加味四逆散对肝星状细胞增殖的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,探讨加味四逆散抗肝纤维化的作用机制。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6的增殖。结果:加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,各浓度组与空白对照组比较差异有极显著性(P<0.01),加味四逆散低、中、高浓度组与鳖甲软肝片组比较,除低、中浓度组作用12h、24h时无差异外(P>0.05),其余各浓度组均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可明显抑制体外培养HSC-T6的增殖。     

加味四逆散含药血清对HSC凋亡影响的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用流式细胞仪和TUNEL法检测加味四逆散对HSC-T6凋亡的影响。结果:(1)流式细胞仪分析结果显示:加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12h、24h、48h后,细胞凋亡与空白对照组比较均有差异(P<0.05);与鳖甲软肝片组比较,除加味四逆散低浓度组作用12h时细胞凋亡无差异外(P>0.05),其余各浓度组细胞凋亡均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)TUNEL检测表明:加味四逆散各浓度药物血清作用48h后,细胞凋亡率与空白对照组及鳖甲软肝片组药物血清比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可显著促进HSC-T6凋亡,且以高剂量和作用48h最为明显。     

罗汉果甜苷对肝星状细胞HSC-T6增殖及肝纤维化相关基因的影响

目的 研究罗汉果甜苷含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6的毒性以及对细胞增殖与相关基因表达的影响,初步探讨其抗肝纤维化作用机制.方法 以罗汉果甜苷含药血清干预HSC-T6,乳酸脱氢酶(LDH)法检测罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6的细胞毒性;MTT法检测其对HSC-T6生长的抑制作用;RT-PCR法检测HSC-T6中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达.结果 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6无特异毒性,罗汉果甜苷含药血清体积分数为20％、10％时可显著抑制HSC-T6的增殖(P＜0.05、0.01),并对Col-Ⅰ、TGF-β1及TIMP-1mRNA表达均表现显著抑制作用(P＜0.05、0.01).结论 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6细胞无特异毒性,对HSC-T6细胞增殖、Col-Ⅰ有抑制作用,促进细胞外基质(ECM)降解,这可能是其抗肝纤维化的部分作用机制.     

赤芍的不同炮制品对复方鳖甲软肝片中芍药苷含量的影响

复方鳖甲软肝片是我院研制并于1999年由国家批准上市的三类新药,它由鳖甲、赤芍、冬虫夏草等成分组成,用于慢性乙型肝炎肝纤维化、早期肝硬化等。我们采用了ＨＰＬＣ测定复方鳖甲软肝片中芍药苷的含量,就赤芍不同的炮制品对复方鳖甲软肝片中芍药苷含量的影响进行了考察。1　　实验材料与仪器生赤芍:购于安徽亳州,饮片,先过筛,除去灰屑,再用清水迅速漂洗一次,除去泥沙,净品干燥备用;炒赤芍:取赤芍饮片,文火炒至棕色。复方鳖甲软肝片:分别以生、炒2种赤芍配方,以相同的工艺制成。芍药苷对照品:中国药品生物制品检定所。岛津ＬＣ-1型高效液相色…     

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。     

复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效评估

目的观察复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效。方法将59例慢性乙型肝炎患者随机分为2组。对照组20例给予安络化纤丸口服,每次6 g,每天3次,疗程6个月。治疗组39例给予复方鳖甲软肝片口服,每次4片,每天3次,疗程6个月。2组均同时辅用普通护肝药物治疗。治疗结束后检测血清肝纤维化指标。结果 2组治疗后血清肝纤维化指标均显著改善。结论复方鳖甲软肝片对乙型肝炎肝纤维化有明显的改善作用。     

大黄用于抗氧化的日服用次数研究

目的采用大黄含药血清体外抗氧化效应动力学结合大黄蒽醌类成分的整合药代动力学的方法研究大黄的日服用次数。方法将24只大鼠随机分为3组,每组8只,每天分别灌服大黄提取物3.6g/kg,1次/天、1.8g/kg,2次/天和1.2g/kg,3次/天,分别于第一次给药前(0小时)及给药后5、10、15、30分钟,1、2、4、6、8、10、12、24小时眼眶后静脉取血,用于测定大鼠血中大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚五种蒽醌类成分的含量和对超氧阴离子的抑制率。计算上述成分在大鼠体内的药动学参数,利用各成分曲线下面积(AUC0-∞)百分率作为自定义权重系数,得到其整合药代动力学曲线,再与抗氧化效应动力学进行相关性分析,以此来制定大黄用于抗氧化时合理的日服用次数。结果大黄蒽醌类成分整合药代动力学与含药血清体外抗氧化效应动力学具有良好的相关性。每日给药2次组整合药代动力学AUC及抗氧化效应动力学AUC均明显高于每日给药1次和3次组。结论大黄用于抗氧化时以每日服用两次为宜。     

