Id反义寡核苷酸对A549肺癌细胞的抑制及意义

【目的】观察Id反义寡核苷酸（IdASOD）对A549细胞中Id蛋白、mRNA表达及细胞的影响。【方法】体外培养A549细胞,并转染Id反义寡核苷酸;运用RT-PCR与Western-blot检测反义寡核苷酸对A549细胞中Id基因的抑制及蛋白表达的变化;用MTT法与细胞贴壁率检测转染反义寡核苷酸后A549细胞生物学特征的变化。【结果】转染反义寡核苷酸后A549中IdmRNA与蛋白表达水平明显低于未转染组（P〈0．05）,细胞存活率与活性明显下降（P〈0．05）。【结论】IdASOD对A549细胞及Id基因与蛋白表达有明显的抑制作用。     

关于肿瘤预防的前瞻性问题：合成肽对高转移人肺巨细胞癌细胞体外侵袭能力的作用

背景：高转移肿瘤细胞对重组基底膜成分侵袭是恶性肿瘤侵袭和转移体外实验常见的模型，合成肽对某些肿瘤细胞的影响也有报道．但合成肽对高转移人肺巨细胞癌细胞(highly metastatic human lung giant-cell carcinoma cell，PG)的目前影响报道很少。目的：研究合成肽RGD，YIGSR及其衍生物对PG细胞体外侵袭能力的影响。设计：完全随机对照实验研究。地点和材料：PG和NIH3T3细胞株由北京医科大学病理教研室提供；合成肽由中国医学科学院药物所合成室和承德医学院化学教研室合成提供：整个实验在承德医学院生物化学教研室完成。干预：利用NIH3T3细胞株制备肿瘤细胞趋化因子在肿瘤细胞趋化因子作用下，测定合成肽对接种在Tanswell细胞培养小室中PG细胞侵袭能力的影响。主要观察指标：PG细胞穿过Tanswell细胞培养小室重组基底膜的数量作为评价肿瘤细胞侵袭能力的指标。结果：适量PG细胞经趋化剂作用10h、侵袭细胞已达便于统计学分析的数量范围(50～100个侵袭细胞)；100mg／L合成肽RGD，YIGSR与PG细胞共育48h，对侵袭能力的抑制率分别为53.63％和36.86％，共育10h．抑制率分别为0％和6．48％。结论：PG细胞是肿瘤细胞体外侵袭实验筛选抗肿瘤药物的适用细胞；RGD，YIGSR杂叉肽和均叉肽有较强的抗肿瘤侵袭活性．对恶性肿瘤具有较强的预防和治疗价值。     

高尔基体内Connexin32蛋白对肝癌细胞Li-7的运动和侵袭能力的影响

目的 探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32 对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响及可能 的分子机制.方法 利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7 中建立Connexin32 蛋白表达可通过doxycyc- line 调控的Li-7 Tet-off Connexin32 稳定克隆,应用高尔基体染色确定Connexin32 蛋白亚细胞定位,应用刮擦 负荷-染料转移实验(SL-DT)方法评价间隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)水平,运用体外跨室细胞运动及侵 袭方法验证Connexin32 表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性.结果 利用逆病毒感染方法建立了稳定 整合了Connexin32 cDNA 和调控序列Tet-off 的肝癌细胞Li-7 Tet-off Connexin32 亚克隆,Western-blot 结果显 示外源性Connexin32 蛋白表达于细胞质中且受细胞培养液中多西环素(Dox)调控,当从细胞培养液中去除 Dox 时,Connexin32 表达量增加到基础表达量的4 倍;高尔基体染色显示Connexin32 蛋白定位于高尔基复合 体内,SL-DT 实验证实外源性高尔基体内表达的Connexin32 蛋白使相邻肝癌细胞间不能形成有效的GJIC,跨 室细胞运动和侵袭实验表明次高尔基体内异常蓄积的Connexin32 蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动 和侵袭能力(P 均<0.05).结论 高尔基体内异位表达的Connexin32 蛋白GJIC 非依赖性发挥促进肝癌细 胞运动和侵袭能力的作用.     

