白藜芦醇苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤模型的保护作用

目的 探讨白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用.方法 以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型模拟脑缺血病理的改变,研究白藜芦醇苷对该缺氧缺糖损伤模型的影响.结果 白藜芦醇苷能显著减少PC12细胞死亡,降低乳酸脱氢酶漏出量,一氧化氮含量及丙二醛生成,提高超氧化物歧化酶活性.结论 白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用.     

HT22海马神经元细胞氧糖剥夺再灌注模型的建立

【目的】探讨HT22海马神经元细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型的建立条件。【方法】将HT22海马神经元细胞分为正常对照组和模型组,以不同的密度接种至96孔板,正常对照组细胞始终在正常气体条件下培养,模型组先采用缺氧小室对细胞进行缺氧处理8 h,然后给予不同时间的复氧处理。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力,采用微板法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)的含量,并进行细胞形态学观察。【结果】与正常对照组比较,接种密度9000、5000、3000个/孔的HT22细胞在复氧6 h时均明显损伤,细胞存活率降低,上清液中LDH活力及MDA含量升高,SOD活力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】HT22细胞OGD/R模型的最佳造模条件是缺氧8 h复氧6 h。     

内皮祖细胞对氧糖剥夺／复氧损伤神经元的保护作用

目的:研究内皮祖细胞(EPCs)共培养对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤神经元是否有保护作用。方法:分离培养新生小鼠的海马神经元,利用缺氧培养室建立神经元OGD/R模型。分离培养小鼠骨髓源性EPCs,采用Transwell小室建立EPCs与OGD/R损伤神经元的共培养系统。将神经元随机分为4组,即对照组、OGD/R组、EPCs共培养组及EPCs共培养并加入一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂(L-NAME)组。神经元凋亡率用TUNEL荧光法检测。用Western blot法检测神经元caspase 3及内皮型e NOS活性。结果:OGD/R组神经元的细胞凋亡率和caspase 3活性较对照组显著增加。与OGD/R组相比,EPCs共培养组神经元凋亡情况显著降低(P<0.05),且e NOS磷酸化水平明显增高(P<0.05)。而与EPCs共培养组相比,EPCs+LNAME组神经元凋亡情况明显增加(P<0.05),且e NOS磷酸化水平也明显下降(P<0.05)。结论:与EPCs共培养可以通过提高神经元e NOS的活性来保护OGD/R损伤的神经元。     

17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12神经细胞的保护作用

目的研究17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12神经细胞的作用.方法将PC12神经细胞随机分为三组:正常对照组;OGD-R(oxygen-glucose deprivation and reperfusion)组和17β-E2(17β-雌二醇)治疗组.OGD-R组和17β-E2治疗组进行氧糖剥夺再灌注,观察氧糖剥夺后PC12神经细胞形态改变;流式细胞仪检测再灌注24h后PC12神经细胞早期凋亡率和死亡率.数据以均数±标准差(x-±s)表示,应用SPSS13.0软件包进行统计学分析,显著性水准为α=0.05.结果(1)氧糖剥夺30min后17β-E2治疗组较OGD-R模型组PC12神经细胞胞体水肿轻,保留了突起,但较正常细胞明显变短甚至消失.(2)流式细胞仪检测示再灌注24小时后早期凋亡率和死亡率中17β-E2治疗组均介于正常对照组和OGD-R组之间,三组间两两比较均有显著性统计学差异.结论17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12神经细胞有保护作用.     

莱菔硫烷对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对体外培养皮质神经元氧糖剥夺(OGD)/复氧(R)损伤的保护作用。方法出生O～1d的SD乳大鼠皮质神经元原代培养5～6d后,随机分为正常对照组、OGD组及SFN组。建立皮质神经元的OGD模型,1h后复氧,模拟再灌注模型,OGD/R期间给予0.1、0.5、1、2.5μmol/L SFN,复氧2...     

