热疗联合а-IFN逆转人肺腺癌细胞A549/CDDP耐药性的研究

目的探讨热疗联合α-IFN对人肺腺癌细胞A549/CDDP耐药逆转作用及可能机制。方法采用体外细胞培养技术,培养人肺腺癌细胞系A549及其耐药株A549/CDDP。设计1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml浓度的CDDP,分别联合100U/ml、500U/ml、1000U/ml浓度а-IFN,在42℃热疗干预2h后,采用MTT法检测2种细胞对化疗药物CDDP的敏感性,采用流式细胞仪间接免疫荧光法,检测α-IFN、CDDP、热疗处理前后细胞中P-糖蛋白（P-gp）的表达及细胞内荧光药物CDDP的聚集量。结果热疗、а-IFN分别联用CDDP时,对A549/CDDP细胞的抑制率较单用CDDP时的抑制率高,差异有统计学意义（P〈0.05）。热疗联合а-IFN与CDDP时,对A549/CDDP细胞的抑制率较热疗、а-IFN分别联用CDDP时明显升高（P〈0.05）。热疗、а-IFN分别联合CDDP时,A549/CDDP细胞P-gp表达率较单用CDDP时下降,细胞内荧光强度增强,热疗联合α-IFN与CDDP,CDDP/A549P-gp表达率明显下降,细胞内荧光强度显著增强。结论а-IFN、热疗能部分逆转人肺腺癌细胞系A549/CDDP的耐药性;а-IFN联合热疗可提高逆转肺癌细胞耐药效应,其机制可能与抑制P-gp表达,增加细胞内化疗药物的积聚有关。     

不同温度热疗逆转人肺癌细胞A549/CDDP耐药性的研究

目的 探讨不同温度的热疗对人肺腺癌细胞A549/CDDP耐药逆转作用及可能机制.方法 采用体外细胞培养技术,培养人肺腺癌细胞系A549及其耐药株A549/CDDP.设计不同温度(37、40、41、42、43℃)热疗2 h,联合2μg/mL CDDP处理A549/CDDP细胞,检测其对化疗药物CDDP的敏感性,流式细胞仪间接免疫荧光法检测CDDP、热疗处理前后细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达及细胞内荧光药物CDDP的聚集量.结果 A549/CDDP细胞抑制率在39-42℃范围内随热疗的温度升高而升高,42℃时最高(P<0.05).热疗合用顺铂时,A549/CDDP细胞P-gP表达下降,胞浆内CDDP荧光强度增强.结论 热疗能部分逆转人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药效应,其机制可能与抑制P-gP表达,增加细胞内化疗药物积聚有关.     

透明质酸寡糖调节A549／DDP多药耐药作用的研究

目的：通过研究透明质酸寡糖对人肺腺癌细胞系A549／DDP的P糖蛋白和多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达的影响,探讨透明质酸在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法：将CD44单抗或透明质酸寡糖与A549／DDP细胞共培养48小时,放免法检测培养基中细胞所分泌透明质酸的含量,流式细胞仪检测经上述处理的A549／DDP表面MDR1、MRP、LRP的表达率,MTT法检测在不同浓度顺铂作用下,各组细胞的存活率。结果：经透明质酸寡糖处理后A549／DDP,分泌透明质酸较未处理组明显减少（P〈0．05）;且细胞表面与多药耐药相关的MDR1、MRP、LRP的表达率均降低（P〈0．05）。另外,处理后的细胞,在不同浓度顺铂作用时,细胞凋亡率明显增加。结论：体外条件下,透明质酸寡糖能逆转A549／DDP的耐     

