美金刚对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及丙二醛含量的影响

目的:观察非竞争性NMDA受体拮抗剂美金刚对大鼠脑缺血再灌注后迟发性脑损伤的抑制作用.方法:雄性Wistar大鼠135只,随机分为假手术组、模型组及干预组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,干预组用美金刚溶液灌胃,HE染色观察神经元形态变化,免疫组织化学染色检测神经元Caspase-3...     

PARP-1和Caspase-3在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)和Caspase-3在乳腺癌中的表达及其与临床特征的关系。方法采用免疫组化技术,检测277例乳腺癌和11例乳腺正常组织石蜡包埋标本中PARP-1及Caspase-3的表达,分析正常乳腺与乳腺癌组织中两者表达与临床参数的相关性,以及两者间的相关性。结果在277例乳腺癌组织中,PARP-1阳性表达率(62.09%,182/277)显著高于正常乳腺组织(27.27%,3/11)(P=0.009)。乳腺癌中有淋巴结转移者PARP-1阳性表达率(76.47%,130/170)高于无淋巴结转移者(48.59%,52/107),表明PARP-1与淋巴结转移相关(r=-0.286,P<0.001)。同时PARP-1在乳腺癌中的表达与组织学分级相关(r=0.018,P=0.002)。Caspase-3在正常乳腺组织的阳性表达率(72.73%,8/11)高于乳腺癌(42.24%,117/277)(P=0.046)。Caspase-3与PARP-1的表达在乳腺癌组织中呈负相关(r=-0.722,P<0.001)。结论PARP-1表达上调可能与乳腺癌的恶性生物学行为有关,Caspase-...     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Hsp70的表达及与细胞凋亡的关系

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｔｅｉｎ,Ｈｓｐ）７０的表达及与细胞凋亡的关系。方法：用线栓法制备ＭＣＡＯ模型,用免疫组化法测定Ｈｓｐ７０阳性细胞及用ＴＵＮＥＬ法测定凋亡细胞。结果：缺血２ｈ即有Ｈｓｐ７０阳性细胞,６～２４ｈ明显,４８ｈ减弱,３ｄ消失。ＴＵＮＥＬ阳性细胞于再灌注后２ｈ出现,２４～４８ｈ达高峰,７２ｈ减弱。结论：脑缺血再灌注后早期即有Ｈｓｐ７０表达及细胞凋亡发生。     

局灶性脑缺血后修复蛋白表达与细胞凋亡影响的实验研究

目的 :研究成年大鼠局灶性脑缺血脑内的增生细胞核抗原 (ProliferatingCellNuclearAntigen ,PCNA)或称修复蛋白表达。方法 :建立大脑中动脉阻塞模型 ,对大鼠局灶性脑缺血缺血 2小时再灌不同时间。检测PCNA的蛋白表达及神经元细胞凋亡 ,观察梗死区面积。结果 :在大脑中动脉阻塞再灌注 12小时单纯缺血组PCNA最高 ,随着再灌注时间的延长 ,表达逐渐下降 ,48小时PCNA少量表达但仍略高于正常对照组。脑细胞凋亡在再灌注 1小时开始出现 ,随着缺血再灌注时间延长 ,凋亡细胞越来越多。TTC染色后可见梗塞区苍白、未染色 ,梗塞区周围染色为紫红色 ,面积约 (1.0× 0 .7)cm2 。结论 :脑缺血PCNA大量表达 ,启动细胞内的DNA修复机制 ,对损伤的DNA进行修复     

局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织HIF-1α表达的观察

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor—1α,HIF—1α）的表达及意义。方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,动物分为缺血2h再灌注6h、1、2、3、4d及假手术对照组。应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白、原位杂交及RT—PCR法检测HIF-1α mRNA的表达变化。结果免疫组化及原位杂交法检测显示：大鼠缺血再灌注6h,缺血侧脑组织梗死灶周边HIF-1α及HIF-1α mRNA阳性反应已出现,随再灌注时间的延长阳性表达增强,一直持续到第3天,第4天显著下降;RT—PCR检测HIF-1α mRNA在6h后已有表达,随再灌注时间的延长,HIF-1α mRNA的表达呈上升的趋势,在第3天达高峰,第4天显著下降。结论脑缺血再灌注损伤可以诱导HIF-1α表达增强,提示HIF-1α对缺血性脑损伤有保护作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电针对局灶性脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达。方法：采用免疫组化法检测大鼠脑局灶性缺血24h后Caspase-3蛋白表达，以及电针干预后Caspase-3蛋白表达的变化。结果：大鼠局灶性脑缺血Caspase-3蛋白大量表达．电针可以降低其表达。结论：电针可能通过降低凋亡基因Caspase-3蛋白的表达而减少缺血性脑损伤。     

