急、慢性吗啡依赖大鼠脑内Gi2蛋白的表达

目的研究吗啡依赖大鼠腹侧背盖区（VTA）、伏隔核（NAc）、前额皮质（PC）、海马及蓝斑（LC）各脑区Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白（Gi2蛋白）的改变,探讨吗啡依赖的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为6组,分别为急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、急性空白对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组和慢性空白对照组。建立吗啡依赖大鼠模型。戒断组腹腔注射纳洛酮5mg／kg,作用30min。断头处死各组大鼠,取出脑组织,进行冰冻切片。用免疫组化技术检测NAc、PC、LC、VTA和海马的相对Gi2蛋白水平。结果急性吗啡依赖组和戒断组与急性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01）。慢性吗啡依赖组和戒断组与慢性空白对照组比较,NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01）,LC区Gi2蛋白水平明显升高（P〈0．01）。结论吗啡依赖可引起大鼠脑内Gi2蛋白水平发生改变,但各脑区Gi2蛋白水平的变化并不相同。Gi2蛋白水平改变可能是吗啡耐受和依赖潜在的分子机制。     

大鼠吗啡精神依赖时脑区氨基酸类神经递质的变化

目的建立条件性位置偏爱模型,检测吗啡精神依赖大鼠不同脑区中氨基酸类神经递质含量的变化。方法用4mg·kg-1盐酸吗啡对雄性SD大鼠进行条件性位置偏爱(CPP)训练。CPP形成后将大鼠断头处死,立即取脑,分离杏仁核、额叶皮层、海马、下丘脑、伏隔核、纹状体、丘脑、小脑等8个核团,在高氯酸溶液中做组织匀浆,同时沉淀蛋白,离心后取上清液备测。采用柱前衍生-电化学检测-高效液相色谱法测定谷氨酸(GLU)和γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果吗啡使大鼠形成CPP时,额叶皮层、下丘脑和伏隔核的GLU和GABA含量均有明显下降(P<0.05),其中以伏隔核变化最明显(P<0.01);而且,伏隔核中的GLU/GABA值显著升高(P<0.05)。结论大鼠对吗啡的精神依赖形成时,中枢GLU和GABA的含量变化集中于额叶皮层、下丘脑和伏隔核等与奖赏作用关系密切的脑区,证明了GLU和GABA系统参与了精神依赖形成时药物在脑内的奖赏作用。伏隔核中的GABA含量显著下降,GLU/GABA值显著升高,表明吗啡精神依赖时伏隔核处于去抑制状态。     

糖皮质激素对吗啡依赖大鼠海马c-fos基因表达的影响

目的 观察吗啡依赖大鼠脑内海马区c-fos mRNA水平的变化,研究糖皮质激素(地塞米松)控制阿片戒断症状的分子机理。方法 剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型,给与地塞米松干预,纳洛酮促瘾后观察戒断症状,应用原位杂交方法观察海马区c-fos mRNA。结果 吗啡依赖大鼠经地塞米松干预后,由纳洛酮催促戒断症状评分明显低于未经地塞米松处理组;同时经地塞米松干预后,海马c-fos mRNA的表达量明显低于未经地塞米松处理,但较盐水对照组高。结论糖皮质激素(地塞米松)能抑制吗啡依赖大鼠戒断症状以及海马c-fos mRNA的表达。     

