湖北十堰地区幽门螺杆菌与原发性肝癌相关性研究

目的 探讨十堰地区原发性肝癌与幽门螺杆菌感染之间的关系. 方法 80例原发性肝癌组织标本和10例正常肝组织标本,分别采用螺杆菌培养、PCR扩增细菌16SrDNA通用序列以及幽门螺杆菌特异基因(26 kD基因)和相关功能基因(cagA、vacA、rps4、glmM)、免疫组化法检测各组织标本中有无幽门螺杆菌感染. 结果 ①未能从组织标本中培养出螺杆菌.②80例癌组织标本中有50例检出16SrDNA基因,阳性率为62.5%;正常肝组织未检出;50例16SrDNA基因阳性标本中有8例cagA基因阳性(16%),37例26 kD基因阳性(74%),9例glmM基因阳性(18%),未能扩增出vacA基因以及rps4基因.③80例肝癌组织标本中26例检出幽门螺杆菌,阳性率为32.5%,正常肝组织中未检出. 结论十堰地区原发性肝癌组织内存在幽门螺杆菌基因物质,且感染率较高,幽门螺杆菌的感染与原发性肝癌的发生存在相关性.     

原发性肝癌组织中螺杆菌相关基因的检测

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)与螺杆菌感染关系.方法 选取经病理诊断的38例HCC病人的癌组织作为实验组,28例非肝癌肝病组织、29例胃癌组织、18例结肠癌组织和18例子宫肌瘤组织作对照组.采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌属16S rRNA基因,扩增产物经Southern杂交确认,并进行测序及同源性比较.阳性者再扩增幽门螺杆菌的特异基因26-kDa 及相关基因cagA、vacA、rps4、glmM以进一步验证是否为幽门螺杆菌感染.结果 38例HCC标本中有27例检出螺杆菌属16S rRNA基因,阳性率为71.1%;29例胃癌标本有23例检出螺杆菌属16S rRNA,阳性率为79.3%,两组比较差异无显著性(P>0.05);与其他对照组(均未扩增出16S rRNA基因)比较差异有显著性(χ2=24.70～33.67,P<0.01).16S rRNA PCR 产物经Southern杂交证实为幽门螺杆菌.序列测定表明,HCC和胃癌组织中的螺杆菌16S rRNA序列与幽门螺杆菌序列有97.8%的同源性.Hp特异相关基因检测结果,26-kDa基因扩增阳性率82.0%;cagA基因扩增阳性率18.3%;glmM基因扩增阳性率15.0%;均未扩增出vacA和 rps4基因.结论 HCC病人肝组织中存在螺杆菌感染且感染率较高,螺杆菌感染与HCC可能存在相关性.     

南北方食管癌高、低发病区患者幽门螺杆菌感染分析

目的比较幽门螺杆菌(Hp)感染在南北方食管癌高、低发病区之间的异同,探讨Hp感染在食管鳞癌发生过程中的作用机制。方法选择南方食管癌高发区、低发区食管癌标本各40例,北方食管癌高发区、低发区食管癌标本各40例,另选择同地区正常食管组织标本各20例,运用实时荧光定量PCR方法扩增Hp特异基因glmM,判断食管癌组织及正常食管组织中是否存在Hp感染。结果南北方各自食管癌高发病区Hp感染高于食管癌低发病区,差异具有统计学意义(P<0.05)。北方食管癌高发病区食管鳞癌组织和正常食管组织的Hp感染率分别高于南方,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hp感染可能是食管鳞癌发生和发展的一个主要因素事件。     