GST-π、P-gp、LRP在人肺癌细胞株中的表达与多西他赛治疗敏感性的关系

目的:探讨不同肺癌细胞株中谷胱甘肽转移酶(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(lung re-sistance protein,LRP)的mRNA表达差异及对多西他赛化疗敏感性的预测价值。方法:采用RT-PCR技术检测ANIP973细胞株、A549细胞株,A2细胞株中GST-π、P-gp、LRP蛋白mRNA的表达,结合多西他赛体外药物敏感实验,分析GST-π、P-gp、LRP的mRNA表达水平与多西他赛化疗敏感的相关性。结果:在肺癌细胞株中,P-gp、LRP、GST-π在腺癌细胞株中表达高于鳞癌细胞株,从高到低依次为ANIP973、A549、A2细胞株,差异有统计学意义。多西他赛药敏试验显示细胞株生存曲线受药物抑制由大到小为A2、A549、ANIP973细胞株。多西他赛IC50均值从高至低依次为ANIP973、A549、A2细胞株。经单向方差分析不同细胞株之间IC50差异显著(F=29.636,P=0.000)。3种肺癌细胞株中多西他赛IC50与GST-π(rs=0.626,P=0.001)、P-gp(rs=0.453,P=0.027)、LRP(rs=0.398,P=0.045)表达水平呈正相关,且与GST-π关系最密切(rs>0.5)。结论:检测肺癌细胞中GST-π、P-gp、LRP各蛋白mRNA表达水平对多西他赛化疗敏感性具有一定预测价值,联合检测三者可能对临床判断化疗效果以及合理选择化疗药物具有指导作用。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

虎杖苷逆转人结肠癌细胞株HT-29奥沙利铂耐药性及机制

目的:探讨虎杖苷对结肠癌耐药细胞株HT-29奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法:采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA。MTT和CCK-8法测定虎杖苷对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,qRT-PCR 检测各组细胞LRP(lung resistance protein)和P-gp(P-glycoprotein)mRNA表达水平,Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果:虎杖苷使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转(P＜0.05)。联合应用对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡(P＜0.05)。作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低,同时下调了LRP和P-gp 蛋白表达(P＜0.05)。结论:虎杖苷部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与降低细胞内LRP基因从而导致P-gp 的表达降低有关。     

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳（elemene,ELE）逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂（cisplatin,DDP）合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123（rhodamine-123,Rh123）蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上P-gp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A549/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

老年人急性髓细胞白血病多药耐药蛋白过度表达的实验与临床研究

 目的　初步分析老年急性髓细胞白血病（AML）患者P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）的表达及其在预后中的意义。方法　流式细胞仪活细胞直接或间接免疫荧光法检测12例初治老年AML（M2a 4例,其中1例由MDS转化而来;M4a 2例;M5a 5例;M6 1例）患者骨髓白血病细胞P-gp、MRP、LRP表达情况。分析这些多药耐药蛋白表达与预后的关系。结果　P-gp、MRP、LRP的表达率分别为58.33 %、8.33 %、50 %;P-gp(+)、MRP(+)0,P-gp(+)、LRP(+)33.33 %,MRP(+)、LRP(+)0,P-gp(+)、MRP(+)、LRP(+)8.33 %,P-gp(-)、MRP(-)、LRP(-)33.33 %,其中P-gp、LRP单独和二者共表达频率较高。P-gp(+)者的完全缓解（CR）率与2年总生存率（OS）均显著低于P-gp(-)者（P＝0.01）,LRP(+)者的CR率与2年OS亦均低于LRP(-)者。结论　老年AML患者 P-gp、LRP单独及二者共表达频率均较高。P-gp、LRP过度表达是老年AML患者的不良预后因素。     

寡聚体透明质酸逆转A549/DDP细胞耐药作用的研究

目的 研究寡聚体透明质酸逆转A549／DDP细胞耐药的作用。方法 MTT法研究寡聚体透明质酸对A549／DDP耐药逆转作用，流式细胞术测定细胞表面耐药相关蛋白P-gP、MRP的表达及凋亡调控蛋白P53、bcl-2的表达。结果 寡聚体透明质酸可提高A549／DDP对化疗药物的敏感性，使P-gp、MRP表达下降，P53表达增高。结论 寡聚体透明质酸有部分逆转A549／DDP耐药及诱导凋亡的作用。     

