知母皂甙对Aβ_(25-35)激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用

目的观察知母皂甙(SAaB)对Aβ25-35激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞进行培养,用10μg/L的Aβ25-35刺激细胞,对照组同时加入不同浓度(10μg/L、30μg/L、100μg/L)的SAaB共同孵育。采用ELISA法、Griess反应和免疫组织化学(SP)方法分别检测TNF-α分泌量、iNOS表达、NO的生成量。结果Aβ25-35能激活小鼠腹腔巨噬细胞,使其分泌的TNF-α增多、iNOS表达上调、NO的生成量增加。SAaB能有效地抑制此变化,并呈剂量依赖关系。结论这一作用的机制可能与其抑制激活的巨噬细胞释放炎症因子有关。     

知母皂甙对Aβ25-35激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用

目的 观察知母皂甙（SAaB）对Aβ25-35激活的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和iNOS表达的抑制作用，并初步探讨其作用机制。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞进行培养，用10μg／L的Aβ25-35刺激细胞，对照组同时加入不同浓度（10μg／L、30μg／L、100μg／L）的SAaB共同孵育。采用ELISA法、Griess反应和免疫组织化学（sP）方法分别检测TNF-α分泌量、iNOS表达、NO的生成量。结果 Aβ25-35能激活小鼠腹腔巨噬细胞，使其分泌的TNF-α增多、iNOS表达上调、NO的生成量增加。SAaB能有效地抑制此变化，并呈剂量依赖关系。结论这一作用的机制可能与其抑制激活的巨噬细胞释放炎症因子有关。     

重组人生长激素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化碳产生及Toll样受体4表达的影响

目的 研究重组人生长激素(rhGH)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)生成及Toll样受体4(TLR4)表达的影响以探讨rhGH的免疫调节作用.方法 采用Griess反应、中性红吞噬实验及RT-PCR法分别测定不同剂量(1、3、25和100μg/L)rhGH作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、吞噬功能及TLR4的表达.结果 结果显示3μg/L rhGH可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量及TLR4的表达,增强巨噬细胞吞噬中性红能力.结论 rhGH对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产生及TLR4表达有显著的调节作用,这种调节作用呈现剂量相关性,为rhGH的合理应用提供一定的实验基础.     

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的 观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达.探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制.方法 传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟.在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养.用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变.结果 Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加.结论 ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用.     

穿心莲内酯对活化巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路的抑制作用

目的：观察穿心莲内酯对脂多糖激活的小鼠腹腔巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignal-regulated kinase1/2,ERK1/2）信号转导通路及肿瘤坏死因子α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）的影响。方法：以穿心莲内酯作用于脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞后,细胞计数试剂盒8测定穿心莲内酯对巨噬细胞的细胞毒作用,蛋白质印迹法检测巨噬细胞ERK1/2、p38和JNK蛋白磷酸化水平以及IκBα蛋白表达水平,逆转录聚合酶链反应法检测巨噬细胞TNF-αmRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达水平。结果：1~100μg/mL穿心莲内酯对脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞无细胞毒作用;穿心莲内酯能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的ERK1/2磷酸化,随着穿心莲内酯浓度增加,抑制作用增强（P〈0.01）;1~25μg/mL穿心莲内酯不能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的p38和JNK磷酸化,对脂多糖引起的IκBα降解也无影响。12μg/mL穿心莲内酯和20μmol/LPD98059（ERK1/2信号转导通路抑制剂）能降低巨噬细胞TNF-αmRNA的表达和其上清液中TNF-α的分泌水平（P〈0.01）。结论：穿心莲内酯能阻断ERK1/2信号转导通路,并在抑制TNF-α的表达中可能起作用。     

刺五加多糖的免疫调节作用研究

目的 研究刺五加多糖(acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)对小鼠腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞体外激活作用.方法 培养小鼠腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞,经不同浓度的ASPS作用48h后,用比色法分析腹腔巨噬细胞吞噬中性红细胞的能力;Griess法测定培养液中一氧化氮合酶含量;反转录聚合酶链反应检测脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平.结果 ASPS能够明显提高巨噬细胞吞噬活性.能够显著增加一氧化氮(nitric oxide,NO)的生成量.反转录聚合酶链反应检测结果显示,经ASPS处理后,小鼠腹腔巨噬细胞IL-1、TNF-α mRNA的表达高于对照组;而小鼠脾淋巴细胞IL-2 、TNF-α mRNA的表达高于对照组.结论 ASPS对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用,并能促进腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞产生细胞因子.     

