复方米非司酮对人早孕绒毛和蜕膜组织结构和分泌功能的影响

目的 :探讨复方米非司酮的抗早孕作用及机理。方法 :采用光镜、电镜和放免方法观察复方米非司酮对人早孕绒毛蜕膜组织结构和分泌功能的影响。结果 :( 1 )服药 2 4h后 ,光镜观察发现 ,绒毛和蜕膜组织灶性、片状变性 ,复方米非司酮组改变尤甚。超微结构改变表现为绒毛合体滋养细胞表面微绒毛稀少 ,胞浆内细胞器退化 ,复方米非司酮组胞质内可见大量空泡 ;蜕膜颗粒细胞中的高电子密度物质减少 ,腺上皮细胞顶浆分泌突起少且小 ,溶酶体增多 ,出现大量空泡 ,蜕膜细胞病变较轻。 ( 2 )服药 2 4h,绒毛和 /或蜕膜组织中的h CG、PRL、E2 、P水平明显下降 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,PGF2α明显增高 ( P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) ;E2 / P比值增加 ( P<0 .0 1 ,P<0 .0 5)。结论 :复方米非司酮通过影响绒毛和蜕膜组织结构和分泌功能而终止早孕 ,双炔失碳酯和米非司酮在人类也有协同抗早孕作用 ,绒毛和蜕膜是其抗早孕时主要作用部位之一。     

米非司酮对早孕蜕膜与绒毛转化生长因子β基因表达及血清肿瘤坏死因子α的影响

目的:了解米非司酮对早孕蜕膜和绒毛中转化生长因子β基因表达及血清肿瘤坏死因子α水平的影响,探讨来非司酮对母-胎界面及血清中细胞因子的调节作用。方法:应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定正常和服用米非司酮100 mg后的人早孕蜕膜和绒毛中转化生长因子β_1(TGF-β_1)及受体(TGF-β_1R)的基因表达;采用放射免疫法测定米非司酮应用前后血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:服药组蜕膜中TGFβ_1及受体的基因表达比对照组明显下降(P<0.05),而服药组绒毛中TGFβ_1及受体的基因表达与对照组比较没有显著差异(P>0.05)。服药后血清TNF-α水平明显高于服药前(P<0.05)。结论:米非司酮抗早孕作用是多环节的,可能通过多种机理协同参与促进流产的发生。其中,米非司酮通过降调节蜕膜中TGF-β_1与TGF-β_1R的转录,提高血清TNF-α的水平,从母-胎界面局部至外周,使免疫刺激和抑制失调,导致母体对胚胎排斥而不利于妊娠的维持。     

正常早孕与流产患者蜕膜局部PRL、P、E_2水平及其受体表达水平的比较

目的 :比较正常早孕组与流产组蜕膜催乳素 (PRL)、孕酮 (P)、雌二醇 (E2 )及其受体水平的差异 ,探讨它们在维持早孕中的作用。方法 :收集正常早孕人工流产 18例与保胎失败流产的 12例蜕膜组织 ,应用放免法测定蜕膜匀浆PRL、P、E2 水平 ,并用免疫组化方法检测了相应激素受体 (PRLR、PR、ER)的表达。结果 :正常早孕组蜕膜匀浆PRL、P水平显著高于流产组 (P <0 .0 5 ) ,正常早孕组PRLR、PR表达亦显著高于流产组 (P <0 .0 5&0 .0 1)。结论 :蜕膜局部正常水平的PRL、P及其受体的正常表达对维持妊娠有重要作用     

RU_(486)对早孕妇女蜕膜组织甾体激素受体及内分泌的影响

目的 了解米非司酮及米索对人早孕蜕膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达及血清内分泌水平的影响。方法 取正常早孕、服用米非司酮及服米非司酮配伍米索后各20例的蜕膜,应用单克隆抗体链霉素亲生物蛋白——过氧化酶 (SP) 免疫组织化学方法测定 ER、PR 的表达及血清激素水平的变化。结果米非司酮配伍米索使蜕膜组织中 ER、PR 表达下调,正常早孕组、服米非司酮组及服米非司酮配伍米索组之间差异有显著性。血清雌二醇(E_2)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)含量上升,孕酮(P)下降;而对 FSH、hCG 的含量无明显影响。结论 大剂量RU_(486)能竞争地结合蜕膜组织孕激素受体,使早孕期高浓度的内源性孕酮与其受体的正常结合受到干扰,从而达到抗早孕的目的。     