三七皂苷对大鼠吗啡依赖戒断症状的抑制作用及对海马神经元内游离钙的影响

 目的 研究三七叶的三七皂苷(Arasaponins of Panax notoginseng leaves,APnL)对大鼠吗啡依赖及纳络酮催促戒断症状的抑制作用,以及对大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,进一步探讨APnL抑制吗啡戒断症状的作用机制.方法 应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型.在使用吗啡的同时,采用(50、100和200 mg/kg)3种剂量的APnL进行灌胃.第6天上午8:00末次注射吗啡50 mg/kg,观察各组催促戒断症状及体重减轻情况;1 h后急性分离海马神经元,并采用流式细胞技术检测了APnL对吗啡依赖大鼠海马神经元[Ca2+]i的浓度.结果 ①剂量递增法慢性吗啡处理5 d后经ip NAL催促戒断后,与吗啡组相比可明显地诱发大鼠体重减轻和跳跃次数的发生(P＜0.01).②3种不同剂量APnL均可抑制大鼠戒断后体重减轻和跳跃的发生.③APnL可以有效地抑制纳络酮催促戒断所引起的大鼠海马神经元[Ca2+]i浓度的降低,200 mg/kg剂量组作用最佳(P＜0.01).结论 APnL可以缓解纳络酮催促戒断诱导的吗啡成瘾大鼠戒断症状的发生,同时可以抑制纳络酮催促戒断所引起的大鼠海马神经元[Ca2+]i浓度的降低.     

胍丁胺抑制中枢不同脑区单胺类神经递质释放

目的：观察胍丁胺对吗啡依赖大鼠不同脑区脑片单胺类神经递质戒断释放的抑制作用。方法：用ＨＰＬＣ法测定脑片单胺类神经递质浓度。结果：纳洛酮能使吗啡依赖大鼠出现戒断综合征;使其海马、纹状体和丘脑脑片单胺类神经递质释放增加。用胍丁胺和吗啡共同处理大鼠,纳洛酮的上述作用显著受到抑制。胍丁胺的此项药理作用可被咪唑克生阻断。结论：胍丁胺通过激活咪唑啉受体,抑制纳洛酮引起的吗啡依赖大鼠不同脑区单胺类神经递质释放,胍丁胺的此项作用与其抑制戒断综合征相关。     

利鲁唑对吗啡躯体依赖的影响及其可能机制

目的：评价利鲁唑对吗啡躯体依赖的调节作用及可能机制。方法：在小鼠吗啡依赖和大鼠依赖模型上分析利鲁唑对吗啡躯体依赖的影响。用化学发光法测定小鼠脑组织NOS活性。结果：在小鼠吗啡躯体依赖模型中，利鲁唑(2．5～10mg/kg,sc)剂量依赖性地抑制吗啡依赖小鼠纳洛酮催促的戒断症状；在大鼠吗啡依赖模型中，利鲁唑(2．5和5mg/kg，sc)使吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断积分明显降低。利鲁唑能显著降低吗啡依赖小鼠不同脑区(大脑、小脑、丘脑)一氧化氮合酶(NOS)活性。结论：利鲁唑抑制吗啡依赖大鼠和小鼠的戒断症状，机制与抑制吗啡依赖状态下脑组织内NOS活性代偿性升高有关。     

吗啡依赖和戒断对大鼠杏仁核神经甾体和氨基酸递质水平的影响

目的研究吗啡依赖和戒断时大鼠杏仁核中神经甾体和氨基酸递质水平的变化。方法连续7天给予大鼠盐酸吗啡建立吗啡依赖模型。使用纳洛酮(2mg/kg)催促戒断,观察戒断症状并进行评分。将大鼠断头处死后,剥离大脑并分离出杏仁核,用液-液萃取和固相萃取法提取游离型和结合型神经甾体。神经甾体(包括脱氢表雄酮、孕烯醇酮、别孕烯醇酮、脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯)的含量使用高效液相色谱-质谱法测定。甘氨酸、谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量采用柱前OPA衍生-电化学检测-高效液相色谱法测定。结果与盐水对照组相比,吗啡依赖大鼠杏仁核中的脱氢表雄酮水平降低33 %(P<0·01)。与戒断对照组比较,吗啡戒断大鼠杏仁核中的孕烯醇酮和别孕烯醇酮水平分别升高45 %和42 %(P<0·05) ,γ-氨基丁酸水平降低18 %(P<0·01)。与吗啡依赖组比较,吗啡戒断组大鼠杏仁核中的孕烯醇酮和孕烯醇酮硫酸酯水平分别升高60 %和40 %(P<0·05) ,甘氨酸水平降低14 %(P<0·05)。结论吗啡依赖大鼠杏仁核中的脱氢表雄酮可能参与吗啡依赖的形成而与吗啡戒断症状的表达无关。其他神经甾体(包括孕烯醇酮、别孕烯醇酮和孕烯醇酮硫酸酯)则可能参与吗啡的戒断而与依赖的形成无关。纳洛酮催促戒断时,大鼠杏仁核中抑制性氨基酸递质的合成和释放受到抑制。表明大鼠杏仁核中的各种神经甾体和氨基酸递质在吗啡依赖和戒断时发生了不同的变化。     

