人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型的建立

目的 建立人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,为探讨其发病机制和实验治疗提供工具。方法 将5例人小肠恶性淋巴瘤新鲜组织植入裸鼠小肠黏膜层内,观察原位移植成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学(光镜、电镜、免疫组织化学)、染色体核型和流式细胞分析。结果 有3例原位移植获得成功。依据新的WHO恶性淋巴瘤分类标准,建成1株人小肠原发性(非霍奇金B细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型(HSIL-1)、1株人小肠原发性(非霍奇金B细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型(HSIL-2)和1株人小肠原发性(非霍奇金T细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型(HSIL-3)。免疫组织化学显示,HSIL-1和HSIL-2的CD19、CD20、CD22、CD40、CD45、CD72阳性,HSIL-3的CD3、CD7、CD45RO阳性。染色体众数范围55～69条,为亚三倍体核型。移植瘤细胞的DNA指数为1.46～1.71,均为异倍体。HSIL-1、HSIL-2和HSIL-3分别传至32代、27代和21代,共移植裸鼠443只,其肿瘤移植生长率、液氮冻存复苏成活率和自发转移率均为100％。移植瘤在裸鼠小肠内呈侵袭性生长,破坏肠壁各层组织结构,出现血道、淋巴道及种植性转移。原位移植瘤与来源人小肠恶性淋巴瘤细胞一致。结论 3株人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型完整地模拟了人小肠原发性恶性淋巴瘤患者的临床过程,为研究小肠恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供了理想的动物模型。     

人脾原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及生物学特性的研究

目的 建立人脾原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型,为探讨其发病机理和实验治疗提供工具,方法 将11例人脾原发性恶性淋巴瘤新鲜组织植入裸鼠脾裨内,观察原位移植的成瘤、移植瘤的侵袭和转移及其形态学特征（光镜、电镜、免疫组织化学）。结果 筛选出1株人脾原发性（非霍奇金B细胞性裂核细胞型）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型（BFNHL－HMN－1）,已传至41代;1株人脾原发性（非霍奇金B细胞性裂核细胞型）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型（LM－BFNHL－HMN－2）,已传至47代;1株2脾原发性（非霍奇金T免疫母细胞）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型（TINHL－HMN－3）,已传至37代,共移植裸鼠611只,其肿瘤移植生长率、肝转移率和液氮冻存复苏成活率均为100％。BFNHL－HMN－1和TINHL－HMN－3肿瘤完全限于脾内,呈结节状生长,或伴有脾门淋巴结累及,无腹腔淋巴结和器官转移。LM－BFNHL－HMN－2肿瘤不仅限于脾脏,并有脾门淋巴结及肝转移。原位移植瘤组织经病理学、超微结构观察,流式细胞仪DNA含量测定及染色体核型的分析,表明与人脾原发性恶性淋巴瘤细胞相一致。结论 所建立的3株人脾原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,完整地模拟了人脾原发性恶性淋巴瘤患者的临床过程,为研究人脾原发性淋巴瘤的生物学和实验治疗提供了理想的动物模型。     

胃癌细胞和组织块原位移植模型的建立及评价

[目的]采用两种方法建立胃癌裸鼠原位移植模型，并对两种模型进行评价。[方法]将胃癌肿瘤细胞悬液、胃癌裸鼠皮下瘤块采用OB胶粘贴法种植于裸鼠胃壁，形成原位移植瘤，观察和比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率和自发转移的发生率。常规HE染色，观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移的病理切片。免疫组化法检测胃癌原位移植瘤的MVD和VEGF的表达。[结果]细胞悬液种植的原位胃癌成瘤率为60％，淋巴结转移率和肝转移发生率仅为55．6％和33．3％；皮下组织块移植OB胶粘贴法的原位成瘤率100％，淋巴结转移率和肝转移发生率为93.3％和80％。皮下瘤块的原位移植瘤中MVD值和VEGF的表达高于细胞悬液法鼠移植瘤中MVD和VEGF的表达。[结论]两种原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，以胃癌裸鼠皮下组织块OB胶粘贴法为优，且肿瘤血管新生的能力较强。     