米非司酮药物流产后绒毛蜕膜细胞凋亡的相关研究

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞凋亡、增殖的作用机制。方法:以20例药物流产患者为研究组,以20例非意愿妊娠要求行人工流产负压吸引刮宫术的患者为对照组,分别收集绒毛和蜕膜标本,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,并采用免疫组织化学方法检测bcl-2、bax、fas、fasL、增殖细胞核抗原(PCNA)5种蛋白在绒毛和蜕膜中的分布与表达强度,同时应用原位杂交法测定fas与fasLmRNA的分布与表达强度。结果:凋亡细胞在正常早孕绒毛合体滋养细胞中少量存在,蜕膜中偶见;绒毛、蜕膜中bcl-2、bax、fas、fasL、PCNA均有表达。采用米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞及蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡显著增多,同时伴有促凋亡bax、fas、fasL蛋白及fasLmRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量与C组比没有变化。结论:米非司酮不仅能促进早孕绒毛合体滋养细胞、蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,而且主要通过Fas与FasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也其也有一定的相关性,此可能为其抗早孕机制之一。     

米非司酮对人早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白和绒毛膜促性腺激素-β表达的影响

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白(OPN)和绒毛膜促性腺激素-β(β-hCG)表达的影响。方法:采用免疫组化半定量法检测米非司酮药物流产(n=20)和人工流产(n=20)的早孕绒毛及蜕膜中的OPN(骨桥蛋白)和β-hCG的表达。结果:OPN和β-hCG在早孕妇女绒毛组织和蜕膜组织中的表达米非司酮组均显著低于手术流产组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:米非司酮可能抑制了早孕绒毛及蜕膜中OPN和β-hCG的合成,进而影响胚泡着床和胎盘的形成,使妊娠难以维持,最终流产。     

米非司酮抗早孕蜕膜碱性成纤维细胞生长因子变化的研究

目的 :了解米非司酮对人早孕蜕膜碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growthfactor,b FGF )的影响 ,探讨药物流产后子宫出血时间长的可能机理。方法 :取正常、服米非司酮、服米非司酮配伍米索前列醇 (米索 )后的早孕蜕膜各 1 5、1 5和 1 6例 ,应用酶联免疫吸附分析法定量测定蜕膜匀浆中 b FGF的水平 ;同时观察子宫出血的持续时间。结果 :正常早孕蜕膜匀浆中 b FGF水平为 2 6 8.81± 75.34pg/ mg蛋白 ;服米非司酮及服米非司酮配伍米索后蜕膜匀浆中 b FGF水平分别为 373.99± 45.94pg/ mg蛋白和 375.6 8±1 0 9.34pg/ mg蛋白。后两者间差异无显著性 (P>0 .0 5) ,但均较正常早孕蜕膜组升高 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 1 )。子宫出血持续时间与正常早孕蜕膜组 (7.47± 1 .92 d)比 ,服米非司酮 (1 1 .38± 2 .2 5d)及米非司酮配伍米索组 (1 2 .73± 2 .2 2 d)均延长 ,差异有极显著性 (P均 <0 .0 0 1 ) ,后两者间差异无显著性 (P>0 .0 5)。结论 :米非司酮可使早孕蜕膜b FGF水平升高 ,停用米非司酮可引起子宫出血时间延长 ,药物流产后继续服用米非司酮可望缩短子宫出血时间     

Wnt4,Bmp2,PRL在胚胎停育和正常早孕蜕膜中的差异性表达

目的比较Wnt4,Bmp2,PRL在一胎早孕,二胎早孕,一胎胚胎停育,二胎胚胎停育蜕膜中的表达差异,探讨它们与早孕的关系及一胎分娩史与胚胎停育的关系。方法选取一胎,二胎胚胎停育患者及正常一胎,二胎早孕自愿流产女性各30例,用免疫组化法检测蜕膜中Wnt4,Bmp2,PRL的表达。结果 Wnt4,Bmp2,PRL在正常早孕蜕膜中的表达显著强于胚胎停育蜕膜(P0.01),Wnt4,Bmp2,PRL在一胎和二胎胚胎停育蜕膜中的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论早孕期蜕膜中Wnt4,Bmp2的正常表达对子宫内膜蜕膜化及维持妊娠有重要意义,单纯一胎分娩史与胚胎停育无相关性。     

正常早孕与流产患者蜕膜局部PRL、P、E_2水平及其受体mRNA表达水平的比较

目的:比较正常组与流产组蜕膜PRL、P、E_2及其受体mRNA水平的差异,探讨其在早孕维持中的作用。方法:收集18例正常早孕人流与12例保胎失败刮宫患者的蜕膜组织,应用放免法测定蜕膜匀浆PRL、P、E_2水平,并行RT-PCR方法检测了相应激素受体(PRLR、PR、ER)mRNA表达的差异。结果:正常早孕组蜕膜匀浆PRL、P水平显著高于流产组(P<0.05),PRLR、PRmRNA表达正常早孕组亦显著高于流产组(P<0.05和0.01)。结论:蜕膜局部正常水平的PRL、P及其受体mRNA的正常表达对妊娠的维持起着重要的作用。     

