白细胞介素-1β及其Ⅰ型受体mRNA在大鼠颈动脉体中的表达

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）及其Ⅰ型受体（IL-1RI）mRNA在大鼠颈动脉体中的表达。方法原位分子杂交、免疫荧光双重染色和Western blotting。结果原位分子杂交结果显示，IL-1RI mRNA阳性信号出现在颈动脉体球细胞中；免疫荧光双重染色结果显示，IL-1β表达在颈动脉体球细胞中；Western blotting结果进一步证明，IL-1β阳性反应条带出现在18kD处，与其分子量一致。结论大鼠颈动脉体球细胞不仅表达IL-1RI，而且也表达其配体IL-1β。     

氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达

目的：研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法：离体培养免主动脉血管平滑肌细胞，分别用胆固醇、Triol与25-OH负载细胞，狭缝杂交测定TIMP-1mRNA表达，细胞免疫化学测定MMP-9与ITMP-1蛋白表达。结果：Triol与25-OH(1mg/L,24h）抑制TIMP-1 mRNA及蛋白表达，对MMP-9蛋白表达无影响。结论：氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP-1基因表达。     

TGF-β对WB鼠肝脏上皮细胞内Ⅰ型IP3受体表达的影响

目的：探讨TGF-β对WB鼠肝脏上皮细胞内Ⅰ型玛受体表达的影响。方法：通过对WB细胞的培养，应用Western blot和RT-PCR技术分别检测在TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型玛受体蛋白和mRNA的表达。结果：TGF-β刺激不同时间后WB细胞内Ⅰ型玛受体蛋白和mRNA的表达均有所增加，8小时的表达达到最高峰，然后开始下降。结论：TGF—β可增强WB细胞内Ⅰ型毋受体蛋白和mRNA的表达。     

天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白促进动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA

目的：探讨天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白（n-LDL，n-VLDL，ox-LDL，ox-VLDL）是否能促进培养的动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 (MIP) 1α mRNA。方法： 将培养的兔主动脉平滑肌细胞暴露于上述4种脂蛋白后，分别用原位分子杂交法及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其MIP-1α mRNA的表达。结果： 培养的兔主动脉平滑肌细胞能表达低水平的MIP-1α mRNA，4种脂蛋白均能增强平滑肌细胞表达MIP-1α mRNA，氧化型脂蛋白作用强于天然型脂蛋白，其中又以ox-VLDL作用最强，组间差异有极显著意义（P<0.01）。结论： n-LDL，n-VLDL，ox-LDL和ox-VLDL可能通过诱导平滑肌细胞表达MIP-1α， 从而在动脉粥样硬化早期病变的形成中起重要作用。     

IL-18信号转导途径研究进展

白细胞介素18(IL-18)是新近发现的细胞因子,其独特的少TATA型启动子、特殊的mRNA结构及其前体蛋白需IL-1β转化酶(ICE)加工成熟的特点,使得IL-18基因可广泛表达于多种类型的细胞。IL-18与IL-18受体结合组成受体复合物,受体复合物信号通过IRAK-TRAF6途径激活NF-кB,及通过酪氨酸蛋白激酶(PTK)的LCK-MAPK信号途径诱导TH1细胞产生IFN-γ、IL-2等细胞因子。IL-18通过AP-1位点调节IFN-γ启动子活性,而IL-12则需要通过STAT4和AP-1两个位点共同调节IFN-γ启动子的活性。     

激活素A对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的：探讨激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用及其机制。方法：免疫组化观察激活素ⅡA型受体（ActRⅡA）在巨噬细胞上的表达，ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中IL-1β分泌水平，采用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-1βmRNA、ActRⅡA mRNA及激活素受体相互作用蛋白2（ActRIP2）mRNA的表达。结果：激活素A可以促进原代培养小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1β mRNA表达，并呈剂量依赖关系；激活素A对LPS活化的小鼠原代培养腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1βmRNA的表达具有抑制作用，并呈剂量依赖关系。免疫组化染色证实ActRⅡA在巨噬细胞中高表达，激活素A对巨噬细胞表达ActRⅡA mRNA具有促进作用，采用抗ActRⅡA抗体可以阻断激活素A促进IL-1βmRNA表达作用，进一步检测表明激活素作用后ActRIP2 mRNA表达亦增加。结论：激活素与LPS比较可能是IL-1分泌的弱激动剂，激活素单独应用显示刺激IL-1分泌作用，而与LPS共同作用，则呈现抑制LPS强刺激作用；激活素可能通过ActRⅡA-ActRIP2受体信号传导途径，调控巨噬细胞IL-1β分泌与合成。     

氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达

目的:研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法:离体培养兔主动脉血管平滑肌细胞,分别用胆固醇、Triol与25-OH负载细胞,狭缝杂交测定TIMP-1mRNA表达,细胞免疫化学测定MMP-9与TIMP-1蛋白表达。结果:Triol与25-OH(1 mg/L,24 h)抑制TIMP-1 mRNA及蛋白表达,对MMP-9蛋白表达无影响。结论:氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP-1基因表达。     