低氧诱导因子-1α与马桑内酯点燃SD大鼠难治性颞叶癫痫耐药模型耐药性的相关性研究

目的 探讨难治性颞叶癫痫中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)在不同脑区表达水平的变化及其与耐药蛋白MDR1/Pgp表达的关系.方法 以SD大鼠作为研究对象,设置点燃组和对照组.点燃组处理方法:以马桑内酯(CL)0.4ml/kg肌注,1次/72h,在给药1～5次期间判定点燃模型是否构建成功,选择符合标准的大鼠继续给药,1次/6d,共30次;最后点燃组共存留7只大鼠.对照组5只大鼠,在同时间点给予0.4ml/kg生理盐水肌注.取大鼠脑组织标本,制备后采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)、免疫组织化学(IIHC)和Western blotting三种方法分别检测HIF-1 α、MDR1/Pgp在脑组织中的表达情况.结果 IHC显示,HIF-1α在点燃组主要表达于大鼠海马、颞叶皮质等部位的神经元和神经胶质细胞,在对照组仅见微弱表达.Pgp的分布及表达情况与HIF-1 α一致.RO-PCR显示,点燃组HIF-1αmRNA在海马中的表达为对照组的1.741倍,在颞叶中的表达是对照组的1.395倍.Pgp mRNA在海马及颞叶的表达分别为对照组的2.297倍和1.474倍.Western blotting显示,点燃组海马HIF-1 α蛋白表达(1.284±0.166)较对照组(0.763±0.117)明显增高(p＜0.05),且点燃组颞叶皮质中HIF-1α蛋白(1.350±0.105)亦较对照组(0.941±0.078)明显增高(P＜0.05).Pgp的表达与HIF-1α表达呈一致变化,即点燃组海马和颞叶中Pgp的表达(0.831±0.086,0.919±0.129)较对照组(0.441±0.053,0.643±0.095)明显增高(P＜0.05).另外,点燃组Pgp蛋白和mRNA在海马中的表达较颞叶高(P＜0.05).结论 HIF-1α在大鼠颞叶癫痫耐药模型的海马和颞叶皮质中的表达较正常大鼠高,且与Pgp表达的空间分布一致.HIF-1 α与PgP表达的相关性提示HIF-1 α可能与难治性颢叶癫痫的耐药性相关.     

运动对大鼠海马长时程增强效应及其相关因子的影响

目的:探讨运动对大鼠海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)效应及其相关因子的影响。方法:28只成年雄性Wistar大鼠,随机分为对照组与运动组,每组14只。运动组采用4周自愿跑轮运动为体力运动模型。脑立体定位-神经电生理法检测海马齿状回LTP;高效液相-电化学法测定海马5-羟色胺(5-HT)含量;实时荧光定量PCR测定海马5-HT1A受体、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达。结果:运动组海马齿状回LTP较对照组明显提高(P<0.05),运动组海马5-HT含量(P<0.01)、5-HT1A受体mRNA(P<0.01)、CREB和BDNF mRNA表达水平也显著高于对照组(P<0.05)。结论:运动可能通过对5-HT—5-HT1A受体—cAMP—CREB—BDNF—LTP通路元件的上调机制,发挥增强海马LTP的作用。     

吗啡依赖及戒断小鼠脑内节律基因mPeriodl表达的研究

目的 研究吗啡依赖和吗啡戒断小鼠脑组织内节律基因mPeriod1（mPer1）表达的变化。方法 以雄性BALB／C小鼠的吗啡条件性位置偏爱为指标，观测吗啡依赖组、吗啡戒断组小鼠与正常盐水组小鼠的药物精神依赖的变化；应用免疫组化SP法检测3组小鼠脑内mPer1的表达情况；利用图像软件对免疫组化结果进行分析和处理。结果 吗啡依赖组的小鼠脑内mPer1表达峰值相位较正常盐水组有明显改变。而吗啡戒断组小鼠脑内mPerl表达峰值相位较正常盐水组没有显著性差异。结论 研究结果表明吗啡成瘾影响了以mPer1为重要部件的近日钟的自激振荡过程，使近日节律发生了改变。     

