Establishment of a Sandwich ELISA Method for Detection of Vascular Endothelial Growth Factor in Serum Samples of Hepatocellular Carcinoma Patients1

Objective To establish a sandwich ELISA method for detecting vascular endothelial growth factor(VEGF)in sera of population and the patients with hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Full length and two truncated human VEGF cDNA sequences were amplified from a commercial plasmid pBLAST49-bVEGF by PCR and inserted into the prokaryotic-expression plasmid pET-32a or pGEX-2T. Various VEGF proteins were expressed and purified from E. coli in His-Trx or GST fusion forms.The specific VEGF antibodies were elicited in experimental rabbits and mice by immunization of the full length VEGF fusion protein His-Trx-VEGF1-165.After purification of antibodies with chromatograph of Protein G.a sandwich ELISA technique was established.Serum VEGF levels were evaluated in 229 adults and 291 HCC patients.Results SDS-PAGE displayed that the molecular weights of the expressed full length(His-Trx-VEGF1-165),N-terminal(His-Trx-VEGF1-100)and C-terminal(GST-VEGF100-165)human VEGF fusion proteins were about 38KD,31KD,and 33KD,respectively.Western blots confirmed that the prepared antisera were able to recognize both prokaryoticly and eukaryoticly expressed recombinant VEGF proteins.Assays of serially diluted His-Trx-VEGF1-100 by the established sandwich ELISA method showed that the linear range of the standard curve was 0.625-320 ng/mL.with the squared correlation coefficient R2=0.991.Screening of a serum panel containing 291 serum samples of HCC patients and 229 health adults rovealed that the average VEGF level in HCC patients was higher than that in healthy controls,with a statically significant difference. Conclusion The established sandwich ELISA reflects the level of serum VEGF and provide scientific basis for scrcening metastasis and recurrence of HCC using serum VEGF as an index.     

肝细胞癌变过程中血管内皮生长因子的表达变化

目的：观察肝细胞癌变过程中血管内皮生长因子（VEGF）的动态改变及相互关系。方法：以含0.05%2-乙酰氨基芴（2-FAA）颗粒饲料连续喂饲雄性SD大鼠12周诱发肝细胞癌变,在此过程中以免疫组织化学法、Western blot技术及酶联免疫吸附法（ELISA）观察VEGF的表达特征及其相互关系。结果：组织学证实SD大鼠在喂饲2-FAA后,肝细胞出现颗粒样变性、不典型增生及肝细胞癌（HCC）的变化;肝细胞中VEGF呈粽色阳性颗粒,主要存在于细胞浆,偶见于细胞核;癌变过程中VEGF表达率和VEGF/β-actin比率分别为：对照组25%和0.16±0.02、肝细胞变性组88.9%和0.29±0.04、癌前病变组100%和0.52±0.03及癌变组100%和0.84±0.02;VEGF表达在蛋白水平均随着病理组织学的改变呈梯度增加,表现为癌变组明显高于对照组和肝细胞变性组（P〈0.05）;肝癌中VEGF在肝细胞内呈强阳性表达;肝组织与血清VEGF的动态改变呈显著正相关关系（r=0.785,t=8.00,P〈0.01）。结论：VEGF表达异常与肝癌的发生发展有关,其表达增加有助于肝癌早期诊断,也是肝癌治疗的分子靶目标。     

Serum Vascular Endothelial Growth Factor-C and Vascular Endothelial Growth Factor Level in Patients with Colorectal Carcinoma and Clinical Significance

The opti mal staging approachin patients withcolorectal carcinoma(CRC)who have been in-volved in lymph node metastasis on computedtomography(CT)scans or magnetic resonance i m-aging scans(MRI)is far less reliable and contro-versial,because the i maging criteria for tumor in-volvement are relied on the size and shape of thelymph nodes.But as we known,accurate tumorstaging is essential for choosing the appropriatetreat ment strategy for patients with CRC.The in-volvement of lymph nodesis ani…     

血管内皮因子在肝癌中的表达及与微血管密度的关系

①目的探讨VEGF的蛋白表达与不同分期肝细胞癌（HCC）血管生成的关系及其在HCC血管生成中的作用。②方法45例肝细胞癌组织,采用免疫组化法（SABC）检测VEGF的表达和MVD值结合患者的-临床病理指标进行统计学分析。③结果VEGF的表达在有血管侵犯组显著高于无血管侵犯组（P〈0．05）;VEGF阳性组MVD值显著高于阴性表达组（P〈0．05）。④结论HCC中VEGF的表达与肝癌血管生成有关。     