米非司酮对早孕蜕膜肿瘤坏死因子-α及转化生长因子-β表达的影响

目的　探讨米非司酮对胚胎生长及蜕膜肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和转化生长因子-β（TGF-β）表达的影响。方法　30例不同孕龄的早孕药物流产妇女（药流组）,予口服米非司酮25mg,每日2次共3d,72h后加服米索前列醇600μg。另选取30例正常育龄人工流产妇女（人流组）做对照。采用免疫组化测定两组妇女蜕膜组织中TNF-α和TGF-β的表达程度及量化均值水平。结果　（1）人流组蜕膜组织中TNF-α和TGF-β阳性表达率分别为70.00%（21/30）和86.67%（26/30）;药流组蜕膜组织中TNF-α和TGF-β阳性表达率分别为73.33%（22/30）和86.67%（26/30）;两组间比较,差异无显著性（P>0.05）。（2）药流组蜕膜中TNF-α表达程度（+　+～+　+　+为9例）显著高于人流组（+　+～+　+　+为4例）,两组间比较,差异有显著性(P<0.05);药流组蜕膜中TGF-β量化均值为0.6667,显著低于人流组量化均值0.9167的水平(P<0.05)。结论　口服米非司酮药物流产妇女的蜕膜组织中,出现的TNF-α升高及TGF-β的降低,可能是蜕膜组织因子网络平衡状态紊乱的表现,米非司酮可能通过抑制TGF-β的活性,刺激TNF-α的分泌作用对胚胎发育产生不良影响。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在米非司酮流产绒毛及蜕膜组织中表达的研究

目的:通过麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA)受体和鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体在米非司酮流产的绒毛及蜕膜组织中的表达,探讨米非司酮的抗早孕机理。方法:以生物素标记的凝集素WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和组织化学染色法检测3种凝集素受体在米非司酮流产组(实验组)和人工流产组(对照组)早孕绒毛及蜕膜组织上皮细胞及其间充质细胞的分布。结果:实验组WGA受体、RCA受体和ECL受体在蜕膜组织上皮细胞的表达比对照组均显著降低(P0.01)。实验组ECL受体在绒毛上皮的表达显著低于对照组(P0.01),实验组WGA和RCA受体在绒毛上皮细胞的表达与对照组无显著差异(P0.05)。实验组3种凝集素受体在绒毛及蜕膜的间充质细胞的表达,与对照组无显著差异(P0.05)。结论:米非司酮可能通过下调蜕膜上皮组织中WGA受体、RCA受体和ECL受体的表达,阻碍胚胎发育而导致流产。     

正常与药物流产绒毛蜕膜组织细胞凋亡及相关基因的表达

目的：探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞调亡、增殖及相关基因表达的影响。方法：对正常早孕绒毛与蜕膜、药物流产完全与不完全的绒毛、药物流产不完全蜕膜标本各10份（共50份标本）,应用原位末端标记法进行细胞凋亡的组织学检测,免疫组织化学方法测定bcl-2、bax、fas、增殖细胞核捩的（PCNA）5种蛋白在组织中的分布与含量,同时应用原位杂交法测定fas与fasL mRNA的分布与含量。结果：正常早孕绒毛中存在少量凋 细胞,主要分布于合体滋养细胞,蜕膜中凋亡细胞偶见;绒毛蜕膜中均可检测到上述5种蛋白。米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞凋亡显著增,蜕膜凋亡细胞也增多,同时伴有促凋亡baz、fas、fasL蛋白及fas、fasL、mRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量无减少。结论：米非司酮能促进早孕绒毛合体滋养细胞,蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,且主要通过fas与fasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也有一定相关性,此可能为其抗早孕机理之一。     

TNF-α在IVF-ET后自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在胚胎早期发育过程中的作用及其与流产的关系.方法应用免疫组织化学标记法(SP法),比较IVF-ET后自然流产(10例,A组)、复发性流产(20例,B组)、人工流产(20例,C组)3组患者早孕绒毛、蜕膜组织中TNF-α的表达情况.结果TNF-α在3组绒毛及蜕膜组织中均有表达,A、B组蜕膜及绒毛组织中表达的平均光密度与C组相比差异有非常显著性(P＜0.01).结论TNF-α调节生殖免疫过程,参与了母-胎间相互作用,TNF-α表达异常,在自然流产发病中起重要作用,是导致自然流产的原因之一.     

