毛地黄黄酮和玄参黄酮抑制~3H-地西泮和体外大鼠脑膜的结合

目的从阿拉伯艾蒿中提取脑内苯二氮杂卓(BZ)受体活性化合物。方法用体外的放射配体-受体结合测定(RRA)和高压液相法(HPLC)提取、分离、纯化BZ受体活性化合物,用核磁共振和质谱仪确定活性化合物的结构。后用GABA比和Scatchardplot分析确定它们的作用特性。结果提取、分离到毛地黄黄酮和玄参黄酮2种活性化合物。它们在体外可抑制3H-地西泮和大鼠脑细胞膜的结合,IC50值分别为(1.3±0.1)μmol/L和(22.7±2.5)μmol/L。2种化合物还在体外抑制3H-呱唑嗪和α1-肾上腺素受体的结合,IC50值分别为74μmol/L和700μmol/L。2种化合物的GABA比值分别为1.10和1.20,而且它们均使35S-TBPS与脑膜结合轻度升高,提示2种黄酮化合物是BZ受体的拮抗剂或部分激动剂。Scatchardplot分析显示2种化合物对3H-地西泮和脑细胞膜结合的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。结论毛地黄黄酮和玄参黄酮是脑内BZ受体的拮抗剂或部分激动剂。它们的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

葛根素和大豆甙元抑制~3H-氟硝西泮和体外大鼠脑膜的结合

目的从中药葛根中提取脑内苯并二氮杂卓(BZ)受体活性化合物。方法用体外的放射配体-受体结合法(RRA)和高压液相法(HPLC)提取、分离、纯化BZ受体活性化合物,用核磁共振和质谱仪确定活性化合物的结构。后用GABA比和Scatchardplot分析确定它们的作用特性。结果从葛根中提取、分离到葛根素和大豆甙元2种活性化合物。它们在体外可抑制3H-氟硝西泮和脑细胞膜的结合,IC50值分别为(18.46±2.34)μmol/L和(15.4±31.89)μmol/L。大豆甙元还可抑制3H-呱唑嗪和α1-肾上腺素受体的结合(IC50值为89μmol/L)。2种化合物的GABA比分别为1.11和1.12,提示2种黄酮化合物是BZ受体的拮抗剂或部分激动剂。Scatchardplot分析显示2种化合物对3H-氟硝西泮和脑膜结合的抑制是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。结论葛根素和大豆甙元是脑内BZ受体的拮抗剂或部分激动剂。它们的抑制作用是通过竞争性与非竞争性混合机制而实现的。     

用脉冲伏安法观察多巴胺D_1D_2受体拮抗剂对大鼠纹体中DOPAC的影响

本文用脉冲伏安法在体测定麻醉大鼠纹体中二羟苯乙酸(DOPAC)的含量,并观察多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇(D_2/D_1)、氯丙嗪(D_2/D_1),舒必利(D_2)以及SCH23390(D_1)对纹体中DOPAC的影响。结果表明这些多巴胺受体拮抗剂均可使麻醉大鼠纹体中DOPAC含量增加,与基础DOPAC浓度(14±2μmol/L)相比,氟哌啶醇(0.5mg/kg s.c.),氯丙嗪(5mg/kgs.c.)、舒必利(5mg/kg s.c),SCH23390(1mg/kg s.c.)分别使DOPAC增加140％、102％、40％以及26％。从而证实不仅突触前D_2受体参与反馈调节DA的合成代谢,而且D_1受体也参与以上反馈调节机制,但D_2受体的调节作用较强。     

α-芋螺毒素TxID异构体对人类乙酰胆碱受体的活性研究

研究α-芋螺毒素Tx ID 3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体的阻断活性。采用Fmoc固相合成法,分别合成α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体的线性肽,利用2步氧化法进行氧化折叠,获得具有定点连接二硫键的异构体多肽。利用非洲爪蟾卵母细胞表达人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型,测定3个异构体对该乙酰胆碱受体的电流与洗脱速率的影响情况。α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性差异很大,阻断是可逆的,洗脱速率较快。其中具有天然构象的球状异构体活性最强,其半数阻断剂量(IC50)仅约为9.3 nmol/L;其次是带状异构体具有很微弱的抑制活性,其IC50大于5μmol/L;而珠子状异构体几乎没有阻断活性,其IC50大于10μmol/L。成功合成了α-芋螺毒素Tx ID的3个二硫键异构体,并获知了3个二硫键异构体分别对人类α3β4与α6/α3β4乙酰胆碱受体亚型的阻断活性,为α-芋螺毒素Tx ID后续海洋新药研发提供理论基础。     