生、醋莪术对大鼠免疫性肝纤维化及HSC-T6增殖和α-SMA,Procollagen Ⅰ表达的影响

比较生、醋莪术对猪血清所致大鼠免疫性肝纤维化及对活化的肝星状细胞(HSC-T6)增殖和α-SMA,ProcollagenⅠ表达的影响。采用腹腔注射猪血清0.5 mL/只,每周2次,共14周制备大鼠免疫性肝纤维化模型。观察生、醋莪术(0.95,1.90 g·kg~(-1))对大鼠血清ALT,AST,PC-Ⅲ,IV-C,LN,HA和肝组织HYP,MDA的表达水平;采用HE染色观察大鼠肝组织病理改变情况,Masson染色和天狼猩红染色观察大鼠肝组织中胶原表达情况;体外培养HSC-T6细胞,MTT法测定不同浓度生、醋莪术含药血清作用12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的影响;采用Real-time PCR法检测各组α-SMA和ProcollagenⅠ表达情况。结果显示,给药生、醋莪术后,大鼠血清ALT,AST,PC-Ⅲ,IV-C,LN,HA表达水平均下降,与生莪术组相比,醋莪术组作用效果优于生莪术组;生、醋莪术含药血清各剂量组均能抑制HSC-T6的增殖,呈现一定的量效和时效关系;各给药组作用24 h后,HSCT6中α-SMA和ProcollagenⅠ表达水平降低,且醋莪术组降低更显著。生、醋莪术均能不同程度减轻肝纤维化,其抗肝纤维化机制可能与抑制HSC-T6增殖,减少细胞外基质的生成并促进其降解有关。     

加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞-T6 (HSC-T6)增殖与凋亡的影响.方法 以不同浓度的加味四逆散含药血清[(加味四逆散低浓度组(含生药量0.78 g/ml)、加味四逆散中浓度组(含生药量1.56 g/ml)、加味四逆散高浓度组(含生药量3.12 g/ml)]作用于体外培养的HSC-T6细胞,作用时间分别为12、24、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6.采用流式细胞仪和TUNEL法检测对HSC-T6凋亡的影响.结果 ①加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性,加味四逆散各浓度组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);加味四逆散高浓度组[48 h:(0.399±0.041)％]与鳖甲软肝片组[48 h:(0.429±0.037)％]比较差异有统计学意义(P＜0.05).②流式细胞仪分析结果:与空白对照组比较,加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12、24、48 h后,细胞凋亡增加.与鳖甲软肝片组[12 h:(8.31±0.30)％,24 h:(16.25±0.25)％,48 h:(27.12±0.39)％]比较,加味四逆散中浓度组[12h: (17.83±0.25)％,24 h:(26.06±0.26)％,48h:(39.30±2.25)％]、加味四逆散高浓度组[12h:(27.15±0.29)％,24h:(38.96±0.51)％,48h:(49.34±0.77) ％]细胞凋亡均增加(P＜0.05).③TUNEL检测,与鳖甲软肝片组[(30.0±3.92) ％]比较,加味四逆散各浓度[低浓度组(25.1±1.48)％、中浓度组(39.30±2.25)％、高浓度组(39.30±2.25)％]药物血清作用48 h后,细胞凋亡率均增加(P＜0.01).结论 加味四逆散含药血清可抑制体外HSC-T6的增殖、促讲其凋亡,以高剂量作用48 h最明显.     

复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏血管紧张素Ⅱ及其受体mRNA表达的影响

目的:研究复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏血管紧张素Ⅱ及其受体mRNA表达的影响,探讨其抗肝纤维化作用的机制。方法:雄性SD大鼠30只随机分为正常组、模型组及复方鳖甲软肝片组,每组10只;大鼠每周2次皮下注射40?l43ml/kg,共6周,首次加倍,建立大鼠肝纤维化模型;复方鳖甲软肝片组在造模同时灌服复方鳖甲软肝片1g.kg-1.d-1,正常组和模型组灌服等容量蒸馏水,连续6周;HE和Masson染色光镜观察各组大鼠肝组织的病理改变;全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、ALP水平;放免法测定血清HA、LN的含量和血浆AngⅡ的含量;RT-PCR法检测肝组织AngⅡ、AT1R mRNA的表达。结果:模型组大鼠肝组织炎症程度和纤维化程度、血清ALT、AST、ALP、HA、LN和血浆AngⅡ含量、肝组织AngⅡ、AT1R mRNA的表达水平均明显高于正常组(P<0.01),而复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织炎症程度和纤维化程度较模型组明显减轻(P<0.01,P<0.05),血清ALT、AST、ALP、HA、LN和血浆AngⅡ含量较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),肝组织AngⅡ、AT1R mRNA的表达水平较模型组明显下降(P<0.01)。结论:肝脏局部肾素-血管紧张素系统参与CCl4诱导的肝纤维化发生发展,复方鳖甲软肝片能抑制肝纤维大鼠肾素-血管紧张素系统的反应,可能是其抗肝纤维化作用的重要机制之一。     

蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及CYP2E1表达的影响

目的:观察蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化超微结构及细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达的影响。方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、蓝莓原浆预防组(蓝莓组)、复方鳖甲软肝片预防组(复方组)、蓝莓原浆加复方鳖甲软肝片预防组(蓝莓+复方组)。猪血清复制大鼠肝纤维化模型,各预防组在造模同时给予蓝莓原浆或(和)复方鳖甲软肝片灌胃。12周后处死大鼠,观察肝组织超微结构变化,RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学法检测大鼠肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质的表达。结果:与模型组比,3个用药组肝纤维化程度明显减轻(P0.05),超微结构病变明显改善,肝组织CYP2E1 mRNA及蛋白质表达无明显差异。结论:蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化有一定的预防作用,对肝细胞超微结构病变有一定的保护作用,对CYP2E1的表达无明显影响。     

复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞增殖影响的研究

目的　观察复方鳖甲软肝片对心肌成纤维细胞 (CFs)增殖的影响。方法　采用培养的新生大鼠CFs,以MTT作为反映细胞增殖的指标 ,流式细胞仪分析细胞周期。结果　复方鳖甲软肝片能明显抑制CFs增殖 ,并将细胞周期阻抑在G1期 ,强度与氯沙坦相近。结论　复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

复方七芍降压片含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察复方七芍降压片含药血清对炎症因子及其诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:采用自发高血压大鼠模型灌喂蒸馏水、复方七芍降压片和厄贝沙坦,分别制备对照血清和含药血清。使用炎症因子TNF-α、嘌呤受体P2Y6抑制剂MRS2578和含药血清对大鼠VSMC进行干预,检测不同处理下大鼠VSMC的细胞活力和细胞周期以及炎症因子IL-6、IL-1β的表达差异。结果:TNF-α可促进细胞增殖,促进IL-6和IL-1β表达;MRS2578可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达;复方七芍降压片含药血清和厄贝沙坦含药血清可抑制细胞增殖,抑制IL-6和IL-1β表达。结论:复方七芍降压片含药血清能抑制炎症因子诱导的VSMC增殖,抑制细胞炎症因子的表达。复方七芍降压片降低血压的功效可能与抑制VSMC炎症反应有关。     

中西结合治疗乙型病毒性肝炎肝硬化的临床研究

目的：观察拉米夫定联合复方鳖甲软肝片治疗乙型病毒性肝炎肝硬化的临床疗效。方法：对照组单独使用拉米夫定,并采取相应的保肝对症治疗;试验组同时加用拉米夫定和复方鳖甲软肝片口服,观察治疗前后各项指标变化情况。结果：试验组疗效优于对照组。结论：拉米夫定联合复方鳖甲软肝片治疗乙型病毒性肝炎肝硬化疗效肯定。     

中药复方抗纤抑癌方和复方鳖甲软肝片不同采血时间点药物血清对HepG2肝癌细胞增殖活性的影响

目的:研究人来源不同采血时间点中药药物血清对HepG2人肝癌细胞增殖活性的影响。方法:HepG2人肝癌细胞体外培养,健康志愿者3名,服用中药复方抗纤抑癌方(KX)和中成药复方鳖甲软肝片(BJ)后不同时间点收集血清,采用MTT法检测各组药物血清对细胞增殖的影响。结果:(1)1h、2h与MEM对照组比较,各实验组药物血清对HepG2人肝癌细胞具有明显的增殖抑制作用(P0.01);KX1h20%浓度抑制效果优于KX2h同浓度(P0.01);KX1h5%浓度与BJ1h同浓度有差异(P0.05);BJ2h20%、10%浓度均较KX2h抑制作用强(P0.05);(2)增加0.5h抽血时间点,KX0.5h优于KX2h(P0.05);(3)与空白血清组比较,KX0.5h40%浓度时抑制效果明显(P0.05)。结论:2种药物血清对HepG2人肝癌细胞均有增殖抑制作用;在同一采血时间点和不同时间点上,2种药物血清的抑制效果比较均存在差异。     

FibroScan评价恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗乙肝性肝硬化代偿期疗效的Meta分析