乙酰左旋肉碱对大鼠缺血性损伤及氧糖剥夺细胞模型的保护作用

目的：观察乙酰左旋肉碱（acetyl-L-carnitine,ALC）对大鼠缺血性脑损伤和氧糖剥夺细胞模型的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用随机数字表法,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和ALC组,制备大鼠脑缺血模型。术前24 h ALC组腹腔注射ALC,模型组和假手术组注射等量磷酸缓冲液。术后6 h进行氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色,评价ALC对大鼠缺血性损伤的影响。体外培养PC12细胞,将细胞随机分为正常组、模型组和ALC组,建立体外氧糖剥夺模型。建模前24 h在ALC组加入ALC。建模后3 h分别通过ＭＴＴ法、TUNEL法、SYTOX染色检测细胞活力与细胞的凋亡、坏死情况;同时检测各组细胞超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、三磷酸腺苷酶（adenosine triphosphatase,ATPase）活性和丙二醛（maleic dialdehyde,MDA）含量的改变。结果：ALC预处理后,大鼠的TTC染色梗死灶面积较模型组明显减小（P<0.05）;细胞活力与氧糖剥夺模型组相比显著增加,坏死与凋亡的细胞数明显下降,SOD、ATPase活性增高,MDA含量下降（P<0.05）。结论：ALC预处理可以保护大鼠缺血性脑损伤,提高氧糖剥夺条件下的细胞活力,其机制可能与增强细胞抗氧化能力、改善细胞的能量代谢、减少细胞凋亡与坏死有关。     

黄芩苷对氧糖剥夺再复氧损伤大鼠海马神经干细胞的保护作用

目的：探讨黄芩苷对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)损伤大鼠海马神经干细胞(NSCs)的保护作用。方法：体外悬浮培养新生大鼠海马NSCs,将培养的海马NSCs分为对照组、OGD/R组、黄芩苷组。OGD/R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常培养,黄芩苷组在OGD/R基础上加用黄芩苷培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定NSCs细胞的存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,4",6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测NSCs细胞的凋亡,巢蛋白(Nestin)/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色检测NSCs细胞的增殖。结果：悬浮培养细胞呈Nestin阳性表达；与对照组相比,OGD/R组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达显著降低,LDH漏出率显著增加(P＜0.01),DAPI核染提示OGD可诱导细胞凋亡。与OGD/R组相比,黄芩苷组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达的面密度及细胞数明显增多,LDH漏出率明显减少(P＜0.01),DAPI核染显示黄芩苷可减轻OGD/R所引起的细胞凋亡。结论：黄芩苷能减轻OGD/R对大鼠海马NSCs的损伤,并促进其增殖。     

不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用

目的 探讨不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用.方法 制备SD大鼠脑片,室温下保存在人工脑脊液(ACSF)中,根据实验分组情况选择性经过下列程序:恢复期60 min、平衡期30 min、氧糖剥夺(OGD)期30 min及再灌注期90 min.对照组(CTRL)不经过OGD期;模型组不施加臭氧干预(OGD/R);实验组于再灌注期分别给予10,20,30,40,50 μg/mL的臭氧,并且根据ACSF中是否含有人血白蛋白(HSA)分成2个亚组.再灌注期结束后分别测定各组ACSF中谷氨酸(Glu)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果 OGD 30 min后给予90 min的再灌注,模型组与对照组比较Glu和LDH释放增加(P＜0.01).不同浓度的臭氧在不同程度上拮抗了Glu和LDH的释放,其中40 μg/mL的臭氧效应最明显,低浓度(10～30μg/mL)或高浓度(50 μg/mL)臭氧组与OGD/R组比较效应不明显(P＞0.05);在含有HAS组与不合HAS组比较,给予臭氧(40μg/mL)干预能明显减少Glu和LDH的释放(P＜0.05).结论 40 μg/mL臭氧气体对大鼠离体脑缺血再灌注损伤模型中的神经细胞具有保护作用,并且HSA能增强臭氧的保护作用.     

二苯乙烯苷对大鼠原代皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：探讨二苯乙烯苷对大鼠皮层神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的作用。方法：取孕18 d的Sprague-Dawley胎鼠皮层神经元培养7～8 d,进行OGD损伤,同时分别加入二苯乙烯苷(10、20、40μg/mL)和尼莫地平(2.5μg/mL)进行处理。设置空白对照组、OGD组、OGD并加药组(二苯乙烯苷10、20、40μg/mL)以及OGD并尼莫地平阳性对照组。损伤6 h后,用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测LDH释放量,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling,TUNEL)法检测细胞的凋亡,免疫蛋白印迹(Western Blot)法检测Toll 样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)及其抑制因子IκB和磷酸化的IκB(p-IκB)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、p38及磷酸化的p38(p-p38)的蛋白表达。结果：OGD损伤后大鼠皮层神经元细胞活力显著降低,LDH释放量明显增多,细胞凋亡显著增多;二苯乙烯苷和尼莫地平均可显著抑制这一趋势。 OGD损伤引起TLR4、NF-κB、p-IκB/IκB、p-p38/p38和IL-6的异常高表达,二苯乙烯苷明显抑制这些蛋白表达。结论：二苯乙烯苷对OGD诱导的原代皮层神经元损伤的保护作用可能是通过抑制TLR4-NF-κB炎症信号通路和p38通路发挥抗炎抗凋亡效应的。     