转化生长因子βⅠ型受体抑制剂的体外筛选及构效关系分析

目的 筛选转化生长因子(TGF-β)信号通路Ⅰ型受体抑制剂,并探讨活性化合物的结构特征.方法 利用SMAD3荧光素酶报告系统对靶向TGF-β信号通路Ⅰ型受体激活素受体样激酶(ALK)设计合成的170个化合物进行活性初筛;通过分子水平激酶活性分析评价初筛活性化合物对ALK4、ALK5或ALK7激酶的选择性抑制活性;采用EGFP-SMAD2荧光蛋白转核模型,对筛选结果进行确证;参照SB431542与ALK5分子对接情况,对活性化合物进行构效关系的分析.结果 初筛发现15个化合物对TGF-β引起的SMAD3荧光素酶报告基因表达达到≥25%的抑制程度;在分子水平对ALK4、ALK5或ALK7也具有抑制活性,并表现出一定的选择性.其中,化合物63对ALK4和ALK7的IC50值分别为0.234和0.370μmol/L,对ALK5选择性较差,化合物64对ALK4、ALK5和ALK7的IC50值分别为10、6和85 nmol/L.这两个化合物在TGF-β1诱导EGFP-SMAD2核转位中同样表现出浓度依赖性抑制活性,IC50值分别为0.45和6.30μmol/L.MTT细胞增殖抑制实验表明,63和64在有效浓度下均无细胞毒性.构效关系分析表明,1,2,4-三芳基-1H-咪唑母核、1,3,5-三芳基-1H-吡唑母核、3,4-亚甲二氧基苯基、6-甲基-吡啶-2基和4-氨基羧基取代基团的化合物预计具有更好的活性.结论 筛选得到2个与阳性化合物SB431542活性相当的TGF-β信号通路Ⅰ型受体抑制剂,其中63对ALK4和ALK7具有选择性,64对ALK4、ALK5和ALK7均有抑制活性.     

犬冠状动脉和脑动脉多巴胺受体亚型对比研究

目的 :对比分析犬冠状动脉和脑动脉多巴胺 (DA)受体亚型类别与反应特性。方法 :利用离体血管微量生物反应检测技术 ,测定多巴胺 1(DA1)受体激动剂非诺多泮 (Fenoldopam ,FODA)和多巴胺 2 (DA2 )受体激动剂propy lbutyl dopamine(PBDA)对冠状动脉和脑动脉血管环的舒张反应。结果 :①冠状动脉和脑动脉均有DA1受体分布 ,但其分布密度存在明显差别 ;②脑动脉内既有DA1受体又有DA2 受体分布 ;③用 6 羟多巴胺 (6 OHDA)处理后的实验进一步证实脑动脉存在有DA2 受体。结论 :冠状动脉和脑动脉DA受体亚型存在明显的异质性 ,阐明这种异质性将有助于了解多巴胺受体对冠脉循环和脑循环的不同生理反应。     

犬冠状动脉和脑动脉多巴胺受体亚型对比研究

目的：对比分析犬冠状动脉和脑动脉多巴胺（DA）受体亚型类别与反庆特性。方法：利用离体血管微量生物反应检测技术,测定多巴胺1（DA1）受体激动剂非诺多泮（Fenoldopam,FODA)和多巴胺2（KA2）受体激动剂propy-lbutyl-dopamine(PBDA)对冠状动脉和脑动脉血管环的舒张反应。结果：（1）冠大辩论动脉和脑动脉均有DA1受体分布,但其分布密度存在明显差别;（2）脑动脉内既有DA1受体又有DA2受体分布;（3）用6-羟多巴胺（6-OHDA）处理后的实验进一步证实脑动脉存在有DA2受体。结论：冠状动脉和脑动脉DA受体亚型存在明显的异质性,阐明这种异质性将进一步证实脑动脉存在有DA2受体。结论：冠状动脉和脑动脉DA受体亚型存在明显的异质性,阐明这种异质性将有助于了解多巴胺受体对冠脉循环和脑循环的不同生理反应。     

