肌苷对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因基因表达的影响

①目的　研究肌苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因基因表达的影响 ,探讨肌苷的神经保护作用机制。②方法　取成年健康雌性SD大鼠 6 8只 ,随机分为治疗组和对照组 ,每组再随机分为缺血1.5h再灌注 2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组 (n =4 ) ,另外 4只为假手术组。应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)再灌注模型 ,腹腔注射肌苷注射液 (10 0mg/kg) ,原位末端标记 (TUNEL)和原位杂交技术分别观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因mRNA表达。③结果　脑缺血再灌注后 2h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞 ,并逐渐增加 ,皮质区 1d达高峰 ,纹状体区 2d达高峰 ,之后逐渐减少 ,至 14d接近假手术组水平 ;经肌苷治疗后 ,皮质区和纹状体区凋亡神经细胞减少 ,其中再灌注 12h～ 7d较对照组有显著差异 (t=2 .5 2 5～ 8.987,P <0 .0 5 )。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区卡配因mRNA的表达于 2h逐渐增加 ,皮质区 12h、纹状体区1d达高峰 ,3d后逐渐降低 ,至 14d仍明显高于假手术组 ;肌苷治疗组再灌注 12h～ 14d ,其在皮质区和纹状体区表达较对照组显著降低 (t=4 .4 4 3～ 8.876 ,P <0 .0 5 )。④结论　脑缺血再灌注后肌苷使卡配因mRNA表达降低 ,神经细胞凋亡减少 ,提示肌苷具有抑制细胞凋亡和     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和HSP-70基因表达的影响

①目的　了解肌苷 (Inosine)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和热休克蛋白 70 (HSP 70 )基因表达的影响 ,探讨Inosine的神经保护作用机制。②方法　应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)再灌注模型 ,腹腔注射Inosine注射液 (1 0 0mg/kg) ,应用原位末端标记 (TUNEL)和原位杂交技术分别观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和HSP 70mRNA表达。③结果　脑缺血再灌注后 2h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞 ,并逐渐增加 ,皮质区 1d达高峰 ,纹状体区 2d达高峰 ,之后逐渐减少 ,至 1 4d接近于假手术组水平 ;经Inosine治疗后 ,皮质和纹状体区凋亡神经细胞减少 ,其中再灌注 1 2h～ 7d与对照组比较差异有显著性 (F =3.2 38～1 1 .1 6 3,q =2 .4 5 1～ 7.2 0 0 ,P <0 .0 5 )。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区HSP 70mRNA的表达于 2h逐渐增加 ,皮质区 1 2h、纹状体区 1d达高峰 ,3d后逐渐降低 ,至 1 4d仍明显高于假手术组 ;Inosine治疗组再灌注 1 2h～ 1 4d ,皮质区和纹状体区HSP 70mRNA表达较对照组显著升高 (F =4 .5 73～ 1 0 .2 4 1 ,q =3.1 4 4～ 6 .992 ,P <0 .0 5 )。④结论　Inosine具有抑制细胞凋亡和神经保护作用。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后VEGF表达的影响

①目的　研究肌苷对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 ,探讨其神经保护作用机制。②方法　成年健康雌性SD大鼠 6 8只 ,应用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注动物模型 ,随机分为假手术组 4只 ,肌苷组 32只 ,对照组 32只。肌苷组腹腔注射肌苷 (10 0mg/kg) ,对照组同步注射等量的生理盐水。采用免疫组织化学法检测肌苷对大鼠脑缺血再灌注不同时间内VEGF蛋白表达的影响。③结果　对照组在皮质区和纹状体区于脑缺血再灌注 2hVEGF开始表达 ,12h达高峰 ,持续 2 4h ,随即迅速降低。肌苷治疗组VEGF表达于缺血再灌注 2h～ 2d较对照组显著增高 (t=12 .4 5～ 2 7.78,P <0 .0 1)。④结论　肌苷对脑缺血再灌注后的保护作用可能通过上调脑组织VEGF的表达而实现的。     

