短暂性脑缺血发作后海马区星形胶质细胞形态学研究

采用SD大鼠制成模拟短暂性脑缺血发作(TIAs)动物模型.应用免疫组织化学方法抗神经胶原纤维酸性蛋白(GFAP)标记星形胶质细胞,研究TIAs后海马结构不同区域星形胶质细胞反应的规律.结果显示:海马CA1区星形胶质细胞反应最为显着,再灌注7d时星形胶质细胞密度、面积和染色灰度达最高峰,分别为12.68±1.57、(123.90±19.39)μm²、113.20±18.76;齿状回次之,且随存活时程延长星形胶质细胞反应下降缓慢.再灌注30d时星形胶质细胞反应的各项指标与再灌注7d时无差别(P>0.05).而CA3区星形胶质细胞反应相对较弱,且星形胶质细胞反应随存活时程延长下降较快,再灌7d时星形胶质细胞密度、面积和染色灰度分别为9.24±0.88、(113.60±18.87)μm²、96.61±9.36,与再灌注30d时相比具有显着性差别(P<0.01).结果表明:CA1区星形胶质细胞反应呈持续性,而CA3区星形胶质细胞反应呈一过性.     

慢性脑缺血对小鼠脑内星形胶质细胞的影响

目的：研究慢性脑缺血对小鼠脑内星形胶质细胞的影响。方法：C57小鼠,3月龄时行改良双侧颈总动脉结扎术,假手术组对照。甲苯胺蓝染色观察模型有效性。于术后1、2、4、5、6个月胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫组化观察小鼠脑内星形胶质细胞的病理改变。免疫印迹检测脑内GFAP表达量变化。结果：甲苯胺蓝灌注后,模型0 h组大脑冠状切面苍白色,假手术对照组呈深蓝色。慢性脑缺血后,星形胶质细胞增生,表现为细胞数量增多,胞体肿胀肥大,突起增多,变粗,变长。与假手术对照组比较,从模型2个月组开始,GFAP阳性细胞数量持续性增多,染色加深,累计光密度增强,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。免疫印迹结果显示,与假手术对照组比较,模型2、4、5、6个月组脑内GFAP表达量增高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：慢性脑缺血后星形胶质细胞出现持续性增生,可能在缺血性脑损伤后脑内的不可逆病理改变中有重要意义。     

糖尿病小鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察糖尿病小鼠海马星形胶质细胞及胶质酸性蛋白的变化.方法用四氧嘧啶对ICR小鼠造成糖尿病模型,利用免疫组织化学方法结合图像分析仪观察海马CA1、CA2、CA3和CA4区星形胶质细胞数目密度及胶质酸性蛋白表达的变化情况并与生理盐水组对照.结果 GFAP阳性细胞在海马各区均有分布.除CA2区外,糖尿病组GFAP阳性细胞在CA1、CA3和CA4区的密度较生理盐水组增加（P〈0.01）,GFAP阳性细胞的平均光密度值在各区均高于生理盐水组（P〈0.01）.结论糖尿病时海马星形胶质细胞数量及其胶质酸性蛋白表达增加,可能是星形胶质细胞对糖尿病糖代谢改变的一种保护性反应.     

大鼠脑缺血损伤后星形胶质细胞活化及川芎嗪的影响

1材料和方法健康雄性SD大鼠24只,体质量260～300g（西安交通大学医学院实验动物中心）．将大鼠随机分为川芎嗪治疗组、缺血对照组、假手术组、对照组,每组动物6只．采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌注制作模型．术后2h开始腹腔注射川芎嗪40mg／kg,1次／d．缺血对照组用等量生理盐水注射．动物在最后1次注射后1d处死,40g／L多聚甲醛灌注固定、取脑及后固定．标本石蜡包埋,进行GFAP免疫组化染色,WesternBlot检测GFAP表达．     

红藻氨酸致痫后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化

目的研究红藻氨酸(Kainic acid, KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况。结果KA诱导大鼠癫痫发作后,海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。癫痫发作30 min后GFAP开始增多,1 h达高峰;1 h 后Fos阳性产物开始增多,2 h达高峰。结论海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加,反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节。     