清君饮戒毒效应的实验研究

研究观察中药制剂清君饮对动物药物依赖性的影响。用逐次逐日增加吗啡注射剂量的方法造成大鼠的吗啡依赖性模型后，又分别分为中药大、小剂量组，吗啡维持组，空白对照组，再给予腹腔注射纳洛酮给予催瘾，观察经不同药物处理后动物的戒断症状反应。结果表明：中药能明显抑制成瘾大鼠的戒断症状。主要症状积分值的降低与空白对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）并能促进动物体重的恢复。中药的效应与剂量相关     

急性低压缺氧后大鼠脑皮质和海马细胞凋亡情况的动态观察

目的　观察大鼠在急性低压缺氧环境暴露后脑皮质和海马细胞凋亡的情况。　方法　采用Wistar大鼠 30只 ,在低压舱内模拟暴露于 75 0 0m高度停留 2 0min ,建立急性缺氧模型。分别在缺氧前及低压缺氧环境暴露后 1d、2d、3d、4d和 5d ,取大鼠脑颞叶皮质和海马组织用流式细胞仪分析脑细胞周期和细胞凋亡率的变化。　结果　大鼠低压缺氧后脑皮质和海马细胞凋亡率明显升高 ,在缺氧后 4d和 3d脑皮质和海马凋亡细胞数分别达到高峰 ,急性缺氧后 3d和 4d脑皮质和海马凋亡细胞数显著高于 1d (P <0 0 1 )。而急性缺氧后脑皮质和海马细胞G1 期细胞呈逐渐减少趋势 ,S期细胞逐渐增加。　结论　 75 0 0m模拟高空低压缺氧可导致不同程度的脑皮质和海马细胞凋亡 ,缺血缺氧后的 3d和 4d凋亡细胞率最高 ,5d凋亡细胞数降低与未缺氧时比较差异无显著性意义     

大鼠Li-Pilocarpine癫痫模型的MRI与海马体积测量动态研究

目的 :观察Li Pilocarpine大鼠癫痫模型在慢性期出现反复自发性癫痫发作过程中MRI与海马体积的进行性变化 ,探索癫痫发生的病理生理机制。方法 :分别在成功诱发癫痫持续状态大鼠的 3小时～ 8周的不同时间点分别行MRI成像与海马体积测量 ,并与正常对照组相比较 ,观察急性期至慢性期过程中的动态变化。结果 :在急性期最早累及杏仁核、内嗅皮层和梨状皮层 ,进而出现海马的水肿。两周后出现海马的进行性萎缩 ,海马体积在慢性期萎缩至正常的 1/2左右。结论 :癫痫持续状态后的脑损伤包括多个受累部位 ,既累及海马 ,也累及其它边缘系统 ,如杏仁核和邻近的梨状皮层、内嗅皮层、丘脑及大脑皮层感觉运动区。包括海马在内的边缘系统的改变更为复杂。     

Transient changes in the endocannabinoid system after acute and chronic ethanol exposure and abstinence in the rat: a combined PET and microdialysis study

Purpose

Recent biochemical and post-mortem evidence suggests involvement of the endocannabinoid system in alcohol drinking behaviour and dependence. Using [¹⁸F]MK-9470 small-animal PET imaging, our primary objective was to evaluate in vivo type 1 cannabinoid receptor (CB1R) binding changes in rats subjected to several ethanol conditions: (1) at baseline, (2) after acute intraperitoneal administration of ethanol (4 g/kg) or saline, (3) after 7 days of forced chronic ethanol consumption, and (4) after abstinence for 7 and 14 days. Secondly, levels of anandamide (AEA) in the nucleus accumbens (NAcc) were investigated in the same animals using in vivo microdialysis and correlated with the changes in CB1R binding.

