一种旋毛虫肌幼虫囊包标本的单染制作方法

本研究采用醋酸明矾卡红染色液对旋毛虫肌幼虫囊包标本进行染色。为观察不同染色时间对制片效果的影响,分别采用4种染色方法:①染色20 h后,分色;②染色2.5 h,不分色;③染色20 h,不分色;④染色40 h后,分色。结果显示,染色方法 1制作的标本效果最佳。囊包、囊内幼虫和周围肌纤维色泽差别较大,易于观察。囊壁内外两层结构可清晰辨别,囊内幼虫典型。     

旋毛虫肌幼虫囊包标本的复染制作方法

本研究采用单染和复染两种方法对旋毛虫肌幼虫囊包标本进行染色。单染方法:制片经甲醛、乙醇和冰醋酸溶液固定,用乙醇硼砂卡红染色液(4%硼砂水溶液100 ml,卡红1 g,70%乙醇100 ml)染色。复染方法:制片经甲醛、乙醇和冰醋酸溶液固定,用乙醇硼砂卡红染色液和固绿染色液(固绿0.1 g,95%乙醇100 ml)染色。结果显示,单染标本,囊包与周围肌细胞着色无明显差别,结构不清晰,不易观察,囊内幼虫可辨认。复染标本,囊包结构清晰;囊内幼虫、囊包和肌细胞呈不同的颜色,囊包梭形显著,囊内幼虫特征典型。与单染标本相比,复染标本着色适度,染色效果好,易于观察。     

旋毛虫肌幼虫囊包不染色标本的制作

在医学寄生虫学实验教学中,制作旋毛虫肌幼虫囊包标本通常采用染色封制法,梭形囊包明显,但如果分色过程掌握不好,虫体轮廓不清。作者尝试制作旋毛虫肌幼虫囊包不染色封制标本,用于教学实践取得良好效果。介绍如下。 旋毛虫肌幼虫囊包取自感染旋毛虫幼虫的猪横纹肌。操作工具:眼科剪,眼科镊,载玻片,大瓶皿,显微镜,吸管,玻片标本盘等。试剂:甲醛,蒸馏水,乙醇,水杨酸甲酯,中性树胶。 将感染旋毛虫幼虫的肌肉剪成碎块,夹在两张载玻片之间,轻轻加压、捆扎,置于10％甲醛固定12～24 h。解开载玻片后再浸泡1～2h,充分固定。倾去甲醛,用蒸馏水洗3次,每     

3种旋毛虫成虫永久标本染色方法的比较

目的探讨制作旋毛虫成虫染色标本的最佳方法。方法分别使用乙醇硼砂卡红、醋酸卡红、固绿3种染色法制作旋毛虫成虫标本。结果乙醇硼砂卡红染色的标本,颜色鲜艳,结构清晰,另外两种染液染色效果不佳。结论乙醇硼砂卡红染色可用于旋毛虫成虫永久标本的制作。     

旋毛虫肌幼虫在小鼠体内发育的实验观察

为观察旋毛虫肌幼虫在小鼠体内的发育过程及特点,取28只雌性昆明小鼠,每鼠经口感染100条旋毛虫肌幼虫,感染后8、 9、 10、 11、 13、 17、 20、 23、 27、 29、 50、 60、 240、 400 d各剖杀2只小鼠,取完整隔肌和部分腹肌,醋酸明矾卡红染色后,镜下观查肌幼虫、囊包形态,测量肌幼虫长和宽。结果显示,旋毛虫感染后10、 13 d,小鼠膈肌和腹肌中分别发现旋毛虫肌幼虫,以直杆状、弧形居多。感染后17 d,肌幼虫形态以环状、折叠、弯曲、 s形、直杆状、弧形为主,囊包雏形形成。感染后29 d,囊包基本发育成熟,囊壁细线状,囊内结构分为两层。感染后60 d,肌幼虫出现蜷曲成团,囊内结构开始出现透明化。感染后400 d,囊包退化,囊内层(深染层)出现透明。旋毛虫感染后10、 17、 29、 60 d,肌幼虫长均值分别为(131.7±21.4)、(435.5±201.5)、(928.4±188.5)、(1044.4±86.7)μm,前后二者差异均有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05);肌幼虫宽均值分别为(10.4±2.5)、(22.8±5.2)、(35.0±5.2)、(38.3±3.0)μm,前后二者差异有统计学意义(P﹤0.01)。提示旋毛虫感染小鼠后,肌幼虫及囊包发育大致可以分为成囊前期、囊包发育期、囊包成熟期和囊包退化期等4个时期。肌幼虫和囊包的形态结构变化与感染时间密切相关。     

一种快速、简便制作旋毛虫幼虫永久标本的方法

经甲醛、乙醇、冰醋酸溶液固定,固绿染色液染色制作旋毛虫肌幼虫标本,方法简单,制作快速,幼虫虫体清晰可见,整体色调柔和,易于观察,可长期保存。     

旋毛虫孔雀绿染色标本制作

孔雀绿是一种弱碱性胞核染料，也是一种很好的指示剂。纪伟华等用孔雀绿染色法制作的带绦虫妊娠节片标本，子宫与周围组织清楚。旋毛虫标本常通过卡红或苏木精染色制作永久标本，作者首次用孔雀绿染色法制作旋毛虫标本。     

