工频磁场对P38丝裂原活化的蛋白激酶磷酸化的诱导作用

目的：研究50Hz工频磁场对细胞内P38丝裂原活化的蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinase，P38 MAPK）信号转导途径的影响，阐明工频磁场生物效应相关的细胞信号转导机制。方法：中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL）分别经0.1mT及0.4mT2个强度的工频磁场辐照不同时间后，提取细胞蛋白质，以Western印迹技术，测定并比较细胞内p38MAPK及上游激酶MKK3/MKK6(MAPK kinase3/6)磷酸化（活化）的变化。结果：0.1mT的工频磁场在24h内不能诱导P38MAPK磷酸化，而0.4mT即开始诱导P38MAPK磷酸化，15min后P38MAPK磷酸化恢复至对照状态。但2个强度都不能诱导上游激酶MKK3/MKK6的磷酸化（活化）。结论：50Hz工频磁场可以短暂诱导P38MAPK磷酸化（活化），活化P38MAPK的上游环节有待于进一步探索。     

电磁噪声抑制工频磁场诱导的应激活化蛋白激酶磷酸化

目的　研究电磁噪声对 5 0Hz工频磁场诱导细胞内应激活化蛋白激酶 (stress activatedproteinkinase ,SAPK)磷酸化的影响 ,探索电磁噪声对极低频磁场生物效应可能存在的干预作用。方法　中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)分别经 0 .4mT工频磁场、等强度的电磁噪声、工频磁场与噪声的复合磁场辐照及假辐照处理 3min和 15min后 ,裂解细胞 ,提取细胞蛋白质 ,以Western印迹技术测定并比较细胞内SAPK磷酸化 (活化 )的变化。结果　 0 .4mT的工频磁场可诱导细胞内SAPK的磷酸化。经 3min及 15min辐照后 ,磷酸化SAPK含量分别增至 4 9.3%及 5 7.0 % ,与假辐照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而相同强度的电磁噪声不能增强SAPK的磷酸化 ,磷酸化SAPK分别为 37.7%及31.8% ,与假辐照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。复合磁场辐照 3min后 ,可明显抑制工频磁场对SAPK磷酸化的增强作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 2 4 .4 % ,与辐照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 15min后也可降低工频磁场对SAPK磷酸化的诱导作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 39.0 % ,与工频磁场组和假辐照组相比 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　一定强度的电磁噪声可以抑制工频磁场诱导SAPK磷酸化 ,对工频磁场的生物效应存在干预作用     

极低频磁场对细胞色素氧化酶亚基1基因转录水平的影响

目的　克隆和鉴定本研究室经DD法在Daudi细胞中筛选到的一个极低频磁场的特异反应基因 (MF 1) ,并在多种磁场敏感细胞中证实该基因反应的普遍性 ,为揭示磁场所致生物学效应的作用机制提供实验依据。方法　克隆、序列分析MF 1片段 ;选择HL 6 0、L12 10和中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)等细胞 ,用Northern技术观察该基因在不同条件的磁场辐照 (5 0Hz磁场 ,磁通密度分别是 0 .1mT和 0 .8mT ,辐照时间分别是 2 0min和 2 4h)后该基因转录水平的变化。结果　克隆测序及与GeneBank同源性比较表明 ,MF 1序列与细胞色素氧化酶亚基 1基因 (CO1)有 10 0 %同源性。HL 6 0、L12 10和CHL等细胞在 0 .1mT、0 .8mT磁场辐照 2 0min后 ,CO1转录水平 (分别为 0 .38± 0 .12、0 .37± 0 .0 4 )均比对照组 (0 .5 8± 0 .12 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 2 4h后 ,3种细胞该基因转录水平 (分别为 0 .4 6± 0 .0 9、0 .4 5± 0 .0 9)亦比对照组 (0 .6 5± 0 .0 6 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　CO1是磁场辐照密切相关的反应基因之一。磁场可能通过影响CO1的转录水平来影响细胞色素氧化酶的活力 ,从而影响多种生物学效应     