白藜芦醇对刀豆蛋白A所致肝损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对刀豆蛋白A(ConA)所致肝损伤的保护作用。方法用ConA诱导小鼠肝损伤,用白藜芦醇灌胃治疗,3d后取血,检测血清ALT、AST活性和一氧化氮(NO)含量,检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量,并观察肝组织病理学变化。结果白藜芦醇中剂量组ALT、AST活性均明显低于模型组(P<0.01),但与联苯双酯组比较,差异无显著性意义(P>0.05);白藜芦醇大、中剂量组肝组织SOD活性明显升高、MDA含量显著降低,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05);白藜芦醇大、中、小剂量组血清NO含量较模型组明显降低(P<0.05);白藜芦醇中剂量组肝组织病理改变明显减轻。结论白藜芦醇对ConA所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用,其保肝机制与抗脂质过氧化损伤和抑制NO的产生密切相关。     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究丹酚酸B（Salvianolic acid B,Sal B）对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1-100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达。结论在0.1-100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关。     

妊高征血清对脐静脉内皮细胞影响的研究

目的利用妊高征患者血清致伤培养的正常脐静脉内皮细胞,观察致伤后内皮细胞分泌功能的变化.方法培养后的脐静脉内皮细胞用中、重度妊高征患者的血清为干预条件,共同培养后,测定NO2-/NO3-、LDH、SOD、MDA的含量变化.结果①LDH的活性、MDA的含量:中、重度妊高征组24h点及重度妊高征组12 h点均明显高于6 h时间点(P＜0.05),12、24 h两时间点均明显高于对照组相同时间点(P＜0.05);②SOD含量:重度妊高征组12、24h点均明显低于6 h点(P＜0.05).中、重度妊高征组24h点及重度妊高征组12 h点均明显低于对照组相同时间点(P＜0.05);③NO2-/NO3-含量:中、重度妊高征组内24h点均明显低于6 h点(P＜0.05).中、重度妊高征组的24h点及重度妊高征组12 h点均明显低于对照组相同时间点(P＜0.05).结论妊高征时存在着血管内皮细胞的损伤.     

蒲黄、丹参对纤维蛋白损伤内皮细胞的保护作用

应用传代培养的牛和人主动脉内皮细胞及原代培养的人脐静脉内皮细胞为实验模型,用1%纤维蛋白的琼脂薄膜复盖于融合成单层的细胞上,观察比较蒲黄、丹参对纤维蛋白损伤牛和人血管内皮细胞的影响。发现牛和人主动脉或脐静脉内皮细胞接触含纤维蛋白的琼脂薄膜后,部分细胞出现收缩移动和细胞间隙增宽,随后大多细胞脱落,少数聚集成团;而加入蒲黄血清或丹参针液的防治组,大部分细胞形态基本正常。加入蒲黄、丹参防治组的培养液中,LDH及ACP含量均明显低于实验对照组。提示蒲黄、丹参均能减轻纤维蛋白凝块对血管内皮的损伤作用。     

NO、SOD在糖尿病大鼠早期肾损害中的作用

目的 :探讨一氧化氮 (NO)及超氧化物歧化酶 (SOD)在糖尿病 (DM)早期肾损害中的作用。方法 :将实验鼠分为正常对照组 (A组 )、糖尿病组 (B组 )、糖尿病 + 0 .5 %左旋 精氨酸 (L Arginine)组 (C组 )。检测各组第 1,2周内生肌酐清除率 (Ccr)、尿微量白蛋白排泄率 (UAE)、尿亚硝酸盐 /硝酸盐 (NO-2 /NO-3 )、肾皮质NO-2 /NO-3 和总 超氧化物歧化酶 (T SOD)、铜锌 超氧化物歧化酶 (CuZn SOD)、肾重 /体重及肾小球平均体积 (AGV)。结果 :第 1,2周B、C组Ccr、UAE、尿NO-2 /NO-3 较A组明显升高 (P <0 .0 1) ,C组Ccr、UAE、尿NO-2 /NO-3 较B组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,第2周B、C组肾皮质NO-2 /NO-3 较A组显著升高 (P <0 .0 5 ,0 .0 1) ,C组较B组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,B、C组T SOD、CuZn SOD较A组显著下降 (P <0 .0 1) ,C组较B组更低 (P <0 .0 5 )。第 2周C组肾重 /体重、肾小球平均体积较B组显著升高。结论 :糖尿病肾病早期肾脏抗氧化酶活性减弱 ,超氧阴离子增多 ,内源性NO合成增加 ,补充L Arginine加重糖尿病肾损害。     