刺伤对星形胶质细胞胶质酸性蛋白表达的影响

目的观察刺伤对星形胶质细胞及其胶质酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的影响。方法用腹腔注射速眠新和氯胺酮联合麻醉,微型钻钻孔造模,利用免疫组织化学方法和图像分析仪,观察刺伤后的星形胶质细胞的密度及其胶质酸性蛋白表达的变化,并与未刺伤组作对照分析。结果 GFAP阳性细胞在二组星形胶质细胞中均有分布;刺伤组星形胶质细胞的密度比未刺伤组增加（P〈0.05）,GFAP阳性细胞的平均光密度值（OD值）,刺伤组高于未刺伤组（P〈0.01）。结论刺伤星形胶质细胞后可以引起其数量及其胶质酸性蛋白的表达增加,可能是星形胶质细胞对刺伤的一种保护性反应。     

马桑内酯点燃癫痫动物模型海马区星形胶质细胞的形态学观察

本实验采用马桑内酯肌注造成化学点燃效应癫痫动物模型，并于点燃后连续用药４０次，模拟人类长期反复全身强直－阵挛发作，然后进行海马区脑组织的光镜、电镜和免疫组化观察分析。结果表明，长期反复抽搐动物的海马区星形胶质细胞发生明显的变性坏死。提示马桑内酯对星形胶质细胞有损伤性作用，这种损伤可能在诱导痫性发作中起一定作用。     

补阳还五汤及其有效部位组方对沙土鼠脑缺血后反应性星形胶质细胞活化的影响

目的：比较研究补阳还五汤及其有效部位组方对脑缺血后反应性星形胶质细胞活化的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型,分别腹腔注射补阳还五汤及其有效部位组方,于不同时间取脑组织,以 免疫组化方法测定胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：缺血15min后各组脑组织无GFAP表达。缺血15min再灌注24h后,脑组织GFAP表达达高峰,主要在海马区表达,补阳还五汤及其有效部位组方可使GFAP表达减弱,两者作用相近。缺血15min再灌注48h后,GFAP表达有所减弱,而补阳还五汤及其有效部位方组GFAP表达则较模型组有所增强,两者作用相近。结论：星形胶质细胞活化主要在脑缺血后再灌注期,在再灌注早期,补阳还五汤及其有效部位组方通过对抗缺血性脑损伤而改善星形胶质细胞功能的紊乱;在再灌注后期,则通过促进星形细胞的活化,利于损伤的修复。     

星形胶质细胞缝隙连接在脑缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)在临床疾病中属于常见的一类疾病,在脑血管疾病中占比约有70％以上.胶质细胞在神经系统中的数量是最多的,远超过神经元.星形胶质细胞的线粒体功能发生障碍,导致神经元在存活和发挥正常的生理功能方面出现问题.缝隙连接蛋白(connexi...     

大鼠局灶性脑缺血后脑内星形神经胶质细胞反应

要用免疫组织化学技术显示脑内胶质纤维酸性蛋白的变化。以观察大鼠脑皮层局灶性脑缺血后星形神经胶质细胞的反应。结果表明,在假手术大鼠大脑皮层内,ＧＦＡＰ表达阳性细胞主要分布于大脑皮层Ⅰ－Ⅱ层;ＦＣＩ后２４ｈ。     

人大脑及脑干挫伤后星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白的变化

目的探讨人大脑及脑干挫伤后星形胶质细胞(Ast)及其特殊标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)变化与损伤时间的关系,以及大脑与脑干挫伤后病变的差异。方法对87例闭合性颅脑损伤死亡者脑挫伤组织进行病理学及GFAP免疫组织化学检查。结果脑挫伤后Ast灶性肥大及增生最早见于伤后12h,7～14d达高峰,30d胶质瘢痕基本形成。在Ast4项图像分析指标中,平均细胞数在伤后首先下降然后逐渐增加,细胞平均吸光度值、积分吸光度值及细胞平均面积在脑挫伤后14d内随时间延长而逐渐增加,大脑与脑干之间Ast的上述4项指标在脑挫伤后均呈正相关关系,相关性由高至低为:平均细胞数>平均吸光度值>积分吸光度值>细胞平均面积。结论星形胶质细胞GFAP免疫组织化学检查结合图像分析技术可用于脑挫伤后经过时间的推断,大脑与脑干挫伤后星形胶质细胞GFAP变化趋势基本一致。     