藻蓝蛋白对大鼠脑缺血再灌注后环氧合酶-2及环氧合酶-2 mRNA表达的影响

目的探讨藻蓝蛋白对大鼠局灶性脑缺血再灌注后COX-2及COX-2 mRNA表达的影响。方法用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),分别对假手术组、模型对照组、藻蓝蛋白组进行神经功能缺失评分,用TTC染色法测量脑梗死体积,应用免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌注后不同时间点COX-2及COX-2 mRNA在神经元中的表达情况。结果(1)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2阳性细胞。模型对照组COX-2阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区仅有少量阳性细胞出现,缺血再灌注后6h COX-2阳性细胞数开始增加,至再灌注24 h达高峰,2 d后阳性细胞逐渐减少,至14 d时仍有表达,略高于假手术组。藻蓝蛋白组COX-2阳性细胞也主要位于缺血周围区,阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,同一时间点相比较,藻蓝蛋白组周围区COX-2阳性细胞数均显著低于模型对照组。(2)假手术组和模型对照组非缺血侧脑组织可见到少量COX-2 mRNA的表达。模型对照组COX-2 mRNA阳性细胞主要位于缺血周围区,而缺血中心区阳性细胞明显减少。缺血再灌注6 h后COX-2 mRNA阳性细胞数逐渐增加,至再灌注12 h达高峰,持续24 h~3 d,然后开始下降,至14 d时仍有表达,略高于假手术组;藻蓝蛋白组COX-2 mRNA阳性细胞数量相对较少,其变化规律与模型对照组相似,与模型对照组同一时间点相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论脑缺血再灌注后,缺血周围区的神经元内COX-2及COX-2 mRNA均高表达,其在局灶性脑缺血再灌注损伤中起重要作用。藻蓝蛋白可能通过选择性抑制COX-2及COX-2 mRNA的表达来抵抗脑缺血损伤,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

脑缺血再灌注后脑组织Cyclin D1和CDK4基因的表达及其意义

①目的研究脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)基因表达及其与神经细胞凋亡的关系。②方法成年健康雌性SD大鼠36只,随机分为假手术组4只和实验组32只,实验组再进一步分为缺血1.5h再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d亚组,每组4只。应用线栓法经左侧颈外颈内动脉插线建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)技术检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的变化,原位杂交技术检测CyclinD1mRNA和CDK4mRNA的表达。③结果脑缺血再灌注2h脑组织即开始出现凋亡神经细胞,并于1d和2d分别在皮质区和纹状体区达高峰。神经细胞CyclinD1mRNA和CDK4mRNA的表达分别于再灌注2h和6h开始逐渐增强,并于12h和1d分别在皮质区和纹状体区达高峰,至再灌注14d降至假手术组水平。④结论脑缺血再灌注后皮质区、纹状体区对缺血更为敏感,CyclinD1mRNA和CDK4mRNA表达可能是诱导细胞凋亡的重要因素之一。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后勿动蛋白基因表达的影响

①目的　探讨脑缺血再灌注后勿动蛋白 (Nogo A)基因表达的变化规律及肌苷对其表达的影响。②方法　成年健康雌性SD大鼠 6 0只 ,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型。随机分为治疗组和对照组 ,每组再随机分为缺血 1.5h再灌注 2h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组 (n =4 ) ,另外 4只作假手术组。应用Bederson等神经功能评分法评定脑缺血再灌注后各组大鼠神经功能的恢复情况 ,原位杂交技术检测脑组织Nogo AmRNA的表达。③结果　对照组在缺血侧皮质和纹状体区Nogo AmRNA表达于 12h和 2d呈双峰增高 ,神经功能于 3d开始恢复。肌苷治疗组与对照组比较 ,Nogo AmRNA在皮质区的表达于 12h增高 ,7d下降 ,在纹状体区 12h、2d、3d增高 (t=1.93～ 14 .96 ,P <0 .0 5 ) ;神经功能于 7d恢复 ,差异有显著性 (t =2 .31,P <0 .0 5 )。④结论　肌苷可促进大鼠脑缺血再灌注后神经功能恢复 ,其作用机制可能与Nogo AmRNA表达下调有关。     

