全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的观察不同浓度全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）活性的影响。方法以凝血酶和不同剂量的全蝎纯化液同时作用于培养的人脐静脉内皮细胞（VEC-340）,12h后收集细胞液测定t-PA和PAI活性。结果与空白组比较,凝血酶组t-PA活性降低,PAI活性增高,差异有统计学意义（P〈0.01）,与凝血酶组比较,全蝎大剂量、中剂量、小剂量组t-PA活性均增高,PAI活性降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论凝血酶对VEC-340细胞具有损伤作用,可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。全蝎纯化液可促进血管内皮细胞释放t-PA,抑制PAI分泌,对纤溶平衡具有调节作用。提示这可能与全蝎纯化液增加血管内皮细胞抗血栓能力有关。     

中药脑心通对血管内皮细胞一氧化氮和内皮素-1的影响

目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)分泌量的影响.方法 以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入Ox-LDL(50 mg/L)制备细胞损伤模型,并以不同浓度脑心通含药血清预先进行干预,分别采用硝酸还原酶法和放免法检测细胞上清液中的NO及ET-1的含量.结果 Ox-LDL作用HUVEC 24h后,HUVEC上清液中NO含量明显降低,而ET-1的含量明显升高,均明显高于正常对照组(P＜0.05);而预先加入脑心通含药血清或阿托伐他汀药液组NO含量明显升高,且在加入步长脑心通含药血清组,这种作用在一定剂量范围内随药物剂量的增加而增强(P＜0.05).结论 步长脑心通能够通过促进内皮细胞NO的合成与释放从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减轻或抑制动脉粥样硬化的形成与发展.     

蕨麻正丁醇部位下调缺氧内皮细胞HIF-1α及ET-1表达

[目的]探讨蕨麻正丁醇部位对内皮细胞缺氧损伤的保护机制。[方法]采用人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)建立缺氧损伤实验模型,实验设常氧对照组、缺氧模型组、高(3.00 g/L)、中(1.50 g/L)、低浓度(0.75 g/L)蕨麻正丁醇部位组,复方丹参(3.0 g/L)组。胎盘兰染色法测定各组细胞存活率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)m RNA和内皮素-1(ET-1)m RNA表达,免疫细胞化学染色及Western Blot方法检测HIF-1α蛋白表达。放免法测定培养基中ET-1的活性。[结果]与对照组比较,缺氧模型组细胞存活率显著降低,HIF-1α和ET-1m RNA及蛋白表达增加(P0.01);蕨麻正丁醇部位各剂量组与缺氧模型组比较,细胞存活率显著升高,高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组细胞HIF-1α和ET-1 m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01)。[结论]在缺氧状态下,蕨麻正丁醇部位可能通过HIF-1α途径调控靶基因的表达,从而发挥保护作用。     

尿酸利仙含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞VCAM-1 mRNA表达的影响

目的：观察中药尿酸利仙（含药血清）对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞（Endothelial cell of vessels，ECV）血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）mRNA表达的影响。方法：①体外培养人血管内皮细胞，用终浓度为1070μmol／L的尿酸盐溶液刺激，同时用低、中、高浓度（2．5％、5％、10％）尿酸利仙含药血清的培养液进行干预，用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）技术测定细胞VCAM-1的mRNA表达。结果：尿酸盐可诱导血管内皮细胞VCAM-1的mRNA高表达，差异有极显著的统计学意义（P〈0．01）；各浓度尿酸利仙含药血清干预组细胞VCAM-1的mRNA表达均较尿酸盐刺激组下降，差异有统计学意义。结论：尿酸利仙含药血清可抑制VCAM-1过度表达，是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤及抑制炎症反应的机制之一。     

丹参对子痫前期血清诱导的内皮细胞分泌NO及ET-1的影响

目的 探索丹参对妊娠期高血压内皮细胞的保护作用。方法 用丹参溶液（0、100、200、300 mg/L）预孵育脐血管内皮细胞,实验分为3组：空白对照组（对照组）8例,正常孕妇血清对照组（正常组）14例, 重度子痫前期孕妇血清观察组（观察组）14例。检测各培养上清液中的一氧化氮（NO）及血管内皮素-1（ET-1）。结果 观察组NO含量低于对照组及正常组,ET-1含量高于对照组及正常组（P<0.05）。观察组丹参200 mg/L 血清组的NO较丹参0 mg/L血清组增加（P<0.05）, 丹参300 mg/L血清组NO比丹参0、100、200 mg/L血清组皆增加（ P<0.05）。观察组丹参300 mg/L 血清组ET-1比丹参0、 100 mg/L血清组减少（P<0.05）。结论 丹参能使经子痫前期血清诱导的离体脐静脉的内皮细胞产生更多的NO,减少ET-1的分泌。     

土茯苓抑制白介素-1诱导的血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的表达

目的:探讨中药土茯苓对白介素-1(IL-1)诱导的血管内皮细胞表面的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达升高的保护作用.方法:以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)为研究对象,采用细胞培养、免疫荧光染色、中药血清药理学方法、流式细胞仪等技术,观察IL-1对培养的HUVEC ICAM-1表达的影响并研究不同时间点及不同浓度的含药血清的抑制作用.结果:IL-1使HUVEC的ICAM-1的表达明显升高,同时含药血清组的ICAM-1的表达比空白血清组低.结论:土茯苓含药血清能拮抗IL-1致内皮细胞ICAM-1表达升高.土茯苓的作用部分是多种成分作用于多个靶点的综合效应.     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞iNOS mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）iNOS及ET-1 mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞iNOSmRNA及ET-1 mRNA。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少iNOSmRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