慢性肝脏疾病患者肝组织中螺杆菌相关基因16SrRNA的检测

目的对慢性肝脏疾病患者肝组织中螺杆菌(Hp)基因16SrRNA进行检测,了解慢性肝脏疾病患者肝组织中Hp感染状况,进一步揭示Hp感染与慢性肝脏疾病的关系。方法(1)收集肝穿活检和手术治疗肝脏组织标本,其中正常人、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者肝组织各30例,经病理证实。(2)应用PCR扩增Hp16SrRNA基因及测定序列。结果肝组织16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,于紫外检测仪下均可见16SrRNA基因阳性扩增带为109bp;18例原发性肝癌标本检出Hp16SrRNA基因,阳性率60.0%;14例肝硬化标本检出检出Hp16SrRNA基因,阳性率47%;正常人、慢性肝炎组均无检出检出Hp16SrRNA基因。肝组织螺杆菌16SrRNA测序对比分析,与Hp16SrRNA片段的基因有98.8%同源性。结论慢性肝脏疾病患者肝组织中存在Hp,Hp感染与肝癌可能存在相关性。     

螺杆菌感染与原发性肝癌的相关性研究

目的　探讨螺杆菌感染与人类原发性肝癌(PLC)的相关性。方法　选取 21例PLC患者的肝癌组织为研究对象(实验组), 12例非肝癌手术患者的肝组织作对照组。参照文献设计螺杆菌属细菌 16SrRNA基因特异性引物,进行聚合酶链反应 (PCR)扩增,扩增产物经Southern杂交证实,并将PCR产物进行测序及同源性比较。同时,将两组标本制成病理切片用于螺杆菌属的cDNA mRNA原位杂交实验。通过定性和定位测定评价肝组织螺杆菌感染与PLC的相关性。结果　实验组 62%(13 /21)的肝癌组织中检出螺杆菌属 16SrRNA存在,而对照组无阳性检出 (P<0 .01)。所有PCR产物经Southern杂交得到证实。利用原位杂交技术检测实验组和对照组标本螺杆菌属 16SrRNA mRNA,实验组有 13例阳性,对照组均为阴性 (P<. 0 01 )。比较显示,肝癌组织中的螺杆菌属16SrRNA序列与幽门螺杆菌的 16SrRNA序列有 97 80%的同源性。结论　PLC患者肝组织中可能存在螺杆菌属感染且感染率较高,提示螺杆菌感染与PLC的发生可能存在某种相关性。     

肝硬化患者肝组织中螺杆菌感染状况

目的 研究肝硬化患者肝组织中螺杆菌(Hp)感染状况,进一步揭示Hp感染与肝硬化的关系.方法 (1)收集正常人、慢性肝炎、肝硬化患者肝组织各30例.(2)在微需氧环境(5%O2、10%CO2、85%N2),37℃培养肝脏组织中Hp.(3)免疫组化,肝脏组织均经常规脱水,石蜡包埋,4μm连续切片,HE染色,光镜观察.(4)应用PCR扩增螺杆菌属16S rRNA基因及序列测定.结果 (1)所有肝组织培养均未见细菌生长.(2)免疫组化显示5例肝硬化组织中观察到Hp存在,检出率为16.8%.正常肝组织、慢性肝炎患者肝组织中未观察到Hp存在,与肝硬化组织差异有统计学意义(p＜0.05).(3)30例肝硬化标本有14例检出螺杆菌16S rRNA基因,阳性率47%;正常人、慢性肝炎组织均无检出螺杆菌16S rRNA基因.肝硬化患者肝组织16S rRNA PCR扩增产物测序对比分析,与Hp16S rRNA片段的基因有98.8%同源性.结论 肝硬化患者肝组织中存在Hp,Hp感染与肝硬化可能存在相关性.     

球形幽门螺杆菌vacA基因的克隆及序列测定

目的：克隆球形幽门螺杆菌(HpC)vacA基因全长片段，并进行序列分析。方法：采用亚抑菌浓度的抗生素作用，使幽门螺杆菌(Hp)标准株NCTC11637发生球形变异，收集球形Hp。从HpC基因组DNA中特异扩增出vacA基因片段，扩增的目的片段经纯化回收后克隆到pMD-18T中，转化人大肠杆菌JM109。阳性重组质粒用PCR及双酶切鉴定，并进行序列测定。结果：从HpC基因组DNA中扩增出3888bp的vacA基因，构建重组质粒pMD-18T-vacA，酶切产物的大小与预期相符。测序结果显示，HpC与已公布的HpvacA基因序列的同源性达99.8％。结论：成功地对HpC vacA基因进行体外扩增及构建原核重组质粒pMD-18T-vacA，并经酶切及序列分析所验证，证明HpC含有完整的vacA基因，其可能与Hp的致病性有关。     

