核因子κB在人乳腺癌组织中的表达及其意义

目的　探讨人乳腺癌组织中核因子κB(nuclearfactorkappaB ,NF κB)的表达及其激活与乳腺癌恶性潜能的关系。方法　应用免疫印迹杂交法 (Westernblot)测定 2 6例乳腺癌及 12例癌旁乳腺组织标本的NF κB p65蛋白表达水平 ,以及应用凝胶电泳迁移率法 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)测定NF κB的DNA结合活性。结果　乳腺癌组织中NF κB p65蛋白表达水平及NF κB的DNA结合活性均明显高于癌旁组织 (P <0 .0 1)。雌激素受体 (ER )阴性的乳腺癌组织中NF κB的活性显著高于ER阳性的乳腺癌组织 (P <0 .0 1)。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织中NF κB的活性高于无淋巴结转移的乳腺癌组织 (P <0 .0 5 )。结论　NF κB的活化可以影响乳腺癌的发展及恶性潜能。     

NF-κB活化及iNOS基因表达在急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的　探讨急性坏死性胰腺炎 (ANP)大鼠肺组织核因子 κB (NF κB)活化及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达与肺损伤的关系。方法　 33只Wistar大鼠随机分为正常对照空白组、盐水对照和胰腺炎组。以 3 5 %牛磺胆酸钠溶液逆行注入胰胆管制作ANP模型 ,并将N 乙酰半胱氨酸(NAC ;30 0mg/kg体重 )于造模前和后 1h用于ANP模型 ,造模后 12h取材 ,采用SP免疫组化方法检测肺组织NF κB活性。利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测ANP肺组织iNOSmRNA表达 ,同时观察血淀粉酶、肺及胰腺组织湿 /干重比率、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)及病理改变等。结果　正常对照组肺组织几乎无NF κB活化及iNOSmRNA的表达 ,ANP时肺组织NF κB活化及iN OSmRNA高表达 ,NAC对肺NF κB活性有抑制作用 ,可使肺iNOSmRNA表达降低 ,并可降低淀粉酶、胰腺组织湿 /干重比率及肺MPO。肺组织NF κB活化与iNOSmRNA表达及肺iNOSmRNA表达与MPO均呈正相关 ,相关系数分别为 0 79及 0 6 6 (P <0 0 1)。结论　肺组织NF κB活化及iNOSmRNA过度表达可能是ANP肺损害发生的原因之一。NAC可能通过抑制肺NF κB活性及iNOSmRNA的表达 ,减轻肺损害。     

NF-κB激活在大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤中的意义

目的　从核转录因子 κB(NF κB)途径研究心肌缺血再灌注损伤早期众多细胞因子表达的分子机制。方法　建立大鼠离体工作心脏模型 ,心肌缺血 3 0min后再灌注 60min ,期间取心室肌。同时 ,稳定阶段在实验组Krebs Henseleit碳酸盐缓冲液 (KHBB)里应用吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)。对照组测定心肌NF κB的DNA结合活性、胞质IκBα水平和肿瘤坏死因子 (TNF) αmR NA的表达。分别测定两组在短时间缺血后NF κB的DNA结合活性和TNF αmRNA的表达情况。结果　短时间的单纯缺血即引起细胞质IκBα水平的明显降解 ,同时有相对应的NF κB的DNA结合活性增加 ;再灌注后 ,虽然细胞质IκBα的水平有恢复 ,但是却有更强的NF κB的DNA结合活性 ;首次明确激活的心肌NF κB有 p65 p5 0和p5 0 p5 0两种形式。此外 ,在实验组 ,NF κB的DNA结合活性明显受抑 ;相应的 ,TNF αmRNA的表达也受到抑制。结论　分析了心肌在缺血再灌注过程中NF κB经历了两种不同激活途径 ,但没能确定p5 0 p5 0的确切作用。同时 ,确定NF κB的快速活化是心肌缺血再灌注早期众多细胞因子表达的始动因素。     