GST-π、P—gP、LRP在人肺癌细胞株中的表达与多西他赛治疗敏感性的关系

目的：探讨不同肺癌细胞株中谷胱甘肽转移酶（GST-π）、P-糖蛋白（P～gP）、肺耐药蛋白（lung reistanceprotein,LRP）的mRNA表达差异及对多西他赛化疗敏感性的预测价值。方法：采用RT—PCR技术检测ANIP973细胞株、A549细胞株,A2细胞株中GST-π、P—gP、LRP蛋白mRNA的表达,结合多西他赛体外药物敏感实验,分析GST-π、P—gP、LRP的mRNA表达水平与多西他赛化疗敏感的相关性。结果：在肺癌细胞株中,P—gp、LRP、GST-竹在腺癌细胞株中表达高于鳞癌细胞株,从高到低依次为ANIP973、A549、A2细胞株,差异有统计学意义。多西他赛药敏试验显示细胞株生存曲线受药物抑制由大到小为A2、A549、ANIP973细胞株。多西他赛IC50均值从高至低依次为ANIP973、A549、A2细胞株。经单向方差分析不同细胞株之间IC50差异显著（F=29．636,P=0．000）。3种肺癌细胞株中多西他赛Ic50与GST-π（0=0．626,P=0．001）、P-gp（rs=0．453,P=0．027）、LRP（rs=0．398,P=0．045）表达水平呈正相关,且与GST-π关系最密切（ri〉0．5）。结论：检测肺癌细胞中GST-π、P—π、LRP各蛋白mRNA表达水平对多西他赛化疗敏感性具有一定预测价值,联合检测三者可能对临床判断化疗效果以及合理选择化疗药物具有指导作用。     

Expression and reversion of drug resistance-and apoptosis-related genes of a DDP-resistant lung adenocarcinoma cell line

Resistanceofcancercellstocytotoxicchemotherapyisacommonprobleminpatientswithcancerandamajorobstacletoeffectivetreatmentofdisseminatedneoplasm.Severalmolecularmechanismshavebeenassociatedwithmultidrugresistance(MDR)inexperimentaltumormodels.Theseincludel)enhancedeffluxofdrugbytransporterproteinssuchasp--glycoprotein(Pgp),multidrugresistance-associatedprotein(MRP)andhumanmajorvaultprotein(LRP)whichmightplayanimportantroleinvesicularsequestrationofdrug;['3]2)alterationsofdrugtargetssuchasDNA…     

5—氟脲嘧啶对耐顺铂人肺腺癌细胞A549^DDP的程序依赖性逆转作用

用耐顺铂（ＣＤＤＰ）人肺腺癌细胞系Ａ５４９ＤＤＰ作模型，研究了５－ＦＵ对ＣＤＤＰ耐药的程序依赖性逆转作用。５－氟脲嘧啶（５－ＦＵ）预处理Ａ５４９ＤＤＰ２４ｈ后立即给予ＣＤＤＰ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加３．９倍；５－ＦＵ预处理Ａ５４９ＤＤＰ后间隔２４或４８ｈ再给予ＣＤＤＰ，其细胞毒性分别增加２０倍和２５０倍，甚至较亲代细胞Ａ５４９更为敏感；如先给ＣＤＤＰ后给５－ＦＵ则细胞毒性仅增加１．８倍。５－ＦＵ对亲代细胞亦有类似效应但细胞毒性增加程度明显低于耐药细胞。５－ＦＵ预处理后间隔２４，４８ｈ，细胞内ＧＳＨ含量逐渐降低，与细胞毒性逐渐增加相一致。如用ＢＳＯ耗竭Ａ５４９ＤＤＰ细胞内ＧＳＨ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加６．４倍，仅能部分逆转ＣＤＤＰ耐药。５－ＦＵ明显抑制ＭＲＰ的表达，但对ＧＳＴπ的表达无影响。在５－ＦＵ预处理后的无药间隔时间内，给予无毒浓度的三苯氧胺则有明显的协同效应。结论：程序性给予５－ＦＵ通过降低细胞内ＧＳＨ含量和抑制ＭＲＰ的表达能完全逆转ＣＤＤＰ耐药     

透明质酸寡糖调节A549/DDP多药耐药作用的研究

目的:通过研究透明质酸寡糖对人肺腺癌细胞系A549/DDP的P糖蛋白和多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)表达的影响,探讨透明质酸在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用.方法: 将CD44单抗或透明质酸寡糖与A549/DDP细胞共培养48小时,放免法检测培养基中细胞所分泌透明质酸的含量,流式细胞仪检测经上述处理的A549/DDP表面MDR1 、MRP、LRP的表达率,MTT法检测在不同浓度顺铂作用下,各组细胞的存活率.结果: 经透明质酸寡糖处理后A549/DDP,分泌透明质酸较未处理组明显减少(P<0.05);且细胞表面与多药耐药相关的MDR1 、MRP、LRP的表达率均降低(P<0.05).另外,处理后的细胞,在不同浓度顺铂作用时,细胞凋亡率明显增加.结论: 体外条件下,透明质酸寡糖能逆转A549/DDP的耐药.     

