急性白血病患者血管内皮生长因子及其受体表达的临床意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (VEGFR)在成人急性白血病 (AL)中的表达、对临床疗效和预后的影响以及与多药耐药的关系。方法 :采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 6 4例成人AL患者VEGF、VEGFR 1、VEGFR 2、mdr 1mRNA表达水平。结果 :VEGF基因在AL组中表达的平均水平和阳性率均高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。其中急性粒细胞白血病 (AML)组广泛表达 ,明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而急性淋巴细胞白血症 (ALL)组的表达与正常对照组相比差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。AL组VEG FR 1表达阳性率高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;VEGFR 2表达阳性率与正常对照组相比无显著性意义 (P >0 .0 5 )。VEGF表达水平在临床耐药组高于临床敏感组 (P <0 .0 5 ) ,是影响缓解率和生存期的危险因素。VEGF与mdr 1表达无相关关系。结论 :VEGF及VEGFR 1基因在成人AL患者中有异常表达 ,是影响成人AL患者临床疗效和预后的因素之一。     

急性白血病患者血清VEGF及VEGFR-2的临床研究

目的：探讨急性白血病（AL）患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（VEGFR-2）的表达水平与临床的关系,以及血管新生在AL发病中的作用。方法：采用双抗体夹心ELISA法检测20例健康志愿者与39例AL初发患者未治时血清VEGF及VEGFR-2的含量,及25例获得完全缓解后的AL患者血清VEGF及VEGFR-2的水平;同时留取39例AL初发患者骨髓液涂片,进行瑞特染色后检测骨髓原始和幼稚细胞水平。结果：血清VEGF、VEGFR-2在AL初发组的含量明显高于正常对照组,尤其在未缓解组,P〈0.05;急性非淋巴细胞白血病（ANLL）和急性淋巴细胞白血病（ALL）之间血清VEGF、VEGFR2的水平差异无统计学意义（P〉0.05）;25例完全缓解的AL患者,其缓解前、后的血清VEGF、VEGFR2水平均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,同时缓解后较缓解前血清VEGF、VEGFR2水平也明显下降（P〈0.05）;血清VEGF、VEGFR2的含量与患者骨髓中原始幼稚细胞水平有一定的相关性（均P〈0.05）。结论：提示AL患者有血管新生的存在,且血清VEGF及VEGFR-2水平与病情的特征以及预后的判断有一定的相关性。     

白血病患者STAT5、SOCS1和PTPRO基因的表达及意义

目的探讨信号转导子与转录激活子5(STAT5)、SOCS1和受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)基因在急性白血病中的表达情况及临床意义。方法将入选患者分为急性白血病(AL)初治组、AL缓解组、慢性粒细胞白血病(CML)组和正常对照(NC)组,采用Syber G reen荧光定量PCR方法检测白血病和NC组骨髓单个核细胞中STAT5、SOCS1及PTPRO mRNA的表达。结果 AL初治组STAT5表达水平明显高于AL缓解组和NC组;CML组高于NC组,低于AL初治组和AL缓解组(P<0.05)。AL初治组SOCS1、PTPRO表达水平低于AL缓解组,更低于NC组(P均<0.05);CML组低于AL缓解组和NC组(P<0.05),与AL初治组无统计学差异(P>0.05)。结论 STAT5的高表达及SOCS1和PTPRO的低表达可能在白血病的发生发展中起重要作用。     