加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠脑组织bFGF和FGFR1表达的影响

目的：研究加减地黄饮子对局灶性脑缺血大鼠脑组织bFGF和FGFR1表达的影响。方法：采用栓线法制作大鼠局灶性脑缺血损伤模型（MCAO）。120只Wistar大鼠随机分成6组：空白组、假损伤组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药对照组，每组20只。均连续灌胃7天后，实施手术。结果：空白组、假损伤组bFGF和FGFR1呈弱阳性（＋）表达，模型组、对照组和中药高剂量组呈阳性表达（＋＋），但对照组和中药高剂量组bFGF和FGFR1表达更强，中药低剂量组呈强阳性（＋＋＋）表达。结论：说明加减地黄饮子低剂量可以明显增强缺血脑组织Bfgfey FGFR1的表达，从而保护神经组织并促进其功能修复。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3的表达及纳洛酮的影响

目的:探讨Caspase-3在缺血再灌注大鼠海马神经元中的表达及纳洛酮的影响。方法:用插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,左侧MCAO1h,再灌注23h后处死,对照组给予生理盐水,纳洛酮组给予纳洛酮,海马区Caspase-3的表达通过免疫组化来测定;缺血侧海马区凋亡细胞数采用TUNEL法测定。结果:对照组、纳洛酮组、假手术组缺血侧海马区平均密度值分别为0.130±0.012、0.062±0.004、0.053±0.006。对照组大鼠缺血侧海马区Caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),给予纳洛酮处理后,Caspase-3的表达减弱(P<0.01)。对照组缺血侧海马区许多神经元有凋亡现象,纳洛酮组凋亡神经元减少,假手术组偶见凋亡神经元。结论:短暂的脑缺血可导致海马区Caspase-3的表达增加,凋亡神经元增多。海马区Caspase-3的激活与神经元的凋亡相关,纳洛酮可抑制海马区Caspase-3的表达,减少神经元的凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血后脑组织Ref-1蛋白的表达

脑缺血后细胞死亡方式有 2种 :一是坏死 ,二是凋亡。在脑梗死中心区 ,细胞死亡以坏死为主 ,在脑梗死周边部 ,即半暗带区 ,则以凋亡为主。Ｒｅｆ 1(氧化还原因子 1,ＡＰＥ) ,是ＤＮＡ碱基切除修复通路中的多功能蛋白酶 ,在缺血性脑损伤过程中 ,由于兴奋性氨基酸增加 ,钙离子内流升高 ,大量自由基产生 ,造成了ＤＮＡ损伤 ,Ｒｅｆ 1蛋白酶免疫活性同时也下降 ,造成ＤＮＡ修复丧失 ,导致细胞凋亡[1] 。我们采用免疫组织化学方法 ,对大鼠局灶性持久性脑缺血不同时程脑组织Ｒｅｆ 1蛋白酶的表达进行了观察 ,同时采用ＴＵＮＥＬ染色 (ＴｄＴ ｍｅｄ…     

脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的影响

目的探讨脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的保护作用。方法应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,各组分别于术前3d和术后给予不同剂量药物灌胃,术后24、48.72、96h,取脑组织进行HE染色、TIC染色、测定Caspase-3表达的动态变化。结果脑心通低、高剂量组均能减少大鼠脑梗死体积（P〈0．05）,减少Caspase-3阳性细胞表达。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有保护作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区内皮抑素、血小板反应蛋白-1表达的影响

