孕妇血浆游离DNA高通量测序用于胎儿性染色体非整倍体检测的初步探讨

摘要：目的：初步探讨孕妇血浆游离DNA高通量测序用于产前胎儿性染色体非整倍体检测的效果及临床可行性。 方法：2011年至2012年收集早、中孕期单胎孕妇5 540例,在知情同意的原则下采集外周血血浆进行游离DNA的高通量测序检测,通过生物信息学分析,获得测序结果;对测序检出的性染色体非整倍体患者行羊水穿刺,进行染色体G显带分析。 结果：5 540例样本中测序方法共检出10例性染色体非整倍体,其中6例与G带核型分析结果一致,包括3例45,X,1例47,XXY,2例47,XYY,其余4例G带核型正常。 结论：孕母血浆游离DNA高通量测序可对性染色体非整倍体胎儿进行无创性产前检测,但存在假阳性,还需进一步完善实验方案以提高检测效果。     

无创产前基因检测在性染色体非整倍体产前筛查中的应用

目的探讨无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)在性染色体非整倍体(sex chromosomal aneuploidy,SCA)产前检查中的临床意义。方法选择2016年1月1日至2018年1月31日在江西省妇幼保健院产前诊断中心行NIPT的孕妇20334例,对筛查SCA阳性孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉穿刺获取胎儿细胞行染色体核型分析及荧光原位杂交,并对检测结果进行分析。结果共检测20334例NIPT样本,提示胎儿SCA76例,筛查阳性率为0.37%,经遗传咨询知情同意下,52例筛查胎儿SCA阳性孕妇行介入性产前诊断,确诊胎儿SCA病例25例,总阳性预测值(positive predictive value,PPV)为48.1%,其中23例已引产,2例胎儿出生时正常;另27例排除胎儿SCA的孕妇均继续妊娠。24例筛查胎儿SCA孕妇拒绝介入性产前诊断,其中15例选择继续妊娠(随访出生时表型正常),2例直接引产,7例孕妇失访。结论 NIPT可用于性染色体非整倍体产前筛查,但阳性预测值不高,需要进一步完善检测技术和分析方法,以提高检测准确率。     

母血中胎儿遗传物质与无创性产前诊断

经过10余年的发展,利用母体外周血中胎儿遗传物质进行无创性产前诊断的技术正逐步面向临床。本文综述了目前较为广泛被研究的母血中的胎儿遗传物质,着重阐述了使用无创的方法获得母血中胎儿遗传物质的方法及其优缺点。     

无创性产前诊断染色体非整倍体的研究进展

染色体非整倍体是胎儿最常见的染色体畸形,也是胎儿出生缺陷疾病最常见的病因之一,其中以唐氏综合征最为常见。唐氏综合征又名21-三体综合征(21-trisomy syndrome)或先天愚型,在新生儿中发病率约为1/800。所以对先天性遗传病的     

孕妇血浆中胎儿游离 DNA 在唐氏综合征无创性产前诊断中的应用研究

目的：探讨应用孕妇血浆中游离胎儿高通量基因测序技术在无创性产前诊断中的可行性。方法对3368例孕妇进行中孕期血清学筛查的同时,筛查出的高风险病例平行进行 cffDNA 高通量测序;对需进行产前诊断者,同时进行胎儿染色体核型以及 MLPA 分析。结果中孕期三联血清学筛查3368例,血清学筛查21三体高危共347例,经高通量基因测序技术检测后结果为唐氏高危20例;经 MLPA 分析,结果得出347例标本中21-三体病例为20例;最后通过羊水细胞核型分析证实20例与无创基因检测结果一致。应用孕妇血浆中游离胎儿 DNA高通量基因测序技术诊断胎儿的21号染色体非整倍体异常的敏感度为100．00％（20/20）,特异性为100．00％（347/347）,假阳性率为0．00％（0/347）。结论无创性产前诊断技术具有无创、准确、快速的诊断优势,该技术具有良好的临床应用前景。     