七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤SOD的影响

目的：观察七叶皂苷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤中超氧化物歧化酶（SOD）的影响,探讨其治疗作用机制。方法：将试验大鼠随机分为假手术组、对照组、治疗组。用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO／R）模型．应用七叶皂苷钠进行干预,采用免疫组化方法分别观察脑缺血再灌注6h、12h、1d、3d、7d和14d的SOD的表达以及藻蓝蛋白的干预作用。结果：对照组脑组织SOD有微弱表达,脑缺血再灌注后6h,皮质区和纹状体区SOD表达逐渐增强．于24h达高峰,之后逐渐升高,至7～14d仍高于假手术组。七叶皂苷钠对SOD变化趋势与对照组相似．与对照组同一时间点比较,SOD表达明显增强（P〈0．01）。结论：脑缺血再灌注损伤后,七叶皂苷钠可能通过上调SOD的表达,对脑缺血再灌注损伤后神经细胞损伤具有保护作用。     

胡黄连对缺血再灌注大鼠脑内NMDAR1 mRNA表达的影响

目的 观察缺血再灌注模型大鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）mRNA的变化,探讨胡黄连对神经元的保护作用。方法 参照线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,胡黄连干预,原位杂交方法观察皮质、纹状体NMDAR1 mRNA表达。结果 对照组缺血侧皮质区、纹状体区于缺血再灌注1d时NMDAR1 mRNA表达达高峰,7d后逐渐下降,但各时间点与假手术组比较,均有显著性差异（F=3．6、7．2,q=11．4～16．7,P〈0．01）;胡黄连治疗组大鼠脑皮质与纹状体NMDAR1 mRNA基本接近假手术组,明显低于对照组（t=9．43～10．55,P〈0．01）。结论 胡黄连对脑缺血再灌注损伤神经元有一定保护作用,其机制可能与下调脑内NMDAR1 mRNA表达有关。     

脑缺血再灌注损伤后神经细胞增殖相关因子基因的表达

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞巢蛋白（Nestin）、干细胞因子（SCF）和神经细胞黏附分子（NcAM）基因的表达。方法 成年健康雌性SD大鼠36只,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为缺血1．5h再灌注2h、6h、12h、24h、2d、3d、7d、14d组和假手术组,每组4只。应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织Nestin、SCF和NCAM mRNA的表达。结果 假手术组皮质和纹状体区Nestin、SCF和NCAM mRNA均有微弱表达。脑缺血再灌注后Nestin mRNA表达增高,皮质除再灌注2h以外、纹状体除再灌注2、6h以外,其余各时间点均明显高于假手术组。SCFmRNA表达,皮质除再灌注2、6、12h以外,纹状体除再灌注2、6h以外,其余各时间点均明显高于假手术组。NCAM mRNA于再灌注2h后在皮质和纹状体区开始表达,分别于再灌注12h和1d达高峰,7d后逐渐减少,14d降至假手术组水平。结论 脑缺血再灌注后SCF mRNA表达可能具有促进神经千细胞增殖作用,NCAM表达可能参与了损伤后脑组织的修复过程。     

神经调节素对缺血性脑损伤大鼠COX-2表达的影响

目的探讨神经调节素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后COX-2表达的影响。方法实验分为假手术组、对照组和治疗组。采用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO-R）模型,治疗组给予神经调节素干预治疗。于缺血1 h再灌注6 h1、2 h1、d、2 d、3 d7、d、14 d,对照组和治疗组采用免疫组化和原位杂交技术分别检测COX-2蛋白及COX-2 mRNA的表达。结果假手术组脑组织可见到少量COX-2阳性细胞。对照组缺血再灌注6 h后COX-2阳性细胞数开始增加,再灌注2 d后达高峰,然后阳性细胞逐渐减少,至14 d仍有表达。治疗组COX-2阳性细胞数相对较少,变化规律与对照组相似,同一时间点比较,治疗组均显著低于对照组（t=2.558~6.795,P〈0.05）。结论神经调节素可能通过抑制脑缺血再灌注后COX-2的表达,发挥其神经保护作用。     