工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的影响

目的研究50Hz工频磁场对离体原代培养的人早孕绒毛滋养细胞分泌功能的影响，探索工频磁场生殖健康效应的可能机制。方法体外分离、培养人早孕绒毛滋养细胞，以0．2、0．4mT强度的工频磁场分别辐照处理6、12、24、48以及72h，每一辐照组均设立相应时间的平行对照组，用电化学发光免疫分析法测定每组细胞培养液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）和黄体酮的含量并对结果进行统计分析。结果0．2mT工频磁场辐照72h内，滋养细胞分泌的HCG和黄体酮与空白对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。0．4mT工频磁场辐照48h内不影响滋养细胞的分泌；辐照72h，则可以明显抑制滋养细胞分泌HCG与黄体酮（与空白对照组相比，P〈0．05）。结论一定强度的工频磁场长时间辐照可抑制绒毛滋养细胞的分泌功能，阈强度可能在0．2至0．4mT之间。     

0.2 mT工频磁场引起人羊膜成纤维细胞微丝骨架重组

目的探讨50Hz工频磁场对人羊膜成纤维细胞微丝装配的影响,并分析磁场对肌动蛋白和表皮生长因子受体蛋白表达的影响。方法将人羊膜成纤维细胞分别用0．1、0．2．0．3、0．4、0．5mT,50Hz工频磁场辐照30min,以异硫氰四甲基罗丹明一鬼笔环肽标记细胞微丝并在显微镜下观察分析微丝形态的变化。用荧光光谱及紫外光谱检测法测定细胞内微丝总含量,用激光共聚焦显微镜逐层扫描的方法观测细胞微丝骨架的高度,用扫描电镜观测细胞外部形态等方法进一步分析磁场对细胞微丝骨架及细胞形态的影响。用Western blotting检测去垢剂不可溶的蛋白的表达量以分析磁场作用的可能机制。结果人羊膜成纤维细胞经不同强度工频磁场辐照30min后,只有0．2mT工频磁场辐照显著导致细胞中平行排列的微丝应力纤维减少,诱导细胞周边出现致密微丝外周带并伸出丝状伪足,停止辐照2h后微丝形态恢复,伪足消失。光谱检测发现胞内微丝总含量无显著变化。激光共聚焦显微镜逐层扫描观测到0．2mT磁场辐照使细胞微丝骨架平均高度由（12．37±1．28）μm降低到（9．97±0．38）μm（t=6．96,P〉0．05）。扫描电镜图像显示磁场辐照使细胞更为扁平,有足状伪足出现。Western blotting检测到磁场辐照后细胞骨架中去垢剂不可溶部分的肌动蛋白和表皮生长因子受体含量与对照组相比,分别升高（16．8±2．3）％（t=16．68,P〈0．05）和（31．2±4．1）％（t=17．10,P〈0．05）。结论0．2mT工频磁场短时辐照影响了人羊膜成纤维细胞微丝骨架的形态,此效应可随磁场撤销而解除,且可能与磁场诱导了细胞膜上表皮生长因子受体聚簇有关。     

0.4 mT工频磁场对骨骼肌肌质网囊泡游离钙离子转运的影响

目的探讨工频磁场对骨骼肌肌质网钙转运动力学的影响.方法利用动态光谱法检测0.4 mT、50 Hz正弦磁场辐照过的骨骼肌肌质网Ca2+转运和钙泵活性,用3H-兰尼碱结合实验检测Ca2+释放通道的活性,用荧光偏振法检测肌质网膜的流动性等.结果 0.4 mT、50 Hz正弦磁场辐照导致提取的肌质网囊泡Ca2+摄取初速率由每秒(29.18±3.90) pmol/mg下降到(24.60±3.81) pmol/mg,钙泵的活性由每分钟(0.93±0.05) μmol/mg下降到(0.69±0.07) μmol/mg;导致Ca2+释放初速率由每秒(4.83±0.82) pmol/mg上升到(5.65±0.43) pmol/mg,3H-兰尼碱结合度由(1.10±0.12) pmol/mg上升到(1.16±0.13) pmol/mg,分别上升了15%和5%.结论 0.4 mT工频磁场辐照引起的肌质网Ca2+摄取下调和Ca2+释放上调是由于肌质网钙泵活性降低和Ca2+释放通道活性升高所致.     