利用母体血浆游离胎儿DNA进行胎儿SRY基因定量检测

目的探讨胎儿游离DNA在无创性产前诊断中的应用价值。方法行产前诊断的孕妇87例,分为中期妊娠(16～24周)61例(中孕组)和早期妊娠(11～14周)26例(早孕组),采用实时荧光定量PCR方法,利用Taqman探针对妊娠早、中期孕妇血浆游离的胎儿Y染色体性别决定基因(sex-determining region of Y-chromosome,SRY)进行扩增和定量分析。结果孕13周后的样本均得到特异性扩增,特异度和灵敏度均为100%;中孕组男性胎儿SRY检测的平均DNA浓度为155.46copies/mL血浆,实测范围为43.6～326.8copies/mL血浆;早孕组平均浓度为26.42copies/mL血浆,实测范围为14.3～73.3copies/mL血浆。结论采用荧光实时定量PCR在妊娠早、中期可稳定检测到胎儿游离DNA,可作为孕期性连锁遗传性疾病研究或产前诊断的有效补充手段。     

母体血浆胎儿核酸分析应用于地中海贫血的无创性产前诊断

地中海贫血(地贫)是世界上最常见的单基因遗传病之一,通过产前诊断淘汰受累重型患儿是目前世界上公认的地贫首选预防措施.母血浆胎儿游离核酸的发现为地贫的无创性产前诊断提供了新的途径.近些年来,针对地贫遗传缺陷(特别是β地贫点突变)的母血浆胎儿游离DNA检测技术,如飞行时间质谱分析、分子大小分离法、肽核酸介导的突变序列富集方法和数字化PCR等技术的发展使开展地贫的无创性产前诊断成为现实,这些技术的进一步发展有望推动无创性产前诊断在其他人类单基因病上的应用.本文除重点阐述与地贫相关的研究外,也对该领域技术发展和应用的整体现状进行了综述.     

无创DNA检测技术在常州市产前筛查中的应用

目的探讨无创DNA产前检查(NIPT)在胎儿染色体非整倍体疾病诊断中的应用价值。方法选取2 237例接受唐氏筛查的孕妇,对其外周血中游离胎儿DNA进行测序分析,阳性者进行羊水穿刺及染色体核型分析;阴性者行电话随访。结果 (1)无创DNA检测结果为阳性者共23例,包括21-三体15例、18-三体4例、13-三体1例,性染色体异常3例。(2)23例结果异常的孕妇,22例进行了羊水穿刺及染色体核型分析。结果显示无创DNA检测技术的检出率为100%,准确率86.4%。结论 NIPT对孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测准确率达86.4%,其高准确性、无创伤性等优点将使其成为未来产前筛查的主力手段。     

基于胎源遗传物质的唐氏综合征无创性产前诊断研究进展

唐氏综合征是常见且严重的染色体异常类出生缺陷,迄今无有效治疗方法,在产前进行筛查与诊断,减少和避免患儿出生是唯一预防措施.目前常用的侵入性诊断方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝接受,因此寻找并建立准确且无创的唐氏综合征产前诊断方法是亟待解决的重要临床问题.利用存在于母体外周血中的胎儿遗传物质是近年来开展的无创性产前诊断...     

基于游离RNA的无创性产前诊断研究进展

孕妇血浆血清中游离RNA作为一种新的胎儿遗传信息材料给无创性产前诊断带来了新的契机。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,且稳定存在于母体血循环中,易于检测。同时,其由于无需依赖胎儿性别或父源性多态性位点而具有十分明显的应用优势。目前,已经有研究将血浆血清中游离RNA与胎儿非整倍体、宫内发育迟缓以及子痫前期等妊娠相关疾病联系起来,并且取得了十分可喜的研究成果。     

