靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P0.01)。(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P0.01)。(3)转染联合顺铂作用24h细胞增殖开始受抑(P0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P0.01)。转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.01)。结论靶向OPN的miR-NA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。     

益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的探讨益气养阴除结方联合顺铂对肺腺癌细胞(A549细胞)凋亡的影响及其机制。方法选用A549细胞培养,实验分为4组,分别为空白对照组、益气养阴除结方组(简称中药组)、顺铂组、联合组。空白对照组不加药物处理;中药组浓度梯度设定分别为1 000、500、200、100、50、20 mg/L;顺铂组浓度梯度设定分别为4 mg/L和8 mg/L;联合组浓度梯度分别为以上2组之间的组合。应用MTT法检测药物对其增殖的抑制作用;TUNNEL法检测细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测肿瘤细胞Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达。结果与空白对照组比较,中药组、顺铂组及联合组的细胞抑制率均有明显增加(P0.05~P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4mg/L)抑制率最高;各用药组凋亡细胞数量均有明显增加(P0.01,P0.001),其中联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)凋亡细胞数量最多;各用药组bcl-2的表达均降低,其中顺铂组(4 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)Bcl-2的表达明显降低(P0.01);各用药组Caspase-3表达的表达均升高,其中中药组(200 mg/L)、联合组(中药200 mg/L+顺铂4 mg/L)有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论该中药复方能促进A549细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长,联合一定浓度顺铂后其效果更明显,其机制可能与抑制Bcl-2和增加Caspase-3的表达有关。     

八宝丹处理肺腺癌细胞A549和SPCA-1对顺铂化疗敏感性的影响

目的：探讨八宝丹处理人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系对顺铂（DDP）抗肿瘤化疗敏感性影响。方法收集人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系进行不同处理,随机分为对照组（空白）、DDP组（4 uM ）、（八宝丹＋DDP）组（0.75 mg／kg＋4 uM ）,处理3周,采用MTT法检测细胞增殖能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定（TUNEL）法检测细胞凋亡率,采用transwell检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的 A549和SPCA‐1细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞增殖能力无明显差异（P＞0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0．01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.001）。结论（八宝丹＋DDP）可以增加肿瘤细胞的凋亡,降低肿瘤细胞的增殖,减少 A549和SPCA‐1细胞迁移数目,增加肿瘤细胞的DDP抗肿瘤敏感性。     

顺铂与蒿甲醚联用增强对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的体外观察顺铂和蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞的相互作用。方法采用MTT法,利用中效原理判定联合应用顺铂及蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞的效应。结果顺铂与蒿甲醚联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药单用和联用时随着药物浓度增加,其效应也增加;两药联用时的中效浓度明显小于两药单独使用时的中效浓度(顺铂减少34.5%,蒿甲醚减少97.2%);两药大剂量合用时CI<1,小剂量合用时CI>1;且两药联用时的效应与给药的时间先后次序无关(P>0.05)。结论顺铂与蒿甲醚的联用可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,两药联用时的中效浓度较单用时明显减小,在两药小剂量联用时表现为拮抗效应,大剂量为协同效应,且两药联用时的效应与给药的时间先后次序无关。     

益肺解毒方协同顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究益肺解毒方协同顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的作用。方法（1）应用血清药理学方法制备益肺解毒方含药血清。（2）应用MTT法检测益肺解毒方药物血清、顺铂以及两药协同对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。结果益肺解毒方药物血清能够抑制人肺腺癌A549细胞的生长,单纯顺铂对人肺腺癌A549细胞增值抑制作用为50．12％,与益肺解毒方协同抑制率提高到85．02％,并且q值大于1．15。结论益肺解毒方具有协同顺铂增效的作用。     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用

目的:研究姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺癌A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549凋亡和细胞周期的影响。结果:①姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并呈浓度及时问依赖性;姜黄素10,15,20μmol/L分别与顺铂1,2 mg/L联合24,48,72 h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组(均为P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。②姜黄素和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关。两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③姜黄素将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.01),顺铂将细胞周期阻滞在S期(P<0.01)。结论:姜黄素、顺铂均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用

目的：研究姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺癌A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549凋亡和细胞周期的影响。结果：①姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并呈浓度及时问依赖性;姜黄素10,15,20μmol/L分别与顺铂1,2 mg/L联合24,48,72 h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组（均为P〈0.05）,两者呈现出相加的抗瘤效果。②姜黄素和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关。两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③姜黄素将细胞周期阻滞在G2/M期（P〈0.01）,顺铂将细胞周期阻滞在S期（P〈0.01）。结论：姜黄素、顺铂均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。     

褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、7001、000μmol/L)及顺铂(2.55、、10μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率。结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10μg/mL)与500μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率([71.25±5.01)%(、86.37±7.10)%(、97.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖。     

敲低circ＿0000620表达对肺腺癌A549细胞凋亡和顺铂敏感性的影响

目的:探讨敲低circ＿0000620表达对肺腺癌A549和顺铂耐药A549(A549/DDP)细胞凋亡和顺铂敏感性的影响。方法:设计针对circ＿0000620的siRNA靶序列,分别构建敲低circ＿0000620表达的A549和A549/DDP细胞株(实验组),并构建感染sh-NC(阴性对照)的细胞株(对照组),qRT-PCR检测circ＿0000620表达量,验证敲低效果。敲低circ＿0000620后,利用CCK-8方法检测顺铂对各组细胞活力的影响,并计算顺铂药物半数抑制浓度(IC₅₀);利用Caspase-3/7活性和Tunel方法检测敲低circ＿0000620表达后A549和A549/DDP细胞的凋亡率。利用敲低circ＿0000620表达后A549和对照A549细胞接种BALB/c裸鼠,7 d成瘤后,腹腔注射顺铂(2 mg/kg)进行药物干预,观察肿瘤的生长曲线,28 d后处死裸鼠,称量瘤重。结果:qRT-PCR筛选得到有效抑制circ＿0000620表达的siRNA靶序列(siRNA-2 5’-GAAGAATGATATCCTTGGAAC-3’)...     

马蔺子素对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP耐药逆转及可能的机制

顺铂 (ＣＤＤＰ)耐药阻碍临床疗效的发挥 ,迄今尚无可完全逆转顺铂耐药的药物。马蔺子素[1] (ＡＮＫＡ)是国内外唯一开发成功的乏氧细胞放射增敏剂 ,我们以耐顺铂人肺腺癌细胞系Ａ54 9ＤＤＰ为靶细胞 ,研究马蔺子素对顺铂耐药的逆转效应及其可能的机制。一、材料与方法1.主要材料 :ＤＭＥＭ培养基 (美国ＧＩＢＣＯ公司产品 ) ,噻唑兰 (ＭＴＴ) (美国Ｓｉｇｍａ产品 ) ,顺铂 (昆明三戌贵金属药业有限公司产品 )。马蔺子素由三戌投资发展有限公司提供。谷胱甘肽 (ＧＳＨ)检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。ＭＲＰ单抗本室自制 ,谷胱苷肽…     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究紫草素(shikonin, SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制。方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平。结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P<0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关。     

aaptamine 与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

探讨aaptamine与顺铂（DDP）联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用,并阐明其可能的分子机制。     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.     

Bcl-xl反义寡核苷酸转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Bcl-xl反义寡核苷酸(ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法将肺腺癌A549细胞分为细胞对照组(无脂质体及核酸)、脂质体(Lip)组(空脂质体,无核酸)、序列对照寡核苷酸(SCODN)组和ASODN组,设计合成特异性靶向Bcl-xl ASODN,用阳离子脂质体介导其转染肺腺癌A549细胞株。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测A549细胞增殖抑制率;末端脱氧核苷酰基转移酶介导性d UTP切口末端标记(TUNEL)法检测A549细胞凋亡情况;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测A549细胞中Bcl-xlm RNA和蛋白表达水平。结果 ASODN和SCODN浓度为50 nmol·L~(-1)时,各组A549细胞增殖抑制率比较差异均无统计学意义(P>0.05);浓度为100、200、400 nmol·L~(-1)时,ASODN组A549细胞增殖抑制率均高于SCODN组和Lip组(P<0.05);ASODN对细胞增殖抑制作用随其浓度增加而增高,具有剂量依赖性(P<0.05)。细胞对照组、Lip组、SCODN组和ASODN组细胞凋亡率分别为(4.01±0.18)%、(5.23±0.22)%、(8.01±0.32)%和(41.50±1.91)%,ASODN组细胞凋亡率高于SCODN组、Lip组和细胞对照组(P<0.05)。ASODN和SCODN浓度为50 nmol·L~(-1)时,各组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);浓度为100、200、400 nmol·L~(-1)时,ASODN组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量均低于SCODN组、Lip组和细胞对照组(P<0.05);ASODN组A549细胞中Bcl-xl mRNA表达量随浓度增加相应地下降(P<0.05);SCODN组和Lip组Bcl-xl mRNA表达量较细胞对照组下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。细胞对照组、Lip组、SCODN组和ASODN组A549细胞中Bcl-xl蛋白表达量分别为0.62±0.17、0.67±0.27、0.62±0.21和0.23±0.10,ASODN组A549细胞中Bcl-xl蛋白表达量低于细胞对照组、Lip组和SCODN组(P<0.05)。结论转染Bcl-xl ASODN可下调Bcl-xl基因表达,能有效抑制A549细胞增殖,并显著促进A549细胞凋亡;Bcl-xl基因有望成为肺腺癌基因治疗的新靶点。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法常规培养肺腺癌A549细胞(购于中国科学院细胞生物学研究所)至对数生长期,加入不同浓度的Res(终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L),以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应(RT-PCR)检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度(10、30、100 mg/L) Res可抑制A549细胞增殖; Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量(10、30、100 mg/L)的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组比较,不同剂量Res(10、30、100 mg/L)诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