目的 观察电针对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区内皮抑素（endostatin,ES）、血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1,TSP-1）表达的调控作用及其机制。方法 将54只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组18只。利用改良线栓法复制局灶性大脑中动脉闭塞模型,电针组选取“百会”与“水沟”穴进行治疗,每次30 min,每日1次,共干预7 d。比较术后7 d各组大鼠神经功能评分,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法测量脑梗死面积,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测ES、TSP-1蛋白在大鼠脑缺血皮质区的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损体征较为显著,梗死范围明显,脑缺血皮质区ES和TSP-1蛋白表达均显著上调（P<0.05）;与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分降低（P<0.05）,梗死面积缩小（P<0.05）,脑缺血皮质区ES、TSP-1蛋白表达水平均明显下调（P<0.05）。结论 电针可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复,缩小梗死面积,其机制可能与血管新生抑制因子ES、TSP-1的表达下调有关。     

尼莫地平对沙土鼠脑缺血后细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨沙土鼠短暂脑缺血后海马区细胞凋亡与Bcl鄄2表达的改变及尼莫地平的影响。方法:52只健康沙土鼠随机分成3组,假手术组(n=12),尼莫地平组(n=20),对照组(n=20)。采用夹闭双侧颈总动脉制成全脑缺血模型。尼莫地平组及对照组均夹闭双侧颈总动脉5min,随即分别予尼莫地平注射液(1mg/kg)及等量生理盐水腹腔注射。3组分别于再灌注24、48、72、168h断头取脑,海马石蜡切片,原位末端标记法(TUNEL)测定海马CA1区锥体细胞凋亡阳性数及免疫组化法测定Bcl鄄2反应强度。结果:对照组72h见大量凋亡细胞;Bcl鄄2在72h表达最强,168h明显减少。尼莫地平组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),Bcl鄄2在24、48、72、168h均有较强表达(P<0.01)。结论:尼莫地平可显著减少沙土鼠脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的发生,并可增强Bcl鄄2的表达;脑缺血后及时应用尼莫地平治疗具有明显脑保护作用。     

芦荟多糖对脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨芦荟多糖对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用机制。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制备局灶性脑缺血模型,观察芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为变化,用免疫组化法检测大脑皮质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果芦荟多糖能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白的表达。结论芦荟多糖对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理与其影响、抑制Caspase-3的表达有关。     

尼卡地平对脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡的影响

目的　研究沙土鼠短暂性脑缺血再灌注后细胞凋亡及尼卡地平处理的影响。方法　实验动物随机分为正常组、假手术组、对照组、尼卡地平处理组。正常组不进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;假手术组只进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;对照组阻断双侧颈总动脉 15min造成完全性前脑缺血模型 ;尼卡地平处理组在脑缺血前 30min给予腹腔注射尼卡地平 2mg/kg。用TdT介导的原位末端标记 (TUNEL)法来检测死亡神经元的DNA片段。HE染色计数海马CA1区 1mm长度内正常的锥体细胞数。结果　 (1)缺血再灌注后 2～ 4d ,对照组海马CA1区正常锥体细胞数比假手术组明显减少 (P <0 .0 1)。 (2 )缺血再灌注后 2～ 4d ,尼卡地平处理组海马CA1区正常锥体细胞数明显比对照组多 (P <0 .0 1)。 (3)尼卡地平处理组明显减少缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论　完全性前脑缺血再灌注后存在细胞凋亡 ;尼卡地平可抑制脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡。     

脑缺血/ 再灌注损伤大鼠脑组织Th1/Th2 细胞平衡与PARP-1表达的相关性

目的：探讨大鼠大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型脑组织Th1/Th2细胞平衡与二磷酸腺苷核糖多聚酶-1（Poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1）表达是否存在相关性。方法：将健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组、假手术组、模型组、PARP-1抑制剂PJ34组,按再灌注不同时间点分为6、12、24、48、72h五个亚组,各组取材前进行神经功能损伤评分,氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色评价脑梗死体积,定量RT-PCR技术检测脑缺血/再灌注损伤病灶中PARP-1 mRNA的表达,Western Blot技术检测PARP-1聚合体蛋白的表达,ELISA技术测定干扰素-γ（interferon-γ,INF-γ）、白介素4（interleukin 4,IL4）水平。结果：与假手术组比,模型组神经功能损伤评分、脑梗死体积、PARP-1表达及炎性反应效应细胞（helper T cell 1,Th1）与辅助性效应细胞（helper T cell 2,Th2）的比值均显著增加（P<0.01）;与模型组比,PJ34组梗死体积明显减小（P<0.01）,PARP-1表达、Th1/Th2比值均显著降低（P<0.01）;Th1/Th2与PARP-1水平呈显著正相关（ r=0.984,P<0.05）。结论：MCAO大鼠脑组织Th1 /Th2细胞平衡状态与PARP-1表达存在相关性。     