关于肿瘤预防的前瞻性问题:合成肽对高转移人肺巨细胞癌细胞体外侵袭能力的作用

背景高转移肿瘤细胞对重组基底膜成分侵袭是恶性肿瘤侵袭和转移体外实验常见的模型,合成肽对某些肿瘤细胞的影响也有报道,但合成肽对高转移人肺巨细胞癌细胞(highly metastatic human lung giant-cell carcinoma cell,PG)的目前影响报道很少.目的研究合成肽RGD,YIGSR及其衍生物对PG细胞体外侵袭能力的影响.设计完全随机对照实验研究.地点和材料PG和NIH3T3细胞株由北京医科大学病理教研室提供;合成肽由中国医学科学院药物所合成室和承德医学院化学教研室合成提供.整个实验在承德医学院生物化学教研室完成.干预利用NIH3T3细胞株制备肿瘤细胞趋化因子.在肿瘤细胞趋化因子作用下,测定合成肽对接种在Tanswell细胞培养小室中PG细胞侵袭能力的影响.主要观察指标PG细胞穿过Tanswell细胞培养小室重组基底膜的数量作为评价肿瘤细胞侵袭能力的指标.结果适量PG细胞经趋化剂作用10 h,侵袭细胞已达便于统计学分析的数量范围(50～100个侵袭细胞);100mg/L合成肽RGD,YIGSR与PG细胞共育48 h,对侵袭能力的抑制率分别为53.63%和36.86%,共育10 h,抑制率分别为0%和6.48%.结论PG细胞是肿瘤细胞体外侵袭实验筛选抗肿瘤药物的适用细胞;RGD,YIGSR杂叉肽和均叉肽有较强的抗肿瘤侵袭活性,对恶性肿瘤具有较强的预防和治疗价值.     

siRNA干扰LUNX对NSCLC细胞系A549增殖和侵袭的影响

【目的】探讨siRNA干扰肺特异性X蛋白（LUNX）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系A549增殖和侵袭的影响。【方法】采用脂质体LipofectamineTM 2000介导LUNX siRNA转染人NSCLC细胞系A549,转染48 h后分别用 qRT‐PCR和 Western blot方法评价干扰效果;MTT法检测LUNX siRNA转染对细胞增殖的影响;Transwell法检测LUNX siRNA转染对细胞侵袭能力的影响;并用 qRT‐PCR 和 Western blot方法检测p‐AKT的表达。【结果】转染后NSCLC细胞系A549内LUNX的表达显著降低;LUNX表达降低使NSCLC细胞系A549的增殖减慢及侵袭能力降低,且LUNX表达降低后p‐AKT的mRNA和蛋白表达均显著降低。【结论】siRNA干扰后LUNX表达、NSCLC细胞系的增殖和侵袭能力降低,可能与其表达降低后p‐AKT表达减少相关。     

P53融合蛋白对肺癌细胞生长的影响

目的研究蛋白转导域（PTD）与人野生型P53（wtP53）融合表达的融合蛋白PTD-P53对肺癌细胞增殖的影响。方法用PTD-P53处理人肺癌细胞H1299和NIC—H157后，采用细胞增殖抑制实验（MTT法）分析处理后观察细胞的生长情况，流式细胞术（FCM）分析处理后观察细胞的周期变化。结果PTD-P53对肺癌细胞的生长有明显的抑制作用，处理后细胞周期出现阻滞现象。结论采用PTD-P53治疗肺癌将会是一种有效的途径。     

多胺类似物四丁基丙二胺对人A549肺癌细胞的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人A549肺癌细胞增殖、细胞迁移能力和多胺代谢的影响及其机制.方法:MTT法用于分析细胞增殖;流式细胞术用于分析细胞周期;QT-RT-PCR技术用于分析多胺代谢酶的表达水平;高效液相色谱用于检测细胞内多胺含量.结果:TBP处理A549细胞后导致:(1)显著抑制人A549细胞增殖,其抑制效应呈浓度和时间的依赖性;(2)G1期和G2期细胞显著减少,但S期细胞显著性增加;(3)显著诱导多胺降解代谢限速酶SSAT的表达,但对其他酶影响较小;(4)细胞内多胺含量显著性下降.结论:上述研究结果提示TBP具有抑制人A549肺癌细胞增殖的药理活性,有作为肺癌治疗药物的潜在临床应用前景.其机制可能与干扰DNA复制、抑制细胞周期和降低细胞内多胺水平相关.     

