。方法：将ＰＮＨ患者外周血制备的植物血凝素刺激的Ｔ淋巴细胞条件培养液（ＰＨＡＴＣＭ）加入造血祖细胞的培养基中，用于ＰＮＨ患者和正常人骨髓的粒巨噬细胞系集落形成单位（ＣＦＵＧＭ）和红系爆式集落形成单位（ＢＦＵＥ）的培养。结果：在含有初发ＰＮＨ患者的ＰＨＡＴＣＭ培养条件下，ＰＮＨ患者和正常人骨髓ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ数明显低于含有正常人ＰＨＡＴＣＭ培养条件下的集落数；在含有好转和治愈的ＰＮＨ患者的ＰＨＡＴＣＭ培养条件下，正常人骨髓ＣＦＵＧＭ和ＢＦＵＥ数增加和恢复到正常范围。结论：初发ＰＮＨ患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用减弱，治愈的ＰＮＨ患者的Ｔ淋巴细胞对造血祖细胞的支持作用恢复正常     

脐血造血祖细胞培养及细胞周期的研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）和红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和成人骨髓及外周血做比较。结果显示，脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于骨髓而超过外周血水平；脐血ＢＦＵ－Ｅ对红细胞生成素和爆，式促进活素表现出更高的敏感性；脐血Ｓ期、Ｇ＿２＋Ｍ期及Ｓ＋Ｇ＿２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义。     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓和外周血 HLA-DR~ T 细胞的变化及其淋巴细胞造血抑制活性的研究

目的：进一步阐明免疫紊乱在严重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）发病中的作用。方法：对１３例初诊ＳＡＡ、７例抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）治疗后恢复期ＳＡＡ（ｒＳＡＡ）患者骨髓和外周血及对照组（包括９名骨髓对照和１１名外周血对照）的ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞进行检测，并对部分患者和对照组刺激的外周血去单核细胞的单个核细胞培养上清液（ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ）的造血活性进行检测。结果：初诊ＳＡＡ患者骨髓及外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者骨髓和外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞较初诊ＳＡＡ下降，但仍高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＳＡＡ患者骨髓内ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于外周血（Ｐ＜０．００１）；与对照组比较，初诊的ＳＡＡ患者外周血ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ具有显著的抑制作用（Ｐ＜０．００１），而ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用明显减弱。结论：ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞在ＳＡＡ的发病中可能发挥重要的作用。     

人胎盘无细胞是悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用

为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较,用人胎盘无细胞悬液及ＩＬ－３,ＧＭ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＦＰＯ作为刺激因子,并应用甲基纤维素半固体培养体 对骨髓ＧＭ－ＣＦＵ,ＧＭ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ进行了培养和比较,研究结果表明,人胎盘无细胞悬液对骨髓ＣＦＵ－ＧＭ,ＣＦＵ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ体外扩增最适蛋白浓度是２００－３００μｇ／Ｌ,人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓血干／祖细胞的体外扩增效果优于单独ＩＬ－３,单独ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＥＰＯ组。结论提示,人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子,用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干／祖细胞细胸具有有效而价廉的特点。     

IL—6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复？…

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１ＩＬ－６对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法：将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠，建立骨髓移植（ＢＭＴ）模型。小鼠的造血功能用脾结节（ＣＦＵ－Ｓ）、粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）测定及外周血各项血液学指标来确定。结果：ＷＸＭＳＣ１ＩＬ－６转基因骨髓基质细胞可明显增强ＢＭ     

基因重组干扰素γ体外对骨髓增生异常综合征患者造血祖细胞的…

对基因重组干扰素γ（ＩＦＮ－γ）体外对３２例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者造血祖细胞的作用进行了研究，结果如下：①ＭＤＳ患者ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ明显低于对照组，ＣＦＵ－Ｅ减低者占３０／３２例，ＣＦＵ－ＧＭ减低者占３１／３２例。②ＩＦＮ－γ对ＭＤＳ患者ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的促增殖作用与患者自身集落数有关，在自身集落数正常和稍减低者这种作用最明显，在明显减低者这种作用小甚至为０。④上海和日本     