非小细胞肺癌血清血管内皮生长因子水平的变化及其意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者术前血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平及其诊断价值。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测32例NSCLC患者、19例肺部良性疾病患者和30例健康人血清中VEGF水平。结果NSCLC患者血清VEGF水平[(16.27±2.32)μg/L]明显高于肺良性疾病患者[(11.08±2.20)μg/L]和健康人[(10.52±2.03)μg/L](P<0.01);VEGF水平与P-TNM分期、淋巴结转移情况、肿瘤细胞分化程度密切相关(P<0.01);血清VEGF≥14.58mg/L诊断NSCLS的灵敏度和特异性分别是71.88%和93.33%。结论血清VEGF可作为判断NSCLC侵袭和转移状态的生物学指标。     

肝癌患者血浆PEDF和VEGF表达水平及其与预后关系的探讨

目的观察肝癌患者血浆色素上皮衍生因子(PEDF)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平并探讨其与预后的关系。方法采用ELISA法检测肝癌患者43例(肝癌组)、肝脏良性疾病患者20例(良性肝病组)及健康对照者20例(健康对照组)血浆PEDF和VEGF水平;肝癌患者平均随访(12.02±0.23)个月,记录短期主要不良终点事件(SMAE)发生情况。结果血浆PEDF水平肝癌组较良性肝病组及健康对照组明显降低(P<0.01),VEGF水平明显升高(P<0.01),而良性肝病组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肝癌患者随访结束后,高PEDE/VEGF比值(≥3)亚组22例发生SMAE 3例(13.64%),低PEDF/VEGF比值(<3)亚组21例发生SMAE 7例(33.33%),Kaplan-Meier生存曲线显示2组差异有统计学意义(P=0.039)。另外,与未发生SMAE的肝癌患者(33例)比较,发生SMAE者(10例)有更低的PEDE/VEGF比值(2.14±0.76 vs.3.49±1.12,P<0.01)。结论 PEDF和VEGF参与肝癌的病理生理过程,低表达的PEDF及高表达的VEGF反映肝癌发生、发展及转移情况,两者比值可能成为预测肝癌转移及预后的有效指标。     

非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子测定与临床病理特征及预后的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者(NSCLC)血清血管内皮生长因子(VEGF)与临床病理指标的关系,以及对肺癌预后的判断价值。方法收集30例正常体检者、35例肺炎患者和70例NSCLC患者血清,用ELISA方法检测血清VEGF浓度。结果NSCLC患者血清VEGF水平远高于正常健康人群组(P<0.01),肺炎患者血清VEGF浓度虽也有一定的升高,但较之肺癌组低,二者间有显著差异(P<0.05)。肺癌患者血清VEGF水平与淋巴结转移状态、临床分期及原发肿瘤大小有关。血清VEGF与患者生存期密切相关,生存>6个月患者血清VEGF明显高于<6个月者(P<0.05)。结论血清VEGF与非小细胞肺癌的病程进展及生存期相关,是一种有用的预后判断指标。     

肿瘤相关巨噬细胞在肝癌组织中的表达及其与VEGF的相关性

目的：研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在肝癌中的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）的相关性。方法采用免疫组织化学双染方法检测2010年1月至2014年1月在我院行肝癌切除术后收集的肝癌组织标本95例,采用免疫组化法分别检测组织中CD163(TAMs标记物)及VEGF的表达,光镜下对TAMs计数及VEGF阳性表达进行分析,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果在肝癌组织分期Ⅰ~Ⅱ期的肝癌组织中TAMs平均浸润(38.39±22.13)个,Ⅲ~Ⅳ期的肝癌组织中TAMs平均浸润(48.95±25.32)个(P<0.05),未出现远处转移的肝癌患者组织中TAMs平均浸润(37.41±22.48)个,而出现远处转移的肝癌患者组织中TAMs平均浸润(47.56±26.45)个(P<0.05)。VEGF主要是在肿瘤细胞中呈中等强度表达;并且其表达强度与TAMs计数呈正相关关系(r=0.782,P<0.05)。结论 TAMs在肝癌组织中的表达与肝癌侵袭转移特性以及分期有密切关系,并与VEGF表达呈正相关关系,提示TAMs与VEGF的表达可用来预测肿瘤的恶性程度,以及作为肝癌的辅助治疗和改善预后的潜在靶点。     

血管内皮生长因子与非小细胞肺癌相关性的研究

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成、临床分期、淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法和酶联免疫吸附试验检测112例NSCLC患者的肺癌组织和血清中VEGF的表达,并分析其临床意义.结果 NSCLC组织中VEGF的表达明显高于正常黏膜组织和癌旁组织(P＜0.01).NSCLC患者血清VEGF水平显著高于正常对照组(P＜0.01).NSCLC组织、血清中VEGF的表达,均随肺癌分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期的顺序明显上升(P＜0.01),淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P＜0.01).结论 VEGF在NSCLC中表达明显增高,并与NSCLC的发生、发展及淋巴结转移有关,血清VEGF是NSCLC增生和转移的重要指标.     