实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其意义

目的 定量检测急性白血病(AL)骨髓单个核细胞(MNCs)的肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达,并探讨其临床意义.方法 制备67例初治AL患者的骨髓MNCs,提取定量MNCs的总RNA,并制备cDNA.应用实时荧光定量-PCR(FQ-PCR)检测HGF mRNA在AL的表达.结果 HGF mRNA在AL组的表达显著高于对照组(6.936 4±1.613,0.407±0.170,P<0.001),而急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达差异无统计学意义(7.127±1.911,6.635±0.934,P>0.05).在AL中,M5呈显著强表达(9.998±1.454),高于M2、M3、M4、L1、L2和L3表达(P<0.001);而后者间表达差异无统计学意义(P>0.05).HGF mRNA在性别、年龄间的表达差异也无统计学意义(P>0.05).缓解组HGF mRNA的表达明显低于未缓解组(6.393±1.165,8.041±1.848.P<0.005).结论 HGF mRNA在AL组与对照组、AL亚型间的表达存在差异,但在AML与ALL、AL患者的性别、年龄间的表达无差异,且低表达者疗效较好,提示HGF mRNA可能是AL诊治的又一理想指标.     

急性白血病bcl-2、bax测定的临床意义

目的探讨急性白血病(AL)患者bcl-2、bax的表达与临床治疗及预后的关系。方法采用S-P免疫组化法检测AL患者骨髓单个核细胞(BMMNC)上bcl-2及bax的表达水平,行AL疗效分析。结果急性髓细胞白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者bcl-2表达分别为(46.12±27.29)%和(57.94±32.19)%,均明显高于正常对照组(15.4±5.64)%(P<0.01),AML与ALL间bcl-2表达差异无统计学意义(P>0.05);49例AL临床治疗有效组bcl-2表达为(36.81±30.35)%,无效组为(56.36±26.78)%,无效组高于有效组(P<0.05)。各组间bax差异均无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2水平对判断AL疗效和预后有重要价值。     

初诊急性白血病患者细胞膜组织因子和血浆F1+2检测的临床意义

目的 探讨初诊急性白血病(AL)各亚型患者白血病细胞膜组织因子(TF)的表达程度和血浆凝血酶原片段1+2(F1+2)浓度及其关系以及上述指标对AL并发弥散性血管内凝血(DIC)的预测和诊断评价意义.方法 用流式细胞术(FCM)对2006年10月至2007年10月中国医科大学附属盛京医院收治的50例AL患者和12例正常人骨髓分离的单个核细胞胞膜TF表达进行检测,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆F1+2浓度.结果 急性髓性白血病(AML)-M3白血病细胞膜TF的表达[(48.23±11.59)%]高于AML-M1-2、M4和急性淋巴细胞白血病(ALL)(P＜0.05),与AML-M5(40.51%)比较差异无统计学意义(P＞0.05).AML-M3、M4和M5血浆F1+2浓度均显著高于正常对照组(P＜0.05).合并DIC组的TF表达和血浆F1+2浓度均高于无DIC组,差异有统计学意义(P＜0.01).TF表达程度和血浆F1+2浓度呈一定相关性(r=0.682,P＜0.01).结论 初诊AL患者存在凝血激活,表现为白血病细胞膜TF表达增多,凝血酶生成增加,尤以AML-M3和M5为著.FCM测定TF的膜表达程度对AL凝血异常发生潜在性可起一定预测和提示作用.     

粒细胞集落刺激因子受体在急性髓性白血病骨髓CD34+细胞中的表达及其临床意义研究

目的 评价粒细胞集落刺激因子(G-CSF)应用于急性髓性白血病(AML)化疗患者的安全性.方法 对2008年3月至2009年1月天津医科大学总医院血液肿瘤科62例AML患者[初治或复发AML33例,完全缓解(CR)AML 29例]和16名正常人采用流式细胞术(FCM)和半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓CD34+细胞G-CSFR的表达.结果 CD114+CD34+/CD34+比值在初治或复发组、CR组及对照组分别为(11.69±2.91)%、(31.84±8.62)%、(32.87±8.44)%(P<0.05),CR组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).G.CSF受体mRNA表达在初治或复发组、CR组及对照组分别为(30.52±6.21)%、(85.13±21.25)%、(91.57±18.64)%(P<0.05),CR组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).动态随访了13例AML患者,初治及CR时骨髓CD34+细胞上CD114+CD34+/CD34+比值分别为(12.58±2.00)%、(30.13±7.09)%,初治时低于CR时(P<0.05).G-CSF受体mRNA表达分别为(32.23±5.69)%、(83.27±19.79)%,初治组低于CR组(P<0.05).结论 G-CSF受体在AML患者骨髓CD34+细胞上的表达低于正常人CD34+细胞上的表达,故G-CSF用于治疗AML化疗后粒细胞缺乏期是安全的.     