旋毛虫孔雀绿染色标本制作

孔雀绿是一种弱碱性胞核染料 ,也是一种很好的指示剂。纪伟华等[1] 用孔雀绿染色法制作的带绦虫妊娠节片标本 ,子宫与周围组织清楚。旋毛虫标本常通过卡红或苏木精染色制作永久标本[2 ] ,作者首次用孔雀绿染色法制作旋毛虫标本。1　材料和方法1.1　材料1.1.1　成虫　每只小鼠感染 5 0 0条肌幼虫 ,第 6d禁食 1d ,于第 7d处死 ,取出小肠并纵行剪开 ,无菌生理盐水洗去肠内容物 ,将小肠剪成 2～ 3cm长的小段 ,放入盛有 3 7℃预温的无菌生理盐水的大平皿内 ,置 3 7℃恒温培养箱中孵育 2h～ 3h ,成虫从肠壁钻出 ,反复用无菌生理盐水漂洗、沉淀收集…     

旋毛虫幼虫在大鼠与小鼠肌肉分布及囊包内幼虫数量的观察

目的观察不同剂量旋毛虫感染大鼠与小鼠后幼虫在肌肉内的分布及囊包内的幼虫数量。方法将30只昆明小鼠和30只SD大鼠均随机分为轻、中、重度感染组(每组10只),分别按每g克体重1、5、20条肌幼虫经口感染。感染后42d剖杀,取不同部位肌肉称重后压片镜检,观察不同部位每克肌肉虫荷(larvaepergram,lpg)及囊包内幼虫数量。结果大鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时分别以膈肌和舌肌虫荷最高;小鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时均以膈肌虫荷最高。在大鼠肌肉8028个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.91%、1.95%及0.14%;在小鼠肌肉7559个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.33%、2.54%及0.13%。小鼠肌肉多幼虫(2～3条)囊包的检出率明显高于大鼠(χ2=5.644,P<0.05)。多幼虫囊包的检出率在大鼠和小鼠均随感染剂量的增加而升高(χ2大鼠=42.656,P<0.05;χ2小鼠=45.713,P<0.05);在含3条幼虫囊包的肌肉,重度感染的大鼠和小鼠肌肉分别占81.82%(9/11)与100%(10/10)。未发现含有4条及4条以上幼虫的囊包。结论对鼠类旋毛虫感染的流行病学调查时应首选咬肌进行病原学检查,其次为膈肌或舌肌;进行肌肉活检或肉类检疫时发现含3条幼虫的囊包提示为重度感染。     

不同地理株旋毛虫对小鼠感染性的实验观察

目的观察我国黑龙江、河南及云南省3个地理株旋毛虫对小鼠的感染性。方法取30只昆明小鼠,随机分为3个组,用灌胃感染法分别建立黑龙江株、河南株和云南株旋毛虫动物感染模型,每只灌胃200条肌幼虫。取小鼠膈肌压片,镜下观察各株旋毛虫是否成囊,摸索成囊时间,同时计数膈肌虫荷;随机测量30个囊包的长和宽,计算囊包指数(长/宽);收集小鼠全身各部位肌肉中的幼虫,计算旋毛虫的繁殖力指数(RCI)。结果黑龙江株、河南株及云南株旋毛虫在昆明小鼠体内形成囊包的时间分别为53、40和40d;50mg小鼠膈肌虫荷数分别为(91.8±5.119)条/50mg、(301.8±14.839)条/50mg和(176.4±7.127)条/50mg;囊包指数分别为2.360±0.624、2.385±0.335和1.883±0.401,差异有统计学意义(P<0.05);RCI分别为66.20±1.569、293.84±3.855和154.80±3.894,差异有统计学意义(P<0.05)。结论河南株旋毛虫对小鼠的感染性较黑龙江株和云南株强。     

旋毛虫成囊前期幼虫抗原保护性免疫的研究

目的比较旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。方法分别用旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和阴性对照组,间隔7d免疫1次,共3次。末次免疫后7d,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口进行攻击感染。感染后7d和30d分别检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体。结果虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原和佐剂组的成虫减虫率分别为84．89％、89．73％、85．65％、2．57％;肌幼虫减虫率分别为71．71％、80．98％、73．66％、5．60％。排泄分泌抗原组、表面抗原组的成虫减虫率（P均〈0．05）及肌幼虫减虫率（P均〈0．01）均高于虫体抗原组。各免疫组小鼠血清IgG抗体滴度明显升高,虫体抗原组、排泄分泌抗原组和表面抗原组的几何平均倒数滴度分别为2798．89、3474．51、2984．83,分别为阴性对照组（459．32）的6．09、7．56、6．50倍。结论旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力。成囊前期幼虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。     

旋毛虫幼虫在宿主肌组织中分布的影响因素

旋毛虫幼虫在宿主肌组织中的分布受多种因素的影响, 如宿主种类、 肌肉生理状况、 旋毛虫种别、 旋毛虫幼虫能否成囊、 感染量等。本文对旋毛虫幼虫在宿主肌组织分布的影响因素作一综述。     