Methods

In total, 28 male Wistar rats were investigated. Small-animal PET was done on a FOCUS-220 tomograph with [¹⁸F]MK-9470. Parametric images of [¹⁸F]MK-9470 binding based on standard uptake values (SUV, as a measure of CB1R binding) were generated. Images were normalized to Paxinos space and analysed voxel-wise using SPM8 (p _height?=?0.005; k _ext?=?200). The AEA content was quantified using HPLC with tandem mass spectrometry detection.

Results

Acute ethanol administration increased relative CB1R binding in the NAcc that was positively correlated with the change in AEA levels of that region. In contrast, compared to rats at baseline, AEA levels in the NAcc were not significantly different in rats after chronic ethanol consumption or after a 14-day abstinence period. Chronic ethanol consumption decreased relative CB1R binding in the hippocampus and caudate-putamen, whereas same regions showed increased relative CB1R binding after 7 and 14 days of abstinence compared to the baseline condition. After 7 and 14 days of abstinence, relative CB1R binding additionally decreased in the orbitofrontal cortex. The magnitude of the hippocampal and frontal changes was highly correlated with daily ethanol intake.

Conclusion

This study provides in vivo evidence that acute ethanol consumption is associated with enhanced endocannabinoid signalling in the NAcc, indicated by an increased CB1R binding and AEA content. In addition, chronic ethanol exposure leads to regional dysfunctions in CB1R levels, involving the hippocampus and caudate-putamen that are reversible within 2 weeks in this animal model.     

+Gz暴露对大鼠脑星形胶质细胞S100蛋白表达的影响

目的观察＋Gz暴露后大鼠脑星形胶质细胞中S100蛋白表达的改变。方法雄性SD大鼠44只,随机分为对照组、＋6Gz／3min暴露组、＋10Gz／3min暴露组。分别于＋Gz暴露后不同时间灌注取脑,免疫组织化学染色观察脑S100蛋白的表达情况。结果＋6Gz暴露后6h,顶叶皮层、海马可见S100蛋白呈中等强度的阳性反应,阳性细胞数较对照组显著增多（P〈0．01）,多为细小型,暴露后1d、2d、4d和6d,S100蛋白阳性反应程度进一步增强,阳性细胞数进一步增多。＋10Gz暴露后各时间点,顶叶皮层、海马S100蛋白呈较强的阳性反应,阳性细胞数较＋6Gz组显著增多（P〈0．01）,暴露后2d出现少量肥大型,仍以细小型为主。结论＋Gz暴露可引起大鼠顶叶皮层、海马S100蛋白表达显著增加．而＋10Gz／3min比＋6Gz／3min暴露引起脑组织S100蛋白的轰达增加更明显。     

Opiate tolerance by heroin self-administration: an fMRI study in rat.

Functional MRI (fMRI) was employed to determine whether repeated heroin self-administration (SA) produces tolerance or sensitization in the brain of heroin-SA rats. Twelve rats were evenly divided into saline and heroin (0.06 mg/kg, 4 hr/day) SA groups. There was a progressive increase in drug-SA behavior and daily heroin intake during the 8-9 days of heroin-SA training. Within 24 hr after the last session of daily SA, acute heroin (0.1 mg/kg) administration induced regional blood oxygen level-dependent (BOLD) signals in both groups of rats. The positive BOLD signals appeared mainly in the cortical regions, including the prefrontal cortex, cingulate, and olfactory cortex, while the negative BOLD signals were predominantly located in subcortical regions such as caudate and putamen, nucleus accumbens, thalamus, and hypothalamus. However, the number of activated voxels or BOLD-signal intensity was significantly less in heroin-SA rat in regions of prefrontal cortex, nucleus accumbens, and thalamus, etc., compared to the changes in the saline control rats. Application of gamma-vinyl GABA (100 mg/kg), an irreversible GABA-transaminase inhibitor, failed to block opiate actions in the heroin-SA rats. Together, these data suggest that repeated heroin-SA produces tolerance or desensitization of opiate actions in the rat brain, which may in turn potentiate drug SA behavior and drug intake.