催乳素、孕酮、雌二醇及其受体对早期胚胎发育的影响

目的:探讨早期妊娠母体血循环中催乳素(PRL)、孕酮(P)、雌二醇(E<,2>)水平改变及其受体在早期妊娠蜕膜中的表达与胚胎发育终止的关系.方法:收集正常早孕人工流产者(正常早孕组)与早期胚胎发育终止者(早期胚胎发育终止组)各30例,用化学发光免疫分析法检测其血清中PRL、P、E<,2>水平变化,并用免疫组化方法检测3种激素相应受体(PRLR、PR、ER)在孕早期蜕膜中的表达.结果:早期胚胎发育终止组血清PRL、P、E<,2>水平及蜕膜中PRLR、PR、ER表达均低于正常早孕组,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论:孕早期血清PRL、P、E<,2>维持正常水平及PRLR、PR、ER在孕早期蜕膜的正常表达对早期妊娠的维持有重要作用,其水平降低可能是导致胚胎死亡的重要原因之一.     

人早孕滋养细胞通过分泌CXCL16促进蜕膜γδT细胞增殖

目的:探讨人早孕期滋养细胞分泌的CXCL16对蜕膜γδT细胞增殖的影响。方法:收集正常非孕妇女、正常早孕妇女及自然流产妇女的外周血及蜕膜组织各10例,体外分离外周血单核淋巴细胞及蜕膜免疫细胞,使用流式细胞仪检测γδT细胞的比例;采用磁珠分选技术纯化得到的人早孕蜕膜γδT细胞,流式细胞术检测其胞内细胞因子的表达;建立人早孕蜕膜γδT细胞与滋养细胞的共培养体系,流式细胞仪检测γδT细胞中Ki67的表达。结果:正常早孕妇女外周血及蜕膜局部γδT细胞比例明显高于非孕妇女及自然流产妇女,且正常早孕组和自然流产组蜕膜局部γδT细胞比例均高于外周血。人早孕蜕膜γδT细胞内的细胞因子表达依次为IL-10>TGF-β1>TNF-α≥IFN-γ。人早孕滋养细胞或者人重组的CXCL16(rhCXCL16)均能促进γδT细胞的增殖,而在共培养体系中加入CXCL16的中和性抗体后则抵消了此效应。结论:早孕妇女体内γδT细胞数量增多可能与正常妊娠的维持有关,母-胎界面的滋养细胞通过分泌CXCL16促进蜕膜γδT细胞的增殖,蜕膜γδT细胞可能通过分泌IL-10及TGF-β1等细胞因子有利于正常妊娠的维持。     

细胞因子对人子宫肌组织泌乳素分泌的调节

人子宫组织包括子宫内膜、蜕膜和子宫肌层释放垂体外泌乳素(PRL)已获证实。子宫内膜和蜕膜分泌PRL不依赖于垂体,而受人胎盘组织条件培养液(HPCM)中含量丰富的孕激素及白介素6(IL-6)、干扰素α(IFN-α)、表皮生长因子(EGF)、内皮素3(ET-3)等多种因子的调节。体外培养试验证实,孕激素能抑制子宫肌层组织合成和分泌PRL,与孕激素对子宫内膜和蜕膜组织的作用相反。     

米非司酮药流时整合蛋白β3和细胞间粘附分子-1在蜕膜与绒毛内的表达

为了解米非司酮与米索前列醇对早孕流产的蜕膜、绒毛中整合蛋白 (Integrin)β3和细胞间粘附分子 1 (Intercellular adhesion molecule,ICAM 1 )的影响 ,应用流式细胞定性定量分析技术测定了 1 0例采用米非司酮与米索前列醇终止早孕妇女的蜕膜与绒毛组织中整合蛋白β3和 ICAM 1水平 ,并以 1 0例负压吸引人工流产者为对照。结果显示 :蜕膜与绒毛组织整合蛋白 β3和 ICAM 1均较对照组明显降低。实验组蜕膜组织整合蛋白 β3与 ICAM 1分别为 1 9.1± 5.0 1 %和 2 0 .6 1± 6 .51 % ,对照组分别为 2 9.3 1± 5.2 6和 2 6 .6 9± 6 .1 1 ;实验组绒毛组织整合蛋白β3与 ICAM 1分别为 2 1 .3 2± 4 .3 8%和 2 0 .2 9± 6 .4 9% ,而对照组则为 3 1 .3 1± 7.85和 2 8.6 9± 7.98。结果提示整合蛋白β3及 ICAM 1可能与维持早孕有关 ,米非司酮影响蜕膜、绒毛组织中整合蛋白 β3及 ICAM 1的表达 ,可能参与药物抗早孕机制。     

