大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

耐钙心肌细胞的分离及基本电生理特性

目的　探讨分离单个心肌细胞的方法并进行基本电生理指标测定 .方法　改进的 L angendorff灌流法及膜片钳全细胞记录法 .结果　单个心室肌细胞静息电位为 (- 85±2 .3) m V(n=1 0 ) ,记录到单个心室肌细胞典型的 L 型钙电流特性 .结论　用该方法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性     

成年小鼠心室肌细胞分离及L型钙电流记录

目的:寻找一种成年小鼠心肌细胞分离的简便、可行且稳定的方法,以获得耐钙心肌细胞并记录心室肌细胞L型钙电流(IL-Ca)。方法:采用Langerdorff逆行主动脉灌流、无钙台氏液+胶原酶Ⅱ消化法分离成年小鼠单个心室肌细胞;利用含钙细胞外液复钙法筛选耐钙心肌细胞;并采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L型钙电流。结果:利用该方法分离心肌细胞可获得90%活细胞;复钙后细胞存活率60%-70%;并可记录到典型L型钙电流。结论:无钙台氏液+胶原酶Ⅱ消化法简单可行且稳定,可分离大量活性较佳且耐钙心肌细胞,可用于心肌细胞离子通道电流记录,从而为心脏电生理研究提供有力的技术支持。     

耐钙心肌细胞的分离及其L型钙通道电流观察

目的：建立大鼠心肌细胞分离方法，用于膜片钳实验，并记录L型钙通道电流，方法：基于Langendorff逆行主动脉灌流模型，以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞，用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流。结果：在灌流所得50％存活单个心肌细胞中约70％为耐钙心肌细胞，并记录到典型的L型钙电流，结论：这种心肌细胞分离技术能获得大量具有正常电生理特性的耐钙心肌细胞，可用于心肌细胞离子通道和信号转导机制的研究。     

大鼠心室肌细胞的分离及其钙电流的观察

目的：探讨大鼠心肌细胞酶急性分离的方法，并观察大鼠心室肌细胞膜钙电流。方法：采用Lngendorff灌流装置，用含胶原酶P(0．12g/L)的台式液，经主动脉逆行灌流心脏，分离心肌细胞；采用膜片钳全细胞记录的方法，观察记录大鼠心室肌细胞膜L型钙电流。结果：心肌细胞的存活率约70％-80％，形态呈长杆状，横纹清晰，膜良好。膜片钳全细胞记录出电压依赖性内向电流，其激活电位-30mV，最大激活电位0mV，反转电位50mV，并且此内向电流可被钙通道阻滞剂维拉帕米抑制。结论：用此法可分离出高存活率的心肌细胞，并具有正常的电生理特性。     

豚鼠心肌细胞分离方法及电生理特性的观察

目的：建立膜片钳实验室单个心肌细胞的分离方法和膜片钳技术平台.方法：采用酶解法分离豚鼠心室肌细胞;在膜片钳全细胞模式下记录不同基础刺激周长时的动作电位以及L-型钙电流、延迟性整流钾电流.结果：酶解法分离豚鼠心室肌可以得到90%的存活细胞;豚鼠的单个心室肌细胞静息电位为（-74.0±2.2）mV,基础刺激周长1 000 ms时复极90%的动作电位时程（APD90）为（313.2±20.72） ms;APD90和复极50%的动作电位时程（APD50）均随着基础刺激周长的延长而延长.L-型钙电流峰值电流密度为（-7.36±1.10）pA/pF,0.1 mmol/L verapamil灌流后为（-1.22±0.49 ）pA/pF,100 μmol/L CdCl2灌流后内向电流消失;延迟性整流钾电流密度为（4.88±0.96）pA/pF,2 μmol/L Dofetilide灌流后降低为（3.48±0.37）pA/pF.结论：酶解法分离的豚鼠心室肌细胞可以满足膜片钳实验的要求,此膜片钳技术可作为更深入电生理研究的平台.     