工频磁场对星形胶质细胞间隙连接通讯功能的影响

目的　探讨工频磁场 (PFMF)是否有促癌或协同促癌作用。方法　利用荧光光漂白后再恢复法观察漂白细胞荧光强度的恢复以判断经间隙连接的细胞间通讯 ,以相对荧光强度恢复速率(CFIRR)作为对细胞间隙连接通讯 (GJIC)作用的评价指标 ,研究不同磁场强度单独作用或协同佛波酯(TPA)对星形胶质细胞GJIC功能的影响。结果　 3ng/mlTPA作用 1h时CFIRR的中位数 (Md)值为4 .53 % /min ,空白对照组为 9.74% /min ,两组的差异有显著性 (H =1 2 .0 84,P <0 .0 0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 4h时CFIRR的Md 分别 8.2 5、6 .68% /min ,与空白对照组比较 ,差异无显著性 (H =32 .61 7,P >0 .0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 3h ,再与TPA共同作用 1h时CFIRR的Md 分别为 3 .32、2 .85% /min ,与TPA组比较 ,差异无显著性 (H =2 .589,P >0 .0 5)。结论　 0～ 1 .6mT的 50Hz磁场单独作用不能抑制星形胶质细胞GJIC功能 ;协同TPA ,不能增强TPA对星形胶质细胞GJIC的抑制作用 ;但是磁场对星形胶质细胞GJIC的抑制作用随着磁场强度增强呈递增趋势     

工频磁场辐照导致细胞连接蛋白Cx43的异常移位

目的　研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法　用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)处理 2 4h(其中TPA处理 1h)。采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦显微镜进行连接蛋白Cx4 3定位的测定 ;采用Westernblot方法检测胞浆和核内Cx4 3蛋白的含量。结果　正常组细胞间连接处有明亮的点状标记 ,连接成线 ;TPA处理组、0 .8mT正弦磁场单独作用组及 0 .8mT正弦磁场联合TPA处理组细胞的连接处标记斑点均较正常组减少 ,大量Cx4 3蛋白标记斑点出现在胞浆内 ,且在核附近聚集。各组核内Cx4 3蛋白条带很淡 ,而胞浆内Cx4 3蛋白含量ELF组 (2 .0 3± 0 .89)和TPA组 (2 .4 3± 0 .82 )明显增加 ,与正常组 (1.0 4± 0 .17)相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　 5 0Hz正弦磁场直接和 (或 )协同TPA抑制体外培养细胞GJIC功能与细胞连接蛋白Cx4 3内移至胞浆有关     

0.4mT工频磁场对CHL细胞微丝装配的影响

目的 探讨0.4mT工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)微丝(F-actin)装配的影响及作用机制。方法 用免疫荧光染色法标记F-actin,激光共聚焦荧光显微镜观察F-actin形态并拍照,用Western-blotting方法检测了与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的含量。结果 0.4 mT工频磁场辐照CHL细胞30min导致细胞F-actin应力纤维减少,在细胞周边出现丝状伪足,磁场对CHL细胞F-actin形态的影响与细胞经50nmol/L的表皮生长因子(EGF)作用30min类似,且磁场和EGF都使与去垢剂不可溶的细胞骨架相连的EGFR增多。结论 0.4mT工频磁场辐照导致CHL细胞F-actin装配发生变化,磁场对F-actin的影响可能与磁场诱导表皮生长因子受体聚集,并引起信号向下传递有关。     