Ts21基因在旋毛虫不同期虫体的表达及特性的研究

目的观察旋毛虫Ts21基因在不同发育期虫体的表达及其特性。方法应用RT-PCR检测旋毛虫Ts21基因在成虫、新生幼虫、感染后15d的成囊前幼虫及感染后42d的成囊幼虫(肌幼虫)的转录情况;应用抗Ts21重组蛋白血清通过间接荧光抗体试验(IFA)对成囊前幼虫及肌幼虫冰冻切片抗原进行检测。应用抗Ts21重组蛋白血清对旋毛虫肌幼虫粗(可溶性)抗原及排泄分泌(ES)抗原进行Western-blot分析。结果RT-PCR发现旋毛虫成虫与感染后42d肌幼虫均扩增出一条分子量约540bp的特异性条带(Ts21基因目的条带),而新生幼虫与感染后15d成囊前幼虫则未扩增出目的条带;IFA结果表明抗Ts21重组蛋白血清只与感染后42d成囊幼虫抗原发生阳性反应,而不与感染后15d的成囊前幼虫抗原发生阳性反应。Western-blot结果显示抗Ts21重组蛋白血清只与旋毛虫肌幼虫粗抗原和ES抗原中Mr 21 000的单一蛋白条带发生阳性反应。结论旋毛虫Ts21基因的表达具有期特异性,Ts21蛋白是旋毛虫肌幼虫ES抗原中的一部分。     

Biology, species biodiversity and distribution of Trichinella nematodes

From the time of the discovery of Trichinella larvae in 1835 until the middle of the next century it was commonly assumed that all trichinellosis was caused by a single species Trichinella spiralis. This species is an intracellular parasite in both a larva and an adult stage. The L1 larvae live in a modified skeletal muscles. The adult worms occupy a membrane-bound portion of columnar epitelium, living as intramulticellular parasite. More than century later T. spiralis have been reported from more than 150 different naturally or experimentally infected hosts and demonstrated worldwide distribution in domestic and/or sylvatic animals. Up to date, Trichinella genus comprised eight species (T. spiralis, T. nativa, T. britovi, T. murrelli, T. nelsoni, T. pseudospiralis, T. papuae and T. zimbabwensisi) and three additional genotypic variants that have not yet to be taxonomically defined (T6, T8, T9). Molecular markers revealed that Trichinella T6 is related to T. nativa, Trichinella T8 related to T. britovi. Two main clades are recognized in the genus Trichinella: the first encapsulated in host muscle tissue and the second--non-encapsulated. In this paper the history of Trichinella spp. discovery, their life cycle, taxonomy and phylogeny have been reviewed.     

三苯双脒治疗小鼠不同虫株旋毛虫囊包幼虫感染的效果比较

目的观察不同剂量三苯双脒对小鼠感染不同虫株旋毛虫囊包幼虫的作用效果。方法对河南株、云南株、黑龙江株旋毛虫囊包幼虫感染鼠采用3种剂量的三苯双脒治疗,观察其效果。结果各治疗组小鼠均无不良反应,治疗组平均检虫数均少于对照组(P<0.05),河南株旋毛虫感染组3种剂量治疗后的减虫率分别为87.5%、75.4%和57.8%。云南株旋毛虫感染组减虫率分别为99.1%、92.4%和74.5%。黑龙江株旋毛虫感染组减虫率分别为61.6%、53.3%和50.5%。结论三苯双脒对小鼠感染河南株、云南株、黑龙江株旋毛虫囊包幼虫均有一定的疗效,尤其对云南株旋毛虫囊包幼虫感染的疗效更显著,且随药量的增加减虫率增大。     

Interaction of mannan-binding lectin with Trichinella spiralis glycoproteins, a possible innate immune mechanism

Complex and variable glycoconjugates presented by parasitic nematodes during infection are very important in the host-parasite interplay. Predominantly carbohydrate-rich antigens are involved in the stimulation and modulation of the stage-specific immune response of the host. The non-specific innate immune system, however, acts as the first line of host defence against pathogens, before the appearance of antigen-specific responses. The functional entities of the innate system are lectins that recognize the surface ligands of pathogens: mannan-binding lectin (MBL) is a key recognition element involved in binding oligosaccharide structures exposed on microorganisms. In the present study we investigated whether MBL binds to the parasitic nematode Trichinella spiralis (T. spiralis). Since the parasite is coated with mannose-containing glycans, these structures could represent potential ligands for MBL and contribute to activation of the innate immune response of the host. Histochemical staining revealed MBL on the surface and internal organs of T. spiralis muscle larvae. MBL bound in a mannose-inhibitable manner to both crude extracts of T. spiralis muscle larvae and larvae excretory/secretory products. Western blot analyses showed that MBL recognized glycoproteins from all stages of T. spiralis. In vitro complement activation assays suggested that MBL is capable of fixing complement components on T. spiralis crude extract coated plates and activating the complement cascade through the 'lectin pathway'.     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。