细胞外液成分对耐钙心肌细胞急性分离及电生理记录的影响

目的 探讨细胞外液成分对获取适于电生理研究的耐钙心室肌细胞及对L-型钙通道电流(ICa-L)、延迟整流钾电流(IK)记录的影响. 方法 家兔心室肌细胞急性分离采用Langendorff灌流装置及酶解分离技术,心脏灌流前实验组细胞外液为正常台氏液,对照组细胞外液为无钙台氏液,观察细胞外液中的钙离子对获取适于电生理记录的单个耐钙心肌细胞的影响;应用全细胞膜片钳技术,实验组分别以含BaCl2的台氏液及N-甲基-D-葡萄糖胺(NMDG)溶液作为细胞外液记录ICa-L及IK,对照组为正常台氏液. 结果与对照组相比较,实验组心室肌细胞存活率和耐钙心肌细胞存活率均明显升高(71% ±9.7% vs 55% ±10% ;52%±7.9% vs 39%±11% ,n=10,P＜0.05);实验组引出的ICa-L峰值电流大于对照组,且幅值稳定;实验组IK时间依赖性外向电流及尾电流随去极化时间延长增大作用更明显(1.39±0.05 pA/pF vs 0.53±0.14 pA/pF; 0.74±0.09 pA/pF vs 0.39±0.13 pA/pF,n=10,P<0.05).结论 细胞外液中的钙离子有助于获取耐钙心肌细胞,以含BaCl2的台氏液及NMDG溶液作为细胞外液易于获得典型而稳定的ICa-L及IK.     

昆明小鼠心室肌细胞分离及钙电流观察

目的：探索建立简单实用的小鼠心肌细胞分离方法并观察其钙电流特征,以便有利于心肌细胞电生理和分子生物学研究。方法：采用下腔静脉灌流,原位主动脉插管和胶原酶Ⅱ消化法得单个心肌细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态,台盼蓝染色判定心肌细胞活力,利用全细胞膜片钳技术记录钙电流。结果：分离得到的心肌细胞数量多、存活率高、杆状、横纹清晰、折光性好、静止、贴壁良好。逐步复钙后可获得50%～60%耐钙细胞,单个心肌细胞在全细胞膜片钳模式下可记录到典型的L-型钙电流,在细胞外液加入尼群地平后L-型钙电流消失。结论：该心肌细胞分离方法简单实用,重复性好,所获得的单个心肌细胞具有正常的电生理活性。     

豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察

目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.     

豚鼠心房肌细胞的分离及其电生理特性

目的 建立单个心房肌细胞的急性分离方法并记录其电生理特性。方法 采用改进的酶解分离法分离单个细胞并经膜片钳全细胞记录法进行鉴定。结果 采用本方法分离出典型的豚鼠单个心房肌细胞并记录到豚鼠心房细胞毒蕈碱型钾电流及L－型钙电流。结论 此方法简单、快捷，分离出的心房肌细胞具有正常的电生理特性。     

间羟胺对大鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响

目的观察α肾上腺素能受体激动剂间羟胺对大鼠心室肌动作电位及L-型钙电流的影响。方法采用全细胞膜片钳方法,记录离体大鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙电流。结果 200μmol/L间羟胺可使心室肌细胞L-型钙电流增大（P〈0.05）,动作电位时程（APD）明显延长（P〈0.01）,动作电位复极50%和90%时间（APD50and APD90）明显延长（P〈0.01）。100μmol/L酚妥拉明可使增大的的L-型钙电流和APD、APD50、APD明显恢复。结论间羟胺可明显延长大鼠心室肌动作电位时程,而酚妥拉明可不同程度地拮抗此效应。     

单个人心房肌细胞急性分离技术及其细胞膜瞬时外向钾电流的记录

目的建立单个人心房肌细胞的急性分离技术,以满足检测人心肌细胞离子通道的需要。方法两步酶解法消化分离人心房肌细胞,采用膜片钳全细胞技术记录瞬时外向钾电流（I_to）。结果根据患者的性别、年龄及组织块的大小,选择适当的消化时间,分离得到结构清晰,横纹清楚,边缘整齐,少颗粒,舒展伸直,呈长杆状的单个心肌细胞：采用全细胞膜片钳技术能记录到瞬时外向钾电流。结论该方法能分离到形态和状态均良好的细胞,有利于进行单个人心房肌细胞膜片钳实验的研究。     

多用途成年大鼠心室肌细胞分离方法

目的 建立稳定的可同时用于细胞培养和膜片钳实验的成年大鼠心室肌细胞的分离方法 .方法 应用Langendorff灌流.生物酶消化法分离耐钙心肌细胞.分别用左右心室肌做细胞培养和全细胞膜片钳研究.结果 左室心肌细胞数(3.7±0.6)× 10~6,杆状细胞得率(84.85±2.7)%.右室心肌细胞横纹清晰,折光率好,膜片钳实验时容易封接破膜,记录到典型的I_(Ca).L、I_(K1)、I_(to)、I_(Na)电流.结论 该方法 简单、节约、重复性好,改善了杆状细胞得率、细胞质量,左右心室肌细胞分别能很好地用于细胞培养和膜片钳实验.     