P物质对肉芽组织成纤维细胞bFGF表达的调控作用及意义

目的　观察感觉神经肽P物质 (substanceP ,SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞中碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)表达的特点及调控作用。　方法　采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应 ,提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养 ;采用RT PCR方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞bFGF基因表达的调控作用 ,观察时间及剂量 效应关系 ;采用Western blot方法检测bFGF蛋白表达情况 ,观察时间及剂量 -效应关系。结果　 10 -7mol/LSP可诱导成纤维细胞bFGFmRNA的表达 ,在作用后 3、6h与对照组比较 ,差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ;12h后可检测到bFGF蛋白表达明显增强 (P <0 .0 1) ,2 4h达高峰 ,4 8h后逐渐回落。SP在 10 -9～ 10 -5mol/L范围内可显著促进成纤维细胞bFGFmRNA表达 ,在 10 -8～ 10 -5mol/L范围可诱导bFGF蛋白的表达 ,均在 10 -7mol/L剂量点达到峰值 (P <0 .0 1)。　结论　SP可诱导肉芽组织成纤维细胞bFGF基因和蛋白的表达 ,且呈现出一定的时间和剂量特点 ,在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。     

外源性脂多糖在大鼠急性胰腺炎中的作用

目的　观察外源脂多糖(LPS)在水肿性胰腺炎(AEP)重症化的作用及其对核因子(NF) κB激活的水平的影响。方法　用LPS(10mg/kg体重)对AEP大鼠进行干预,并与未干预AEP大鼠和正常大鼠进行比较。在复模后分别于12、2 4、3 6、72h用流式细胞术(FCM )检测了NF κB激活的水平。同时进行胰腺病理分级。结果　LPS干预组中的NF κB激活的水平在各个时间段均有所增高(P <0 .0 5 )。LPS加剧了组织炎性浸润程度,使AEP大鼠发生重症化。结论　NF κB的活化作为始动因子激活一系列的炎症介质,引起胰腺组织快速的炎症反应。LPS可以作为研究AEP重症化的预处理剂     

P物质在诱导肉芽组织成纤维细胞增殖中的作用

目的　探讨感觉神经肽P物质 (substanceP ,SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用及其对碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)基因表达的调控作用。　方法　采用MTT法测定SP对原代培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用 ;采用RT PCR方法检测SP对成纤维细胞bFGF基因表达的调控作用 ,观察时间及剂量 效应关系。　结果　 10 -9～ 10 -5mol/L的SP在体外对原代培养的肉芽组织成纤维细胞均具有明显的促增殖作用 (P <0 0 1) ,且具有明显的剂量依赖性 (r=0 5 94 ,P <0 0 1) ,bFGF抗体能部分抑制这一作用。在作用后 3、6hSP可诱导成纤维细胞bFGFmRNA的表达 ,在 10 -9～ 10 -5mol/L范围内均可以显著促进成纤维细胞bFGFmRNA表达 ,在 10 -7mol/L达到峰值 (P <0 0 1)。　结论　SP对肉芽组织成纤维细胞具有明显的促增殖作用 ,这种作用与其诱导内源性bFGF基因表达有关     

P物质对肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子的表达调控及其意义

目的 探讨感觉神经肽P物质(SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子(EGF)表达的调控作用及特点。方法 采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应，提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养；采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞EGF基因表达的调控作用，观察时间及剂量—效应关系；采用Western-blotting方法检测EGF蛋白表达情况，观察时间及剂量—效应关系。结果 10^-7mol/L SP可诱导成纤维细胞EGF mRNA的表达，在作用后6h与对照组比，差异有显著性(P＜0．01)；SP在10^-8-10^-6mol/L范围内可以显著促进成纤维细胞EGF mRNA表达，在10^-7mol/L达到峰值，10^-5mol/L时与对照组差异无显著性(P＞0．05)。10^-7mol/L SP作用12h后可检测到EGF蛋白明显表达增强(P＜0．01)，24h达高峰，48h后逐渐有所回落。SP在在10^-8--10^-5mol/L范围可诱导EGF蛋白的表达，均在10^-7mol/L剂量点达到峰值(P＜0．01)。结论 SP可诱导肉芽组织成纤维细胞EGF基因和蛋白的表达，且呈现出一定的时间和剂量特点，在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。     