两种实验性大鼠脑出血模型的对比研究

目的 研究自体血和胶原酶两种脑出血造模方法对大鼠神经预后血脑屏障通透性及胶质瘢痕增生情况的影响.方法 144只成年健康雄性SD大鼠,分为自体血组和胶原酶组两组,并按预设时间点(3、7、14、21 d,n=6)观察大鼠Bederson评分、伊文思蓝渗透性、脑含水量、HE染色和免疫组化荧光染色.结果 Bederson评分、伊文思蓝渗透性和脑含水量结果显示,两组的神经预后及血脑屏障通透性均随时间恢复正常,而胶原酶组与自体血组相比,Bederson评分、伊文思蓝渗透量和脑含水量在第3、7、14天均明显升高(P＜0.05);HE染色结果说明,两组均随时间增加存在血肿吸收,炎症渗出,胶质瘢痕形成情况,而在第14天和第21天,自体血组较胶原酶组相比,血肿基本吸收完毕,炎症渗出及胶质瘢痕形成较少;免疫组化染色结果表示,两组血肿周围的胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达随时间增加,但第7天和第14天胶原酶模型组GFAP表达水平更高.结论 与自体血模型相比,胶原酶模型的神经功能损伤恢复过程更慢,同时血脑屏障破坏更严重,胶质瘢痕形成更明显,大鼠胶原酶注射模型更适合长时程的临床脑出血研究.     

大鼠脑皮质星形胶质细胞的纯化培养

目的获取纯度较高的大鼠脑皮质星形胶质细胞，用于进一步实验。方法取新生大鼠大脑，用酶消化结合机械吹打方法分离皮质细胞制成细胞悬液，差速贴壁法去除成纤维细胞，培养融合时，恒温摇床振荡法去除少突胶质细胞、小胶质细胞等，纯化后，观察星形胶质细胞生长变化规律，并通过GFAP免疫细胞化学方法鉴定星形胶质细胞。结果大鼠脑皮质细胞接种后24h全部贴壁，部分细胞已伸出突起；3～5d时细胞增殖最明显，细胞数目增加，体积增大，突起相互交织成网状；原代培养7～10d时细胞基本融合并开始分层生长。振荡纯化处理后，GFAP免疫细胞化学染色阳性细胞可达98％。结论用差速贴壁和恒温振荡方法可获得高纯度皮质源性星形胶席细胸．     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

目的 研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的最佳缺氧时间点以对其进行深入研究。方法 体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。通以5%CO₂+95%N₂混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死。与对照组相比,缺氧10h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态。结论 缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的最佳时间点。     

短暂性脑缺血患者血清C反应蛋白水平与脑血栓形成的关系

目的：观察短暂性脑缺血发作（TIA）患者血清C反应蛋白 (CRP) 的水平,探讨CRP与其他危险因素的关系。方法：102例TIA患者根据病程分为两组,即在2周内进展为脑梗塞者为进展组(n= 40),未继续进展者为未进展组(n=62)。所有患者在入院24 h内首次测定血清CRP水平,同时测血压（BP）、血糖（BS）,纤维蛋白原（FIB）、血脂参数如总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-L）、低密度脂蛋白（LDL-L）。67例健康体检者作为对照组。CRP分别与上述8个指标进行相关性分析。结果：①TIA组的CRP血清水平高于正常对照组（P<0.05）,且进展组高于未进展组（P<0.05）。②相关性分析显示,CRP与BP、BS、TG、FIB均呈显著性正相关关系(P<0.01,γ值分别是0.517、0.439、0.533、0.406)。结论：CRP是评价TIA患者短期内是否进展为完全性卒中的一个非特异性的、新的血清学指标;CRP血清水平越高,TIA发展为脑梗塞的可能性越大。     

两种体外培养星形胶质细胞的比较

目的 对2种常用培养方法得到的星形胶质细胞进行生物学功能上的比较分析。方法 用啮齿类新生儿大脑星形胶质细胞分离培养方法培养原代星形胶质细胞,用胎牛血清分化神经干细胞制备分化星形胶质细胞。显微镜下观察2种星形胶质细胞的细胞形态并用免疫荧光染色检测星形胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达量,10种细胞因子处理2种细胞后检测GFAP等的变化,用表达谱芯片检测GFAP、谷氨酸合成酶(GS)、转运蛋白(xCT)、神经调节蛋白-1(NRG)、谷氨酸受体蛋白(NMDA)、脂蛋白脂肪酶(LPL)等基因的表达并进行比较。结果 2种星形胶质细胞形态和GFAP表达量不同,表达谱芯片检测结果显示原代星形胶质细胞GFAP、GS、xCT、NRG、NMDA、LPL基因的表达均显著高于分化星形胶质细胞。10种细胞因子的处理均不能使原代星形胶质细胞GFAP表达升高,但转化生长因子-β(TGF-β)可以使分化的星形胶质细胞GFAP表达升高。结论 与分化的星形胶质细胞相比,原代培养的星形胶质细胞更类似于反应态星形胶质细胞,而TGF-β可促进分化细胞向反应态细胞过渡。     

