东莨菪碱及其大鼠肝匀浆代谢物的液相色谱-质谱法分析

目的 运用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱（LC-MSⁿ）联用技术研究东莨菪碱在大鼠肝匀浆中的代谢物。方法 采用离体实验的代谢研究方法,将东莨菪碱与大鼠肝匀浆在富氧条件下温孵,代谢物以醋酸乙酯萃取,采用LC-MS及LC-MSⁿ等方法进行分析。和原药相比较,根据温孵液中分析物相对分子质量的变化及其多级质谱数据,鉴定代谢物并阐述其结构。结果 在东莨菪碱的大鼠肝匀浆培养液中发现了脱水东莨菪碱和去甲基东莨菪碱两种代谢物。结论 东莨菪碱在大鼠肝匀浆中的代谢主要有脱水和去甲基反应。     

山莨菪碱及其大鼠肠内菌体外代谢物的液相色谱-质谱法分析

目的 用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱联用法研究山莨菪碱在大鼠肠内菌中的代谢。方法 以山莨菪碱优化色谱及质谱条件，总结其色谱及质谱行为规律。将山莨菪碱与大鼠肠内菌体外厌氧温孵培养，并与空白样品及山莨菪碱对照品进行比较，依据被测物的多级质谱数据，鉴定代谢物并阐述其结构。结果 在温孵液中发现了山莨菪碱的脱水及水解代谢产物，即脱水山莨菪碱、6β-羟基托品和托品酸。结论 该方法灵敏、快速、简单，适合于药物代谢分析。     

新型液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留

目的采用液相色谱-串联质谱（LCMS／MS）建立水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留的检测方法。方法均质后的水产品样品，用乙腈和乙酸铵缓冲液提取，合并提取液，用二氯甲烷反提取，经中性氧化铝柱和丙磺酸（PRS）柱固相萃取净化，没有使用氧化铅柱在线氧化，色谱分离后直接进入串联质谱检测器。采用电喷雾（ESI）正离子扫描模式，多反应监控（MRM）方式检测，外标法定量。结果孔雀石绿和隐色孔雀石绿的检出限为0．5ng／g，线性方程的相关系数r〉0．99，在添加浓度0．5～2．0ng／g范围内，孔雀石绿回收率为78．4％～92．1％。隐色孔雀石绿回收率为82．4％～98．1％，相对标准偏差（RSD）均小于5．7％。结论此方法高效快速，结果准确，重现性好，适合于对水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的残留检测。     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中水苏碱

目的 应用LC/ESI-ITMS检测大鼠血浆中水苏碱的含量.方法 取血浆样品0.2mL,经3 mL乙腈-甲醇(90:10)混合液沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-水-甲酸(70:30:1,pH 3.5)为流动相,用Agilent zorba Extend-C18色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测检测.用于定量分析的离子反应分别为m/z 144→m/z 84(水苏碱)和m/z166→m/z 148(内标,麻黄碱).结果 水苏碱线性范围为0.02～5.00 mg·L-1,定量限20 μg·L-1,最低检测限为1 μg·L-1,日内、日间测定值RSD小于5.4%.在大鼠体内药动学研究中,应用此法测定了6只大鼠给予盐酸水苏碱后血浆中水苏碱的浓度.结论 该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内水苏碱的药动学研究.     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中forsklin的浓度及其药代动力学

建立了测定大鼠血浆中forsklin的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。方法 血浆样品经叔丁基甲醚萃取后,以水(0.1%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱, BetaBasic-C₁₈柱分离。通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对分别为m/z 411→375.3(forsklin)和285→193(地西泮)。结果 在本实验条件下,forsklin血浆浓度测定方法的线性范围为0.5~1000 ng/ml,定量下限为0.5 ng/ml。日内、日间精密度(相对标准差 RSD)均小于14.4 %;准确度(相对误差 RE)在-3.5 %和3.8%之间。方法的专属性,绝对回收率,稳定性和基质效应均符合要求。结论 该法快速、灵敏、准确,可用于forsklin的药代动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中黄体酮的浓度

