谷氨酸影响培养的海马神经元内钙变化机制

目的:研究谷氨酸对培养的大鼠海马神经元内钙信号的影响及作用机制。方法:用显微荧光测量技术监测神经元内钙信号的动态变化和谷氨酸对其的影响;阻断NMDA、AMPA受体后,观察谷氨酸对神经元内钙信号影响的变化。结果:谷氨酸使神经元内游离钙浓度明显升高,NMDA和AMPA受体拮抗剂、胞外钙离子浓度的降低均可不同程度地降低胞内游离钙离子升高幅度。结论:谷氨酸通过多种途径影响大鼠海马神经元内钙信号,激活NMDA和AMPA受体是其中的重要机制之一。     

牛磺酸减轻兴奋性氨基酸对培养新生大鼠小脑皮层神经元的损害

取新生大鼠小脑皮层进体外神经培养，用兴奋性氨基酸建立离体的神经元损害模型，观察了不同浓度牛磺酸兴奋性氨基酸神经毒性的影响。结果表明：５００μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸或使君子酸均能造成培养神经元大量死亡，培养液中乳酸脱氨酸含量同步明显增高，在培养液中加入牛磺酸能明显降低神经细胞死亡率，其中以２．０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度效果最为明显。提示牛磺酸可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性。     

李氏5号水提液在兴奋性氨基酸损伤神经元中的保护作用

目的 探讨李氏5号水提液在兴奋性氨基酸性神经元损伤中的保护作用。方法 MTT法观察不同干扰因素作用下细胞成活率和用Hoechest333258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡的比例;借助共聚焦显微镜钙成像和钙荧光指示剂Fluo-3/AM测细胞内钙浓度。结果 300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min后换正常培养液培养18h,细胞死亡率比正常对照组高(54.64±5.76)%;用李氏5号水提液(终浓度为0.5mg/ml)预处理3h后,加300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min,换正常培养液同时加李氏5号水提液继续培养18h,细胞死亡率明显降低。10μmol/LNMDA可明显增加海马神经元胞质游离钙浓度。李氏5号水提液本身可轻度增加胞质游离钙浓度(与正常组比较差异不显著),但明显抑制NMDA导致的胞质游离钙浓度的升高;NMDA阻断剂MK-801明显拮抗NMDA导致胞质游离钙升高的效应,但李氏5号水提液预处理后,MK-801拮抗NMDA的效应显著降低。结论 李氏5号水提液可能通过拮抗兴奋性氨基酸所致的细胞内钙超载而明显保护神经元。     

慢性VNS对点燃大鼠大脑皮质及海马神经元兴奋性的影响

目的：探讨迷神经刺激（VNS）抗癫痫作用的细胞机制。方法：用戊四氮（PTZ）行大鼠腹空注射点燃制作癫痫模型,行迷走神经刺激抗癫痫,应用荧光分光光度法测定不同浓度谷氨酸（Glu）对正常、PTZ点燃及VNS治疗动物大脑皮质及海马神经元胞内游离钙升高的影响,同时观察VNS对动物癫痫行为的影响。结果：VNS组动物胞内游离钙浓度较PTZ点燃组明显降低,并对外源性Glu的升谪胞内游离钙有明显抑制作用,行为观察显示VNS能明显抑制癫痫发作的严重程度,延长癫痫的发作的潜伏期。结论：VNS能明显抑制大鼠PTZ的点燃效应,降低Glu对神经元胞内游离钙的升高作用。VNS可能通过调节神经元兴奋性／抑制性受体的活性来发挥抗癫痫作用。     

双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪(Dipfluzine,Dip)对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象,用谷氨酸建立海马神经元损伤模型,通过测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(LJ)H)泄漏率和胞内游离钙浓度(Ca2+)变化,观察双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用.结果 双苯氟嗪可显著提高谷氨酸损伤海马神经元存活率,降低LDH泄漏率,对谷氨酸诱导的海马神经元细胞内ca2+升高有明显的抑制作用.结论 双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制谷氨酸诱导的细胞内钙超载有关.     