完整瘤组织块原位移植法建立人成骨肉瘤转移模型

目的：建立人成骨肉瘤裸鼠转移模型。方法：采用完整瘤组织块原位移植法获得裸鼠自发性肺转移模型,并对转移模型进行影像学检查、组织学检查及ＰＣＲ同源性分析。结果：建立裸鼠体内人成骨肉瘤转移模型,其自发性肺转移率达到１００％,肝转移率达３０％。影像学检查及组织学检查均与人成骨肉瘤临床情况相似,ＰＣＲ同源性分析证实裸鼠肺部转移灶为人成骨肉瘤细胞。结论：裸鼠体内人成骨肉瘤自发性转移模型模拟了临床发病过程,对人     

人类卵巢癌原位移植自发转移裸小鼠模型的构建

 目的　用人类卵巢癌组织块原位移植构建与人类卵巢癌最相似的裸鼠原位移植自发转移模型。方法　将人类卵巢癌高转移细胞系8910PM在裸鼠皮下注射成瘤,然后将瘤组织运用显微外科的方法植入裸鼠卵巢包膜内,原位移植成功后继续在鼠间卵巢包膜内传代,并运用透射电镜进一步验证肿瘤形成和转移效果。结果　裸鼠皮下与卵巢部位成瘤率均为100 %（分别为2／2和16／16）,原位移植瘤转移率为50 %。卵巢包膜间传代,第2代、第4代分别出现卵巢癌的肝转移,其他部位尚未见转移灶。最早成瘤时间1周,最早转移出现时间2周。在连续传代过程中移植瘤仍保持原癌组织病理形态特点及人类肿瘤染色体的特点。结论　成功构建了人类卵巢癌原位移植自发转移裸鼠模型,为卵巢癌的转移机制及治疗研究提供了一个理想的动物模型。     

人原发性肝恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立

目的建立人肝原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型,为探讨肝恶性淋巴瘤发病机制和实验治疗提供工具。方法采用人肝原发性恶性淋巴瘤术中新鲜瘤组织块植入裸小鼠肝实质内,观察原位移植成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学）、血清学、染色体核型和流式细胞分析。结果在裸小鼠体内建成了一株人肝原发性恶性淋巴瘤原位移植模型（HLBL-0102）。移植瘤的组织病理学为原发性肝恶性淋巴瘤（非霍奇金B细胞性）,免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD45和CD79a阳性,CD3、CD7阴性,甲胎蛋白（AFP）阴性,乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg）阳性,乳酸脱氢酶（LDH）1267．5U／L。染色体众数范嗣55—59条;移植瘤细胞DNA指数值1．57～1．61,均为异倍体。HLBL-0102住裸鼠体内生长3年,已经传至37代,共移植裸鼠283只,其肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活牢均为100％。人原发性肝恶性淋巴瘤在裸鼠肝内自主侵袭性生长,瘤细胞侵入并破坏临近肝组织和门脉区内胆管及静脉,无其他组织、器官侵犯及远处淋巴结累及。结论HLBL-0102是首次建苞成功的人原发性肝恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,完整地模拟了人原发性肝恶性淋巴瘤患者的自然临眯病理过程,为研究原发性肝恶件淋巴瘤生物学和实验治疗提供了理想的动物模型。     

裸鼠人胃腺癌SGC-7901原位移植模型的构建及其生物学特性

目的 :建立裸鼠人胃癌原位移植模型。方法 :以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC 790 1人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料 ,将其原位移植于裸鼠胃壁 ,观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果 :原位移植成功率及局部浸润率为 8 8,局部淋巴结转移率为 8 8,肺转移发生率为 5 8,肝转移发生率为 7 8,腹膜转移发生率为 7 8。结论 :裸鼠人胃癌原位移植模型的生物学行为与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,可作为肿瘤转移机制及其抗转移治疗实验研究的理想模型     

