抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因克隆及序列分析

目的：获得抗人视网膜母细胞瘤（RB）单克隆抗体轻链可变区基因序列，为进一步构建抗RB基因工程抗体奠定基础。方法：用扩增小鼠κ轻链可变区基因的一对引物，从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C6中提取细胞总RNA，经RT－PCR扩增出3C6VL的cDNA片段，并将其克隆人pGEM -T Easy测序载体，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因由321bp组成，编码了107氨基酸残基，含有4个框架区及3个抗原互补决定区，并含有抗体特性的两个半胱氨酸残基，在基因数据库（Gene Bank 2000,4)中，未发现相同的基因。结论：从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中成功克隆了抗人网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因，为抗RB基因工程抗体研究及新一代抗RB肿瘤导向药物的研究奠定了坚实的基础。     

抗转铁蛋白受体单抗可变区基因克隆和序列分析

目的：制备基因工程抗体，减少或消除鼠源性单抗在人体内的免疫原性，保留其对人体抗原配体的高度特异性，发展临床向诊断和治疗，方法；从体外分泌抗转铁蛋白受体单抗发校瘤细胞系７５７９中，对其单抗可变区基因进行克隆和序列分析，利用逆转录ＰＲＧ技术扩增轻，重链可变区基因，再分别与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接，并克隆于ＪＭ１０９受体菌之中，利用荧光染色链终癯法测定其序列，采用ＤＮＳＩＳ７分析软件与ＮＩＨ基因库比较分析。     

鼠抗CD4抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

为获得鼠抗人T细胞分化抗原4分子单抗的轻链及重链可变区基因。采用RT－PCR技术，从WuT4细胞总RNA中扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析，发现RT－PCR扩增出来的两条轻链和一条重链可变区基因分别为400bp左右，构建的pMD18T-VL和pMD18T-VH重组克隆载体，酶切与预期结果相符。测序得到它们的DNA序列。结果表明，克隆的两条轻链可变区基因序列一致，长度均为324bp，属于鼠轻链Ⅳ亚类。克隆的重链可变区基因长度为375bp，属于鼠重链Ⅱ(C)亚类。     

鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的：获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因，方法：用一步法提取总RNA，逆转录形成cDNA，设计并合成一套扩增小鼠重，轻链可变区的通用引物，通过PCR扩增基因，分别克隆入pMD18-T载体中，作核苷酸序列分析。结果：用重链引物扩增获得长约350bp的片段，用轻链引物扩增获得长约330bp的片段，序列测定获得它们的DNA序列，结论：克隆的重链可变区基因长度为348bp，属于小鼠H链可变区IA亚组；克隆的轻链可变区基因长度为336bp ，属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。     

鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法 用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获得长约350bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论克隆的重链可变区基因长度为348bp,属于小鼠H链可变区IA亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336bp,属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。     

抗组织蛋白酶B单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的：为制备基因工程抗体，需要对组织蛋白酶B单抗可变区基因的核苷酸序列进行分析。方法：利用RT-PCR技术扩增2A2抗组织蛋白酶B单克隆抗体可变区基因，测序并和已报道的小鼠免疫球蛋白的基因库进行比较。结果：2A2抗组织蛋白酶B单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析及比较结果没有发现有害的基因突变。结论：2A2抗组织蛋白酶可变区基因可用于构建人鼠嵌合抗体。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183—B2轻链可变区基因的体我扩增,克隆 …

分离抗人卵巢单克隆抗体ＣＯＣＯ１８３－Ｂ２轻链可变区基因并测定其核苷酸序列。方法 用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入Ｐ＾ＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ‘ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ，ＥＭＢＬ，ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。     

抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析

目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体.方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析.所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较.结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因.运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族.结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区.     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析