紫草素对脂多糖诱导的小鼠肺损伤的保护作用

目的 研究紫草素在小鼠ALI中的作用与机制,为ALI的药物治疗提供新的思路。方法 将BALB/c小鼠分成空白对照组、紫草素组、LPS组和LPS+紫草素组,小鼠气管内滴入LPS （5mg/kg）之前1h,预先通过灌胃法给予小鼠50mg/kg剂量的紫草素或其溶剂。LPS给药6h后采集肺泡灌洗液（BALF）及肺组织,用ELISA法检测BALF中TNF-α和IL-1β的浓度,BCA法测定BALF中蛋白浓度;肺组织行病理组织切片检查,测定肺湿干重比,比色法检测组织匀浆液中MPO活性及NO浓度,Western blot法检测肺组织中诱生型一氧化氮合成酶（iNOS）的表达水平。对上述结果进行分析,研究紫草素在ALI小鼠体内的抗炎作用与机制。结果 检测BALF中TNF-α和IL-1β的浓度以及BALF中的蛋白含量发现,紫草素+LPS组的浓度较LPS组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。比色法测定肺组织中MPO活性和NO浓度发现,紫草素+LPS组也明显低于LPS组,差异有统计学意义（P<0.05）。紫草素预处理组的肺湿干重比也较LPS组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。此外,紫草素预处理组的肺组织病理学改变也较LPS组有所减轻,尤其体现在肺组织炎性细胞的浸润明显减少。Western blot法检测显示,紫草素+LPS组的iNOS表达量较LPS组明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 紫草素可在病理学改变、减轻肺水肿、减少炎性因子的释放和中性粒细胞的浸润等多方面缓解ALI。这种保护作用的潜在机制可能与紫草素抑制iNOS有关。     

生脉注射液对急性百草枯中毒大鼠肝损伤NO和iNOS的影响

目的：观察百草枯（PQ）急性中毒大鼠所致肝损伤时一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的变化,探讨生脉注射液对急性百草枯中毒所致肝损伤的保护作用。方法：将50只SD大鼠随机分成5组,空白组、阴性对照组、阳性对照组、生脉低剂量组和生脉高剂量组。观察大体标本,组织病理,测定血清中ALT、AST、MDA、SOD和GSH-Px。同时测定肺组织NO含量和iNOS活性。结果：与阴性对照组相比,生脉低剂量组肝组织病理显示肝出血明显减轻。ALT、AST、MDA、SOD和GSH-Px变化均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）,NO和iNOS也降低（P〈0.01）。结论：NO及iNOS在百草枯所致大鼠肝损伤中起一定作用,生脉注射液能降低NO及iNOS水平,减轻百草枯中毒大鼠肝组织损伤。     

TMB-8体外对神经细胞保护作用及其机理的研究

目的 研究ＴＭＢ－８［８－（Ｎ,Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３,４,５－三甲氧基苯甲酸酯］的神经保护作用及其可能机制。方法 用氧－葡萄糖剥夺模型观察ＴＭＢ－８对培养的大鼠神经细胞形态、细胞膜通透性和细胞内丙二醛（ＭＤＡ）、总过氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）的影响。结果 经氧－葡萄糖剥夺１ｈ后,无血清培养２４ｈ的神经细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出明显增加     

黄秋葵总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化应激损伤的影响。方法 采用MTT法检测黄秋葵总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及一氧化氮（nitric oxide,NO）含量,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,采用二氯荧光乙酰乙酸盐法检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达水平。结果 黄秋葵总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1水平,降低细胞ROS水平,升高eNOS的表达水平。结论 黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白eNOS的表达有关。