噪声磁场阻断工频磁场对佛波酯的协同抑制效应

目的　研究噪声磁场对低强度工频磁场诱导或增强致癌物 12 氧 14 酰佛波 13酯(TPA)对细胞缝隙连接通讯功能 (GJIC)抑制作用的干预。方法　NIH3T3小鼠成纤维细胞分别受5 0Hz 0 2mT、0 2mT TPA极低频磁场或 (和 )同等强度的噪声磁场作用 2 4h后 ,采用激光共聚焦显微镜 ,用荧光漂白后恢复技术测定细胞的GJIC功能。结果　 0 2mT工频磁场与TPA可协同抑制GJIC功能 ,其荧光恢复率为 (2 3± 11) % ,与对照组的 (46± 19) %及TPA组的 (34± 17) %比较 ,均差异有非常显著性 ;当叠加 0 2mT噪声磁场后 ,荧光恢复率为 (35± 19) % ,可显著拮抗 0 2mT磁场对TPA的协同抑制作用。结论　 0 2mT噪声磁场可以阻断同等强度磁场协同TPA抑制细胞GJIC的作用。     

高压线工频电磁污染状况调查

目的 了解高压线及居民区工频电磁辐射污染状况.方法 根据HJ/T24-1998<500 kV超高压送变电工程电磁辐射环境影响评价技术规范>对距离高压线外边导线50 m范同内不同距离处工频电场和磁场强度进行监测,同时对不同负荷条件下高压线两侧100 m内(高压线电磁污染区)及200 m外(高压线电磁场相对无污染区)居室内工频磁场强度进行监测.结果 高压线工频电磁场强度随着距离增加快速衰减,工频磁场强度与电负荷、塔高、监测点高度及距离密切相关;高压线边导线外10m处工频电场强度最大,高压线边导线下工频磁场强度最大,76.5%监测值大于04μT,边导线外50 m处17.6%的工频磁场强度大于0.4 μT;高压线污染区居室内工频磁场强度远高于相对无污染区,所有相对无污染区的居室工频磁场强度均小于0.4μT,而污染区内62%的居室工频磁场强度大于0.4μT,高压线电磁污染区居室内的工频磁场强度高于相对无污染区(P＜0.001);经多元回归分析,高压线电磁污染区居室内工频磁场强度与采样点距高压线距离和高度相关(P＜0.001).结论 高压线两侧50 m内的居室工频磁场强度与高压线电磁污染密切相关,建议高压线两侧50 m内不宜建设学校、幼儿园、住宅和医院.

Abstract：

Objective To investigate environmental pollution of high voltage overhead power lines electromagnetic fields(EMF) of power-frequency.Methods Electric and magnetic fields of power-frequency from high power line were tested according to the Technical Regulations on Environmental Impaet Assessment of Electromagnetic Radiation Produced by 500 kV Ultrahigh Voltage Transmission and Transfer Power Engineering (HJ/T 24-1998),outdoor measurements were tested at area within 50 m of high power lines,indoor measurements were monitored at residences around(＜100m)and far from(＞200m)high power lines;measurements were tested at hours of relative higher and lower loeds.Results Power frequency electric fields and magnetic fields decreased rapidly with distance from high power lines.Multiple regression showed that magnetic fields were closely associated with loads,height of tower,and height of measurement(P＜0.001).MRximum electric fields were found at 10 m from high power line,and maximum magnetic fields were found iust under the cable of high power line.Average residential magnetic fields were about 0.05-0.10μT in China.None of measurements at residences far from high power lines(＞200 m)were higher than 0.4μT,whereas 62%measurements at residences within 100 m of high power liner were higher than 0.4 μT.It Was statistically significant(P＜0.001).Conclusion Residential power-frequency magnetic fields are associated with the proximity of high power lines.It is suggested that residences,schools,nursery school,and hospitals should not be located within 50m of high power lines.     

铝致大鼠皮层神经元凋亡及应激活化蛋白激酶活性的变化

目的：探讨氯化铝（AlCl3）对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及其与应激活化蛋白激酶，又称c-jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）信号转导通路的关系。方法：原代无血清培养至第7天，用不同剂量AlCl3(0、10、100、1000μmol/L）处理大鼠皮层神经元48h，然后用琼脂糖凝胶电泳及AnnexinⅤ联合PI染色法检测细胞凋亡；用免疫印迹法(Western blot)检测SAPK／JNK磷酸化水平的时间变化规律。结果：各染铝组均出现DNA ladder这一典型的凋亡特征，且随剂量增加渐趋明显，各剂量组细胞凋亡率明显升高，与对照组相比差异有显著性（P＜0．05），呈明显的剂量－效应关系。6h时SAPK／JNK磷酸化程度达到最高，以后逐渐降低，呈时间－效应关系（P＜0．05）。结论：铝诱导大鼠皮层神经元凋亡可能与SAPK／JNK信号转导通路有关。     