无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体的临床研究

目的探讨无创性产前基因检测胎儿染色体非整倍体在临床的应用。方法选择2015年1～12月在我院产科门诊就诊的孕妇920例,先行无创产前基因检测（实验组）,对于无创产前基因检测高风险和中等风险者再行羊水或脐血穿刺染色体核型分析（对照组）。两组检测结果为阴性的孕妇,出生后进行随访,确定是否有无漏诊。通过两组阳性结果的比较及出生后的观察随访情况来衡量无创产前基因检测的检查胎儿非整倍体疾病的准确率,再来判断其临床应用价值。结果实施无创产前基因检查920例,阳性结果为5例,其中21三体综合征为3例,18三体综合征为1例,13三体综合征为1例,阴性为915例;阳性结果以羊水或脐血穿刺染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照,21 三体综合征有1 例假阳性,18 三体综合征与13 三体综合征无假阳性。检查结果阴性的孕妇,经产后随访无漏诊率。结论无创产前胎儿非整倍体基因检测可提高产前诊断效率,减少患儿的出生。该项技术具有最佳检测时间、无创取样、无流产风险、高灵敏度及准确度的特点,更适宜基层医院开展。     

无创产前筛查中胎儿游离DNA比例的影响因素分析

目的分析无创产前筛查(NIPS)中影响胎儿游离DNA(cffDNA)比例的因素,探讨cffDNA比例偏低造成NIPS检测失败的原因,为不同孕妇制订个体化的产前遗传学检测方案提供参考。方法对4268例进行NIPS检测的孕妇跟踪随访至胎儿出生,并对孕妇的相关资料进行收集,分析孕妇孕周、体质量指数(BMI)、年龄、妊娠单双胎、标本运输时间与血浆cffDNA比例的相关性,并对cffDNA比例<3.5%的标本重新采血后进行检测,探讨标本重新采血的可行性。结果cffDNA比例与孕周呈正相关(r=0.113,P<0.05)。cffDNA比例与孕妇BMI和年龄呈负相关(r=-0.261、-0.088,P<0.05)。妊娠单双胎和标本运输时间与cffDNA比例无相关性(P>0.05)。cffDNA比例<3.5%的孕妇经重新采血后检测,50%的孕妇能够得到检测结果。结论cffDNA比例与孕周呈正相关,与孕妇BMI、年龄呈负相关。临床可根据筛查对象的BMI、年龄、孕周制订个体化的采血时间,对于肥胖、年龄较大的孕妇可适当将筛查孕周后移。     

第二代测序技术与无创产前诊断

孕妇外周血中胎儿游离DNA（cellfreefetalDNA,cffDNA）的发现开辟了无创产前诊断的新篇章,借助各种分子诊断技术针对cffDNA进行胎儿染色体疾病、遗传性疾病以妊娠相关疾病的研究迅速成为热点。以高通量、自动化为显著特征的第二代测序（next—generationsequencing,NGS）技术诞生．极大加速了cffDNA的实验室研究进展。目前基于NGS平台,建立的胎儿21／18／13三体综合征的产前基因诊断技术已应用于临床。其他如性染色体非整倍体、双胎妊娠染色体非整倍体、胎儿染色体结构异常疾病以及孟德尔单基因遗传病的研究也因NGS的出现获得了显著的进步。本文就NGS的基本原理、cffDNA的生理特性及NGS在无创产前诊断研究中的进展进行综述。     

孕妇血浆游离胎儿 DNA 检测在无创产前诊断中的应用价值研究

目的：探讨孕妇血浆游离胎儿 DNA 检测在无创产前诊断中的价值。方法2011年1月至2013年12月该院46例孕妇作为研究对象,通过柱分离法获得孕妇的血浆 DNA ,并通过聚合酶链反应（PCR）技术对孕妇外周血浆中游离胎儿 DNA 的性别决定基因（SRY）进行检测,并通过 ATL1基因鉴别胎儿的性别。结果46例孕妇中28例产男性婴儿,18例产女性婴儿,其中男性胎儿中的26例能通过 PCR 技术扩增出 SRY 基因,而女性胎儿中有17例经过 PCR 技术扩增出 ATL1基因,其特异度为94．4％（17／18）,而灵敏度为92．9％（26／28）,检测的总符合率为93．5％（43／46）。结论将孕妇血浆游离胎儿 DNA 检测应用到产前检查检测中,其灵敏度和特异度都较高,且检查过程中无创伤,能减少不良事件的发生概率,值得临床推广和应用。     

The importance of pre- and post-test counseling for prenatal cell-free DNA screening for common fetal aneuploidies

Introduction: Prenatal cell-free DNA screening for common fetal aneuploidies has rapidly changed the paradigm of prenatal care. Despite its advantages compared to conventional screening methods, its unexpectedly rapid implementation in clinical practice has generated several ethical and medical issues and misconceptions. Aggressive commercial marketing of cell-free DNA screening and media dissemination of misleading information have added confusion.