大鼠大脑中动脉局灶脑缺血环氧酶2蛋白的表达及其意义

目的：探讨急性缺血性脑血管病发生、发展过程中环氧酶2(COX-2)作用及机制。方法：采用栓线法制备大鼠大脑中动脉短暂及持续缺血不同时点模型。利用免疫组化染色方法观察缺血COX-2蛋白表达情况。结果：光镜下缺血30min再灌注24h组仅在额顶叶皮层可见COX-2免疫阳性细胞。缺血90min再灌注3—48h在扣带皮层、内侧纹状体、海马可见COX-2免疫阳性细胞，12—24h表达强烈，48h下降。持续缺血24h组在内侧纹状体、扣带皮层可见COX-2免疫阳性细胞，海马表达更强。结论：局灶性脑缺血后COX-2蛋白可在受其影响的梗死周边区表达，依缺血时间不同，表达部位及含量不同。COX-2蛋白袁达可能与缺血后迟发性神经细胞死亡有关。     

大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞黏附分子（NCAM）基因表达的变化及规律.方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,原位杂交技术检测脑缺血90 min再灌注2 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d和14 d时间点神经细胞NCAM mRNA表达的变化.结果 NCAM mRNA于再灌注2 h时在皮质出现,12 h时达高峰,14 d降至基础水平;纹状体NCAM mRNA于2 h时出现,1 d后达高峰,14 d降至基础水平.结论脑缺血再灌注后NCAM基因表达持续增加,提示其在神经损伤修复过程中可能起重要作用.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后死亡相关蛋白激酶的表达及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时死亡相关蛋白激酶(Death associated related protein kinase,DAPK)的表达变化及其与脑缺血再灌注损伤的关系。方法 线拴法建立局灶性脑缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血再灌注组,缺血组于栓塞3h后分别再灌注12h、24h、3d、7d。HE染色观察组织病理变化;免疫组化法检测DAPK的表达;原位杂交法检测DAPK mRNA的表达。结果 缺血组DAPK免疫阳性反应于再灌注后24h开始增强并于3d时达高峰,随后下降;DAPK mRNA的表达于再灌注3d时达高峰,随后下降。结论 脑缺血再灌注损伤诱导DAPK表达增强;DAPK在缺血性脑损伤中起重要作用。     

环氧酶-2在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤过程中环氧酶(COX)-2基因的表达及其意义。方法采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。随机分为8组:假手术组,缺血2h组,缺血再灌注3、6、12、24、48和72h组,每组10只。评定神经功能损伤,HE染色观察脑组织形态学改变。Northern blot、Western blot和免疫组化染色方法检测脑组织的mRNA和蛋白产物表达。结果神经功能缺损表现随缺血再灌注时间的延长而逐渐加重。缺血2h组可见COX-2的mRNA和蛋白产物表达明显增加,再灌注后表达逐渐增强,再灌注12～24hCOX-2的mRNA和蛋白产物表达达到高峰。结论COX-2基因在局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达呈动态变化过程,COX-2可能与缺血再灌注后迟发性神经细胞死亡有关。     