牛磺酸降低高糖诱导的视网膜谷氨酸兴奋性及其机制

目的观察牛磺酸对高糖诱导的视网膜谷氨酸兴奋性的影响并探讨其作用的机制。方法体外培养并采用免疫细胞荧光双标鉴定视网膜Muller细胞。实验分10组,分别是：5mmol／L葡萄糖培养组（正常对照组）,5mmol／L葡萄糖＋0．1mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋1mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋10mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖培养组（高葡萄糖组）,25mmol／L葡萄糖＋0．1mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖＋1mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖＋10mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋20mmol／L甘露醇组（甘露醇对照组）。RT—PCR检测谷氨酸转运蛋白（GLAST）和谷氨酰胺合成酶（Gs）表达,p液闪技术检测谷氨酸摄取活性,谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测GS活性。结果25mmol／L高葡萄糖培养后Muller细胞中GLAST、GSmRNA表达量较正常对照组明显降低（P〈0．05）,L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性由正常对照组的（726±12）cpro／（rain·mgprotein）降为（352±10）cpm／（min·mgprotein）,GS活性由（41．1±2．3）μmol／L γ-谷氨酰羟肟酸（GHA）／（h·nagprotein）降为（20．3±2．1）μmol／LGHA／（h·mgprotein）（P〈0．05）。加入1、10mmol／L牛磺酸干预可明显上调高葡萄糖组Miller细胞中GLAST、GSmRNA表达量,增加L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性（P〈O．05）。加入0．1mmoI／L牛磺酸干预可上调高葡萄糖组Mallet细胞中GLAST、GSmRNA表达量,增加L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性,与高葡萄糖组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。甘露醇对照组Muller细胞中GLAST、GSmRNA表达量、L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。结论牛磺酸能降低高糖引起的视网膜谷氨酸兴奋性,其作用机制可能通过上调Muller细胞谷氨酸转运和降解能力,从而维持细胞外空间正常的谷氨酸浓度。     

白黎芦醇对离体培养的大鼠海马CAl区神经元谷氨酸神经毒性的保护作用

目的研究白黎芦醇对谷氨酸神经毒性损伤的离体大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其机制。方法将1．5mmol·L-1的谷氨酸加入到原代培养的新生大鼠海马CA1区神经元培养液中,制造神经元毒性损伤模型;将20μmol·L-1的白黎芦醇分别加入到原代培养正常的和兴奋性毒性损伤的海马CA1区神经元培养液中,观察细胞形态和存活率变化（噻唑蓝法和Hoechst33324荧光染色法）;Westernblot检测细胞色素C来反映谷氨酸对神经元的损伤作用,同时观察白黎芦醇对抗损伤的机制。结果谷氨酸对海马CA1区神经元产生强烈的兴奋性毒性,导致神经元大量凋亡和死亡;20μmol．L-1的白黎芦醇对正常神经元的形态和存活率均无明显影响,但能对抗谷氨酸损伤和减轻谷氨酸的兴奋性神经毒性,同时抑制谷氨酸诱发的细胞色素C表达上调。结论白黎芦醇可通过下调海马CA1区神经元细胞色素C的表达水平,降低谷氨酸的兴奋性毒性,对神经元起到保护作用。     

褪黑素在叠氮钠所致的海马锥体细胞钙超载中的神经保护作用

目的 观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素（Melwatonin, MT)的影响。方法 海马锥体细胞的急性分离，新型游离钙荧光探针Fluo-4AM负载海马锥体细胞，激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及叠氮钠，褪黑和荷包牡丹碱的作用。结果 在孵育液中加入叠氮钠（0.8mg/ml）能使急性分离的海马锥体细胞胞内游离钙在200s内急剧升高并维持在高水平，处于钙超载状态。褪黑素能使NaN3所致的海马锥体细胞内处于超载状态的游离钙显著下降，并有量效关系。结论 叠氮钠导致海马神经细胞损伤的早期原因可能是钙超载，MT促进钙离子向细胞外的转运而抑制叠氮钠所致的钙超载。     