肺癌患者血清血管内皮细胞生长因子水平检测的临床意义

目的　检测肺癌患者的血清血管内皮细胞生长因子(VEGF),探讨血清 VEGF与肺癌患者的关系及临床意义。方法　用酶联免疫吸附法(ELISA)检测80例肺癌患者和30例健康正常人的血清VEGF含量,并进行对照分析。结果　肺癌患者的血清VEGF为160±15.3 pg/ml,明显高于健康正常人的40±20.6 pg/ml(t=33.192,P<0.01)。血清 VEGF浓度与患者的年龄、性别无关(P>0.05)。已手术切除、体内无明确病灶的手术和术后随访患者的血清VEGF浓度显著低于体内有明确病灶的初治和复治患者(P<0.01)。结论　监测肺癌患者的血清VEGF对判断肿瘤负荷、疗效、复发转移和预后都可能有重要参考价值。     

血管内皮生长因子在分化型甲状腺癌中的表达及意义

目的观察血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma,DTC）患者手术前后及复发时血清中的表达及其与血清甲状腺球蛋白（thyroglobulin,Tg）浓度之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法（enzymelinked immunosorbentassay,ELISA）检测30例OTC（术后肺转移7例、局部复发23例）在术前、术后及复发时血清VEGF（serumVEGF,sVEGF）的水平及化学发光法检测血清Tg及TgA的浓度,并与30例正常对照组比较。结果肺转移组及局部复发组在手术前sVEGF比较差异无统计学意义（t=0．373,P〉0．05）,与对照组比较差异有统计学意义（t值分别为8．597、14．140,P均〈0．05）;肺转移组及局部复发组在术后sVEGF明显降低,与术前比较差异有统计学意义（t值分别为5．977、11．500,P均〈0．05）;术后2组sVEGF与对照组比较差异均无统计学意义（t值分别为1．593、1．525,P均〉0．05）;肺转移组及局部复发组在复发前后sVEGF比较差异有统计学意义（t值分别7．387、12．160,P均〈0．05）,复发后肺转移组sVEGF较局部复发组明显增高,差异亦有统计学意义（t=4．167,P〈0．05）。2组血清瞻浓度与sVEGF表达成直线正相关（r=0．786,P〈0．01）。结论sVEGF在DTC术前及术后复发患者血清中高表达,可作为评估DTC生物学行为的一项重要指标。     

结直肠癌患者血清VEGF-C水平变化的临床意义

目的 探讨结直肠癌患者血清血管内皮生长因子-3 (vascular endothelial growth faetor-c,VEGF-C)水平变化的临床意义.方法 采用双抗夹心ELISA法检测45例结直肠癌患者血清VEGF-C水平,并与正常人比较.结果 结直肠癌患者血清VEGF-C水平显著高于正常对照组.P=0.000;有淋巴结转移和肝脏转移的结直肠癌患者血清VEGF-C水平明显高于无淋巴结转移和肝脏转移的患者,分别P=0.005,P=0.002;DukesC期、D期的结直肠癌患者血清VEGF-C水平显著高于DukesA期、B期患者,P=0.001.结论 血清VEGF-C有可能成为一个新的肿瘤标志物而用于结直肠癌病情进展的动态监测及预后判断的指标.     

鼻咽癌放射治疗前测定血管内皮生长因子的意义

目的:于放疗前后检测鼻咽癌患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和β2微球蛋白的水平,探讨其变化及临床意义.方法:采集58例鼻咽癌患者和24名健康体检者血清,应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定VEGF水平,用时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)方法测定β2微球蛋白水平,并对其变化及其与临床分期和患者生存期的关系进行分析.结果:鼻咽癌患者治疗前血清VEGF水平为(174.0±130.0)ng/L,稍高于健康体检者的(134.1±66.6)ng/L,但差异无统计学意义(P>0.05).鼻咽癌TNM分期T4和临床分期Ⅳa患者治疗前血清VEGF水平较高.治疗前血清VEGF水平>267.3 ng/L者,无远处转移生存期短(P<0.05).β2微球蛋白水平高的患者,中位生存期短,但差异无统计学意义.结论:鼻咽癌治疗前VEGF水平明显升高提示预后不良.     