子痫前期血清通过PLCγ1-IP3R信息途径促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子聚集

目的探讨子痫前期血清对脐动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响以及磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）-三磷酸肌醇受体（IP3R）信息途径对其的调控作用。方法体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,子痫前期血清处理共培养细胞,MTT检测平滑肌细胞活力,Western blot检测PLc—γ1（磷酸化）、三磷酸肌醇受体（IP3R）活性,Fluo-3／AM检测平滑肌细胞内钙离子浓度,PLC-γ1siRNA沉默平滑肌细胞PLC-γ1表达后,观察子痫前期血清对共培养平滑肌细胞IP3R及细胞内钙离子浓度变化的影响。结果子痫前期血清可促进共培养平滑肌细胞PLC-γ1、IP3R磷酸化及钙离子浓度,平滑肌细胞PLC-γ1沉默可逆转子痫前期血清引起的共培养平滑肌细胞内IP3R活性及细胞内钙离子增加。结论子痫前期血清通过PLC—γ1-IP3R信息通路促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子增加,PLC-γ1-IP3R激活引起平滑肌细胞内钙离子增加可能在子痫前期血管平滑肌细胞病理过程中起重要作用。     

二甲双胍对脂多糖诱发的血管内皮细胞炎性损伤的影响

目的探讨二甲双胍(Metformin, Met)对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱发的人主动脉内皮细胞HAEC炎性损伤的影响及作用。方法体外培养人主动脉内皮细胞株HAEC,随机分为4组:正常对照组,LPS组(1μg/mL LPS),2.5mmol/L Met预处理+LPS组,5 mmol/L Met预处理+LPS组。MTT法检测细胞生存活性;Western Blot检测细胞内cleaved-caspase-3的表达;ELISA法检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。实时PCR检测IL-1βmRNA、IL-6mRNA、TNF-αmRNA表达。结果与正常对照组相比,LPS组细胞生存率明显降低,细胞内的cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高。2.5mmol/L Met、5mmol/L Met预处理12h后,能显著减轻LPS诱发HAEC细胞炎性损伤,并存在剂量依赖性。而且细胞内的IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA表达明显低于LPS组。结论二甲双胍拮抗LPS诱发的HAEC细胞炎性损伤,与降低细胞内IL-1βmkHA、IL-6mkHA、TNF-αmRNA的表达,从而抑制炎症因子的释放相关。     

内毒素和γ-干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体-β类Ⅰ型表达的影响

目的：探讨内毒素、γ-干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体-β类Ⅰ型(SR-β1)表达及功能的影响。方法：采用Northern blot及蛋白质免疫印迹法测定经内毒素和干扰素处理后的巨噬细胞SR-β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平的表达。结果：用内毒素处理巨噬细胞8h可使SR-β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平均下调(54％和53％)，而干扰素则可使之下调57％和54％，并呈现浓度依赖性和时间依赖性。结论：(1)内毒素、干扰素在mRNA和蛋白双重水平下调SR-β1的表达，明显降低SR-β1调节胆固醇代谢的作用。(2)内毒素通过降低SR-β1的表达及功能，在动脉粥样硬化过程中起着不可忽视的作用。     

油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达

目的 探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用.方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量.结果 油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖.油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达最大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍.IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达最大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍.200 μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29 ±0.22)比较P＜0.05.LPS组TR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P＜0.05).结论 油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达.     

调节IL-1受体转位至焦点附着斑的观察

目的 探讨影响I型IL-1受体(IL-1RI)转位至焦点附着斑的相关因素。方法 将含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组型和突变型(C末端突变)IL-1RI质粒转染进入成纤维细胞，细胞生长于有或无纤维粘连蛋白的培养皿上，用激光共聚焦显微镜直接观察所表达的融合蛋白在细胞内的定位，IL-1β刺激后发生转位，并观察经免疫细胞化学染色后，细胞骨架蛋白Vinculin的位置。结果 转染了重组型IL-1R1质粒的细胞生长在纤维粘连蛋白上，表达的受体融合蛋白与Vinculin位于细胞膜的焦点附着斑，用IL-1β刺激可致受体转位至细胞内。转染突变型质粒的细胞，表达的融合蛋白位于胞质的核周区域，IL-1β刺激后不产生转位。结论 I型受体转位至焦点附着斑需要Vinculin等细胞外基质的参与并与受体C-末端保守结构域有关。     

佛波酯敏感的PKC介导IL-6上调大鼠血管平滑肌细胞bFGF蛋白表达

目的:观察蛋白激酶C(PKC)途径在白细胞介素 6(IL-6 )上调大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)中的作用。方法:采用大鼠主动脉贴块法培养VSMC,以佛波醇 12,13-二丁酸盐预耗竭细胞内PKC,Western免疫印迹法观察IL-6对VSMCbFGF和成纤维细胞生长因子 1型受体蛋白表达的影响。结果:IL-6在 0-10 0g/L剂量范围内上调bFGF蛋白,并呈量效关系,表达高峰为 2 4h。细胞内佛波酯敏感的PKC预耗竭后该上调作用显著下降。IL-6对VSMC成纤维细胞生长因子 1型受体蛋白表达无影响。结论:IL-6上调大鼠VSMCbFGF蛋白水平,上调作用呈佛波酯敏感的PKC依赖性.     