小鼠脑损伤后GFAP表达与损伤时间的关系

目的探讨小鼠脑损伤后胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在损伤灶周围的大脑皮质及白质的表达和损伤时间的关系。方法将健康KM小鼠48只，按施加的处理不同随机分为4组，分别为正常对照组、手术对照组、死后对照组、损伤组。运用免疫组化的技术方法进行研究以及运用图像分析技术测量GFAP阳性反应的灰度。结果（1）手术对照组及正常对照组、死亡对照组小鼠脑组织内均有低水平GFAP表达，它们之间的差异无统计学意义。（2）机械性脑损伤灶在一定时间后GFAP表达增加，其分布特征与对照组相似。主要分布在损伤灶周围的皮质、白质。（3）GFAP在损伤灶周围皮质、白质的表达曲线非常相似，但在白质的反应更加明显。（4）机械性脑损伤后24h表达显著增加，168h后达高峰，其后数天维持在较高水平。结论脑外伤诱导GFAP在损伤灶表达增加，证明它们参与脑损伤修复。在特定损伤部位它们仅主要在星形胶质细胞中表达，从一个侧面反映星形胶质细胞的分裂增殖活动。同时它们之间也可能与脑损伤后神经元活动的存活及维持其功能活动有关。其表达改变的时序可望作为一个客观指标用于法医学脑损伤所经过时间的推断。     

异氟烷对新生大鼠皮质星形胶质细胞形态和幼鼠行为学的影响

目的：探讨长时间吸入低浓度异氟烷对新生大鼠皮质星形胶质细胞的形态及幼鼠空间学习和记忆能力的影响。方法43只新生Wisrar大鼠随机分成两组,I组吸入1.1％的异氟烷6 h,C组吸入压缩空气和氧气的混合气体6 h,两组均维持吸入氧浓度为30％。在吸入麻醉后12、24、72、168 h两组分别取5只幼鼠,灌注取脑后用免疫荧光法标定星形胶质细胞,用Image J软件分析星形胶质细胞形态学的改变。在吸入异氟烷后6周,记录剩余幼鼠的存活率并将剩下的动物进行Morris水迷宫实验测试其空间学习和记忆能力。结果与C组相比,I组12 h和24 h激活星形胶质细胞的数目减少（P＜0.05）,12 h时抑制状态的星形胶质细胞的数目明显上升（P＜0.05）,其余时间点两组之间星形胶质细胞数目差异无统计学意义。两组幼鼠定位航行实验和空间探索实验结果差异无统计学意义。结论长时间吸入低浓度异氟烷会导致星形胶质细胞形态的暂时性改变,但是对于幼鼠成年后的认知功能无明显影响。     

脊髓半切损伤后髓鞘碱性蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的 研究大鼠脊髓半切损伤后后肢运动功能恢复情况及损伤远端星形胶质细胞和近端少突胶质细胞反应性增生关系，探讨损伤后星形胶质细胞和少突胶质细胞反应性增生在脊髓损伤修复中的作用。方法 将35只SD大鼠随机分成7组：对照组5只；实验组6组，每组5只，分别是伤后1天组，3天组，7天组，14天组，21天组，28天组。实验组动物均行T9左侧半切，分别于伤后1，3，7，14，21，28d行后肢运动功能联合评分（CBS）及Basso-Beattle．Bresnahan（BBB）评分。每次评分后处死5只大鼠，进行HE染色及GFAP、MBP免疫组织化学检测。结果 伤后后肢均有不同程度的恢复，1～2周时恢复幅度最大，2～3周时后肢运动功能继续恢复，3周时BBB评分最高达12分，3～4周运动功能无显著性恢复，损伤后1d损伤远端3-6mm处GFAP阳性星形胶质细胞开始增生肥大，3～4d灰质中星形胶质细胞明显增多，2周时达到高峰，损伤近端3～6mm处少突胶质细胞的增生反应过程与星形胶质细胞相似。结论 脊髓损伤后近端少突胶质细胞和远端星形胶质细胞反应性增生可能有助于损伤的修复和再生。