血管内皮生长因子研究进展及其与胰腺癌的相关研究

在胰腺癌的生长和转移中新生血管形成（Angiogenesis）是其从小结节进展成为具有侵袭能力重要的一步。血管内皮生长因子是肿瘤血管新生过程中最重要的驱动因子,血管新生的主要调节者。随着VEGF途径作用机制研究的日益深入,VEGF与胰腺癌的关系也受到越来越多的关注。本文从ⅦGF的结构和功能、调控因素及相关调控机制,VEGF在胰腺癌中表达的临床意义,以及抗VEGF治疗在胰腺癌中的相关研究进展方面,对VEGF在胰腺癌中的研究现状做一介绍。     

进展性前列腺癌患者VEGF含量测定及意义

目的：测定前列腺癌（PCA）患者血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和前列腺特异性抗原（PSA）含量,探讨其临床价值。方法：采用酶标记免疫吸附测定法（enzyme labeled immunosorbent assay,ELISA）测定45例PCA患者血清中VEGF和PSA水平,并以32例良性前列腺增生（BPH）作对照。结果：PCA组血清VEGF为（50.17±8.03）pg/ml,高于BPH组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;Ⅲ＋Ⅳ期前列腺癌血清VEGF为（52.71±8.15）pg/ml,高于Ⅰ＋Ⅱ期,差异有统计学意义（P〈0.05）;淋巴结转移患者血清VEGF为（49.46±7.26）pg/ml,高于未转移者,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：血清VEGF与PCA的临床分期和浸润转移有一定的关系,其检测对PCA术前病情判断、疗效和预后评价有一定的临床意义。     

乳腺癌血清中血管内皮生长因子和碱性纤维母细胞生长因子测定及其意义

目的 探讨乳腺癌患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）和碱性纤维母细胞生长因子（bFGF）的水平及其临床意义。方法 应用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法 检测46例女性乳腺癌患者血清VEGF和bFGF的水平和雌激素受体的表达。结果 乳腺癌组和对照组血清中VEGF含量无差异;而血清中和bFGF含量明显高于对照组（P〈0.05）;乳腺癌血清中VEGF、bFGF含量与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、组织学分级和激素受体无关（P〉0.05）;复发转移组血清中VEGF、VFGF明显水平高于未复发转移组（P〈0.05）。结论 血清中VEGF和bFGF含量的检测可作为评估乳腺癌复发转移和预后的参考指标,且血清中bFGF水平的检测有助于乳腺癌的早期发现和早期诊断。     

联合检测肝癌患者血清中AFP和VEGF含量的临床价值

目的:探讨联合检测肝癌患者血清中AFP和VEGF的含量在肝癌诊断中的价值.方法:收集20例肝癌患者和20例正常体检者的血清标本,采用放射免疫方法及ELISA法分别检测血清中AFP和VEGF的含量.结果:肝癌患者中,血清AFP阴性者与正常对照组无显著性差异(P＞0.05),血清AFP阳性者明显高于正常对照组(P＜0.01).肝癌组血清VEGF明显高于正常对照组(P＜0.01).肝癌患者中,血清AFP阳性率为60%,血清VEGF的阳性率为75%,两者联合应用时的阳性率为85%.结论:联合检测肝癌患者血清中AFP和VEGF的含量,可提高肝癌的检出率,特别是对于AFP阴性的肝癌患者.     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in Hepatocellular Carcinoma and Its Relationship to Tumor Growth and Metastasis

Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)isanewlydiscoveredgrowthfactorwhichmayinducetumorangiogenesisll].Inthepresentstudy,immunohistochemistryandNorthernblotwereusedtoinvestigatetheVEGFexpressioninhepatocellularcarcilloma(HCC)withtheattempttounderstanditsrelationshiptothemetastasls.IMATERIALSANDMETHODS1.1TissueSamplesThespecimensinvestigatedwereobtainedfromZII)atientswithHCCoperatedattheaffiliatedhospitalsofouruniversity.Nineofthepatientsshowedclinicallymetastasiswithportalveintu…     

缺氧诱导因子-1和血管内皮生长因子在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肝癌组织中HIF-1α和VEGF表达的相互关系及临床意义。方法应用免疫组化SABC法检测36例肝癌及15例癌旁组织中HIF-1α、VEGF的表达，分析比较其与肝癌组织病理学的关系。结果肝癌组中的HIF一1α及VEGF的表达较癌旁组增强（P〈0．01），且肝癌组中无包膜及已转移者H1F-1α、VEGF的表达水平相应较有包膜及未发生转移者高（P〈0．05）；同时肝癌组织中HIF-α、VEGF两者的表达呈正相关（r=0．62，P〈0．05）。结论肝癌组织中HIF-1α和VEGF表达可反映肝癌的生物学行为，可作为预测肝癌浸润转移的一项重要指标。