米非司酮对人早孕蜕膜和绒毛超微结构的影响

从超微结构水平，研究早孕妇女口服米非司酮（２５ｍｇ，Ｂｉｄ×２天）４８ｈ后，蜕膜和绒毛的超微结构改变，结果表明：蜕膜中大蜕膜细胞皱缩，粗面内质网和线粒体肿胀，蜕膜颗粒细胞中高电子密度颗粒减少或消失，同时伴随着周围网状纤维的溶解；而绒毛功能活跃的合体滋养细胞则表现不同程度的退行性改变。表明米非司酮阻断孕激素作用，对蜕膜的影响是直接的，而绒毛则主要是受继发性血供不足的影响。蜕膜中颗粒细胞及基质中网状纤维是米非司酮抗早孕重要的作用部位。     

米非司酮并米索前列醇终止早孕的蜕膜组织T淋巴细胞亚群及细胞因子的表达

目的观察米非司酮并米索前列醇终止早孕的蜕膜组织T淋巴细胞亚群及细胞因子的表达,探讨药物流产的免疫作用机理.方法将38例停经≤49d的早孕妇女分成3组米非司酮组13例(Ⅰ组),米非司酮并米索前列醇组12例(Ⅱ组),对照组13例(Ⅲ组),应用流式细胞技术对蜕膜组织T淋巴细胞亚群,即辅助T淋巴细胞(CD+4)、抑制或杀伤T淋巴细胞(CD+8)、T总淋巴细胞(CD+3)、自然杀伤(NK)细胞白细胞分化抗原分化簇(CD+56、CD+16)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β(TGF-β)的表达进行分析.结果Ⅰ组、Ⅱ组CD4+分别为(30.9l±2.57)%、(31.58±3.28)%,与Ⅲ组(25.64±2.36)%比较,差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01).Ⅰ组、Ⅱ组CD+56分别为(22.40±2.77)%、(26.88±3.79)%,与Ⅲ组(18.58±4.04)%比较,差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01).Ⅰ组、Ⅱ组CD+16分别为(8.98±2.18)%、(10.84±2.51)%,与Ⅲ组(6.34±2.01)%比较,差异均有显著性(P＜0.01,P＜0.001).TNF-α在Ⅰ组、Ⅱ组的表达较Ⅲ组有增高趋势,TGF-β有下降趋势,但差异无显著性(P＞0.05),而CD+3、CD+8、CD+4/CD8+比值,3组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论米非司酮并米索前列醇通过影响蜕膜组织局部免疫细胞及细胞因子的表达,可导致局部免疫微环境的破坏,使母体免疫抑制反应减轻,排斥反应增强,这可能是其抗早孕的免疫作用机理之一.     

细胞凋亡和PCNA在早孕绒毛滋养细胞及蜕膜中的表达与自然流产的关系

目的 :研究细胞凋亡与细胞增殖在早孕绒毛滋养细胞和蜕膜中的表达及与自然流产的关系。方法 :对孕 3月内 2 0例正常妊娠、2 0例第 1次自然流产 (SA)和 15例反复自然流产 (RSA)的绒毛和蜕膜组织应用TdT介导的dUTP缺口原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)。结果 :正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中的凋亡指数分别为 7.2 1± 1.2 4、8.89±2 .5 2和 7.70± 0 .82 ;SA组为 15 .4 0± 6 .5 9、2 5 .83± 6 .83和 32 .0 3± 3.2 7;RSA组为 18.77±8.2 2、34.0 2± 13.4 9和 34.96± 5 .4 6。增殖指数在正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中为 6 4 .13± 5 .90、0和 6 2 .0 8± 4 .76 ;SA组为 6 7.0 2± 6 .79、36 .13± 3.5 6和 6 4 .94± 4 .6 0 ;RSA组为 6 8.6 7± 8.4 5、33.6 7± 4 .0 8和 6 3.99± 5 .5 4。即孕 3月内正常妊娠的绒毛和蜕膜组织中均有一定量的细胞凋亡与细胞增殖存在。SA与正常早孕相比绒毛和蜕膜中的细胞凋亡均明显增加 (P <0 .0 1) ,RSA合体滋养细胞凋亡也较SA明显增加 (P <0 .0 5 ) ;细胞滋养细胞和蜕膜中的细胞增殖在自然流产与正常妊娠间无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡和增殖的平衡与妊娠维持?