N-硝基精氨酸甲酯对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

背景：一氧化氮在肿瘤的发生发展中起着双向作用,高浓度的一氧化氮通过细胞毒作用和诱导肿瘤细胞凋亡起抗肿瘤作用;在肿瘤组织改变的微环境下,其对肿瘤组织的影响主要表现为促进肿瘤的生长.目的：观察一氧化氮合酶抑制剂N-硝基精氨酸甲酯对人大肠癌细胞LS174T侵袭、运动能力的影响.设计：单一样本观察.单位：哈尔滨医科大学附属肿瘤医院外科.材料：实验于2004-01/10在哈尔滨医科大学肿瘤研究所完成,人大肠癌细胞系LS174T购自哈尔滨医科大学肿瘤研究所,N-硝基精氨酸甲酯购自Sigma公司.方法：采用0.2,0.4,0.8和1.0mmol/LN-硝基精氨酸甲酯对LS174T细胞进行干预,用重组基底膜侵袭实验观察药物对癌细胞侵袭、运动能力影响.主要观察指标：N-硝基精氨酸甲酯对LS174T细胞侵袭重建基底膜的抑制率和趋化运动抑制率.结果：①0.2,0.4,0.8和1.0 mmol/L N-硝基精氨酸甲酯处理LS174T细胞72 h,对细胞侵袭重建基底膜的抑制率分别为10.29%,19.62%,34.08%,42.23%（P＜0.05或0.01）.②0.2,0.4,0.8和1.0 mmol/L N-硝基精氨酸甲酯处理LS174T细胞72 h,对细胞趋化运动抑制率分别为20.76%,24.95%,39.43%,46.85%（P＜0.01）.结论：N-硝基精氨酸甲酯具有抑制LS174T细胞侵袭和转移的作用.     

P53融合蛋白对肺癌细胞生长的影响

目的研究蛋白转导域(PTD)与人野生型P53(wtP53)融合表达的融合蛋白PTD-P53对肺癌细胞增殖的影响。方法用PTD-P53处理人肺癌细胞H1299和NIC-H157后,采用细胞增殖抑制实验(MTT法)分析处理后观察细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)分析处理后观察细胞的周期变化。结果PTD-P53对肺癌细胞的生长有明显的抑制作用,处理后细胞周期出现阻滞现象。结论采用PTD-P53治疗肺癌将会是一种有效的途径。     

厚朴酚抑制体外乳腺癌细胞株生物活性的实验研究

[目的]探讨中药厚朴提取物厚朴酚(Magnolol,Mag)抑制不同乳腺癌细胞株生物活性的作用.[方法]选取不同乳腺癌高转移细胞株(MCF-7、MDA-MB-231),在培养液中分别加入不同浓度的Mag溶液,观察处理后细胞的凋亡、侵袭、转移和黏附能力,判断Mag对乳腺癌细胞株生物活性的影响.[结果]Mag可以抑制细胞的抗凋亡、侵袭、转移和黏附能力(P<0.05),随着Mag浓度的增大,抑制生物活性的作用逐渐增强(P<0.05).[结论]Mag可以通过抑制不同受体状态乳腺癌细胞株的抗凋亡率、侵袭能力、黏附能力和迁移能力,从而抑制其生物活性,在乳腺癌的治疗及预防乳腺癌复发、转移中具有重要的临床应用价值.     

拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的影响

【目的】探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长的影响。【方法】将人SKVO3细胞株接种于裸小鼠胸壁皮下建立卵巢癌裸小鼠移植瘤模型。随机将其分为空白对照组（A组）和实验组（B组）,实验组根据拉帕替尼药物浓度的不同分为两个亚组：100 mg/kg （B1）和200 mg/kg （B2）,检测各组拉帕替尼用药前后荷瘤体积及裸鼠体质量的变化。【结果】拉帕替尼可显著抑制SKOV3裸小鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性,B2组抑瘤率显著高于B1组,其差异有统计学意义（P＜0．05）,但小鼠体质量用药前后比较无显著性差异（P＞0．05）。【结论】拉帕替尼可显著缩小人卵巢癌细胞株SKVO3裸鼠移植瘤的体积,为卵巢癌新型靶向治疗提供了理论基础。     

安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植肿瘤生长及生物钟基因表达的影响

[目的]探讨安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植后肿瘤生长情况及相应生物钟基因表达的影响.[方法]选取实验无胸腺裸鼠共36只,取人肝癌HepG2细胞,移植于小鼠左侧腋皮下,建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型.接种完成1周后,随机分为安罗替尼处理组和对照组,每组18只.安罗替尼组给予安罗替尼50 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予二...     