IL-18对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的：研究IL-18对体外培养肾小管上皮细胞表型转化的影响，以明确IL-18在慢性肾脏疾病中的可能作用机制。方法：应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞侏（HK-2）。应用RT-PCR技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA水平，用免疫细胞化学方法（ICC）及Western blot技术分别检测IL-18对HK-2细胞表达仪-SMA蛋白的影响。结果：（1）IL-18可促进HK-2细胞表达α-SMA、TGF-β1 mRNA，且两者之间呈正相关（P〈0．05）。（2）IL-18增加α-SMA阳性HK-2细胞百分数（P〈0．05）。（3）IL-18使HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平增加。结论：IL-18可剂量和时间依赖性地促进肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞，促进肾间质纤维化。     

RIPK2介导自噬对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞ROS、caspase-1及IL-1β表达的激活作用

目的观察受体结合丝氨酸/苏氨酸激酶2(RIPK2)介导自噬对高糖诱导的肾系膜细胞(GMCs)ROS、caspase-1及IL-1β表达的调控。方法体外培养正常小鼠GMCs,高糖作为刺激因子,设计siRNA靶向沉默RIPK2表达并构建自噬双荧光(mRFP-GFP-LC3)标记体系,激光共聚焦显微镜观察自噬流变化;DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平;Western blot及RT-PCR检测RIPK2、LC3Ⅱ/Ⅰ、caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达;ELISA检测IL-1β的分泌。结果 1)高糖呈时间-浓度依赖性增加细胞内ROS水平,诱导caspase-1和IL-1β表达(P0.05)。2)短期(0~12 h)高糖刺激可诱导RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达(P0.05),超过12 h后RIPK2和LC3Ⅱ/Ⅰ表达下调(P0.05)。3)siRNA靶向沉默RIPK2下调LC3Ⅱ/Ⅰ表达和细胞自噬流形成,上调细胞内ROS、caspase-1及IL-1β表达(P0.05)。结论 RIPK2介导自噬负性调控高糖诱导的ROS、caspase-1及IL-1β表达,可能是防治糖尿病肾脏疾病(DKD)的新思路。     

西地那非对勃起功能障碍模型大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路的影响

目的 探讨西地那非(Sil)对勃起功能障碍(ED)大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路蛋白表达的影响作用。方法 建立ED大鼠模型,随机分为ED组、Sil组,另取10只大鼠作为对照组。Sil组给予20 mg/kg西地那非灌胃(1次/d,连续2周)后,HE染色观察主动脉血管组织形态变化;Masson染色检测主动脉纤维化;免疫组化测定主动脉中白细胞介素-1β(IL-1β)和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的含量及分布;RT-qPCR及Western blot检测主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和eNOS的表达。结果 ED组大鼠主动脉血管组织形态发生病理变化,内皮细胞局部脱落较多,纤维化明显;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达均增高,eNOS的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与ED组相比,Sil组大鼠主动脉血管组织形态学病理变化改善,内皮局部细胞脱落减少,纤维化减轻;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达降低,eNOS的mRNA和蛋白表达增...     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。     

IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平

目的探讨白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的白细胞介素18受体β(IL-18Rβ)表达的影响。方法采用反转录PCR和Western blot法检测不同浓度IL-18、TNF-α处理后3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的IL-18RβmRNA及蛋白的表达。结果 10 ng/m L、100 ng/m L TNF-α显著增加3T3-L1脂肪细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达,10 ng/m L、100 ng/m L IL-18显著增加RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达。结论IL-18、TNF-α可能通过促进巨噬细胞、脂肪细胞IL-18R的表达参与糖尿病和肥胖的脂肪组织慢性炎症过程。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。 目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。 结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72 h表达最强,感染率达80%,96 h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

AM1241抑制ADPβS诱发培养大鼠脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体表达及炎症因子释放

目的:离体条件下,观察大麻素CB2受体激动剂AM1241对嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。方法:培养纯化新生SD大鼠(3 d)脊髓背角小胶质细胞,荧光定量PCR技术检测AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)诱发的背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达的影响;ELISA技术检测AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)对ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)诱发的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响。结果:与正常对照组相比,ADPβS(10~(-5)mol/L,3 h)可以刺激脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体在mRNA水平表达上调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α释放相应增加(P0.05)。AM1241(10~(-5)mol/L,1 h)几乎完全阻断ADPβS刺激小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放的效应(P0.05);AM1241的这种抑制效应可以被CB2受体拮抗剂AM630(10~(-5)mol/L,1 h)反转(P0.05)。结论:大麻素CB2受体激活可以抑制ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y_(12)和P2Y_(13)受体mRNA水平表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放。