极低频磁场对F0F1-ATPase活力的影响及其与F1旋转频率的关系

目的 研究极低频正弦磁场对F0F1-ATPases活力的影响及其机制.方法 强度为0.1～0.5 mT、频率为4.7～96.0 Hz的磁场分别处理从光合细菌(Rhodospirillum rubrum)中提取的细菌色素体(chromatophores)外膜上的F0F1-ATPases.结果 0.5 mT,4.7、12.0、60.0、72.0、84.0、96.0 Hz磁场对F0F1-ATPases水解起促进作用,0.5 mT、24.0 Hz磁场对F0F1-ATPases水解起抑制作用,差异均有统计学意义(P＜0.05);0.3 mT,4.7、24.0、60.0 Hz的磁场对F0F1-ATPases仍有明显影响,但0.1 mT的磁场则对F0F1-ATPases无明显影响.0.5 mT,24.0、60.0 Hz的磁场对二环己基碳二亚胺(DCCD)抑制的F0F1-ATPases仍分别有明显地抑制和促进酶活力的影响,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 影响F0F1-ATPases活力的极低频磁场具有频率窗口,强度阈值在0.1～0.3 mT之间;F0F1-ATPases,特别是F1是磁场作用的一个重要的位点.     

MAPK信号转导通路与神经损伤研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一种胞浆内广泛分布的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在真核细胞中,由4条平行的信号转导通路组成。细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)通路、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和(或)应激活化蛋白激酶(SAPK)通路、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路和细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK 5)/大丝裂原活化蛋白激酶1(BMKl)通路。近年来的研究发现MAPK信号通路与神经损伤相关。ERK 1/2和p38在神经损伤的区域迅速磷酸化激活,减少神经损伤对机体带来的影响;磷酸化JNK在神经损伤部位聚集,促进神经细胞的凋亡,加重神经损伤的发生;ERK 5是细胞增殖与分化、器官发生与胚胎发育中不可缺少的信号蛋白,磷酸化ERK 5通过促进胰岛素在神经元中的表达促进神经细胞存活。除此之外MAPK各分子在不同刺激和不同疾病中的作用不同。     

Phosphorylation of hepatic AMP-activated protein kinase and liver kinase B1 is increased after a single oral dose of green tea extract to mice

We have previously shown that green and black tea extracts increase the phosphorylation of AMP-activated protein kinase (AMPK) and HMG-CoA reductase in rat hepatoma cells in culture, concomitant with a decrease in cholesterol synthesis. In the present study, we evaluated the ability of a single oral dose of green or black tea extract to promote the phosphorylation of AMPK, liver kinase B1 (LKB1, an AMPK-kinase), and HMG-CoA reductase in mouse liver. Green tea extract administered by gavage at 50 and 100 mg/kg caused a 2- to 3-fold increase in hepatic AMPK phosphorylation at 3 and 6 hours after dosing and a 1.5- to 2-fold increase in LKB1 phosphorylation at these same time points. The phosphorylation of HMG-CoA reductase at these and later time points was not significantly increased. Black tea administered by gavage at up to 250 mg/kg was ineffective in increasing hepatic AMPK phosphorylation. Both green and black tea extracts increased LKB1 phosphorylation in hepatoma cells in culture at 15 μg/mL, and black tea also increased the phosphorylation of protein kinase A in hepatoma cells. These results suggest that compounds in both tea extracts activate AMPK by activating its upstream kinase, LKB1, and that black tea may do so by first activating protein kinase A, a known kinase for LKB1. Only green tea, at 50 and 100 mg/kg, was able to activate AMPK and LKB1 in mouse liver after oral dosing, suggesting that the polymerized catechins present in black tea do not reach the liver in sufficient concentration to affect AMPK activity.