依达拉奉在大鼠局灶性脑缺血细胞中对Drp1和Mfn2动态变化的影响

目的 探讨依达拉奉在大鼠局灶性脑缺血细胞中对Drp1及Mfn2动态变化的影响及其保护机制。方法 采用线栓法建立大脑中动脉缺血模型,并将72只大鼠采用数字表法随机分为假手术组、脑缺血组、依达拉奉组,每组又根据时间的不同分为1、3、7天3个不同亚组。HE染色观察大脑皮质神经元形态结构,Western blot法检测Drp1及Mfn2的蛋白含量,RT-PCR检测Drp1及Mfn2mRNA基因的表达情况。结果 脑缺血组的Drp1蛋白表达量明显高于假手术组及依达拉奉组（P<0.05）,在第1、3、7天中的表达呈递增的趋势,给予依达拉奉治疗后,可以下调Drp1蛋白的表达,差异有统计学意义（P<0.05）;脑缺血组的Mfn2蛋白表达量明显低于假手术组及依达拉奉组（P<0.05）,在第1、3、7天中的表达呈递减的趋势,给予依达拉奉治疗后可上调Mfn2蛋白的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR表达结果与Western blot法检验结果一致。结论 依达拉奉治疗大鼠脑缺血可能与依达拉奉减少氧自由基生成、维持线粒体动态平衡使Drp1表达减少,Mfn2表达增多有关,从而发挥神经保护作用。     

龙蛭汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-1和IL-18蛋白表达的影响

目的 通过使用龙蛭汤对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠进行干预,观察脑组织中焦亡相关蛋白Caspase-1和IL-18表达情况,探讨其对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的保护作用.方...     

大鼠永久性脑缺血后白细胞介素-1β表达的研究

目的探讨大鼠永久局灶性脑缺血后皮质白细胞介素-1β(IL-1β)基因的表达变化规律及其机制。方法采用RT-PCR方法检测大鼠大脑中动脉(MCA)线栓闭塞后不同时相MCA供血区皮质及对侧皮质IL-1β基因的表达,同时用ELISA法测定相同时相IL-1β蛋白的含量。结果缺血侧IL-1βmRAN在各缺血时间点皆有表达,缺血1 h即有明显表达(0.34±0.05),此后表达逐渐增强,缺血24 h达高峰,密度比值为1.23±0.15。对应时相IL-1β值(pg/g),缺血3 h明显提高(384.1±57.7),缺血48 h达高峰(802.3±61.7),缺血5 d仍在高水平(753.9±46.5)。结论局灶性脑缺血时IL-1βmRNA表达一过性增高,IL-1β蛋白量平行延后增高,且持续时间较长,说明IL-1β参与脑缺血损害不仅仅局限于急性期。     

酸枣仁皂苷A对大鼠脑缺血海马区氨基酸递质水平及细胞凋亡的影响

目的：观察酸枣仁皂苷A对大鼠脑缺血海马区兴奋性氨基酸及细胞凋亡的影响,探讨酸枣仁皂苷A对脑缺血损伤保护的作用机制。方法：建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注损伤模型,将健康SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、尼莫地平组、酸枣仁皂苷A组,四组于脑缺血再灌注后12、24、48小时、4天、7天,各取6只大鼠断头取脑,测定大鼠缺血侧脑海马区氨基酸递质水平及细胞凋亡数。结果：除假手术组外,与模型组比较,尼莫地平组和酸枣仁皂苷A组各观察时间点缺血侧脑海马区谷氨酸（Glu）及细胞凋亡均明显降低（P〈0．05）,而γ-氨基丁酸（GABA）在各时间点均明显升高;与尼莫地平组比较,酸枣仁皂苷A组大鼠缺血侧海马区Glu降低（P〈0．05）,酸枣仁皂苷A组细胞凋亡数降低更显著（P〈0．05）,两组GABA比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：酸枣仁皂苷A能调节脑缺血损伤后海马区氨基酸水平的释放,抑制细胞凋亡。