目的:用Meta分析的方法评价用FibroScan测量肝脏硬度值评估恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片对乙肝性肝硬化代偿期的治疗效果。方法:纳入研究对象是乙肝性肝硬化代偿期的患者,干预措施为对照组口服恩替卡韦治疗,观察组在对照组的基础上服用复方鳖甲软肝片治疗,观测指标为肝脏硬度值的临床试验,使用RevMan 5.3软件对治疗前后肝脏硬度变化值进行Meta分析。结果:在58篇已发表论文中选出符合要求的论文9篇;Meta分析提示,两组患者的性别构成没有统计学意义,在治疗12个月后,与对照组相比,联合治疗组肝脏硬度值下降程度显著优于对照组。结论:复方鳖甲软肝片联合恩替卡韦治疗乙肝性肝硬化代偿期患者比单独应用恩替卡韦能更加确实有效降低肝脏硬度值。     

复方鳖甲软肝片对5/6肾切除大鼠肾组织 ET-1mRNA表达的影响

探讨复方鳖甲软肝片对5/6肾切除(5/6NT)大鼠肾组织内皮素(ET-1)mRNA表达的影响.120只SD大鼠随机均分为正常组,假手术组,5/6NT模型组,苯那普利组,尿毒清组和复方弊甲软肝片大、中、小剂量组.连续用药28周后,处死大鼠,无菌取肾,制作肾组织冰冻制片,用原位杂交方法检测各组ET-1mRNA的表达.结果正常组、假手术组,仅见少量ET-1mRNA阳性反应物;5/6NT模型组,肾小球系膜细胞浆、肾小管上皮细胞浆均见ET-1mRNA强阳性蓝色反应物;苯那普利组、尿毒清组ET-1mRNA阳性反应物减少,与5/6NT组比,P＜0.05;复方鳖甲软肝片ET-1mRNA阳性反应物明显减少,并呈剂量依赖关系;与5/6NT组比,P＜0.05.结论复方鳖甲软肝片能抑制5/6NT大鼠肾组织ET-1mRNA的表达,这可能是该方防治肾小球硬化的作用机制之一.     

益气活血解毒化痰方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化患者49例临床观察

目的评价益气活血解毒化痰方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法将95例慢性乙型肝炎肝纤维化患者随机分为试验组49例和对照组46例,两组均予常规治疗,在此基础上试验组口服益气活血解毒化痰方煎剂200ml,每日2次,对照组口服复方鳖甲软肝片,每次4片,每日3次。3个月为1个疗程,两组均治疗2个疗程。观察两组患者临床证候积分、症状、体征、肝纤维化血清学检测指标、S指数及超声影像学指标,评价临床综合疗效。结果两组中医证候明显改善(P<0.01),试验组治疗后证候积分明显低于对照组(P<0.05)。试验组疲倦乏力、食欲不振、肝区不适症状改善率较对照组更明显(P<0.05)。两组均能明显降低血清肝纤维化指标及S指数,缩小肝门静脉主干内径和脾肿指数(P<0.05)。试验组总有效率79.6%,对照组总有效率60.9%,试验组临床疗效优于对照组(P<0.05)。结论益气活血解毒化痰方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效确切,明显优于复方鳖甲软肝片。     

复方鳖甲软肝片治疗乙肝肝纤维化15例临床观察——附人参鳖甲煎丸15例对照观察

目的 :观察中药复方鳖甲软肝片治疗肝炎后肝硬化患者的疗效。方法 :30例患者随机分为治疗组和对照组各 15例。治疗组 ,予复方鳖甲软肝片 ,每日 3次每次 4粒 ;对照组 ,予人参鳖甲煎丸 ,每日 3次每次 10 g。两组疗程均为 6个月 ,治疗期间不加用其它保肝降酶及抗肝纤维化药物。结果 :治疗组胁痛、乏力、纳差、腹胀改善率分别为 80 %、73 3%、86 6 7%、93 3% ,对照组为 73 3%、6 6 6 7%、80 %、73 3% (P <0 0 5～ 0 0 1)。肝功能指标 :两组ALT、AST、A、G、A/G治疗前后均有明显差异 (P <0 0 1) ,A、G、A/G治疗组优于对照组 (P <0 0 1) ,ALT、AST组间无明显差异。肝纤维化指标 :两组HA、LN、PC Ⅲ、Ⅳ C治疗前后有差异 (P <0 0 1) ,治疗组Ⅳ C降低优于对照组 (P <0 0 1)。两组治疗的总有效率分别为 86 87%、80 0 0 % ,组间无差异 ,总显效率分别为 6 6 6 6 %、4 0 0 0 % ,组间有差异 (P <0 0 1)。结论 :复方鳖甲软肝片有明显改善患者症状、肝功能 ,抗肝纤维化的作用