针刺对急性癫痫大鼠脑电功率及海马氨基酸类递质的影响

【目的】探讨针刺对急性实验性癫痫模型大鼠脑电功率和海马内氨基酸类神经递质含量的影响。【方法】SD大鼠40只随机分为正常组、模型组、针刺组和西药组;针刺组针刺大鼠大椎、丰隆、肝俞透胆俞,西药组以丙戊酸钠灌胃给药,均连续治疗3 d;除正常组外,其他3组均采用腹腔注射青霉素钠法复制急性癫痫大鼠模型,观察造模后70~85 min内顶中线Pz区脑电地形图各频段功率及大脑海马区中兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(ASP),抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、牛磺酸(Tau)含量的变化。【结果】模型组δ、θ、α1、α2、β1、β2各频段的功率均高于正常组(P<0.01),而针刺和丙戊酸钠均可显著性降低δ、θ、α1、α2、β1频段的功率(P<0.05或P<0.01);模型组海马区内兴奋性氨基酸Glu、ASP,抑制性氨基酸GABA、Ala、Gly、Tau的含量均高于正常组(P<0.01),而针刺和西药可降低模型大鼠异常升高的兴奋性氨基酸Glu、ASP及抑制性氨基酸Tau的含量(均P<0.05或P<0.01),针刺可升高抑制性氨基酸Ala的含量(P<0.01),但针刺对抑制性氨基酸GABA、Gly的含量及bGABA/bGlu比值无显著性影响。【结论】针刺可通过抑制痫性放电,调节海马内抑制性氨基酸与兴奋性氨基酸的水平而发挥抗癫痫作用。     

牛磺酸对蟾蜍坐骨神经干兴奋性的调节作用

目的: 观察牛磺酸对蟾蜍坐骨神经干兴奋性的影响。方法: 分离蟾蜍的坐骨神经干(50根),分5组,用含不同浓度CaCl₂和牛磺酸的任氏液浸泡30min备用。用Medlab生物信号采集处理系统测定神经干的阈值、不应期和传导速度。结果: 与正常任氏液(1.09mmol/L)比较,高钙任氏液(2.18mmol/L)神经干的阈值升高,不应期缩短(P<0.01);低钙任氏液(0.27mmol/L)的神经干的阈值降低,不应期缩短,传导速度加快(P<0.05~P<0.01);而低钙加牛磺酸组及高钙加牛磺酸(40mmol/L)组上述变化均不明显(P>0.05)。结论: 牛磺酸可调节神经干的兴奋性。     

Lead Can Inhibit NMDA^—,K^＋—,QA／KA—Induced Increases in Intracellular Free Ca^2＋ in Cultured at Hippocampal Neurons

Objective To examine the effects of Pb2+ on N-methyl-D-aspartate (NMDA)-, K+- and quisqualate(QA)/kainite(KA)-induced increases in intracellular free calcium concentration ([Ca2+]i) in cultured fetal rat hippocampal neurons in order to explain the cognitive and learning deficits produced by this heavy metal. Methods Laser scanning confocal microscopy was used. Results The results clearly demonstrated that adding Pb2+ before or after NMDA/glycine stimulation selectively inhibited the stimulated increases in [Ca2+]i in a concentration-dependent manner. In contrast, Pb2+ treatment did not markedly affect increases in [Ca2+]i induced by an admixture of QA and KA. The minimal inhibitory effect of Pb2+ occurred at 1 μ mol/L, and more than seventy percent abolition of the NMDA-stimulated increase in [Ca2+]iwas observed at 100 μmol/L Pb2+. Evaluation of pb2+-induced increase in [Ca2+]i response to elevating extracellular concentrations of NMDA, glycine or calcium revealed that Pb2+ was a noncompetitive antagonist of both NMDA and glycine, and a competitive antagonist of Ca2+ at NMDA receptor channels. In addition, Pb2+ inhibited depolarization-evoked increases in [Ca2+]i mediated by K+ stimulation (30 μmol/L), indicating that Pb2+ also depressed the voltage-dependent calcium channels. Also, the results showed that Pb2+ appeared to be able to elevate the resting levels of [Ca2+]i in cultured neurons, implying a reason for pb2+-enhanced spontaneous release of several neurotransmitters reported in several previous studies. Conclusion Lead can inhibit NMDA-, K+-, QA/KA-inducod increases in intracellular [Ca2+]i in cultured hippocampal neurons.     