碱性成纤维细胞生长因子对肌腱细胞基质合成及NF-κB基因表达的作用

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对兔屈肌腱细胞DNA合成、I型胶原和NF κB基因表达的作用。方法　采用BrdU掺入技术 ,观察肌腱细胞DNA合成情况 ;采用RT PCR方法 ,检测I型胶原mRNA、NF κBmRNA在不同浓度bFGF作用下的合成变化。结果　质量浓度为 2ng/ml的bFGF组、质量浓度为 10ng/ml的bFGF组与正常对照组相比 ,肌腱细胞DNA合成显著增多 (t =-3 .747、-4 .488,P <0 .0 1)。质量浓度为 10ng/ml的bFGF组和正常对照组相比 ,I型胶原密度表达相对比值显著增加 (t =-6.2 5 4,P <0 .0 1)。NF κB基因表达增强 ,实验组和正常对照组相比 ,差异有显著意义 (t =-11.174、-2 .63 4、P <0 .0 1)。结论　bFGF可提高I型胶原和NF κB基因表达水平     

烧伤血清对内皮细胞核因子-κB核移位的影响

目的　了解烧伤血清对内皮细胞核因子 κB (NF κB)异二聚体 p5 0 /p6 5核移位 ,以及核抑制因子κB(IκB)α降解的影响 ,进一步探讨烧伤血清对内皮细胞的活化作用。方法　采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4 ,分别用正常人血清、烧伤患者血清、烧伤患者血清 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)刺激内皮细胞 ,并以正常培养的内皮细胞为对照。应用激光共聚焦显微镜观察刺激 30、6 0、12 0、4 80min后内皮细胞 p5 0 /p6 5核移位情况 ,采用Western印迹法检测刺激 30、6 0、90、12 0min后内皮细胞IκBα蛋白降解的情况。　结果　与对照组比较 ,烧伤血清刺激内皮细胞 30min后 ,p5 0、p6 5即发生核移位 ,30～ 6 0min达高峰 ,2h后恢复至刺激前状态 ;而烧伤血清刺激 30min后 ,IκBα发生降解 (P <0 .0 1) ,刺激 4 5～ 6 0min后最为明显 ,2h后表达逐渐恢复。PDTC能有效抑制烧伤血清作用 30、6 0min后 ,p5 0、p6 5的核移位和IκBα降解。 　结论　烧伤血清可导致内皮细胞NF κBp5 0、p6 5发生核移位 ,并使IκBα降解 ,进而活化NF κB ,诱导内皮细胞分泌细胞因子。PDTC对这一系列变化可能有抑制作用     

皮瓣缺血再灌注期间核因子-κB活性的变化及其意义

目的　探讨核因子(NF) κB活性变化在皮瓣缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法将60只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组;I/R组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)处理组。制备右下腹岛状皮瓣I/R模型。PDTC处理组于再灌注前及早期,分2次静脉注射PDTC(3 0 0mg/kg体重)。采用免疫组织化学及凝胶电泳迁移率法,检测皮瓣NF κB活化情况,并行组织学观察。结果　I/R组再灌注后NF κBp65阳性细胞较对照组明显增加,NF κB活性于再灌注1、3h显著增强;PDTC处理组再灌注1、2h阳性细胞数(7.90±3 .73、10 .60±3 .2 0 )较I/R组(19.5 0±6.93、18.5 0±5 .68)明显减少(P均<0 .0 1) ,再灌注1hNF κB活性受到抑制,中性粒细胞浸润及组织水肿程度较I/R组明显改善。结论　NF κB活化可能在中性粒细胞介导的皮瓣I/R损伤中起重要作用     

吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠重症急性胰腺炎的影响

目的　探讨核转录因子 (NF κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯 (PDTC)对大鼠重症急性胰腺炎 (SAP)的影响。方法　将 3 6只Wistar大鼠随机分组 :假手术组 (n =6) ,假手术 静脉注射组 (n =6) ,SAP组 (n =12 )和试验组 (n =12 )。各组于造模 6h后 ,测定血清淀粉酶及脂肪酶含量 ,取胰腺组织进行病理学评分 ,采用免疫组织化学法检测NF κB激活水平及胰腺细胞凋亡情况。结果　SAP组和试验组的胰腺细胞内NF κB呈激活状态 ,存在胰腺细胞凋亡 ,与前两组差异有显著性 (P <0 .0 1) ,试验组大鼠的胰腺组织病理学评分、血清淀粉酶及脂肪酶含量、NF κB激活及细胞凋亡水平与SAP组差异存在显著性 (P <0 .0 5 )。结论　在SAP发病机制中 ,NF κB是多种炎症介质的始动因子 ,PDTC可以有效抑制胰腺细胞中NF κB的激活 ,促进胰腺细胞凋亡 ,减少胰酶释放 ,减轻胰腺组织的病理损害。     