脐血造血祖细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究

采用甲基纤维素半固体体外培养法对脐带血造血祖细胞进行研究。人脐带血粒单祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ），红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）含量显著高于成人外周血，也高于骨髓（ＣＦＵ－ＧＭ，Ｐ＜０．０５；ＢＦＵ－Ｅ，Ｐ＜０．０１）。脐血造血祖细胞的出现晚于骨髓，但存活时间较长。在不外加促红细胞生成素时，脐血中有少量ＢＦＵ－Ｅ生成。将两份不同胎儿的脐血细胞混合后培养并与单个胎儿脐血细胞培养相比较，两者在祖细胞生成数量和生长特征方面无明显差别。采用单克隆抗体技术检测脐血中ＯＫＴ＿３，ＯＫＴ＿４，ＯＫＴ＿８阳性率，与成人相比，ＯＫＴ＿３￣＋降低，而ＯＫＴ＿４￣＋，ＯＫＴ＿８￣＋和ＯＫＴ＿４￣＋／ＯＫＴ＿８￣＋与成人相似。     

抗淋巴细胞球蛋白联合环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血的？…

目的 探讨进一步提高重型再生障碍性贫血疗效的方法,方法 采用前瞻性同期对照研究方法,比较淋巴细胞球蛋白单用或联合环孢霉素治疗ＳＡＡ的疗效。结果 ＩＩＳＴ方案组不仅疗效显高于ＮＩＩＳＴ方案组,且可降低早期死亡率,缩短脱离红细胞输注时间,治疗有效骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ恢复更为良好。     

MDS-RA与CAA骨髓细胞学及组织学活检的实验研究

目的 探讨骨髓增生异常综合征难治性贫血与慢性再生障碍性贫血的鉴别特征，为临床的诊断和治疗提供诊断依据。方法 对15例骨髓异常增生综合征难治性贫血(MDS-RA)与36例慢性再生障碍性贫血(CAA)作血象及骨髓像细胞学检查．并比较和分析其组织病理学结果。结果 CAA组出血及三系减少的发生率明显高于MDS-RA组：骨髓细胞学检查显示，CAA组有核细胞增生程度低下和巨核细胞减少的发生率明照高于MDS-RA组．而MDS-RA组病态造血的发生率则明显高于CAA组。结论 骨髓细胞学检查是骨髓增尘异常综合征难治性贫血与慢性再生障碍性贫血的主要鉴别手段，骨髓组织学活检能提高病态造血的检出率，尤其是幼稚前体细胞异常定位(ALIP)检测不仅为MDS-RA和CAA鉴别的主要指标，而且能为疚病的预后提供参考依据。     

Successful infusion of 40 cryopreserved autologous bone-marrows. In vitro studies of the freezing procedure

Cryopreservation of human bone marrow may be helpful to use supralethal chemoradiotherapy in order to cure malignant diseases. We report here a cryopreservation procedure from large volumes of human bone marrow which can be applied in routinal use. Whole bone marrow in 10% Dimethylsulfoxide (ME2SO) was frozen at an 1 degree C/min. controlled rate and was stored into liquid nitrogen. After thawing and before infusion, both ME2SO and free hemoglobin were removed. The in vitro recovery of nucleated cells and the myeloid stem cell assay (CFC) were performed as quality control. About 60% of the marrow cells and 40% of the total CFC number were recovered at the end of the procedure. Using this technique, 40 patients (25 children with malignant lymphoma and 15 adults with lymphoma and solid tumors) were transplanted with autologous cryopreserved bone marrow after receiving intensive chemotherapy. Three of them received both chemotherapy and a total body irradiation. Engraftment was achieved in all patients. Rise in leucocyte count (greater than 1.10(9)/l) occurred within an average of 17 days. In conclusion, in autologous bone marrow transplantation, this method of cryopreservation is effective to obtain rapid hematological reconstitution in patients treated for malignant diseases by intensive cytoreductive regimens.     

