灵芝孢子油抑制前列腺癌LNCaP细胞中AR激活及转录活性

目的:研究灵芝孢子油对双氰睾酮诱导的前列腺癌LNCaP增殖、雄激素受体AR的激活和转录活性及相关激酶的影响。方法:采用质粒转染、Western blot、CCK-8细胞增殖活性检测及双色荧光素酶报告基因活性等研究灵芝孢子油对雄激素依赖的前列腺癌LNCaP细胞的作用。结果:CCK-8检测显示灵芝孢子油明显降低DHT刺激的LNCaP细胞的增殖活性,同时,Western blot检测表明灵芝孢子油降低了DHT诱导的前列腺癌LNCaP细胞中AR和蛋白激酶D的磷酸化活性,而对其本底蛋白的表达水平无影响。荧光素酶报告基因活性检测进一步表明灵芝孢子油明显抑制DHT诱导的LNCaP细胞中AR的转录激活活性。结论:灵芝孢子油可能通过抑制AR的激活及其转录活性而抑制雄激素依赖的前列腺癌细胞的增殖。     

前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达

目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

多西他赛对雄激素依赖型及非依赖亚型前列腺癌细胞中C-jun与雄激素受体相互作用的影响

目的研究C-jun和雄激素受体（AR)在多西他赛处理的前列腺癌LNCaP细胞及其非雄激素依赖亚型LNCaP-bic细胞中的
相互作用。方法采用多西紫杉醇处理雄激素依赖型LNCaP前列腺癌细胞及其亚型雄激素非依赖型LNCaP-bic细胞,采用荧光
素酶分析检测AR及AP-1基因的表达,利用Western blotting,免疫沉淀方法分析C-jun以及AR的蛋白表达和相互作用。结果
经多西他赛处理后,LNCaP-bic以及其父代LNCaP细胞AR和C-jun在基因表达水平均得到增强。Western blotting提示
LNCaP-bic细胞中C-jun的磷酸化水平高于LNCaP细胞,同时其PSA蛋白表达也更强。免疫沉淀结果提示多西他赛使
LNCaP-bic细胞株中的AR和C-jun有更高的相关作用。结论多西他赛可以激活AR非配体依赖的转录功能,AR和C-jun之间
的相互作用可能影响多西他赛对前列腺癌的化疗结果。
     

姜黄素对前列腺癌LNCaP细胞PSA生成及AR表达的影响

【目的】研究姜黄素对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖的影响。【方法】化学发光法检测不同浓度的姜黄素处理前列腺癌细胞株LNCaP后前列腺特异抗原(PSA)含量,利用荧光素酶报告基因pGL-3构建含PSA基因5’侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,并将其转染LNCaP细胞,不同浓度姜黄素作用24 h后应用荧光素酶测定系统检测荧光素酶表达活性。用免疫印迹Western-blotting技术检测雄激素受体(AR)的表达。【结果】姜黄素抑制LNCaP细胞培基中PSA蛋白及含PSA启动子的荧光素酶活性的表达;形态学结果显示姜黄素可抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖;Western-blotting技术检测结果显示姜黄素抑制AR的表达,并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。【结论】姜黄素对PSA启动子的影响及PSA蛋白表达的抑制作用是通过抑制雄激素受体(AR)的表达实现的,姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖。     

雄激素受体在前列腺癌细胞激素非依赖转化中的表达及调控

目的：研究雄激素受体(androgen receptor, AR)在激素依赖性前列腺癌（androgen dependent prostate can cer, ADPC）细胞系LNCaP转化成激素非依赖性前列腺癌(androgen independent prostate cancer, AIPC)过程中的表达变化,以及其受Wnt信号通路和蛋白酶体降解通路调控的机制。方法：应用活性炭滤过的低激素胎牛血清培养LNCaP细胞,得到雄激素非依赖的LNCaP亚系LNCaP-AI（androgen independent）细胞。应用细胞增殖试验检测LNCaP-AI的细胞生长曲线。应用Western blot、RT-PCR分析激素依赖性转化过程中的AR、前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）的表达变化。在AIPC细胞中,应用Wnt信号通路阻滞剂IWR-1及蛋白酶体通路抑制剂乳胞素（lactacystin）处理细胞,观察Wnt信号通路和蛋白酶体信号通路对AR mRNA及蛋白表达的影响。结果：在体外低激素环境中生长6个月后,LNCaP细胞变成雄激素非依赖性的LNCaP亚系LNCaP-AI。表现为对雄激素依赖性减弱,细胞增殖加快,PSA的表达增高。在转化为LNCaP-AI的过程中,AR mRNA水平短期上调,后恢复到原始水平,但蛋白水平一直处于下调趋势。 IWR-1处理的LNCaP-AI,AR mRNA及蛋白的表达下调。乳胞素处理的LNCaP-AI,AR mRNA无变化而蛋白表达上调。结论：在体外前列腺癌细胞由激素依赖性向非依赖性转化的过程中, AR mRNA表达仅有一过性增高,而蛋白表达呈现明显的下降趋势。进一步研究发现,Wnt信号通路和蛋白酶体通路可能对AR的蛋白表达有调控作用。Wnt信号通路的抑制或蛋白酶体信号通路的增强可能是AR蛋白表达下调的原因。     