EFFECTS OF PHYCOCYANIN ON EXPRESSION OF CytC mRNA AND CASPASE-3 mRNA AFTER FOCAL CEREBRAL ISCHEMIA／REPERFUSION IN RATS

Objective To study the effects of phycocyanin on the expression of Cytochrome C (CytC) genes and Caspase-3 genes after focal cerebral ischemia/reperfusion in rats. Methods A rat middle cerebral artery occlusion (MCAO)/reperfusion model was produced using the intraluminal filament method. The rats were divided into three groups: sham operation group, model control group and phycocyanin group. After MCAO, the neurobehavioral testing of all rats was made. The infarction area was evaluated with the method of 2,3,7-triphenylt-etrazolium chloride (TTC) staining. The expression of CytC mRNA and Caspase-3 mRNA were determined by in situ hybridization. Results In the sham operation group and the model control group, there was only a few CytCpositive cells were seen in the normal cerebral tissue. In the model control group, the upregulation of CytC mRNA began 6h after ischemia, reached a maximum at 12h (cortex)-24h (striatum) , then subsided gradually, but still in high level. In the phycocyanin group, CytC-positive cells were also mainly in cortex and striatum, but the number of the cells was significantly lower than the number of the model control group. The time-phase pattern of CytC mRNA in the phycocyanin group was similar to the pattern of the model control group. In the sham operation group and the model control group, there was only a few Caspase-3-positive cells were seen in the normal cerebral tissue. In the model control group, the upregulation of Caspase-3 mRNA began 6h after ischemia, reached a maximum at 24h and subsided at 48h, but still in high level. In the phycocyanin group, Caspase-3-positive cells were also mainly in the penumbral area, but the number of the cells were significantly lower than the number of the model control group. The time-phase pattern of Caspase-3 mRNA in the phycocyanin group was similar to the pattern of the model control group. Conclusion The over-expression of CytC mRNA and Caspase-3 mRNA might play a key role in ischemic cerebral injury after MCAO. Phycocyanin could inhibit the over-expression of CytC mRNA and Caspase-3 mRNA in the cerebral cortex, and might play an important role in the protection of ischemic neurons.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血后HSP70 mRNA表达影响

①目的观察亚低温对大鼠局灶性脑缺血后热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达的影响。②方法取成年健康Wistar大鼠145只,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,随机分为健康对照组、假手术组、缺血再灌注对照组(H0)、缺血后即刻亚低温组(H1)、缺血再灌注后亚低温组(H2)。采用原位杂交方法检测各组脑组织HSP70mRNA表达。③结果H0组HSP70mRNA表达于缺血再灌注2h出现,24h明显,48h减少,72h降到最低。H1和H2组HSP70mRNA阳性表达6~48h明显,72h、7d额叶皮质仍有HSP70mRNA表达,较H0组表达增多,差异有显著性(F=96.72~716.59,q=11.95~124.73,P<0.001)。H1组与H2组比较,前者HSP70mRNA表达更为明显,差异有显著性(q=7.56~60.49,P<0.001)。④结论亚低温治疗后脑组织HSP70mRNA表达增多,缺血后即刻亚低温的作用优于缺血再灌注后。     

肌苷对缺血再灌注脑组织VCAM-1表达的影响

①目的 探讨肌苷对局灶性缺血再灌注后脑组织血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）表达的影响。②方法 将健康成年雌性SD大鼠70只随机分为假手术组、治疗组和对照组，治疗组在缺血再灌注前腹腔注射肌苷注射液，另两组腹腔注射相同体积的生理盐水。后两组分别在脑缺血90min后再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d等不同时间，用免疫组化技术观察VCAM-1的表达。③结果 在皮质区，VCAM-1的表达在缺血再灌注不同时间点呈现不同水平，假手术组和对照组缺血再灌注2h之前有痕量表达，VCAM-1的阳性表达在缺血再灌注6h有较明显增加，1～2d时表达达高峰，之后逐渐下降，到7d时VCAM-1的表达接近假手术组水平；在纹状体区呈现与皮质区相似的表达规律，但其表达与同时间点皮质区比较水平更高。在治疗组VCAM-1的表达规律类似于对照组，在同一时间点较对照组表达显著降低，又明显高于假手术组。④结论 适量输注肌苷可能通过VCAM-1作用机制对缺血再灌注脑组织起一定的保护作用。