目的建立测定大鼠血浆中黄体酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法血浆样品采用液-液萃取法,经正己烷-二氯甲烷-异丙醇(100∶50∶5,V/V/V)提取后,以甲醇-水(75∶25,V/V)为流动相,以Hypersil ODS柱(50 mm×2.1 mm,5μm)为分析柱,采用ESI源以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子反应为m/z 315.4→m/z(97.0+109.2)(黄体酮)和m/z 385.4→m/z 267.4(醋酸甲地孕酮,内标)。结果黄体酮血浆浓度测定方法的线性范围为0.5~200 ng/ml,日内、内间精密度(RSD)均<6.7%,准确度(RE)在±6.2%之间。结论该方法分析时间短、操作简便、灵敏度高、专属性强,适用于黄体酮的药动学研究。     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中山茛菪碱

目的建立大鼠血浆中山莨菪碱的测定方法,并研究山莨菪碱的大鼠药动学。方法采用液相色谱串联电喷雾离子阱质谱法测定大鼠血浆中山莨菪碱。大鼠血浆样品经甲醇2次沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-2mmol/L醋酸铵缓冲液(用甲酸调pH3.5)(70:30)为流动相,用AgilentZorbaxEclipseXDB-C_(18)色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z306→140(山莨菪碱)和m/z290→124(内标,阿托品)。结果山莨菪碱线性范围为10-5000μg/L,r=0.9990,最低检测限为2μg/L,日内、日间测定值RSD小于4.2%。结论该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内山莨菪碱的药动学研究。     

肝硬化患者血清胆汁酸代谢物谱的检测分析

目的分析肝硬化患者与健康体检人群微量血清中胆汁酸亚组分含量差异,并探讨其在肝硬化患者诊断中的价值。方法选取符合诊断标准的2016—2017年在上海第十人民医院住院的肝硬化患者和同期在本院健康体检人群作为研究对象,利用高效液相色谱-质谱法定量检测两组人群血清胆汁酸组分含量,应用主成分分析法(PCA)对数据进行代谢轮廓识别,并采用Mann-Whitney检验方法对定量数据进行统计分析。结果该检测体系中,两组人群血清样本共检测得到5种游离胆汁酸(BAs)、5种牛磺结合型胆汁酸(T-BAs)和5种甘氨结合型胆汁酸(G-BAs)。相比于健康对照组,肝硬化组血清中12个代谢物差异有统计学意义(P0.01),包括在肝脏内合成的所有初级胆汁酸和在肠道中合成的部分次级胆汁酸(脱氧胆酸、甘氨石胆酸和牛磺石胆酸),其中以牛磺胆酸和甘氨胆酸升高幅度较大,而石胆酸、甘氨脱氧胆酸和牛磺脱氧胆酸比较差异无统计学意义(P0.05)。PCA结果显示两组人群在PC1区区分较大。结论所建立的在微量血清中同时检测15种胆汁酸组分的LC-MS/MS方法稳定可靠,可满足临床定量检测需求;利用该方法检测肝硬化患者血清初步发现胆汁酸代谢谱异常,提示胆汁酸组分的改变与肝脏合成代谢功能异常密切相关,为研究胆汁酸在肝硬化发展进程中的作用提供了一定的研究基础。     

液相色谱-串联质谱法测定阿德福韦及其前体化合物在大鼠血浆中的浓度

目的 建立测定大鼠血浆中阿德福韦（PMEA）及其前体药物APD2、PMEA-CA的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法 分别采用不同的血浆样品处理方法和色谱条件测定PMEA及其前体化合物。测定PMEA时,血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用Discovery C₁₈柱分离,以甲醇-0.5％甲酸（20∶80,V/V）为流动相,9-(3-膦酸甲氧基丙基)腺嘌呤为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆样品中的PMEA进行定量分析。测定APD2和PMEA-CA时,血浆样品经固相萃取后,用Hypersil ODS2柱分离,以甲醇-5 mmol·L^-1乙酸铵（70∶30,V/V）为流动相,格列本脲为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆中APD2和PMEA-CA进行定量分析。结果 PMEA和PMEA-CA线性范围为25～5 000 μg·L^-1,ADP2的线性范围为10～2 500 μg·L^-1,日内、日间精密度均<5.5 %。结论 本方法专属性强、灵敏度高,适用于PMEA前体药APD2及PMEA-CA的临床前药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物的含量