Effect of melatonin on the spatial and temporal changes of ［Ca2+］i in single living cells of cortical neurons by laser scanning confocal microscopy

Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ (ＭＴ ,Ｎ ａｃｅｔｙｌ 5 ｍｅｔｈｏｘｙｌｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ)ｉｓａｈｏｒｍｏｎｅｓｅｃｒｅｔｅｄｍａｉｎｌｙｂｙｔｈｅｐｉｎｅａｌｇｌａｎｄ ＳｏｍｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｅｘｏｇｅｎｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＭＴｃｏｕｌｄｐｒｏｌｏｎｇｌｉｆｅ ,ｐｏｓｔｐｏｎｅａｇｉｎｇ ,ａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ 1　ＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｆｒｅｅＣａ2 ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ (…     

大鼠肠肌间神经元胃动素受体的表达及胃动素引起神经元内钙信号的机制

目的观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制。方法采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度的变化。结果大鼠肠肌间神经元呈MTLR免疫反应阳性表达;在Hank's液中,10-6mol/L胃动素可引起神经元内Ca2+浓度的显著升高,其峰高(峰值减去静息值)为30.6±3.7,荧光强度相对变化百分比为(100.8±18.4)%。在D-Hank's液(去除细胞外Ca2+)中或用L型钙离子通道阻断剂维拉帕米预处理细胞后,胃动素可轻度升高胞内Ca2+浓度。与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用G蛋白拮抗剂NEM和PLC抑制剂Compound48/80预处理细胞后再加入胃动素,胞内Ca2+浓度升高的程度明显降低,与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当用PKC抑制剂D-鞘氨醇预处理细胞后,再加入胃动素,其峰高和荧光强度相对变化百分比同单独应用胃动素组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠肠肌间神经元能自身表达MTLR。胃动素可明显升高神经元内Ca2+浓度,胞内Ca2+浓度的升高既源于外钙的内流又源于内钙的释放。外钙的内流主要通过L型Ca2+通道,G蛋白偶联型MTLR-PLC-IP3途径参与细胞内钙的释放。     

小檗碱对急性分离成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究小檗碱对急性分离大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ] i)的影响。方法　采用酶解法分离单个大鼠心肌细胞 ,用钙敏感的荧光指示剂Fluo 3/AM染色 ,以荧光强度 (FI)来代表 [Ca2 + ] i,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测FI的变化。结果　在静息状态下 ,小檗碱 (3～ 1 0 0 μmol/L)对 [Ca2 + ] i 无影响。 3～ 1 0 0 μmol/L小檗碱对KCl 60mmol/L介导的钙内流也无影响。但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)对caffeine 1 0mmol/L引起的钙动员有明显促进作用 (P <0 .0 1 )。结论　小檗碱对于KCl通过电压依赖性钙通道 (VDC)介导的 [Ca2 + ] i 升高无影响 ;但小檗碱 (30和 1 0 0 μmol/L)可能通过影响RyRs而促进肌浆网 (SR)内钙外流 ,也可能对SR钙摄取 ,钙的跨膜转运及Na+ Ca2 + 交换有抑制作用     

Both Hypoxic Endothelial Cell Conditioned Medium and Hypoxia Elevate Intracellular Free Calcium in Pulmonary Artery Smooth Mu

ＢｏｔｈＨｙｐｏｘｉｃＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌＣｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄＭｅｄｉｕｍａｎｄＨｙｐｏｘｉａＥｌｅｖａｔｅＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＦｒｅｅＣａｌｃｉｕｍｉｎＰｕｌｍｏｎａｒｙＡｒｔｅｒｙＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＣｅｌｌｓＨＵＱｉｎｇ－...     

Linoleic acid activates GPR40/FFA1 and phospholipase C to increase [Ca2+]i release and insulin secretion in islet beta-cells

To elucidate GPR40/FFA 1 and its downstream signaling pathways in regulating insulin secretion.Methods GPR40/FFA 1 expression was detected by immunofluorescence imaging.We employed linoleic acid (LA),...     

大电导钾通道对脊髓神经元细胞内游离钙和兴奋性的影响

目的 探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙 (intracellular free calcium, [Ca2 ]i) 和兴奋性的调节作用.方法 体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2 ]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2 ]i的影响.结果 生理状态下,Iberiotoxin灌流(100 nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2 ]i无显著影响.持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2 ]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L KCl)引起神经元[Ca2 ]i升高, 而Iberiotoxin灌流(100 nmol/L) 则使[Ca2 ]i进一步显著升高.结论 生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2 ]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2 ]i和兴奋性具有显著的调节作用.     