水杨酰苯胺类mglu5拮抗剂作用模式及体外抗肿瘤活性研究

目的基于分子对接探讨水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ与代谢型谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptor 5,mglu5)之间的相互作用并测定化合物Ⅰ-Ⅳ的体外抗肝癌HepG2细胞增殖活性。方法采用计算机软件,以mglu5结晶复合物5CGD为受体模板,将水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ进行分子对接研究;利用MTT法测定水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ对肝癌HepG2细胞的增殖抑制活性。结果水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ与mglu5的活性口袋产生疏水作用以及与活性口袋关键氨基酸残基SER809产生氢键结合;水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ对肝癌细胞HepG2的抗增殖活性IC50值分别为2.55μmol/L、3.99μmol/L、3.12μmol/L和7.55μmol/L。结论水杨酰苯胺化合物Ⅰ-Ⅳ与mglu5对接的结合信息有助于水杨酰苯胺类mglu5拮抗剂的结构优化和新型mglu5拮抗剂设计,该类化合物的抗肿瘤作用值得进一步研究。     

马蹄金素衍生物的合成及抗乙肝病毒活性

以化合物马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]为先导化合物,设计并合成了10个马蹄金素衍生物,所有化合物均为新化合物,其结构经NMR、ESI-MS确认。以HepG2 2.2.15细胞为乙肝病毒载体,对合成的马蹄金素衍生物进行了抗乙肝病毒活性测试。结果表明,在测试浓度范围内,化合物5e(IC50:10.67μmol/L,SI:47.26)、4c(IC50:11.09μmol/L,SI:15.03)、4b(IC50:19.75μmol/L,SI:4.74)、5b(IC50:59.55μmol/L,SI:3.00)和5a(IC50:77.69μmol/L,SI:5.81)对乙肝病毒DNA复制的抑制活性高于阳性对照药物拉米夫定(IC50:82.42μmol/L,SI:41.59)。其中,化合物5e(IC50:10.67μmol/L,SI:47.26)的抑制活性最强,选择指数较高,具有进一步研究开发的价值。     

稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株的鉴定及新型非咪唑类H3受体拮抗剂的筛选

目的:鉴定转染大鼠组胺H3受体基因的HEK293细胞株受体表达情况,筛选具有H3受体拮抗活性的新型非咪唑类化合物。方法:利用RT-PCR和免疫印迹的方法检测转染细胞株组胺H3受体的表达,以阳性刺激物forskolin诱导细胞内cAMP含量升高为指标,初步筛选具有拮抗作用的化合物。结果:细胞鉴定结果显示,稳定转染H3受体基因的HEK293细胞株高表达大鼠H3受体。H3受体选择性激动剂(R)-α-甲基组胺可浓度依赖性抑制阳性刺激物forskolin(10μmol/L)诱导的cAMP含量升高(P<0.05),当(R)-α-甲基组胺浓度达到30 nmol/L时,抑制率接近平台值(P>0.05)。而H3受体拮抗剂噻普酰胺和新合成的非咪唑类化合物XHA23及XHA25则能够浓度依赖性阻断(R)-α-甲基组胺对forskolin诱导的cAMP含量升高的抑制作用(P<0.05),IC50分别为3.62μmol/L、0.49μmol/L、0.14μmol/L。结论:高表达H3受体的HEK293细胞株可用于有H3受体拮抗活性化合物的筛选,而非咪唑类化合物XHA23和XHA25具有一定的H3受体拮抗剂样活性。     

外源激素对远志根尖离体生长的影响

目的:探讨不同种类的外源激素及其配比对远志根尖离体生长的影响.方法:以从远志无根苗分化出来的根为实验材料,研究外源激素对远志根尖离体生长的影响.结果:就远志根尖离体生长而言,适宜的激素组合为二苯基脲双磺酸钙(DSC)1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L.结论:外源激素的配比及种类与外植体的生长发育有密切关系.     