大黄素对内毒素激活后巨噬细胞释放HMGB1的影响

目的探讨大黄素对内毒素激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达和胞外释放的影响。方法内毒素脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞培养物经不同浓度（5、20、50μmol/L）大黄素作用一定时间,观察培养上清液HMGB1、TNF-α含量的变化及细胞HMGB1mRNA表达的改变。结果大黄素（50μmol/L）明显抑制脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA的表达和HMGB1、TNF-α的释放（均P（0.01）。结论大黄素具有抑制巨噬细胞HMGB1mRNA表达和HMGB1胞外释放的作用。     

几丁聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成和iNOS活性的影晌

目的研究水溶性几丁聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响,探讨几丁聚糖的免疫调节作用机制。方法采用Griess反应、荧光法分别测定不同剂量(100mg/kg,200mg/kg,300mg/kg)水溶性几丁聚糖作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、iNOS活性。结果Griess反应结果显示几丁聚糖提高小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量,低、中、高剂量组NO生成量(nmol/L)分别为51.36±12.14,79.25±14.62,86.44±15.27,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);荧光法测定结果显示低、中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性[nmol/(well.min)]分别为4.06±0.15,6.81±0.13,7.16±0.12,与对照组比较P<0.01。结论水溶性几丁聚糖能提高小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性,增加NO合成。提示几丁聚糖的免疫调节作用可能与几丁聚糖刺激巨噬细胞NO生成有关。     

芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成和iNOS酶活性的影响

目的探讨芦荟多糖(AloePolysaccharides,AP)对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(nitricox-ide,NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)酶活性的影响。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分别用0～400mg/L浓度的AP刺激24h,采用Griess反应测定NO生成量,荧光法检测iNOS活性。结果AP在25～400mg/L浓度范围内作用于小鼠腹腔巨噬细胞24h后,NO生成量增加、iNOS活性增高,除低浓度AP组(25mg/L)外,其余各浓度组差别均具有非常显著性意义(P<0.01),并呈显著正相关(r=0.7523,P<0.01);转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和NOS竞争性抑制剂L-NMA,均能有效抑制AP所诱导的巨噬细胞NO生成和细胞内iNOS活性(P<0.01)。结论AP能促进细胞内iNOS基因表达,以从头合成方式促进细胞NO合成和释放,所释放的NO可能参与AP的免疫调节过程。     

盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化和角质形成细胞细胞因子产生的影响

目的研究盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化、角质形成细胞增殖、以及白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)产生的影响,探索该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点。方法体外培养小鼠脾脏T淋巴细胞、永生化角质形成细胞株HaCaT细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞,分别用伴刀豆球蛋白A(ConA)、重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)、312nm窄波UVB和脂多糖(LPS)诱导,采用MTT法检测盐酸13-己基小檗碱对小鼠T淋巴细胞活化和HaCaT细胞增殖的影响,用ELISA法检测其对HaCaT细胞IL-8和TNF-α,以及小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生的影响。结果盐酸13-己基小檗碱明显抑制小鼠T淋巴细胞活化(IC50≈0.123μg/ml);在0.05～0.78μg/ml范围对HaCaT细胞增殖无明显的直接影响(抑制率<15%),能剂量依赖性抑制25ng/ml rhTNF-α诱导的HaCaT细胞IL-8产生(IC50=0.13μg/ml)和124.2 mJ/cm2窄波UVB照射引起的HaCaT细胞TNF-α产生(IC50=0.21μg/ml);在0.01μg/ml浓度时抑制10μg/ml LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生(抑制率达50%)。结论盐酸13-己基小檗碱能抑制T淋巴细胞活化及炎症性细胞因子IL-8、TNF-α和IL-1β产生,提示以上作用可能是该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点。     