急性和慢性白血病survivin基因的表达及临床意义

目的探讨survivin基因在白血病中的表达及对成人急性白血病(AL)患者的预后意义。方法应用RT-PCR检测105例AL和21例慢性粒细胞白血病(CML)患者survivin mRNA的表达水平,15例健康人为正常对照,K562、NIM、Kg-1α、HL-60细胞株为阳性对照。流式细胞术检测AL患者细胞周期分布,分析survivin基因表达与细胞增殖的关系。结果survivin在初治AL中的表达(0.525±0.460)较正常对照组(0.101±0.187)明显升高,治疗缓解后survivin的表达(0.280±0.095)下降,复发时表达水平(0.935±0.343)又复升高;在CML慢性期患者,survivin mRNA表达水平(0.279±0.112)与正常对照无明显差异,而在急变期的患者表达水平(0.653±0.236)明显升高;AL患者中survivin基因高表达组的增殖指数(PI=9.682)较正常表达组的增殖指数(PI=6.899)高,且差异有统计学意义(P＜0.05);在初治AL患者中,survivin表达阳性的患者缓解率低于表达阴性的患者。结论survivin有促增殖、促分裂作用。survivin基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,并且与AL复发和预后因素密切相关。survivin表达水平的升高是CML患者急变的高危因素。     

c-IAP1与Smac基因在白血病中的表达及临床意义

目的:探讨c-IAP1及其拮抗素Smac基因在白血病中的表达及对成人急性白血病(AL)患者预后的意义。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测103例AL患者c-IAP1、Smac的mRNA表达水平,20例健康人为正常对照,K562、Kg-1α细胞株为阳性对照。结果:初治AL患者中c-IAP1、Smac的表达较正常对照者明显升高,2者的表达为高度正相关,治疗缓解后c-IAP1、Smac的表达明显下降,复发后c-IAP1、Smac:基因的表达又复升高。c-IAP1 mRNA和Smac mRNA在慢性粒细胞性白血病慢性期组的表达率和表达水平均高于正常对照组,但差异无统计学意义。初治AL患者中,c-IAP1、Smac表达阳性的患者缓解率均低于表达阴性的患者。结论:AL的发病可能与c-IAP1和Smac的高表达有关,而且是AL复发的高危因素;c-IAP1和Smac高表达的患者完全缓解率低,预后不良。     

Bcl-2蛋白在成人急性白血病表达的临床意义

目的:检测Bcl-2蛋白在不同阶段成人急性白血病的表达分布,分析Bcl-2蛋白表达是否可以作为预测化疗反应的指标。方法:选择成人急性白血病患者骨髓标本72例,分3组:初治组18例,完全缓解(CR)组38例,复发组16例。正常对照组6例。以流式细胞仪和单克隆抗体检测Bcl-2蛋白表达,进行统计学分析。结果:①Bcl-2蛋白在初治组、CR组和复发组表达率分别为11.11%、18.42%、62.50%。复发组表达率显著高于初治组和CR组(均P<0.01),初治组和CR组表达率差异无统计学意义(P>0.05);②Bcl-2在急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病表达率分别是24.07%(13/54)和33.33%(6/18);两组差异无统计学意义(P>0.05);③Bcl-2蛋白表达阳性组与阴性组CR率分别是36.84%和77.36%(P<0.01)。结论:Bcl-2蛋白在成人急性白血病复发组高表达并且与CR率低相关。     