大鼠脊髓胰高血糖素受体的初步实验研究——放射配体结合分析

本实验采用放射配体结合分析研究了脊髓内有无胰高血糖素受体。结果显示,在大鼠脊髓内含有较丰富的~(125)Ⅱ-胰高血糖素的特异性结合位点;且胸、腰段脊髓内特异性位点的结合量无明显差别;比较脊髓前、后部特异性位点的结合量,发现脊髓后半部”~(125)Ⅱ-胰高血糖素的特异性结合量明显较前半部为高;且非标记胰高血糖素可竞争性地与~(125)Ⅱ-胰高血糖素的特异性结合位点结合,其50%抑制剂量(IC_(50))约为0.5 nmol/L。     

丹酚酸B及其镁盐通过阻止病毒融合抑制SARS-CoV-2感染靶细胞

目的 探究中药单体丹酚酸B（Sal-B）及其镁盐体外抑制SARS-CoV-2感染靶细胞的效果及作用机制。方法 利用感染性SARS-CoV-2及SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型,检测Sal-B及其镁盐制剂注射用丹参多酚酸盐（ZDDY）的抗SARS-CoV-2活性;利用分子对接技术与分子动力学模拟技术,寻找Sal-B的抗病毒作用靶点;利用圆二色谱技术,检测六螺旋束（6-HB）的α-螺旋构象;利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系,检测Sal-B是否作用于新冠病毒入侵宿主的膜融合过程;利用流式细胞术,检测Sal-B是否作用于新冠病毒受体结合区RBD蛋白。结果 Sal-B与ZDDY在非洲绿猴肾细胞（Vero-E6）感染模型上抑制SARS-CoV-2的半数有效浓度EC50分为55.47 μmol/L,36.07 μg/mL;Sal-B与ZDDY抑制SARS-CoV-2的进入阶段,抑制SARS-CoV-2假病毒活性的IC50 分别为1.69 μmol/L,24.81 μg/mL;Sal-B可与SARS-CoV-2 S2亚基的8个氨基酸位点结合,亲和力为-8.2 kcal/moL,Sal-B在分子对接预测位点与 SARS-CoV-2 S2亚基稳定结合;Sal-B干扰SARS-CoV-2 HR1与HR2形成6-HB,显著降低6-HB的α-螺旋百分比（P<0.05）;Sal-B浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合,IC50为3.33 μmol/L;Sal-B不影响SARS-CoV-2 RBD蛋白与受体ACE2结合。结论 Sal-B及其镁盐制剂ZDDY体外可有效抑制SARS-CoV-2感染靶细胞,Sal-B通过抑制病毒膜融合过程发挥抗SARS-CoV-2活性。     

傣族药"广锅"的生药学研究

目的:为研究和开发唇形科罗勒属植物毛罗勒Ocimum bacilicum L.var.pilosum(Willd)Beth.提供生药学资料,为该药的深入研究奠定基础。方法:采用来源鉴定、性状鉴别、显微鉴别及理化鉴别的方法作系统的生药学研究。结果:毛罗勒茎横切面主要显微鉴别特征为:切面四方形;外周有厚角组织于四角处发达;韧皮部较窄;导管多单列排列;髓部薄壁细胞较大。粉末及叶表面特征:花粉粒众多,类圆形或椭圆形,少数近球形,萌发孔明显,外壁两层明显,具网状雕纹;非腺毛有两种,一种单细胞,一种由3~8个细胞组成,端壁相接处膨大,有疣状突起;腺鳞8细胞,内含黄棕色分泌物;叶表皮细胞间分布有众多类圆形分泌细胞。理化实验表明:毛罗勒全草含挥发油及少量皂苷。结论:毛罗勒是一味具有开发前景的民族药材,该研究为制定药材质量标准、研究和开发利用该药材提供了生药学资料。     