目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的浓度.方法 样品用乙酸乙酯∶二氯甲烷(体积比为1∶1)提取浓集后进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C18(50×3 mm, 3 μm),流动相为乙腈-水(85∶15).质谱采用ESI离子源MRM模式检测,以辛伐他汀为内标,按内标法定量. 洛伐他汀、洛伐他汀酸和内标的检测离子对分别为质荷比(m/z)427.4→325.4、445.4→343.4和436.4→325.4.结果 洛伐他汀在0.031～64 μg/L范围内线性关系良好(r=0.9987),最低定量限为0.031 μg/L,方法 回收率在96%～102%之间,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.3%及9.3%.结论 本文建立的方法 准确、灵敏,可用于洛伐他汀血药浓度测定及药代动力学研究.     

液相色谱-电喷雾串联质谱法分析大肠癌患者尿液色氨酸及其代谢产物

目的：通过液相色谱-电喷雾串联质谱（LC-ESI-MS/MS）测定尿液色氨酸及其代谢产物浓度,探讨大肠癌患者体内色氨酸代谢变化及其与机体免疫之间的关系。方法通过 LC-ESI-MS/MS法测定大肠癌患者和健康者（对照组）尿液色氨酸代谢物浓度,并通过犬尿氨酸/色氨酸比值来评估代谢过程中的酶活性。结果大肠癌患者尿液犬尿氨酸、3-羟基犬尿氨酸（HK）、羟基氨茴酰酸（HAA）、吲哚-3-乳酸（ILA）、吲哚-3-丙酸（IPA）、邻氨基苯甲酸（AA）浓度显著升高（P＜0．05,P＜0．01）;而大肠癌患者尿液犬尿烯酸浓度较对照组显著下降（P＜0．05）;大肠癌患者犬尿氨酸/色氨酸比值较对照组显著提高（P＜0．01）。结论大肠癌患者尿液色氨酸代谢发生紊乱,色氨酸代谢物检测或可为大肠癌发病机制、预测和防治研究奠定基础。     

液相色谱-串联质谱联用法测定大鼠血浆中葫芦茶苷及其代谢物

目的:研究大鼠分别灌胃和静脉给药葫芦茶苷溶液后,血浆中的葫芦茶苷及其代谢产物.方法:雌性Sprague Dawley大鼠分别经灌胃(10 mg/kg)和静脉注射(2 mg/kg)给予葫芦茶苷溶液后,按设计的时间点从大鼠眼内眦静脉丛采集血液样品,置于肝素化的离心管中,低温离心得血浆.取5、15、30min和1、2h血浆样品各40μL,合并,混匀,加入600 μL甲醇,漩涡振摇5 min,13 000 r/min离心10min,取上清液,在N2下吹干,残渣用50 μL甲醇复溶,再次振摇和离心,取上清液40 μL,利用液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)进行分析.根据葫芦茶苷在血浆样品中的LC-MS/MS出峰情况,比较空白血浆样品与不同途径给药后相应的生物样品,结果:大鼠血浆中可以检测到葫芦茶苷原形物质,也可检测到脱糖代谢物对羟基桂皮酸.通过中性丢失扫描,确定对羟基桂皮酸再发生结合代谢形成硫酸酯化代谢物.同时,对羟基桂皮酸发生脱氢反应,形成对羟基苯丙酸.结论:给药后大鼠血浆中形成葫芦茶苷多种代谢物,对羟基桂皮酸可能是发挥药效活性的代谢产物.     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的氯吡格雷