肺耐药蛋白在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞肺耐药蛋白（LRP）的表达及意义。方法 采用LRP单克隆抗体、流式细胞技术分别测定15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）和65例AL患者（AL组）LRP的表达率。结果 LRP的表达率在初治和复发／难治急性淋巴细胞白血病（ALL）患者分别高于初治和复发／难治急性髓细胞白血病（AML）患者（P均〈0．05）；AML中M5亚型表达率高于M3亚型（P〈0．05）。初治及复发／难治LRP（＋）者缓解率明显低于LRP（-）者（P〈0．05）。结论 LRP的表达与AL患者临床预后密切相关，化疗前检测LRP表达率有助于个体化治疗和预测疗效。     

急性心肌梗死再灌注后近期血管内皮祖细胞相关功能基因的变化

目的 观察急性心肌梗死再灌注对血管内皮祖细胞（EPCs）有关功能基因的影响。方法 对急性前壁心肌梗死的患者心肌梗死发生6h内和急诊经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后7天分别采取外周血。Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞（MNCs）,在包被有明胶的培养瓶内以M-199培养液培养并在刺激因子作用下,14天后收集贴壁细胞,经鉴定为EPCs。抽提RNA,进行24个内皮相关基因在心肌梗死即刻和再灌注治疗7天后表达差异的芯片检测,并用RT-PCR的方法进行验证。24个内皮相关基因分别为调节血管收缩舒张功能、血管新生和内皮细胞活性的相关基因：ACE、AGTR-1、AGTR-2、eNOS、COX-2、ET-1、ETA、ETB、SOD-1、CDH5、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、ICAM1、ICAM2、ICAM3、PECAM-1、E-Selectin、L-Selection、VCAMl、tPA,uPA,PAI,vWF。同时,收集25例进行急诊PCI的急性心肌梗死患者即刻和7天的外周抗凝血,用流式细胞检测法比较其外周血中一些带有内皮功能标志物的细胞数量变化（如：VEGFR2、PECAM-1、VE-cadherin等）。结果基因芯片检测结果显示再灌注7天后（Cy3）较心肌梗死6h内（Cy5）有8个基因的表达降低（Cy3／Cy5≤0．05）,分别为AGTR-1、AGTR-2、COX-2、eNOS、ET-1、ETA、VEGF。其余17个基因无差异（Cy3／Cy5在0．05-2．00之间）。对差异表达基因AGTR-1和ETA及无差异表达基因SOD．1进行RT-PCR验证也显示了相同结果。流式细胞检测显示再灌注治疗后7天外周血中VEGFR2阳性细胞显著下降（P〈0．05）,PECAM-1和VE-cadherin阳性细胞无明显变化（P〉0．05）。结论 根据以上实验结果推测再灌注治疗后早期能使EPCs在血管舒缩方面的某些功能异常得到恢复。另外,由于缺血的改善EPCs血管新生作用减弱,同时局部的炎症反应也会减轻,有可能进一步稳定冠状动脉的病变。     