Influence of calcium influx on intracellular pH of neocortical and hippocampal neurons in primary culture

研究钙内流对原代培养的皮质和海马神经元内ｐＨ（ｐＨｉ）的影响。为了达到此目的，暴露单个神经元于谷氨酸（Ｇｌｕ，１００μｍｏｌ／Ｌ）或氯化钾（ＫＣｌ，５０ｍｍｏｌ／Ｌ）。用微荧光法测定细胞内游离钙（〔Ｃａ２＋〕ｉ）和ｐＨｉ。结果表明，Ｇｌｕ暴露或Ｋ＋－诱导的去极化可导致海马神经元明显酸化（△ｐＨ～０．４）。在无钙溶液中，这一ｐＨ降低被显著减少（Ｇｌｕ暴露）或转化成增高（Ｋ＋－诱导的去极化）。相反，皮质神经元对Ｇｌｕ的反应很弱，只有轻微的酸化。实际上，去极化诱导的ｐＨｉ在两种细胞中呈反方向变化。由上述结果得出结论：海马与皮质神经元的不同是海马神经元在钙通道激活后允许更大量的钙离子从细胞外液流入。     

Experimental Study of Effect of Corticosterone on Primary Cultured Hippocampal Neurons and Their Ca^2＋／CaMK Ⅱ Expression

Summary: To explore the effect of different concentrations of corticosterone (CORT) on primary cultured hippocampal neurons and their Ca^2 /CaMK Ⅱ expression and possible mechanism, the changes of hippocampal neurons were observed in terms of morphology, activity of cells, cell death.concentrations of cytosolic free calcium, and the expression of CaMK Ⅱ by using MTT assay, flow cytometry, fluorescent labeling of Fura-2/AM and Western hlotting after 10^-7. 10^-8 and 10^-5 mol/L of CORT was added to culture medium. The evident effect of 10^-6 and 10^-5 mol/L of CORT on the morphology of hippocampal neuron was found. Compared with control neurons, the activity of the cells was markedly decreased and [Ca^2 ], increased in the neurons treated with 10^-6 and 10^-7mol/L of CORT. but no change was observed in the neuron treated with 10^-7 mol/L of CORT.The death was either by way of apoptosisor necrosis in the cells treated with 10^-4 and 10^-5mol/L of CORT respectively. The correlation analysis showed that a reverse correlation existed between [Ca^2 ];and the expression of CaMKⅡ. Either apoptosis or necrosis occurs in the hippocampal neurons treated with CORT. The increased hippocampal [Ca^2 ], is both the result of CORT impairing the hippocampal neurons and the cause of the apoptosis of hippocampal neurons and the decreased CaMKⅡ expression.     

重组人内抑素对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的影响

目的通过探讨重组人内抑素（rhEndostatin）促进兔耳增生性瘢痕成纤维细胞（HSFs）凋亡的部分机制,为临床上药物治疗增生性瘢痕（HS）提供实验依据。方法取新西兰大耳兔6只制备瘢痕模型。以HSFs为研究对象,应用激光共聚焦显微镜（CLSM）结合Fluo-4/AM（Ca2+荧光指示剂）检测在Hanks与D-Hanks液中（有、无细胞外钙）rhEndostatin（100 μg/mL）对HSFs胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）的影响。结果当细胞外液为Hanks液时,rhEndostatin（100 μg/mL）可使HSF胞质内[Ca2+]i水平持续增加,当持续10 s给予rhEndostatin处理后,HSFs胞内[Ca2+]i可迅速增加达峰顶再缓慢下降,在停止药物处理后,HSFs胞内[Ca2+]i继续下降,停止处理约50 s后,胞内[Ca2+]i尚未至基线水平;而当细胞处于D-Hanks液中时,rhEndostatin对HSFs胞质内[Ca2+]i无明显影响。结论rhEndostatin可通过干扰HSFs胞内钙离子稳态,推动胞外Ca2+内流导致胞内钙超载来诱导HSFs凋亡。