家兔肝动脉平滑肌中多巴胺受体亚型分析

选用ＦＯＤＡ和ＰＢＤＡ分别作为ＤＡ１和ＤＡ２受体的特异性激动剂；以ＳＣＨ２３３９０和ｄｏｍｐｅｒｉｄｏｎｅ分别作为ＤＡ１和ＤＡ２受体的阻断剂，利用离体血管环的方法对家兔肝动脉平滑肌中多巴胺受体的存在情况进行了观察。结果表明：多巴胺受体两亚型（ＤＡ１、ＤＡ２）均在肝动脉平滑肌中存在     

仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用

目的探讨仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用及机制。方法体外培养大鼠原代心肌细胞,将其分为空白对照组、DMSO溶剂对照组（0.1%）、H2O2氧化损伤组（200μmol/L）、槲皮素干预组（槲皮素30μmol/L＋H2O2200μmol/L）、低浓度仙茅苷干预组（仙茅苷0.5μmol/L＋H2O2200μmol/L）、中浓度仙茅苷干预组（仙茅苷5μmol/L＋H2O2μmol/L）、高浓度仙茅苷干预组（仙茅苷50μmol/L＋H2O2200μmol/L）。用H2O2氧化损伤经槲皮素及不同浓度仙茅苷预培养24 h的心肌细胞,18 h后测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、心肌细胞内丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）含量,并测定心肌细胞的凋亡率和生长抑制率。结果 H2O2氧化损伤后LDH、MDA含量明显升高,GSH-px活性明显下降,细胞抑制率和凋亡率均增加（P〈0.01）;而经槲皮素、不同浓度的仙茅苷预处理组的心肌细胞,LDH、M DA含量明显下降,GSH-px活性明显升高,细胞生长抑制率和凋亡率均降低（P〈0.01）;且仙茅苷对心肌细胞氧化损伤的保护作用呈浓度依赖性。结论仙茅苷预处理心肌细胞可保护H2O2所诱导的氧化损伤,其作用可能与抑制脂质过氧化、增加抗氧化酶活性、减少心肌细胞凋亡有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对裂殖酵母核基因SRK1和线粒体基因转录的影响

 目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors)丙戊酸（valproic acid,VPA）对裂殖酵母体内应激激酶核基因SRK1和线粒体基因转录的影响。方法 在裂殖酵母972细胞中加入梯度稀释的VPA测定细胞生长曲线并计算半数抑菌浓度（IC50）。检测分别加入1和5 μmol/L VPA处理6 h后,核基因SRK1的转录水平;检测同等处理条件下裂殖酵母体内线粒体基因的转录水平。结果 VPA对972细胞的IC50为7.57 μmol/L。1 μmol/L VPA处理的细胞中核基因SRK1转录水平上调5.5倍,外加5 μmol/L VPA处理的细胞中SRK1基因转录水平上调4.2倍;经1 μmol/L VPA处理后,线粒体基因COB,SPMIT2,SPMIT3上调倍数分别为3、4.59和6.31倍,其他基因变化不大,经5 μmol/L VPA处理后,线粒体基因转录水平全部上调,上调范围2.63～7.02倍。结论 在裂殖酵母体内,VPA能通过抑制细胞内去乙酰化酶而调节细胞核基因和线粒体基因的转录水平,加入IC50水平的VPA引起与应激相关核基因SRK1的转录水平显著上升,且线粒体内大部分基因转录水平也随之升高,说明细胞受到刺激后核基因和线粒体基因均能通过调节转录水平来阻挡外界刺激对细胞的影响。     

CPUHY002对人肝微粒体CYP450酶体外抑制作用研究

目的：评价CPUHY002在体外对人肝微粒体细胞色素P450（CYP450）酶6种亚型酶活性的影响.方法：将CPUHY002与CYP450酶6种亚型的特异性探针底物非那西丁、双氯酚酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗、丙酸睾酮与人肝微粒体进行孵育,采用LC-MS/MS法测定对应6种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基双氯酚酸、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮的浓度,求算出IC50.结果：CPUHY002对CYP2C19和CYP2E1的IC50值分别为48.02 μmol/L和47.19 μmol/L,对CYP1 A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9的IC50值＞100 μmol/L.结论：CPUHY002对于CYP2C19和CYP2E1具有弱抑制作用,对CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9无抑制作用.