早期分化抗原在急性白血病中的表达及其意义

目的　探讨CD3 4 、CD90 及CD13 3 在急性白血病 (AL)中的表达及其意义。方法　采用三色直接免疫荧光法测定 76例AL患者白血病细胞膜上CD3 4 、CD90 及CD13 3 抗原的表达 ,半定量RT PCR方法测定CD13 3 mRNA的表达。结果　 (1)AL患者的CD3 4 及CD13 3 表达高于正常对照组(46 37%、0 4 7% )、(2 1 93%、0 2 9% ) ,P值均 <0 0 1;但CD90 的表达二者间差异无统计学意义(0 5 1%、0 2 5 % ) ,P >0 0 5 ;AL、对照组的CD13 3 抗原表达均与CD13 3 mRNA表达相一致。 (2 )急性淋巴细胞白血病 (ALL)的CD90 阳性率高于急性髓细胞白血病 (AML) (P <0 0 5 ) ,B ALL的CD3 4 阳性率高于T ALL(P <0 0 5 )。AML中M4的CD13 3 阳性率最高 (P <0 0 1)。 (3)CD3 4 及CD13 3 阳性组AL的HLA DR阳性率显著高于阴性组 (79 1%、32 0 % ;82 8%、4 6 2 % ) ,P值均 <0 0 1;CD 3 4 AML的CD13 3 阳性率高于阴性组 (P <0 0 1) ,但两组之间CD90 阳性率差异无统计学意义。 (4)CD3 4 、CD90 及CD13 3 表达与AL的细胞或分子遗传学异常等临床预后因素无明显关系。 (5 )CD3 4 、CD90 及CD13 3 阳性组的完全缓解率及总反应率低于阴性组 ,但仅有CD3 4 /CD13 3 双阳性组完全缓解率低于双阴性组差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论     

急性白血病患者侵袭性真菌感染后的免疫功能改变

目的 探讨急性白血病(AL)患者的免疫功能与侵袭性真菌感染(IFI)的关系.方法 采用流式细胞术对61例发生IFI的AL患者AL初诊和缓解时、IFI发病时和抗真菌治疗4周后T淋巴细胞亚群、NK细胞进行检测,用免疫比浊法测定免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量.统计学方法采用方差分析、t检验和卡方检验.结果 AL患者IFI发病时,CD3+、CD3+CD4+、CD8+CD28+T淋巴细胞、CD4+/CD8+细胞比例均低于AL初诊和缓解以及抗真菌治疗4周后(F=25.6,26.6,13.1,167.9;均P＜0.05),CD8+CD28 T淋巴细胞显著高于AL初诊和缓解以及抗真菌治疗4周后(F=220.2,P＜0.01).抗真菌治疗4周有效者CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+均高于无效者(t=3.75,8.61,3.17;均P＜0.05).AL患者血清中IgG、IgM、IgA含量在IFI发病时、AL初诊和缓解以及抗真菌治疗4周后差异无统计学意义(F=0.78,0.72,0.81;均P＞0.05).AL缓解者IFI治疗有效率明显高于未缓解者(87%比53%,x2=7.62,P＜0.05).结论 IFI发生时,AL患者细胞免疫功能受损明显,而IgG、IgM、IgA含量变化不明显.抗真菌感染疗效在一定程度上取决于机体细胞免疫功能的恢复和AL缓解.     

p27^kipl和p57^kip2与CyclinD1在急性白血病的表达及其临床意义

目的:探讨p27kipl和p57kip2与CyclinD1在急性白血病中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组化S-P法检测39例急性白血病及10例正常对照者骨髓中p27kipl和p57kip2与CyclinD1蛋白的表达情况,并结合临床病理资料进行分析。结果:p27kipl和p57kip2与CyclinD1蛋白在急性白血病患者的阳性表达率分别为31%、33%、54%,在对照组表达率为70%、40%、0。p27kipl与cyclinD1在白血病与对照组中的表达差异有统计学意义。在37例接受化疗的急性白血病中,p27kipl和p57kip2阳性表达组化疗后的缓解率(66%、69%)明显高于p27kipl和p57kip2表达阴性组的缓解率(32%、29%),其差异有统计学意义(P<0.05)。p57kip2与CyclinD1在白血病中的表达具有正相关性。结论:p27kipl和p57kip2与CyclinD1在急性白血病患者中存在异常表达其蛋白的表达水平可能会影响化疗疗效。     