原花青素对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达的影响

目的:研究原花青素对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因表达的影响。方法:建立大鼠佐剂性关节炎(AA)模型。硝酸还原酶法测大鼠关节液中NO的含量;RT-PCR和Western blot分别检测大鼠腹腔巨噬细胞内iNOS mRNA和蛋白的表达;同时ELISA检测大鼠血清中细胞因子IL-1β、TNF-α的含量。结果:原花青素显著减低AA大鼠足跖炎症组织中NO的含量以及血清中IL-1β、TNF-α的水平,同时下调AA大鼠腹腔巨噬细胞iNOS mRNA和蛋白的表达。结论:原花青素对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用可能与其降低TNF-α和IL-1β的水平,抑制iNOS的mRNA和蛋白表达从而减少NO的释放有关。     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

猪苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶活性及mRNA表达的影响

目的:探讨猪苓多糖(polyporus polysacchride,PPS)的免疫调节作用和抗肿瘤作用机制.方法:采用Griess反应、荧光法和RT-PCR分别测定不同剂量的PPS作用下小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、iNOS活性及mRNA表达水平.结果:PPS能使小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性增高,并呈作用剂量依赖关系,PPS能刺激小鼠腹腔巨噬细胞iNOS mRNA表达.结论:PPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞NO合成的调节可发生在iNOS的转录水平,从而刺激巨噬细胞NO大量合成与释放.PPS的免疫调节作用和抗肿瘤作用机制可能与PPS刺激巨噬细胞iNOS从头合成从而增加NO生成有关.     

川芎嗪通过AMPK-NF κB信号通路抑制BV-2小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对Aβ25-35诱导的BV-2小鼠小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达及对一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-核因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)信号通路的影响。方法采用Aβ25-35激活BV-2细胞的炎性反应,测定TMP高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μmol/L)对Aβ25-35诱导的BV-2细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA表达水平的影响。在AMPK激活剂(AICAR)及抑制剂(化合物C)存在下,检测TMP对AMPK及p65(NFκB亚基)磷酸化的影响。结果 TMP高、中剂量可明显抑制BV-2细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS基因mRNA表达水平(P0.01),高剂量TMP可激活BV-2细胞中AMPK(P0.01),并抑制p65磷酸化(P0.01)。结论 TMP通过激活BV-2细胞中AMPK活性,抑制NFκB活化,进而抑制促炎性细胞因子基因的表达。     

雷公藤内酯醇对Aβ_(1-42)激活的小胶质细胞一氧化氮释放和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究雷公藤内酯醇(triptolide,T10)对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)1-42激活的小胶质细胞一氧化氮(nitrogenmonoxidum,NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法用不同浓度的T10(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)预孵育小胶质细胞12 h,然后加入10μmol/L Aβ1-42共孵育12 h;Griess反应检测上清NO的含量,Western blotting检测iNOS蛋白的表达。结果 Aβ组iNOS的表达和NO释放明显高于对照组(P<0.01)。T10可明显减少Aβ诱导的小胶质细胞iNOS的表达及NO的释放(P<0.05)。结论 T10可抑制Aβ1-42激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达及NO的释放。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF—αmRNA、iNOSmRNA的表达

目的观察脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α以及诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响。方法按常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成两组：空白对照组及LPS组（分别含LPSO．01,0．1,1．0,10rag／L）。采用荧光定量PCR方法测定肿瘤坏死因子-α及诱导型一氧化氮合酶的基因表达情况。结果经0．01μg／mL LPS刺激后细胞TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异（P〈0．01）,并且在一定范围内呈剂量一效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。     