MIA PaCa-Ⅱ胰腺癌细胞系神经转移动物模型建立的实验研究

目的建立MIA PaCa-Ⅱ人胰腺癌细胞系裸鼠胰腺原位移植瘤模型并观察神经侵袭情况。方法将MIA PaCa-Ⅱ细胞行裸鼠背部皮下接种,建立高转移特性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,然后将高转移性移植瘤组织接种于裸鼠胰腺被膜下,分别于4周、6周和8周处死裸鼠行移植瘤组织解剖和病理学检查,测量移植瘤大小和重量,并用HE和银染方法观察神经侵袭情况。结果MIA PaCa-Ⅱ细胞裸鼠皮下接种成瘤率为100.0%（10/10）,皮下移植瘤呈局限性生长,无脏器和神经转移。原位移植4周、6周和8周后,胰腺癌原位移植瘤成瘤率均为100.0%（10/10）,神经转移率分别为50.0%（5/10）、80.0%（8/10）和60.0%（6/10）,并可见多个脏器转移,以肝脏、肝门淋巴结、胃窦转移和腹膜播散多见。结论人胰腺癌细胞系MIA PaCa-Ⅱ裸鼠胰腺原位移植瘤模型为一较理想的＂拟人＂神经浸润转移模型,可用于胰腺癌体内嗜神经性机制的研究。     

人胃癌组织块裸鼠原位移植/转移模型的建立

 目的　用肿瘤组织块原位移植 ,建立人胃癌裸小鼠原位移植 /转移模型。方法　以人胃低分化腺癌细胞系接种于裸小鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,再取该肿瘤组织块原位移植于裸鼠胃壁 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。结果　原位移植成功率 (成瘤率 )为 1 0 0 %、局部淋巴结转移率 1 0 0 %、远处淋巴结转移率 90 %、肝转移发生率为 75%。荷瘤鼠的中位生存期为 1 4周 ,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论　该裸小鼠原位移植 /转移模型的生物学行为与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,可作为一种有价值的工具用于胃癌转移机理和抗转移实验治疗的研究。     

裸鼠人胃腺癌SGC-7901原位移植模型的构建及其生物学特性

目的：建立裸鼠人胃癌原位移植模型。方法：以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料，将其原位移植于裸鼠胃壁，观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果：原位移植成功率及局部浸润率为8／8，局部淋巴结转移率为8／8，肺转移发生率为5／8，肝转移发生率为7／8，腹膜转移发生率为7／8。结论：裸鼠人胃癌原位移植模型的生物学行为与人胃癌自然生长和转移过程相似，可作为肿瘤转移机制及其抗转移治疗实验研究的理想模型。     

裸小鼠人肺癌术后转移模型的建立及动态观察

目的：建立裸小鼠人肺癌术后转移模型,动态观察肿瘤转移情况,为研究肺癌转移机制和术后抗转移治疗提供动物模型。方法：采用组织块法建立裸小鼠人非小细胞肺癌NCI-H460皮下移植瘤模型。4周后,随机挑选25只裸小鼠作为手术组切除肿瘤组织,建立术后转移模型,其余15只裸小鼠作为对照组。每2周两组各处死5只裸小鼠,动态观察其远处各脏器转移情况。动物明显消瘦时结束实验,并采用免疫组化法检测MMP-2、OPN、CD44v6、CD62等蛋白在转移灶及原发灶的表达情况。结果：对照组裸小鼠10周时所携瘤体严重坏死,并出现明显消瘦,解剖发现各阶段均无转移。手术组裸小鼠于10周、12周各发现1例肺转移（1/5）,14周时裸小鼠明显消瘦,肺转移率达100%（5/5）,有肉眼明显可见的肺转移结节,其他脏器未见转移。免疫组化结果表明,MMP-2、OPN、CD44v6、CD62、E-cadherin、TIMP-2在肺转移灶内的表达明显高于原发灶,CD54和MMP-9在转移灶内的表达则低于原发灶。结论：本模型模拟了临床肿瘤根除术后发生远处转移的过程,结果提示肺癌转移的发生可能与部分粘附分子的表达异常相关,同时为研究肺癌转移机制和术后抗转移治疗提供了理想的动物模型。     