肝癌患者肝组织中螺杆菌感染研究

目的 研究肝癌患者肝组织中螺杆菌(Hp)感染状况,进一步揭示Hp感染与肝癌的关系.方法 收集正常人、慢性肝炎、肝癌患者肝组织各30例,均经病理证实.(1)在微需氧环境37℃下应用哥伦比亚培养基分离培养肝脏组织中Hp.(2)系列生化反应和速尿素酶检测.(3)免疫组化.(4)应用PCR扩增螺杆菌属16S rRNA基因及序列测定.结果 (1)所有的肝组织培养均未见细菌生长;(2)正常人、慢性肝炎患者肝组织快速尿素酶检测阳性率为0,肝癌为3%;1例肝癌组织硝酸盐试验和过氧化氢酶检测阳性.(3)免疫组化示9例肝癌组织发现Hp,检出率为30.0%.正常肝组织、慢性肝炎患者肝组织中未观察到Hp,与癌组织差异有统计学意义(P<0.05).(4)PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,于紫外检测仪下均可见16S rRNA基因阳性扩增带为109 bp;30例原发性肝癌标本中有18例Hp16S rRNA基因,正常人、慢性肝炎组均无检出Hp 16S rRNA基因,与癌组织差异有统计学意义(P<0.05).肝组织16S rRNA PCR扩增产物测序对比分析,与Hp 16S rRNA片段的基因有98.8%同源性.结论 肝癌患者肝组织中存在Hp感染,可能与肝细胞癌存在相关性.     

神经生长因子在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达

目的对贵州小型猪幽门螺杆菌进行分离鉴定。方法采集1只生长发育异常迟缓的小型猪标本,采用细菌学分离培养、生化鉴定、药敏试验、血清学试验、PCR检测等方法进行鉴定,并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到1株细菌,经鉴定为幽门螺杆菌（HPp0812）。用螺杆菌属16SrRNA基因和幽门螺杆菌ureA基因特异引物对HPp0812细菌的PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与幽门螺杆菌参考株基因序列同源性高达99％。结论首次从中国小型猪中分离到了幽门螺杆菌,为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。     

用PCR扩增16Sr RNA基因鉴定幽门螺杆菌的细胞壁缺陷型

目的：探讨幽门螺杆菌及其稳定L型的检测与鉴定方法。方法：用抗生素诱导、滤菌器过滤、非高渗透压培养基培养获得幽门螺杆菌稳定L型纯培养物,对幽门螺杆菌及其稳定L型进行16SrRNA基因的PCR扩增及序列测定。结果：幽门螺杆菌及其稳定L型的16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖电泳,在紫外检测仪下可见550 bp的DNA条带,测序结果经NCB I B last分析比对,基因同源性可达100%。结论：16SrRNA基因PCR检测可用于幽门螺杆菌L型及其他形态变异的菌种鉴定。     

幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30
只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌
喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNA V6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度
凝胶技术（PCR-DGGE）对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-D Analysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图
谱上的组间差异条带用16S rDNA V6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果DGGE指纹图谱分析显示,实验
组DNA条带数量极显著高于对照组（P<0.01）,多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组（0.01好地在相似性系统树中分开,主成分分析不同组的菌群分别聚集在不同的位置,BLAST比对分析感染组出现特有细菌。结论
食道下端定植着以乳杆菌、拟杆菌为优势菌的稳定菌群,幽门螺杆菌感染后菌群结构变化为以葡萄球菌、不动杆菌、无芽胞杆菌
为优势菌的菌群。
     