目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。     

人MAGE-3基因片段的克隆与测序

目的克隆表达人MAGE-3基因片段(210～623位碱基),以便研究其对MAGE-3阳性恶性肿瘤的生物学作用。方法为选择靶基因,采用分子生物学软件分析MAGE-3基因抗原表位;并设计MAGE-3靶区域引物。从人肺癌组织标本中提取mRNA,用RT-PCR法从中扩增出MAGE-3片段,对其进行XhoⅠⅡ酶切鉴定;将扩增片段克隆于pGEM-TEasy载体中,转化JM109,进行阳性筛选后,运用pGEM-TEasy质粒的T7/SP6作为引物对重组子鉴定,并进行DNA测序。结果抗原表位分析表明MAGE-3基因片段(210～623位碱基)为抗原决定簇丰富区段。RNA体外扩增得到的片段为414bp,并经XhoⅠⅡ酶切鉴定得到证实;pGEM-TEasy-MAGE-3经筛选鉴定正确,DNA测序结果与Genebank比较完全相同,表明靶基因成功插入pGEM-TEasy。结论该片段可用于真核及原核表达。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析

目的　 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法　 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果　 抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论　 所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与？…

获得抗血管内皮生长因子１６５抗体的轻重链可变区基因。方法从分泌具有中和抗血管皮生长因子１６５活性的单抗杂交瘤细胞株Ｖｍｄ１１中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆该单抗的轻，重链可变区基因并进行序列分析。     

人存活素基因编码区的克隆和序列分析

目的：克隆人存活素(survivin)基因编码区cDNA并进行序列分析。方法：以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR方法得到人存活素的编码区cDNA，克隆至载体pUC19中，酶切鉴定后进行序列分析。结果：获得人存活素编码区基因和重组质粒pUC19-SURVIVIN，DNA序列分析证实所获得的存活素基因编码区cDNA序列和文献报道一致。结论：采用基因克隆的方法获得人存活素基因，为进一步研究其结构和功能奠定了基础。     

Cloning and sequencing of the variable region genes of anti-human melanoma monoclonal antibody

EngineeringantibodyhasalreadyshoweditsgoodprospectsintumortherapyI'2-.AsmelanomaIsahighlymalignanttumor,itissignificantforthestudyofthetumortoacquirethevariableregiongenesandcorrespondingantibodyfragmentsofvariousanti--melanomamAbs.Itisknowntoallthattheessenceofpreparingengineeringantibodyistoobtainvariableregiongene:"':.Inthisstudy,RT--PCRmethodwasappliedtoamplifythevariableregiongenesoftheheavyandlightchainsofthemAbfromamurinehybrldonlacelllinewhichsecretsspecificantihumanmelanomamAbsa.T…     

抗人黑色素瘤单抗HB8759轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

获得新的鼠抗人黑色素瘤单Ｒ抗ＨＢ８７５９轻，重链可变区基因，以便对其进行基因工程改造。方法：采用反转录－ＰＣＲ从杂交瘤细胞中扩增抗体轻，重链可变区基因，测定ＤＮＡ序列，输入计算机分析，并在大肠杆菌中表达。结论：ＶＨ，ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

Cloning and sequencing genes related to preeclampsia

PreeclamPsia is a major cOmPlication of humanpregnancies, affecting 5% to 7% of pregnant women. Itis among the most significant causes of maternal and fe-tal morbidity and mortality, clinically characterized bythe onset of hyPertension and proteinuria. The etiologyofpreeclampsia remains speculative1'l. The accumulatedevidences strongly suggest that failure or incompletetrophoblastic invasion(end of the first, beginning of thesecond trimester)of ti1e spiral arteries, resulting in nar-rowed sp…     

葡萄胎发病相关新基因的克隆

目的筛选和克隆与葡萄胎发病相关的新基因。方法采用抑制性消减杂交方法，建立葡萄胎组织与正常早孕绒毛组织间的差示cDNA文库，从中筛选出新基因序列，并克隆其全长。结果从差示cDNA文库中共筛选出28个克隆，测序结果提示含10种基因序列，其中3个基因片段被确认为功能未明的新基因，并获得其中一条基因的全长序列（按克隆序列号命名为F10）。结论F10等新基因可能与葡萄胎的病理发生发展密切相关。