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活效应

目的探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用,为微生物DNA制剂开发应用于临床提供科学依据.方法纯化提取双歧杆菌基因组DNA,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度.收集双歧杆菌DNA(10μg/ml)体外诱导培养24 h的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清,采用ELISA法检测培养上清中TNF-α、IL-12的含量,用Griess试剂检测其NO的含量;FACS检测巨噬细胞的吞噬功能.结果实验组(双歧杆菌DNA组)巨噬细胞产生TNF-α、IL-12及NO的水平分别为120.12±13.21 pg/ml、405.51±51.80 pg/ml和11.12±1.01μmol/L,巨噬细胞吞噬功能的平均荧光强度为28.12±3.58;对照组(PBS组)分别为5.82±1.54 pg/ml、10.17±1.27 pg/ml、2.14±0.28 μmol/L和9.32±1.01,两组间各项指标比较均有显著性差异(均P＜0.01).结论双歧杆菌DNA能激活巨噬细胞,可增强巨噬细胞TNF-α、IL-12及NO产生的水平及吞噬功能.     

淫羊藿甙对巨噬细胞iNOS和TNF-αmRNA的影响

目的淫羊藿甙(icariin,ICA)和脂多糖(LPS)共同作用于培养小鼠巨噬细胞(Mψ)后,观察其对Mψ中iNOS和TNF-αmRNA影响.方法培养小鼠腹腔Mψ分为5组,分别为正常对照组、LPS模型组(10mg/L)、ICA3种剂量作用组(ICA1.0;0.1;0.01μg/ml与LPS同时孵育).分别作用培养4h后留取细胞和培养上清,用RT-PGR法测定Mψ中TNF-α和iNOSmRNA的基因表达情况.放射免疫法测细胞培养上清中TNF-α的含量.硝酸还原酶法测定细胞培养上清中NO的含量.结果Mψ加LPS培养后吞噬中性红的能力减弱(P＜0.05);ICA作用组细胞吞噬能力增强,并呈剂量依赖关系.LPS模型组中TNF-α基因表达和iNOSmRNA均增加,NO含量升高(P＜0.05);加用ICA与LPS共同培养后TNF-α基因表达下降、iNOS表达和NO明显降低(P＜0.05),并呈剂量效依赖关系.结论ICA可增强培养Mψ的吞噬功能,并可降低TNF-α、iNOS的表达.     

手术创伤对老龄大鼠海马炎症介质表达的影响

目的:探讨手术创伤对老龄大鼠海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及一氧化氮(NO)表达水平的影响。方法:健康雄性SD大鼠45只,月龄18月,体重500-600g,随机分成3组(n=15):对照组(C组)腹腔注射生理盐水3ml;麻醉组(A组)腹腔注射1%戊巴比妥钠注射液50mg/kg(稀释至3ml)麻醉,不行手术;手术组(S组)腹腔注射1%戊巴比妥钠注射液50mg/kg(稀释至3ml)麻醉后,行腹腔探查+阑尾切除+脾切除术。于麻醉或术后1,3,7d(T1,3,7)采用ELISA法测定海马TNF-α和IL-1β的表达,采用NO和NOS试剂盒测定海马组织NO和iNOS表达水平。结果:与C组和A组比较,在T1和T3时点,S组大鼠海马TNF-α、IL-1β蛋白水平以及iNOS和NO的表达上调(P<0.05),C组与A组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手术创伤导致的海马TNF-α、IL-1β及iNOS、NO的表达上调,可能与老龄大鼠术后认知功能障碍有关。     

黄芪多糖对细菌脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放TNFα、NO及IL-1的影响

目的研究黄芪多糖(APS)对细菌脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-1(IL-1)及一氧化氮(NO)的影响.方法 10 mg/L LPS体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞,小鼠成纤维细胞瘤株(L929)杀伤法检测TNFα的含量、小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1的活性、Griess法检测NO的水平.结果 APS能不同程度地抑制激活巨噬细胞对TNFα、NO与IL-1的分泌.结论 APS抑制巨噬细胞的分泌功能可能是其保肝作用的机制之一.