Establishment of highly metastatic human tumor cell line in nude mice

A total of 22 adult nude mice (7 approximately 17 weeks old) of BALB/cA origin were inoculated subcutaneously (SC) with human tumor cell lines derived from rhabdomyosarcoma and lung carcinomas, including squamous cell carcinoma, bronchiolo-alveolar carcinoma, small cell carcinoma, giant cell carcinoma and 2 types of adenocarcinoma. 12 neoplasms (54.5%) was confirmed at the initial transplantation and 7 serially transplantable tumors were established in 201 nude mice. Metastatic behavior of 7 human tumor cell lines grown in nude mice was judged histologically after sacrifice and SC transplanted tumors could either be highly metastatic (giant cell carcinoma), moderately metastatic (adenocarcinoma PAb), poorly metastatic (squamous cell carcinoma and adenocarcinoma PAa) or non-metastatic (small cell carcinoma and bronchiolo-alveolar carcinoma). The tumor from SC inoculated giant cell carcinoma (PG) could produce regional and/or distant lymph node metastases (12/12) and lung metastases (9/12) in BALB/cA nude mice maintained under semi-barrier system conditions. Six NIH nude mice developed metastatic tumor nodules both in the lymph node and lung (6/6) under the same condition. The highly metastasizing property of PG transplanted tumors remained after passage for as many as 18 times. The limitations of nude mice as an in vivo model for the study of tumor biology are discussed, eg. malignant neoplasms rarely metastasize when transplanted into nude mice. The use of such model (PG) could lead to a better understanding of the biology of metastasis, thus contributing to the development of new approaches to the therapy of metastasis.     

ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.     

Amyloid precursor-like protein 2 (APLP2) affects the actin cytoskeleton and increases pancreatic cancer growth and metastasis

Amyloid precursor-like protein 2 (APLP2) is aberrantly expressed in pancreatic cancer. Here we showed that APLP2 is increased in pancreatic cancer metastases, particularly in metastatic lesions found in the diaphragm and intestine. Examination of matched human primary tumor-liver metastasis pairs showed that 38.1% of the patients had positive APLP2 expression in both the primary tumor and the corresponding liver metastasis. Stable knock-down of APLP2 expression (with inducible shRNA) in pancreatic cancer cells reduced the ability of these cells to migrate and invade. Loss of APLP2 decreased cortical actin and increased intracellular actin filaments in pancreatic cancer cells. Down-regulation of APLP2 decreased the weight and metastasis of orthotopically transplanted pancreatic tumors in nude mice.     

Cordycepin (3′-deoxyadenosine) suppressed HMGA2, Twist1 and ZEB1-dependent melanoma invasion and metastasis by targeting miR-33b

Malignant melanoma, the most deadly form of skin cancer, has a high propensity for metastatic spread and is notoriously chemotherapy-resistant. Cordycepin, the active component of Cordyceps spp., has been identified to have anti-metastatic effect on tumor progression and thus possesses pharmacological and therapeutic potentials. However, the mechanisms of anti-metastatic effects of cordycepin at cellular levels remain elusive. We analyzed the effect of cordycepin on human melanoma miRNA expression profiles by miRNAarray and found that miR-33b was upregulated in highly-metastatic melanoma cell lines following cordycepin exposure. Cordycepin-mediated miR-33b expression was dependent on LXR-RXR heterodimer activation. miR-33b directly binds to HMGA2, Twist1 and ZEB1 3′-UTR to suppress their expression. The negative correlations between miR-33b levels and HMGA2, Twist1 or ZEB1 expression were detected in 72 patient melanoma tissue samples. By targeting HMGA2 and Twist1, miR-33b attenuated melanoma migration and invasiveness upon cordycepin exposure. miR-33b knockdown or ZEB1 overexpression reverted cordycepin-mediated mesenchymal-epithelial transition (MET), triggering the expression of N-cadherin. In spontaneous metastasis models, cordycepin suppressed tumor metastasis without altering primary tumor growth. We showed for the first time that targeting miRNA by cordycepin indicates a new mechanism of cordycepin-induced suppression of tumor metastasis and miR-33b/HMGA2/Twist1/ZEB1 axis plays critical roles in regulating melanoma dissemination.