二甲双胍联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二甲双胍（metformin,Met）联合培美曲塞（pemetrexed,Pem）对人肺腺癌A549细胞株的增殖及凋亡的影响。方法：不同浓度Met（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）、Pem（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L）48 h下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率并确定Met及Pem的半抑制浓度（IC50）;Met（IC50）及Pem（IC50）单用或联用,不同时间（24、36、48 h）下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 检测Bcl?2、Bax、Mcl?1、Noxa蛋白表达。结果：①不同浓度Met及Pem对A549 细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;②Met+Pem组作用A549细胞增殖抑制率优于单药组（P＜0.05）,呈时间依赖性（P＜0.05）;③Met+Pem组作用 A549细胞的凋亡率（30.6 ± 0.4）%优于Met组凋亡率（13.3 ± 0.3）%和Pem组凋亡率（12.9 ± 0.1）%（P＜0.05）;④与单药组相比,Met+Pem组明显下调Bcl?2、Mcl?1蛋白表达,上调Bax、Noxa蛋白表达（P＜0.05）。结论：Met联合Pem可抑制A549细胞增殖、诱导凋亡,其效果优于单药,机制可能与下调Bcl?2、Mcl?1蛋白,上调Bax、Noxa蛋白的表达有关。     

氯化钴化学乏氧对人肺癌A549细胞生长及侵袭、迁徙能力的影响

目的探讨氯化钴化学乏氧对人肺腺癌A549细胞生长及迁徙、侵袭能力的影响。方法采用氯化钴(CoCl2)建立人肺腺癌A549细胞体外化学乏氧模型。首先通过倒置相差显微镜、电镜、MTT法及流式细胞学观察CoCl2对A549细胞形态、增殖及细胞周期的影响;进一步利用Transwell小室模型检测CoCl2对A549细胞侵袭及迁徙能力的影响。结果与常氧对照组相比,200μmol/L CoCl2化学乏氧组A549细胞光镜下较稀疏,电镜下出现线粒体肿胀、内质网扩张及自噬泡形成等微观结构改变,生长曲线低平、增殖缓慢,G1期细胞比例增多、S期细胞比例减少;迁徙及侵袭能力增强。结论 CoCl2化学乏氧抑制人肺A549细胞的增殖,诱导G1/S周期阻滞,增强A549细胞的侵袭及迁徙能力。     

阿糖胞苷对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对人肺腺癌细胞A549凋亡和脂质过氧化的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间阿糖胞苷对A549细胞的生长抑制作用;采用羟胺比色法对超氧化物歧化酶（SOD）活性进行测定,硫代巴比妥酸比色法进行丙二醛（MDA）含量测定,5.5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）比色法进行还原性谷胱甘肽（GSH）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力测定。吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）混合染色检测A549细胞凋亡。结果 Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用,并具有明显的时效和量效关系。随着干预剂量的增加,细胞内MDA含量水平逐渐升高,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;GSH含量,SOD、GSH-Px活性则逐渐下降,与对照组比较（P〈0.05,P〈0.01）;阿糖胞苷作用A549细胞后可以出现凋亡增高和形态学改变。结论阿糖胞苷对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,并引起脂质过氧化水平改变,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。