目的：建立灵敏、快速液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氯吡格雷的浓度,并用于人体药动学研究.方法：500μl的血浆样品经甲基叔丁基醚提取处理后,以0.4％甲酸-乙腈（30∶70）为流动相,Poroshell 120 SB-C18柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以多反应监测方式进行检测,选择离子反应为m/z 322.0→212.1（氯吡格雷）和m/z285.0→193.1（地西沣）.结果：氯吡格雷在5.04～10 080.0 pg/ml浓度范围内线性关系良好,定量下限为5.04 pg/ml,日内、日间精密度均不大于13.6％,氯吡格雷和内标地西泮的回收率分别为86.4％～ 88.6％和91.4％～100.2％.结论：该法选择性强、灵敏度高,适用于氯吡格雷片的临床药代动力学研究.     

超高效液相色谱串联质谱法检测血液中的氨曲南及甲硝唑

 目的 建立同时检测血液中氨曲南及甲硝唑的超高效液相色谱串联质谱分析方法。方法 以头孢拉定和氯霉素为内标,血液样品经乙腈沉淀蛋白后通过高效液相色谱分离,电喷雾离子源进行离子化,采用多反应监测方式(multiple reaction monitoring mode,MRM)对各化合物进行监测。结果 所建立的方法可同时检测血液中的氨曲南和甲硝唑成分,氨曲南在10～5 000 ng/mL、甲硝唑在1～1 000 ng/mL的线性范围内具有良好的线性关系,线性相关系数r均大于0.995;血液中氨曲南和甲硝唑的检出限分别为5和0.5 ng/mL (S/N=3∶1);定量限分别为10和1 ng/mL (S/N=10∶1);方法的日间及日内精密度均小于10%,准确度为 89.6%～97.5%。将此方法应用于1例医疗纠纷案件的鉴定,在涉案死者的血液中同时检出氨曲南及甲硝唑成分,血液中氨曲南及甲硝唑的质量浓度分别为438 ng/mL和15 μg/mL。结论 本研究所建立的分析方法灵敏度高、简便快速、专属性强、可靠性高,为司法鉴定实践中涉及氨曲南和甲硝唑的案件提供了技术支持和基础数据。     

高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定肿节风中异秦皮啶的含量

目的建立异秦皮啶的高效液相色谱-电喷雾串联质谱含量测定方法。方法肿节风药材及清热消炎宁胶囊中异秦皮啶分别用乙酸乙酯和氯仿萃取,以高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行分析,多反应监测扫描,母/子离子对为223/162。结果异秦皮啶保留时间为6.60min,标准曲线在484-9680ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),回收率96.7%,RSD4.49%,最低检测限1ng/ml。结论该方法快速、准确、选择性好,灵敏度高,可为异秦皮啶的含量测定提供参考。     

液相色谱-串联质谱法测定家兔血浆中倍他米松

目的:建立液相色谱-串联质谱法测定家兔血浆中倍他米松含量.方法:血浆样品经乙醚-正己烷(4:1,V/V)液-液萃取,以乙腈-5 mmol/L醋酸铵-甲酸(80:20:0.1,V/V/V)为流动相,Zorbax Eclipse XDB-C18柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 393m/z 373和m/z 393m/z 355 (倍他米松)和m/z 406m/z 247 (内标,A0).结果:测定血浆中倍他米松方法的线性范围为15.0～1 000 pg/ml,定量下限为15.0 pg/ml,日内、日间精密度(RSD)均小于13.0%,准确度(RE)在-1.4%～-0.6%以内.应用本法对家兔经皮给予二丙酸倍他米松乳膏后的药动学进行研究,结果显示Tmax为(11.0±5.3) h,Cmax为(167±28) pg/ml,AUC0-t为(4.24±1.68) ng·h·ml-1.结论:该法选择性强、灵敏度高,适用于二丙酸倍他米松乳膏剂的药代动力学研究.     