5,7-二甲氧基黄酮抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞特性的体外研究

[目的]探讨5,7-二甲氧基黄酮(DMF)对人胰腺癌干细胞特性的影响.[方法]体外培养人胰腺癌PANC-1细胞系得到微球细胞,流式细胞仪检测;划痕法分析不同浓度DMF对胰腺癌干细胞自我更新、体外细胞迁移和运动能力影响;Western Blot分析不同浓度DMF干预后PANC-1细胞系胰腺癌干细胞表面标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmil、E-cad、N-cad蛋白表达变化.[结果]DMF以浓度依赖方式抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞肿瘤球形成能力及抑制细胞体外迁移能力;DMF以浓度依赖方式使胰腺癌干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cad蛋白表达水平降低,而E-cad蛋白水平升高.[结论]DMF以浓度依赖方式显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌样干细胞自我更新、分化后细胞迁移、细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cadherin蛋白表达,而增强E-cadherin蛋白表达.     

分次立体定向放疗治疗非小细胞肺癌脑转移瘤的疗效分析

【目的】探讨分次立体定向放疗（Fractionated stereotactic radiotherapy,FSRT）治疗非小细胞肺癌（NSCLC）脑转移瘤疗效及不良反应。【方法】对卡氏评分（Karnofsky,KPS）＞60分的32例 NSCLC脑转移患者先行全脑放疗（WBRT）30～40 Gy后,给予 FSRT治疗,单次靶区周边剂量为3～5 Gy,总剂量为15～20 Gy,分3～5次完成,50％等剂量曲线包绕计划靶体积（planning target volume ,PTV）,分析疗效及不良反应。【结果】全部患者均完成整个放疗过程,未出现任何明显的不良反应与并发症,全组中位生存期为11．6个月（95％CI为8．6～13．2）,1年及2年生存率分别为30．4％和11．2％。全组临床症状缓解率为82．1％,肿瘤局部控制率为91．7％。治疗后1个月后,KPS评分较治疗前明显改善,差异有统计学意义（P＜0．05）。【结论】FSRT用于全脑放疗后疾病进展的肺癌脑转移患者,可提高生存质量、延长患者生存期,安全性较好。     

siRNA抑制Wnt-1基因对人肺腺癌细胞株A2的影响

目的：研究siRNA对人肺腺癌细胞株A2中Wnt-1基因表达对细胞生物学行为的影响。方法：将siRNA用脂质体转染A2细胞,RT-PCR测定Wnt-1 mRNA表达变化;Western blotting测定Wnt-1蛋白表达的变化;流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比,传染siRNA后,实验组靶基因mRNA表达和蛋白表达均有明显降低,细胞凋亡增加。结论：Wnt-1特异性siRNA能有效干扰A2细胞内其相应基因的表达,而靶基因表达受到抑制后细胞凋亡增加。     

肺移植缺血再灌注损伤细胞模型的建立及意义

【目的】在体外模拟临床肺移植,建立起肺移植缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury ,IRI）的细胞模型。【方法】将人肺泡上皮细胞系A549用Perfadex液保存于100％氧气,4℃环境中来模拟缺血过程,缺血时间分为6h、12h、18h、24h,然后加入37℃含10％胎牛血清的DM EM培养基来模拟再灌注过程,再灌注时间为2 h。分别检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,并应用CCK‐8测细胞存活率。【结果】与对照组相比,各时间点试验组M DA、LD H含量逐渐增加,而SOD含量和细胞存活率则逐渐降低。各时间点MDA、LDH、SOD、细胞存活率水平也存在差异。【结论】成功建立了肺移植IRI细胞模型,此模型能够在分子与细胞水平研究肺移植IRI机制。     

LncRNAAC007009.1与非小细胞肺癌临床分期相关性研究

[目的]研究lncRNA AC007009.1与非小细胞肺癌(NSCLC)临床分期的相关性.[方法]选取本院2015年10月至2019年4月收治的150例NSCLC患者为研究对象.收集患者手术后标本癌组织,对其lncRNA AC007009.1进行检测,以lncRNA AC007009.1水平中位数(5.24±2.05...     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。