心肌肥大大鼠心肌细胞的分离及L型钙电流的记录

【目的】分离耐钙的心肌肥大大鼠心肌细胞，并记录其L型钙电流，比较正常心肌与肥大心肌细胞L型钙电流的不同。【方法】利用腹主动脉缩窄法建立高血压性心肌肥大模型，采用离体大鼠心脏Langendorff灌注法急性分离心肌细胞，利用膜片钳技术记录L型钙电流。【结果】心肌肥大大鼠心肌细胞钙电流密度显著大于正常大鼠心肌细胞的电流密度（P〈0．05）。【结论】肥大心肌细胞L型钙电流的增加直接导致动作电位时程增加，这可能为心律失常的主要原因之一。     

甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响

目的:观察甲基强的松龙(mPSL)对MC3T3-E1成骨细胞L-钙通道电流(L-type voltage-sensi-tive calciumchannels current,L-VSCCsC)的影响。方法:设A组(正常对照组)、B组(10-6mol/L)、C组(10-5mol/L)和D组(10-4mol/L),各浓度的mPSL作用24h后,膜片钳技术记录每组细胞的L-VSCCsC(nA)。结果:正常对照组峰值电流为(-0.2284±0.0209,nA);10-6mol/L组为(-0.1991±0.0158,nA)下降12.8%;10-5mol/L和10-4mol/L组分别为(-0.1839±0.0179,nA)、(-0.1610±0.0033,nA)分别下降19.5%和29.5%,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:mPSL剂量依赖性抑制成骨细胞L-VSCCsC。     

不同用途的心室肌细胞的分离

目的 :建立适合于不同用途的心室肌细胞的酶解分离方法。方法 :恒流 Langendorff灌流 ,I型胶原酶酶解分离 ,应用膜片箝技术记录离子电流、双波长显微荧光光度术检测细胞内游离钙离子浓度及视频跟踪系统测定心肌单细胞收缩。结果 :采用不同分离技术参数获得的心肌细胞能满足上述三种实验条件下的要求。酶解分离的单个心室肌细胞静息电位为 (- 74 .0 6± 4 .5 4 ) m V,记录到心室肌细胞典型的钾、钠、钙离子电流和稳定的心室肌细胞内游离钙比值 ,心室肌单细胞收缩特性稳定。结论 :通过调整分离技术参数获得的心室肌细胞性能稳定 ,具有正常的电 -机械生理特性和耐钙性。     

降纤酶对大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞动作电位和L型钙电流的影响

目的　探讨降纤酶对大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞动作电位和 L型钙电流的影响。方法　制成大鼠急性心肌梗死模型, 分两组, 一组对照, 另一组腹腔注射降纤酶0. 2 U/ (100g·d), 共 7 d, 酶解分离梗死周边区心室肌细胞, 采用全细胞膜片钳技术记录其动作电位和 ICa,L。结果　降纤酶组梗死周边区心室肌细胞 ERP/APD90增大, 受抑制的 ICa,L有所恢复, 峰电流密度显著增大, I V曲线下移, 失活曲线右移, 失活后再恢复速度加快。结论　降纤酶使急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞ERP/APD90增大, ICa,L有所恢复, 因此具有减少急性心肌梗死后室性心律失常和改善心功能的作用。     

犬心房肌细胞分离及其L型钙通道电流检测的研究

目的探讨一种稳定可靠的犬心房肌细胞的分离方法,提高膜片钳的实验成功率并检测L型钙通道电流。方法采用改良Langderoff灌流系统行主动脉逆行灌注,采用选择性冠状动脉插管的方法,获得单个心房肌细胞。在显微镜下观察细胞形态,并应用膜片钳全细胞模式记录L型钙通道电流。结果分离细胞存活率为70%～80%,复钙后细胞存活率为30%～40%,耐钙细胞形态呈杆状,折光性强,横纹清晰,并能稳定记录L型钙通道电流。结论改良Langderoff技术有助于稳定分离出存活率高、具有正常电生理特性的犬心房肌细胞,能用于心房肌细胞离子通道的研究。