液相色谱-串联质谱法测定白念珠菌群体感应分子的含量

目的 建立一种简便、可靠和灵敏的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法用于检测白念珠菌分泌的3种感应分子（法尼醇、酪醇、3-吲哚乙醇）的含量。方法 采用Agilent 6470型三重四极杆串联质谱仪,正离子检测模式,以卡马西平为内标,样品经乙酸乙酯萃取后,在Agilent Poroshell 120 EC-C18（3.0 mm×100 mm,2.7 μm）色谱柱上采用梯度洗脱进行色谱分离。流动相：A-0.1% 甲酸水溶液,B-乙腈,洗脱梯度：0-3 min 80%-60% A,3-4 min 60%-20% A,4-8 min 20% A;流速为0.5 mL/min,进样量为5 μL,柱温为25℃,分析时间8 min,平衡时间2 min。结果 法尼醇、酪醇、3-吲哚乙醇在设定的浓度范围内线性关系良好,相关系数r＞0.999,日内与日间精密度均＜10%。结论 该方法可以用于测定白念珠菌分泌的法尼醇、酪醇、3-吲哚乙醇的含量,并为真菌群体感应分子的快速、准确检测提供参考。     

UHPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢物的浓度

目的 建立利用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢产物(羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺)浓度的方法.方法 以Agilent poroshell SB-C18柱(75 mm×2.1mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温25℃,进样量5 μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),选择多重反应离子监测(MRM)正离子模式.取8只成年雄性SD大鼠分离获得血浆样品,测定血浆样品中环磷酰胺及其代谢产物的血药浓度和药代动力学参数.结果 方法学验证表明,环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺在浓度为20～4 000 ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.998 0、0.995 3和0.998 6),脱氯乙基环磷酰胺在浓度为5～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.996 8).日内、日间相对标准差(RSD)对于质控(QC)样品和最低定量限(LLOQ)样品分别小于8.73％和15.38％,基质因子的RSD均在-15％～15％之间,提取回收率均在(66.44±5.53)％～(96.66±1.73)％之间;所有待测化合物的稳定性均表现良好.大鼠血浆中各化合物药代动力学参数如下:环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺的Ckx分别为(207.52±13.20)、(18.47±2.66)、(6.59±1.33)和(8.27±1.44) μg/mL,T1/2分别为(1.28±0.09)、(5.03±0.48)、(6.72±0.47)和(7.47±0.68)h,AUGo(-)t分别为(372.52±32.79)、(65.70±5.04)、(33.26±11.76)和(45.03±8.93) μg·h·mL-1.结论 该方法操作简单、灵敏、准确、专属性强,适用于高剂量环磷酸铵在大鼠血浆中药代动力学研究.     

高效液相色谱串联质谱法检测妊娠期肝内胆汁淤积症7种胆汁酸及其临床意义

目的 比较妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇、肝功异常孕妇和正常孕妇胆汁酸谱中7种胆汁酸亚型在不同孕周的血清水平差异及其与妊娠结局的关系,探讨血清胆汁酸亚型分析在临床应用中的价值。 方法 回顾性分析2018年9月—2019年2月于杭州市妇产科医院常规产检并分娩的ICP孕妇84例、单纯肝功异常孕妇20例和正常孕妇30例,于9～13+6周、15～20+6周及28～40周采集空腹静脉血,应用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清中胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、石胆酸(LCA)、熊脱氧胆酸(UDCA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)水平;分析与相应妊娠结局间的关系。 结果 孕早、中、晚期ICP孕妇均有多种胆汁酸亚型水平显著高于正常孕妇组和肝功异常孕妇组,以GCA和TCA为主;ICP组胆汁酸谱随孕周升高趋势明显,7种胆汁酸亚型在3个妊娠阶段均有显著差异;GCA与分娩孕周负相关,GCA、LCA、GCDCA与新生儿体重负相关,其他胆汁酸与临床结局无显著相关性。 结论 3组病例的胆汁酸谱随孕周变化规律不同;CA/CDCA比值有望作为区分ICP和单纯肝功异常的指标;LCA、GCA和GCDCA升高可能与不良预后有关,HPLC-MS/MS法检测的7种胆汁酸可用于ICP临床诊断及疗效评估。