Survivin在前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中的表达及意义

目的:探讨Survivin在前列腺癌激素非依赖进展中的可能作用。方法:采用流式细胞术测定前列腺癌雄激素依赖型细胞LNCaP和雄激素非依赖型细胞PC-3在雄激素剥夺时的凋亡情况,进而用Western-Blot鉴定这两株细胞中的Survivin表达情况,初步分析其在前列腺癌的激素非依赖存活中的作用。结果:在去雄激素情况下LNCaP凋亡细胞数显著高于PC-3;同时,Western-Blot证实Survivin在PC-3细胞中的表达显著高于LNCaP细胞。结论:Survivin在雄激素依赖型和雄激素非依赖型的前列腺癌细胞中的表达存在差异,而这种差异可能在前列腺癌细胞雄激素缺失时的生存发挥重要作用。     

PKD3上调前列腺癌细胞中PSA表达及机制

目的 研究蛋白激酶D3(PKD3)对前列腺癌细胞中前列腺特异性抗原(PSA)表达水平的影响及其机制,以期阐明PKD3在雄激素依赖的前列腺癌细胞增殖中的重要作用.方法 首先,在LNCaP细胞中过表达PKD3并以双氢睾酮刺激,而后采用荧光定量PCR扩增PSA的cDNA并使用2-△△α方法比较其相对表达量的变化;其次,在HEK293细胞中,共转染PKD3的野生型质粒(或无激酶活性的突变型质粒)、AR的表达质粒、AR转录活性的报告质粒pMMTV-luc及内参照报告质粒pRL-SV40,并以双氢睪酮刺激后,以Promega的双报告基凶分析试剂盒测定AR的转录活性.最后,利用共聚焦显微技术分析LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在有无双氢睾酮刺激时亚细胞定位的变化和可能的共定位.结果 在LNCaP细胞中,过表达PKD3可明显升高双氢睾酮刺激时PSA的mRNA表达水平(P<0.001).与之相符,在HEK293细胞中,过表达PKD3明显提高双氢睾酮刺激时AR的转录活性(P<0.001),而过表达无激酶活性的PKD3可部分降低AR的转录活性(P<0.01).此外,LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在双氢睾酮刺激时均向核内转位并共定位于核内.结论 PKD3增强双氢睾酮刺激的前列腺癌细胞中AR的转录活性及上调PSA的表达,提示PKD3可能参与雄激素依赖的前列腺细胞的生长和恶性增殖.     

柯萨奇腺病毒受体在前列腺癌细胞中的表达及分析

目的:讨论柯萨奇腺病毒受体(CAR)在前列腺癌恶性进展中的作用。方法:Western-Blot鉴定CAR在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、DU145与PC-3等6种前列腺癌细胞株中的表达情况。结果:CAR在低恶性的LNCaP细胞中表达最高,在高度恶性、有较强远处转移能力的C4、C4-2、C4-2B、DU145与PC-3细胞中的表达呈依次下降趋势,在恶性程度最高的PC-3细胞中最低。结论:CAR在恶性程度不一的前列腺癌细胞中存在表达差异,可能在前列腺癌的恶性进展过程中发挥了重要作用。     