多西他赛诱导肺腺癌A549/DTX细胞株的建立及耐药机制分析

目的 建立人肺腺癌细胞A549多西他赛（DTX）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法 采用逐步增加多西他赛浓度、间歇诱导的方法,建立人肺癌A549/DTX体外耐药细胞模型;MTT法检测A549/DTX的耐药特性;流式细胞仪比较多西他赛对耐药细胞株A549/DTX及亲本细胞株A549凋亡的影响;Western blot分析多西他赛作用后两种细胞凋亡调节因子Bc1-2、Bax表达差异。结果 MTT显示A549/DTX的多西他赛耐药指数为18.5;流式细胞分析显示经12.5、25、50 μg/L多西他赛作用24 h后,A549/DTX的细胞凋亡率为(6.2±4.1)％、(13.6±2.7)％、(20.5±5.1)％,A549细胞凋亡率为(15.7±3.5)％、(28.5±2.9)％和(33.1±4.8)％,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）;Western blot显示,与A549相比,A549/DTX细胞Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白明显降低(P＜0.01)。结论 逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的A549/DTX细胞株,并认为凋亡受抑是A549/DTX的耐药机制之一,与Bcl-2表达上调、Bax表达下调相关。     

RNA干扰GRP75表达改善人肺腺癌细胞对顺铂耐药性

背景与目的 GRP75(glucose regulated protein75)属于热休克蛋白(hot shock protein,HSP)家族,是一种主要位于线粒体的分子伴侣,在某些耐药的肿瘤细胞中高表达。本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默GRP75基因的表达,观察下调GRP75的表达对肿瘤细胞耐药性的影响并探讨GRP75在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用逐步增加剂量与大剂量冲击相结合的方法,诱导建立耐顺铂细胞株A549/CDDP。分别将包裹GRP75-shRNA和不含干扰序列的慢病毒转染A549和A549/CDDP细胞,在荧光显微镜下观察各组细胞转染率,应用M比色法检测干扰前后各组细胞对顺铂的敏感性,应用Western blot检测干扰前后各组细胞GRP75、p53、bcl-2的表达。结果各组细胞感染效率均在90%以上,转染后A549/CDDP和A549细胞中GRP75的表达均明显下调(P<0.05)。转染前后A549/CDDP细胞对顺铂的耐药指数分别为21.52和4.14。转染后A549/CDDP细胞内p53的表达上调(P<0.05),bcl-2表达下调(P<0.05)。结论 GRP75是A549细胞对顺铂耐药机制的相关蛋白之一,其在耐药机制中的作用与其对p53和bcl-2的调控有关。     

Effects of neoadjuvant chemotherapy on the quantitative expression of P-gp, LRP, MRP, GST-π in NSCLC and its clinical significance

1 Introduction Lung cancer is the most common and the first le-thal cancer inlarge cities of China with anincreasingmorbidity in recent years . Non-small cell lung cancer(NSCLC) takes up 80 %--85 % of total lung cancersand has a high mortality .Since most of patients werediagnosed at Ⅲor Ⅳof clinic stage ,surgical treat-ment alone showed a poor effect onit .The total five-year survival rate of NSCLC after diagnosis is below15 %[1]. Upto now,systemic therapy becomes an ef-fective treat m…     

LRP,MRP,MDR1基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨肺耐药蛋白（ｌｕｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＲＰ）,多药耐药蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＲＰ）,和多药耐药基因（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｅ,ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ在非小细胞肺癌（ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｃａｎｃｅｒ,ＮＳＣＬＣ）中的共表达及临床意义。方法 ＲＴ－ＰＣＲ检测ＮＳＣＬＣ冰冻组织中上述耐药