探讨非霍奇金淋巴瘤骨髓实验诊断体系的临床应用价值

目的：探讨联合多种检测技术的骨髓实验诊断体系诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润的价值。方法以骨髓涂片检查、切片检查、流式细胞术、荧光原位杂交技术和染色体核型分析技术为基础,建立骨髓实验诊断体系。体系内容包括实验流程和诊断结果评价体系。实验流程的检验顺序为：（1）骨髓涂片、骨髓切片;（2）FCM分析和染色体培养分析;（3）FISH探针检测。诊断结果评价体系以骨髓涂片（BMA）和病理切片（BMB）作为定性诊断指标,特异性的FCM或免疫组织化学（IHC）的免疫表型和FISH探针的基因表型作为分型依据。CAA结果作为诊断及预后判断指标。各项检测技术的实验操作按常规进行。结果总例数为115例,BMA和BMB完成检查各115例,FCM完成74例,FISH 85例,CAA 23例。各单项检出阳性率分别为BMA 72.17%,BMB 89.96%,FCM 90.54%,FISH 54.12%。实验诊断体系综合分析检出率为100%。单项比较,BMB和FCM的阳性检出率明显高于BMA和FISH,差异显著。将75例淋巴结病理确诊为NHL患者的诊断结论在定性、免疫分型和病理分型3个层面上,做骨髓实验诊断结果与淋巴结病理诊断结果的对比分析,其吻合率分别为98.67%,91.94%,72.00%,说明骨髓诊断NHL在较精准的病理分型水平上还有差距。结论骨髓实验诊断的各单项技术对NHL-BMI的诊断有其临床价值,也有不足和局限。骨髓涂片和骨髓切片检查是基本方法,可以做出定性诊断。进一步做 FCM 或 IHC 可以明确免疫分型,配合FISH及CAA可以得到精细的病理分型诊断。多技术联合应用的实验诊断体系是诊断NHL的有效方法,可以提高NHL-BMI的诊断正确性和阳性率。     

诱导化疗期定时骨髓象检查在急性髓细胞白血病预后判断中的价值

目的：分析诱导化疗期骨髓象检查结果与预后的关系。方法：对９６例原发、初治急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者，于诱导化疗第１疗程期间定时作骨髓穿刺检查。结果：化疗第７天骨髓中幼稚细胞≤０．１０的患者１个疗程完全缓解（ＣＲ）率明显高于幼稚细胞＞０．１０的患者（分别为６４．６％和４０％，Ｐ＜０．０５）。对幼稚细胞＞０．１０的患者适当延长化疗时间可提高１个疗程ＣＲ率（５０％∶２５％，但与不延长化疗组相比无统计学差异）。停化疗后ＷＢＣ降至最低时骨髓中幼稚细胞比例和预后更具显著相关性，幼稚细胞≤０．１０的患者１个疗程ＣＲ率明显高于幼稚细胞＞０．１０的病例（６６．０％∶２５．８％，Ｐ＜０．００５），而难治病例发生率显著减少（７．５％∶４５．２％，Ｐ＜０．００５）。结论：诱导化疗期定时骨髓象检查有助于估计预后、指导治疗和改善疗效。     

CD68因子在急性髓系白血病患者中的表达情况及其临床相关性研究

目的:分析急性髓系白血病(AML)患者骨髓及外周血血浆中CD68因子的表达及临床特点。方法:采用四色流式细胞术检测50例初诊AML患者、23例对照组(非血液系统恶性疾病)的骨髓原始细胞CD68的表达情况。采用ELISA法检测85例初诊期、29例缓解期AML患者与24例对照组外周血血浆中CD68的表达情况。分析CD68因子的表达及其与临床特征的相关性。结果:非M3型AML患者骨髓白血病细胞中CD68表达率中位数为19.7%,明显高于对照组的0.2%(P<0.001)。非M3型AML患者外周血中CD68浓度中位数为67.97 pg/ml,明显高于对照组的29.94 pg/ml(P<0.01)。配对分析非M3型AML患者初诊时(45.72 pg/ml)与缓解期(55.12 pg/ml)外周血血浆中CD68浓度差异无明显统计学意义(P>0.05)。分别比较非M3型AML骨髓中CD68的表达率、外周血中CD68浓度与白细胞计数等临床资料相关性的结果表明:骨髓中CD68表达率越高,外周血白细胞数越高,血红蛋白及血小板数越低;外周血血浆中CD68浓度越高,外周血白细胞计数越高,完全...     