肥大细胞通过上调p21促进前列腺癌神经内分泌分化及增加对多西他赛化疗的抵抗性

目的探索肥大细胞浸润对前列腺癌细胞神经内分泌分化（NED）及多西他赛化疗敏感性的影响。方法利用Transwell小 室将人前列腺癌细胞系（LNCaP和C4-2）与人肥大细胞系（HMC-1）进行共培养,通过sh-AR慢病毒沉默C4-2细胞AR的表达, 通过sh-p21质粒（pLKO.1-sh-p21）和p21过表达质粒（pCMV-p21）转染分别沉默和过表达前列腺癌细胞p21,倒置显微镜观察 LNCaP和C4-2细胞的形态变化,MTT实验及克隆形成实验检测LNCaP和C4-2的细胞增殖能力,CCK8实验检测C4-2在多西 他赛化疗下的细胞活性,RT-qPCR实验及Western blot实验分别检测前列腺癌细胞细胞神经内分泌标志物、AR、p21的mRNA 及蛋白表达量。结果HMC-1细胞共培养可以增加LNCaP和C4-2细胞的NE表型表达,抑制LNCaP和C4-2细胞的增殖能力, 并上调p21的表达（P<0.05）。P21通过不依赖AR的信号通路正向调控前列腺癌细胞NED,敲除p21表达可部分逆转HMC-1共 培养促进NED的作用。同时,肥大细胞共培养后的前列腺癌细胞对多西他赛化疗的抵抗性增加（P<0.05）,敲除p21部分逆转了 肥大细胞提高多西他赛化疗抵抗性的作用。结论肥大细胞可以部分通过上调p21表达促进前列腺癌细胞NED以及增加对多 西他赛化疗的抵抗性。     

慢性再生障碍性贫血患者雄激素及其受体的改变

目的观察慢性再障(CAA)患者血浆雄激素水平和骨髓单个核细胞中雄激素受体的表达,研究雄激素及其受体与CAA病情及治疗反应之间的关系。方法采用放射免疫法测定CAA初发组、CAA治疗组和对照组外周血血浆中的睾酮水平,免疫细胞化学SP法检测三组骨髓单个核细胞(BMMNC)胞浆和胞核内雄激素受体(AR)的阳性表达水平。结果①治疗组外周血血浆睾酮水平显著高于初发组。②CAA初发组BMMNC胞浆和胞核内AR的水平显著低于治疗组和对照组,治疗组AR阳性水平也显著低于对照组。③CAA初发组患者的血浆睾酮含量与其骨髓中的AR水平明显正相关(P<0.05)。④CAA患者骨髓中的AR阳性水平与其外周血中的网织红细胞(RC)百分数正相关(P<0.01),与骨髓非造血细胞百分数负相关(P<0.01)。结论CAA患者发病时BMMNC中AR在胞核和/或胞浆中的表达较正常人减少,因此雄激素刺激骨髓造血的作用减弱。检测CAA发病时AR的表达量可能在CAA的病情监测方面有一定意义。     

核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

目的：探讨位于雄激素受体(androgen receptor, AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor, NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法：绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)融合蛋白表达载体pEGFP-AR(1-918aa),pEGFP-NESAR(743-817aa),pEGFP-NAR (1-665aa)和pEGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体（赖氨酸K突变为精氨酸R）pEGFP-NESAR K776R,pEGFP-NESAR K807R和pEGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果：在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论：核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。     

雄激素受体及相关通道在激素非依赖性前列腺癌中的研究进展

前列腺癌（PCA）是男性泌尿生殖系统的常见肿瘤,其发病率不但在欧美国家高居首位,而且在中国的发病率也呈显著上升趋势。早期,激素依赖性前列腺癌（HDPC）可以通过内分泌治疗达到缩小瘤体、降低血前列腺特异性抗原（PSA）的目的,但在治疗12—18个月后,80％前列腺癌患者逐渐演化为激素非依赖性前列腺癌（AIPC）,导致患者最终死于激枣不敏感细胞的广泛转移。     

Study of Androgen and Androgen Receptor in Relation to Insulin Resistance in Polycystic Ovary Syndrome

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is the mostcommon endocrinopathies of premonopausal womenwith the incidence rate being5 % to2 1 % [1,2 ] .Thedisorder is characterized by anovulation,hyperandro-genism,hyperinsulinism and obesity.Many studiessuggested that insulin resistance play an importantrole in the pathogenesisof PCOS,butthere wasveryfew investigations about androgen and androgen re-ceptor in relation to insulin resistance.The purposeof this study was to investigate the role of serum an…     