间充质干细胞分泌的血管内皮生长因子对心肌细胞的保护作用

目的:探索间充质干细胞通过其分泌的血管内皮生长因子对H9C2细胞的保护作用及机制。方法: 收集骨髓源间充质干细胞的条件培养基,分别处理培养,将其置于缺氧小室缺氧处理21 h,复氧处理6 h。阻断实验利用VEGFR阻断剂SU5416与间充质干细胞的条件培养基共处理。随后,利用流式细胞术ANNEXIN/PI双标法分析其凋亡变化。Western blotting分析H9C2细胞pAkt的表达。结果: RT PCR结果显示间充质干细胞表达血管内皮生长因子,Western blotting结果显示间充质干细胞条件培养基增加了H9C2细胞pAkt的水平。AnnexinV/PI分析发现间充质干细胞条件培养基明显降低了H9C2细胞缺氧复氧的凋亡,且这种抗凋亡作用能被VEGFR阻断剂SU5416或PI3 K/Akt途径阻断剂LY294002所阻断。结论: 间充质干细胞通过其分泌的血管内皮生长因子通过激活PI3 K/Akt途径保护H9C2细胞。     

急性白血病P_(170)和CD_(34)抗原共同表达及其临床意义

目的 :探讨急性白血病 (AL ) P1 70 和 CD34 抗原共同表达与患者化疗疗效的关系。方法 :对 81例 AL患者的单个核细胞分别用抗 P1 70 单克隆抗体 UIC2 和抗 CD34 单克隆抗体标记后 ,经流式细胞仪检测后分成 4组 ,观察其与 AL 患者临床疗效的关系。结果 :P1 70 和 CD34 抗原共同高表达组的 AL 患者的临床疗效最差 ;P1 70 和 CD34 比较 ,P1 70 表达增高预后更差。结论 :P1 70 和 CD34 同时高表达临床缓解率更低 ,更有预后意义     

急性白血病ZO-1基因启动子区甲基化状态分析及其临床意义

目的 探讨紧密连接蛋白-1(Zonula occludens-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在人急性白血病(AL)发生、发展中的作用及作为通用性基因标志物的临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测白血病细胞系HL60、Molt4、NK92和40例非恶性血液病以及81例AL骨髓ZO-1基因启动子区的甲基化状态.结果 ZO-1基因启动子区在白血病细胞系中呈完全甲基化状态;而在40例非恶性血液病标本中均为非甲基化;81例AL标本中甲基化阳性率为60.49%(49/81),其中难治复发组为92.86%(13/14),高于初诊未治疗组65.85%(27/41)及完全缓解组34.62%(9/26);急性髓细胞白血病组61.54%(32/52)与急性淋巴细胞白血病组58.62%(17/29)比较差异无统计学意义.结论 首次证明ZO-1基因启动子区高甲基化状态在人AL中具有较高的特异性,与疾病发生、发展密切相关,可作为一个新的白血病通用分子标志.     

急性白血病患者周期素D_1及其激酶抑制蛋白p15检测的意义

目的 :探讨细胞周期素 D1 及其激酶抑制蛋白 p15表达在急性白血病 (AL)中的临床意义。方法 :用间接免疫荧光标记流式细胞术研究 46例初治 AL 细胞治疗前后 D1 、p15、细胞周期及 DNA倍体与疗效间关系。结果 :2 8例急性髓系白血病 (AML)中 2 2例 p15阳性 ,6例阴性。 18例急性淋巴细胞白血病 (AL L)中 p15均阳性。AML与 AL L D1 均阳性。高 p15者 G1 期细胞百分率 (G1 % )增多 ,S期细胞百分率 (S% )减少。低 p15者 G1 %减少 ,S%增多。 DNA非整倍体者均高表达 p15和 D1 ,完全缓解率低 (30 % )。高 p15低 D1 者 2 0例中 18例 (80 % )完全缓解 (CR) ;低 p15高 D1 者 10例 ,8例 (80 % ) CR;高 p15高 D1 者 14例中 10例 (71.4% ) CR,低 p15低 D1 者 2例均 CR。结论 :p15和 D1 在 AL 中表达有异质性。高 p15者显示 G1 期阻滞 ,低 p15显示 G1 / S期转化 ,p15和 D1表达有助于指导治疗