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及鉴定

目的 构建幽门螺杆菌(Hp)中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)DNA疫苗。方法 扩增全长napA(编码HP-NAP)，将其与克隆载体pBT连接，经测序及同源性分析后，将相应片段亚克隆入真核表达载体pIRES，经双酶切及PCR鉴定。结果 PCR扩增-435bp产物，核苷酸序列测定及BLAST分析表明，所克隆序列与基因库中Hp悉尼株(SS1)napA核苷酸及蛋白质的同源性均为98％。ANTHEPROT软件预测其蛋白质具有良好的疏水性和抗原性。经PCR及双酶切鉴定，证实成功构建携带，napA的重组真核表达质粒plRES-napA。结论 成功构建并鉴定了HP-NAP重组DNA疫苗，为进一步研究其免疫原性及研制口服DNA疫苗奠定了基础。     

Helicobacter pylori and other enteric bacteria in freshwater environments in Mexico City

BACKGROUND: Helicobacter pylori infection is common in the Mexican population; however, sources, routes, and risk factors for infection as well as mode of transmission remain unclear. METHODS: H. pylori was detected by polymerase chain reaction (PCR) technique in three aquatic systems located in the Mexico City area. In addition, microbiologic cultures and physicochemical parameters were measured. The systems were sampled over an 18-month period (1997-1999), resulting in a total of 212 samples for the different analyses. RESULTS: Twenty-one percent of the samples (16/77) were positive for H. pylori; of these, 42% (5/12) were confirmed for cagA gene detection by PCR hybridization. Microbiologic samples (n = 74) yielded Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Aeromonas veronii, and Vibrio fluvialis. In the samples for physicochemical analyses (n = 61), low concentrations of dissolved oxygen were detected and residual chlorine was less than the inactivation dose, both providing conditions for potential survival of H. pylori and other enteric pathogens in these environments. CONCLUSIONS: The results of this study suggest that, in Mexico City, water used for human consumption and irrigation may play an important role as a vehicle in the transmission of H. pylori as well as infection by other known enteric pathogens.     

高效表达幽门螺杆菌黏附素Hp0410的嗜酸乳杆菌重组菌株的构建

目的构建高效表达幽门螺杆菌黏附素Hp0410的嗜酸乳杆菌重组菌株。方法从幽门螺杆菌标准株NCTC11639中扩增出幽门螺杆菌黏附素基因Hp0410,克隆入穿梭质粒pMG36e中,通过电穿孔将重组质粒转入嗜酸乳杆菌,表达的目的蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳与硝酸银染色及Western blotting鉴定,并检测重组质粒的稳定性。结果扩增的黏附素Hp0410基因与基因库公布的一致,构建的重组质粒成功转入嗜酸乳杆菌中,表达出分子量约34kD的目的蛋白,Western blotting证实该蛋白可被幽门螺杆菌感染患者血清所识别。重组质粒pMG36e-Hp0410在含有红霉素和不含有红霉素的环境下均稳定。结论成功构建了高效组成型表达幽门螺杆菌黏附素Hp0410的重组嗜酸乳杆菌菌株。     

幽门螺杆菌flaA基因在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的：观察幽门螺杆菌(H．pylori)flaA基因在大肠杆菌中的表达。方法：用PCR方法扩增flaA基因,然后插入原核表达载体pMAL-c2x进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果：特异PCR和酶切鉴定证实flaA基因克隆入表达载体,并以融合蛋门形式MBP-FLA高效表达,约占细胞总蛋白的28％。该融合蛋白可与H.pylori阳性病人血清和小鼠H.pylori全菌抗体发生特异反应。结论：成功构建了能高效表达H．pylori FlaA蛋白的重组质粒,为H．pylori多价基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

Cloning of the Gene Encoding Urease Subunit.A in Helicobacter Pylori

Themostefficient ,economicalapproachwithlowriskofadversereactiontothepreventionandcon trolofHelicobacterpylori (H .pylori)infectionistousevaccine .UreaseanditssubunitAisproventobethemainvaccineagainsttheinfectionofH .pylori.Inordertoexpresstheureasesubuni…