内源性雄激素及雄激素受体水平与老年男性冠心病的相关性

目的 探讨内源性雄激素及雄激素受体(AR)水平与老年男性冠心病的相关性.方法 选择冠状动脉造影证实的老年男性冠心病患者237例,对照组59例.所有患者均检测血清中7种内源性性激素水平,包括游离睾酮(FT)、总睾酮(TT)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、性激素结合球蛋白(SHBG)及脱氢表雄酮(DHEA),并用流式细胞术检测外周血淋巴细胞AR水平.结果 冠心病组FT水平低于对照组[(24.1±22.2)×10-9mmol/L比(34.1±31.8)× 10-9mmol/L,P=0.06],其余激素水平差异均无统计学意义(均P＞0.05).两组AR阳性率也差异无统计学意义(56.3%±24.0%比57.1%±20.8%,P＞0.05).Logistic回归分析显示FT降低冠心病发病风险(OR=0.98,95%CI0.973～0.997,P=0.0049).FT与AR阳性率之间呈正相关,而年龄与FT和AR阳性率呈负相关.结论 内源性雄激素水平减低在老年男性人群的冠心病发病中有独立作用.FT和AR水平下降,可能与老年男性冠状动脉粥样硬化加速进展有关.

Abstract：

Objective To investigate the correlation of endogenous androgen and androgen receptor (AR) level with coronary artery diseases (CAD) in elderly males and elucidate the potential mechanism of gender difference in the prevalence of CAD. Methods A total of 296 male patients from different centers were divided into the CAD group ( n = 237 ) and the control group ( n = 59 ) according to the results of coronary angiography. Their mean ages were 68.6 ± 6. 8 and 66. 2 ± 6. 5 years old respectively. The serum levels of FT (free testosterone), TT (total testosterone), E2 (estradiol), LH (luteinizing hormone), FSH ( follicle-stimulating hormone ), SHBG ( sex hormone-binding globulin ) and DHEA (dehydroepiandrosterone) were measured in all participants. And the androgen receptors of peripheral lymphocytes were assessed by flow cytometry. Results The serum level of FT was lower in the CAD group than that in the control group[(24. 1 ±22. 2) × 10-9 mmol/L vs( 34. 1 ±31.8) × 10-9 mmol/l, P =0. 06]. But two groups showed no statistic differences in the levels of TT, E2 , LH, FSH, SHBG, DHEA and lymphocyte AR (56. 3% ± 24. 00 vs 57.1% ± 20. 8% ). As demonstrated by the logistic regression analysis, the level of FT was negatively correlated with the CAD risk ( OR = 0. 98, P = 0. 0049 ) and positively correlated with the peripheral lymphocyte AR level. However age was negatively correlated with the levels of FT and AR. Conclusion The deficiency of endogenous androgen contributes to a high prevalence of CAD in elderly males. The age-related decreases of FT and AR impair the physiological functions of androgen so as to accelerate the progression of coronary atherosclerosis.     

Mutations in the androgen receptor gene of seven Chinese patients with complete androgen insensitivity syndromes

Androgenplaysanimportantroleinthenormaldevelopmentofmalephenotypeandtheregulationofvirilization.Theseactionsofandrogenaremediatedbytheintracellularandrogenreceptor(AR)containingN--terminal,DNAuandsteroidbindingdomains.MutationsintheARgenecancausevariousdegreesofandrogenInsensitivitysyndromes(AlS)inpatientswith46,XYkaryotype.ThephenotypeofpatientswithAlSrangesfromcompletefemaleexternalgenitalia(completeAlS,CAIS)overgenitalambiguity(partialAlS,PAlS)totheinfertilewithnormalmaleornearlys…     

S578N mutation of the androgen receptor in an adolescent with complete androgen insensitivity syndrome

Androgen insensitivity syndrome （AIS） was first .described by the American gynecologist Morris in 1953 and was mitially described＇in 82 patients, The syndrome was designated testicular feminization syndrome , because the testes produce hormones with estrogen-like actions. Clinical AIS manifestations include the appearance of normal female external genitalia without internal female genital organs.     

雄性激素在烧伤病人中应用的疗效观察

目的：探讨应用雄性激素对烧伤病人代谢变化影响及促进创面愈合的疗效。方法：32例病人随机分为治疗组和对照组，治疗组16例，给予烧伤常规治疗加雄性激素治疗（伤后3天用药），对照组16例为同期住院条件相似的烧伤患，仅给予常规治疗。两组均观察血糖、白蛋白的变化，丸厚皮供区和创面愈合时间。结果：烧伤病人应用雄性激素后，血糖升高与用药前比较，有显差别（P＜0．05）。白蛋白均较用药前增高，并高于对照组（P＜0．05）。治疗组供区及创面愈合时间缩短（P＜0．05）。结论：应用雄性激素能促进蛋白合成，加速创面愈合，但同时会引起高血糖，需注意监测。