重组腺病毒对烫伤大鼠肝组织核因子-κB活性的调控

目的　探索腺病毒介导IκBα基因对烫伤大鼠肝组织核转录因子NF κB活性的调控作用。　方法　应用重组缺陷型腺病毒载体 (AdIκBα)预处理大鼠 ,烫伤后不同时相点取肝组织 ,提取组织核蛋白 ,与r-3 2 PATP标记的NF κB特异性探针共同反应 ,利用凝胶电泳迁移率改变分析方法(EMSA)检测NF κB/DNA结合活性 ;提取肝组织总RNA ,用RT PCR法检测IL 1β、TNFαmRNA的表达。结果　与正常对照组相比 ,烫伤组致伤后 0 .5hNF κB/DNA结合活性显著增强 ,至伤后 2 4h ,仍保持较强结合活性。AdIκBα预处理组 ,大鼠NF κB/DNA结合活性略高于正常 ,但显著低于烫伤组。RT PCR分析 ,大鼠烫伤后 0 .5h与对照组相比 ,IL 1β、TNFα表达显著升高 ,持续至伤后 2 4h ;AdIκBα预处理组 ,IL β和TNFα表达显著低于烫伤组。 　结论　大鼠严重烫伤后 ,肝组织细胞内NF κB迅速活化 ,IL 1β和TNFα的表达随之显著增强 ;经AdIκBα预处理能显著抑制大鼠严重烫伤后肝组织NF κB的活化 ,并下调IL 1β、TNFα的表达。     

低分子量肝素治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的　探讨低分子量肝素 (LMWH )治疗重症急性胰腺炎的机理。方法　比较假手术组(S组 )、重症急性胰腺炎组 (SAP组 )和LMWH治疗组 (H组 )各组死亡率、血清淀粉酶、IL 6、胰腺组织NF κB活性和 p65mRNA表达程度。 结果　H组死亡率、血清淀粉酶和IL 6明显低于SAP组 (P<0 .0 0 1)。H组胰腺组织NF κB活性和 p65mRNA表达程度明显弱于SAP组。 结论　LMWH可能通过抑制NF κB的活性 ,从而减少炎症介质的释放 ,减轻SAP的程度。     

丙型肝炎核心蛋白活化肝门部胆管癌细胞中NF-κB介导的信号转导途径

目的　研究丙型肝炎核心蛋白 (HCVC蛋白 )致癌作用的细胞内信号转导途径(STPs)。方法　将构建成功的HCVC基因重组真核表达载体pcDNAHCV C ,分别与环AMP反应分子 (CRE)、血清反应因子 (SRF)、血清反应分子 (SRE)、活化蛋白 1(AP 1)及核转录因子 κB(NF κB)重组表达质粒共转染肝门部胆管癌细胞株 (QBC939) ,通过检测转染后细胞内荧光素酶活性确定与HCVC蛋白作用的信号转导分子。结果　HCVC蛋白通过NF κB介导的STPs ,使荧光素酶比活性较正常对照增高 7倍 ;而HCVC蛋白并不能激活QBC939细胞中与 pAP 1、pCRE、pSRF和pSRE相关信号转导途径。随着 pcDNAHCV C转染量的增多 ,NF κB被活化的程度也升高 ,两者呈剂量依存关系。结论　HCVC蛋白活化肝门部胆管癌细胞中NF κB介导的细胞内信号传导途径。     

核转录因子-κB组成性激活对胃癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及其对胃癌细胞增殖的影响机制。方法 采用蛋白免疫印迹法(Western blot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB蛋白质表达水平的差异。通过Trans AM~(TM)NFκBp65试剂盒来比较不同胃癌细胞株中p65亚基的蛋白活性差异。选取活性较高细胞株,观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对NF-κB活性的影响;利用噻唑蓝(MTT)法,分别观察24、48、72h,PDTC对细胞增殖的影响。并采用流式细胞分析技术(FCM)检测细胞的凋亡情况。结果 4株胃癌细胞株胞核中均存在NF-κB蛋白的表达,即存在NF-κB的组成性激活,且存在表达差异。活化的p50亚基在AGS细胞株中表达较低,在MKN28、MKN45、SGC-7901细胞株中表达较高;活化的p65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞,NF-κB的活性均被抑制(P<0.01);同时细胞表现为不同程度的增长抑制(P<0.01),FCM结果显示PDTC可诱导细胞的凋亡。结论 胃癌细胞株中存在NF-κB的组成性激活,并在不同的细胞株中存在表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖,其机制与PDTC所诱导的细胞凋亡有关。     