AML骨髓“前ALIP”样结构数量及其与骨小梁距离对白血病复发的影响

本研究通过急性髓系白血病(AML)患者完全缓解(CR)期骨髓"前ALIP"样结构定位、定量异常的检测,探讨其与AML复发的相关性。对62例骨髓涂片示CR的患者骨髓活检塑料切片进行回顾性分析及预后随访,依据预后将其分为复发前组及未复发组。计算骨髓塑料切片每平方毫米内单个、两个聚集前体细胞数量及二者的总和,结合计算机图像分割法测量其与骨小梁间的精确距离,明确"前ALIP"样结构定位、定量异常与复发的相关性。结果表明:复发前组及未复发组骨髓"前ALIP"样结构数量分别为11±11.71和8.33±9.17个/mm2,均明显高于正常对照组(5.29±4.00)(P<0.01)。在"前ALIP"数量≥11个/mm2的17例患者中,复发前组12例,占70.6%,明显高于未复发组(29.4%,P<0.05);而复发前组"前ALIP"与骨小梁的相对距离为(341.31±266.16)μm,明显远于未复发组(242.41±174.65)μm(P<0.01),有向骨小梁间区迁移的趋势。在前"ALIP"与骨小梁之间平均距离≥341μm的18名患者中,复发前组14例,占77.8%,明显高于未复发组(P<0.01)。结论:AML患者CR期骨髓切片中"前ALIP"样结构平均数量超过11个/mm2或其与骨小梁间的平均距离超过341μm,预示AML可能早期复发,应及时进行再诱导缓解治疗。     

再生障碍性贫血患者骨髓造血干/祖细胞体外增殖分化特征的研究

OBJECTIVE: To investigate the quality of bone marrow stem cells from aplastic anemia patients and their in vitro responses to hemopoietic growth factors(HGF). METHODS: CD34 positive bone marrow cells from 10 chronic aplastic anemia(CAA), 5 severe aplastic anemia(SAA) patients and 5 healthy subjects were detected with immunoflurescence assay, enriched by Panning way, and then cultured in vitro for CFU-GM, BFU-E and CFU-E in the presence of recombinant HGFs. RESULTS: CD34 positive rates of the bone marrow mononuclear cells(MNC) of CAA, SAA and control groups were (1.05 +/- 0.51)%, (0.70 +/- 0.37)% and (1.27 +/- 0.45)%, respectively, and there was no difference among them (P > 0.05). After being enriched, CD34 positive cells in MNC of CAA, SAA and control groups increased to a similar level(P > 0.05). In the presence of G-CSF or GM-CSF, the enriched CD34 positive MNC of CAA and SAA patients formed similar CFU-GM number to those of normal controls. The numbers of BFU-E and CFU-E formed from the enriched CD34 positive MNC of CAA and SAA patients were also the same as that of normal control groups under the stimulation of erythropoietin and interleukin-3. Stem cell factor could cooperate with G-CSF, GM-CSF, and erythropoietin significantly increasing the numbers of CFU-GM, BFU-E and CFU-E of CAA, SAA and normal control's enriched CD34 positive MNC. CONCLUSION: The bone marrow CD34 positive cells from aplastic anemia patients appears to be normal in percentages and in in vitro proliferation/differentiation capacities.     

骨髓穿刺物的检测对非霍奇金淋巴瘤患者骨髓受累的诊断和患者预后评估的价值

目的:比较并评估非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的各种检测方法的敏感度、特异度和提示预后的价值。方法:2013年1月至2017年11月在北京大学第三医院就诊并行骨髓穿刺的检查的NHL患者共351例。对这些患者分别统计骨髓活检(bone marrow biopsy,BMB)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、基因重排(gene rearrangement,GR)、骨髓形态学检查的骨髓受累检出率。以骨髓活检为金标准,观察FCM、基因重排、骨髓形态学的敏感度、特异度,并绘制ROC曲线。在77例NHL患者的生存分析中,分别统计患者的总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)、完全缓解率(CRR)。对比FCM阳性组、基因重排阳性组与阳性对照组(BMB阳性组)、阴性对照组患者的生存情况。结果:骨髓穿刺物的流式细胞术和基因重排检测骨髓受累较骨髓活检、骨髓形态学检测有更高的检出率,且两者都具备比较良好的诊断效能。流式细胞术和基因重排联合检测骨髓受累的敏感度为82.5%,而特异度达90%,AUC为0.863,诊断效能良好。骨髓穿刺物的基因重排检测对NHL患者具有提示不良预后的作用,基因重排阳性组(RG group)患者的3年生存率较无骨髓受累的组(All negative group)低(P<0.05);RG组患者的生存曲线虽然较All negative组无显著差别(P<0.1),但仍提示患者有较差的预后,且在Cox回归模型中体现出可预测死亡风险(P<0.05)。而FCM阳性组(FCM group)预后没有统计学差异。结论:骨髓穿刺物检验中,流式细胞术和基因重排方法具有较好的诊断效能,基因重排检测可提示患者的预后。而两种方法联合检测效能更好。