Areas covered: This review provides an extensive update and will focus on the importance of pre-and post-test counseling for prenatal cell-free DNA screening not previously discussed extensively in the available literature. Additionally, we report cell-free DNA screening implementation in the largest obstetrical tertiary unit in Finland which is one of few countries that provides all prenatal screening methods free of charge for all women and has a very high uptake of first-trimester screening. This is not a systematical review, but rather a narrative overview which includes the most relevant and recent original publications and reviews covering this issue.

Expert opinion: Despite being the most accurate method for screening of common fetal aneuploidies, the knowledge and counseling should be substantially improved. Cell-free DNA screening is not a replacement for diagnostic testing and its use in prenatal testing is complex and limited.     

More attention should be paid to pregnant women who fail non-invasive prenatal screening

ObjectiveWe discuss how to handle failure of first-pass non-invasive prenatal screening (NIPS) and investigate the pregnancy outcomes after second-pass failure.MethodsA total of 35,187 pregnant women underwent NIPS in a single center. Those who failed first-pass NIPS were re-tested after a repeat blood draw. Those who failed again were offered genetic counseling. We recorded antenatal data and pregnancy outcomes.ResultsA total of 273 (0.78%) women failed the first test. On re-testing, 220 (80.59%) yielded reliable results and 53 failed the test again. Women with higher total cell-free DNA (cfDNA) levels evidenced a lower NIPS success rate (40%) and a higher incidence of adverse pregnancy outcomes.ConclusionsMost women who failed first-pass NIPS yielded reliable results on repeat testing, especially those with lower fetal fraction. Higher concentrations of cfDNA in maternal plasma were associated with poorer pregnancy outcomes. Such women require special attention, thus early medical intervention, to avoid an adverse prognosis.     

男性胎儿DNA含量低的孕妇的无创产前检测

目的探讨外周血中胎儿DNA含量低的孕妇的无创产前检测(NIPT)。方法回顾分析2015年4月至2016年3月间在佛山市妇幼保健院行NIPT的3 240例孕妇实验数据与随访资料,根据其Y染色体z值,筛选出胎儿为男性且胎儿DNA含量低于8%的样品共150例,利用琼脂糖凝胶电泳富集法提高胎儿DNA含量,进行NIPT,对比非整倍体筛查结果的准确率。结果琼脂糖凝胶电泳富集法将样品中的胎儿DNA含量从平均5%提高到9.2%。对比胎儿DNA含量提高前后的NIPT结果是一致的。结论当胎儿DNA含量高于5%时,胎儿DNA含量不会影响NIPT结果的准确率。     

ERG甲基化位点检测技术在无创性产前诊断中的应用

目的通过检测和分析游离胎儿DNA的ERG基因在不同孕期中浓度的变化,探讨利用ERG甲基化位点检测技术应用于无创性产前诊断的可行性。方法随机选取健康妊娠妇女早孕组、中孕组、晚孕组各30例。采用HpaⅡ、MspⅠ分别对血浆中提取的游离DNA酶切后进行SYBR PCR反应,通过检测ERG基因甲基化位点,定量分析不同孕期的孕妇血浆中游离胎儿DNA浓度。结果游离胎儿DNA的ERG基因在孕妇血浆中的浓度随着孕周的增长而升高。各孕周组的母血浆中ERG基因浓度（LG copies/mL）中位数分别为5.38,6.10和7.04（χ2=75.104,P〈0.01）。结论本研究证实了游离胎儿DNA的ERG基因序列上CCGG位点存在甲基化的特性。进一步确定了ERG基因作为胎儿DNA的标记物应用于无创性产前诊断的可行性。