P物质对大鼠成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的影响

目的　探讨P物质 (SP)对大鼠肉芽组织成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子 (bF GF)及其受体 (FGFR 1)表达的影响。方法　采用成纤维细胞体外培养和逆转录 多聚酶链反应(RT PCR)技术 ,观察SP在不同浓度 ( 1× 10 - 9～ 1× 10 - 5mol L)及孵育时间 ( 0、3、6、12、2 4h)情况下刺激成纤维细胞后 ,其bFGF、FGFR 1mRNA表达情况。结果　SP可上调大鼠成纤维细胞bF GF、FGFR 1mRNA表达。SP对bFGF的量 效曲线呈双相分布 ,最大效应浓度为 1× 10 - 7mol L。但SP仅在高浓度 ( 1× 10 - 6 ～ 1× 10 - 5mol L)时促进FGFR 1表达。在最大效应浓度 ( 1× 10 - 7～ 1× 10 - 5mol L)时 ,SP对bFGF、FGFR 1表达的上调作用分别于刺激细胞后 3、12h达高峰。结论　SP对大鼠肉芽组织成纤维细胞bFGF、FGFR 1基因表达存在直接影响 ,其表现形式与SP的刺激浓度及孵育时间有关 ,这可能是SP在创伤修复中发挥作用的机制之一。     

雌、孕激素作用后小鼠子宫内膜细胞中核因子-κB的表达

目的　探讨不同浓度雌、孕激素对小鼠子宫内膜细胞核因子 κB(NF κB)表达的影响。　方法　采用去势雌性昆明小鼠模型 ,分为假手术、雌激素、孕激素及雌、孕激素联合组 ,采用免疫组织化学方法检测给药后小鼠子宫内膜NF κB的表达。　结果　雌激素浓度为 30及 10 0 μg·kg-1·d-1时均可促进小鼠子宫内膜细胞NF κB的表达 (P <0 .0 1) ,但无明显的量效相关性 (P >0 .0 5 )。单用孕激素降低子宫内膜细胞胞浆中NF κB的表达 (P <0 .0 1)。雌、孕激素联合促进细胞浆及细胞核的NF κB表达 (P <0 .0 1)。　结论　雌激素可上调小鼠子宫内膜细胞NF κB的表达 ,而孕激素对其表达呈降调节作用 ;NF κB途径可能参与了雌、孕激素对子宫内膜容受性建立的调节     

环孢素A对原位肝移植后干扰素γ基因转录的调控机制

目的　研究环孢素A对原位肝移植后干扰素γ基因转录的影响及相关机制。方法利用大鼠原位肝移植模型 ,设立同基因对照组 (Ⅰ组 )、急性排斥组 (Ⅱ组 )和环孢素A治疗组 (Ⅲ组 )。分别于移植后 1,3,5 ,7,12d ,用逆转录聚合酶链方法测定移植肝组织中IFN γmRNA的表达 ,用凝胶电泳迁移率方法测定脾细胞的活化T细胞核因子 (NFAT)和核因子κB(NF κB)的DNA结合活性 ,并以病理形态学变化作参照。结果　Ⅱ组移植后各时点脾细胞NFAT和NF κB的DNA结合活性较Ⅰ组明显增强 (P <0 0 5 ) ,IFN γmRNA表达明显增高 (P <0 0 5 )。Ⅲ组移植后NFAT和NF κB的DNA结合活性较Ⅱ组明显减弱 (P <0 0 5 ) ,IFN γmRNA表达明显降低 (P <0 0 5 )。NFAT和NF κB的DNA结合活性与IFN γmRNA转录水平间均表现出良好的相关关系 (r =0 781,r =0 815 ,P <0 0 5 )。结论　原位肝移植后NFAT和NF κB活性变化是环孢素A调节IFN γ基因转录的重要机制。阻断NFAT和NF κB分子途径是治疗肝移植排斥反应的具有重要价值的研究方向。