搜风祛痰法中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）核转录因子（NF-κB）mRNA及内皮素-1（ET-1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞NF-κB mRNA及ET-1 mRNA,随机分为5组：正常对照组,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组,低浓度中药血清＋AngⅡ组,中浓度中药血清＋AngⅡ组,高浓度中药血清＋AngⅡ组。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少NF-κB mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

肺心通对慢性肺源性心脏病模型大鼠一氧化氮、内皮素-1及血管内皮细胞生长因子的影响

目的：探讨肺心通对慢性肺源性心脏病（CPHD）大鼠的治疗效果及其作用机理。方法：50只Wistar大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、肺心通高、中、低剂量组，以2％野百合碱（MCT）按60mg／kg1次腹腔注射复制CPHD大鼠模型。同时给模型组、肺心通高、中、低剂量组灌胃相应药物，连续用药21d。测定大鼠血清和肺组织匀浆中-氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）的含量；测定肺小动脉及支气管平滑肌血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达；观察肺组织病理形态学改变。结果：肺心通可显著提高CPHD模型大鼠的NO含量；降低ET-1的含量；降低大鼠肺小动脉及支气管平滑肌中VEGF的表达；改善肺组织的病理改变。结论：肺心通对CPHD大鼠有较好的治疗作用。     

水蛭素对凝血酶造成的血管内皮细胞单层通透性增高的抑制作用

观察水蛭素对凝血酶造成的血管内皮细胞单层通透性增高的抑制作用。从新生牛主动脉分离获得单个内皮细胞 ,培养于微孔滤膜上直至形成致密单层。通过灌流Hanks液或含 5g·L-1 白蛋白的Hanks液后 ,测定经 1 0U/ml凝血酶溶液处理或经 1 0U/ml凝血酶溶液加 1 0U/ml水蛭素处理的液体滤过系数 (Kf)、液体滤过流量(Jv)和蛋白质渗透压反射系数(σ)。结果 :内皮单层经凝血酶处理后 ,Kf和Jv降低 ,σ升高 ;而水蛭素能够抑制因凝血酶造成的Kf和Jv降低 ,以及σ升高。提示 :凝血酶能够引起血管内皮单层通透性的增加 ,而水蛭素能够减轻凝血酶造成的内皮单层通透性的增加 ,其作用机制尚需进一步研究     

中药含药血清对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的观察中药尿酸利仙(含药血清)对尿酸盐诱导的人血管内皮细胞(endothelial cell of vessels, ECV)细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule,ICAM-1)基因和蛋白表达的影响.方法1070μmol/L尿酸盐溶液刺激血管内皮细胞,同时用含不同浓度(2.5%、5.0%、10.0%)中药含药血清的培养液进行干预,分别用流式细胞术(FCM)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定细胞ICAM-1的表达.结果①血管内皮细胞在尿酸盐刺激下,ICAM-1基因和蛋白表达均较空白对照组显著上调.② 5.0%浓度中药尿酸利仙含药血清可显著抑制尿酸盐诱导的血管内皮细胞ICAM-1基因表达(P＜0.01);2.5%、10.0%浓度的尿酸利仙含药血清均可显著抑制ICAM-1蛋白表达(P＜0.01).结论中药尿酸利仙含药血清抑制ICAM-1表达的作用是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一.     

化瘀祛痰颗粒剂对血管内皮细胞表达MCP-1的影响研究

[目的]通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。[方法]以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT-PCR方法观察各组MCP-1mRNA表达情况;用Westen Blot方法检测MCP-1蛋白表达情况。[结果]与空白组比较,阳性对照组MCP-1mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组MCP-1mRNA和蛋白表达较阳性对照组明显降低(P<0.05);血清各组在影响MCP-1蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响MCP-1mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。[结论]化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制MCP-1,减少单核细胞聚集起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药对血管紧张素II致体外培养人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响。方法:制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs 2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX-1 mRNA,随机分成5组:正常对照组,AngⅡ组,低浓度药物血清+AngⅡ组中浓度药物血清+AngⅡ组高浓度药物血清+AngⅡ组。结果:活心汤可抑制AngⅡ所致的内皮细胞损伤,减少LOX-1 mRNA的表达。结论:活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,可以保护血管内皮功能。     

复方丹参饮对胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的研究

目的:探讨复方丹参饮对胰岛素抵抗(IR)大鼠血清中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。方法:将60只Wistar雄性大鼠适应性的喂养1周,随机分为生理盐水组、胰岛素抵抗组、复方丹参饮预防组(中药预防组)复方丹参饮治疗组(中药治疗组)、罗格列酮组(西药对照组),每组分为12只。采用高脂高糖高胆固醇饮食喂养,建立大鼠IR模型。喂养16周以后采用酶联免疫法检测各组Wistar大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量。结果:与生理盐水组比较,除复方丹参饮预防组差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量均升高(P<0.05),有统计学意义;与胰岛素抵抗组相比较,西药对照组、中药治疗组与中药预防组均能减少大鼠血清中ICAM-1、VCAM-1的含量(P<0.05)。结论:认为复方丹参饮具有抑制大鼠血清血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的过度表达作用,对胰岛素抵抗大鼠的血管内皮细胞具有保护功效。     

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1mRNA及ET-1 mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ致体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白1（LOX－1）mRNA及内皮素－1 ET－1）mRNA表达的影响。方法制备兔活心汤舍药血清。采用酶消化法培养HUVECs2～3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX－1 mRNA及ET－1 mRNA。随机分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、低浓度中药血清＋AngⅡ组、中浓度中药血清＋AngⅡ组、高浓度中药血清＋AngⅡCR。结果活心汤可抑制AngⅡ导致的内皮细胞损伤,减少LOX—1 mRNA及ET-1 mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。     

全蝎纯化液对大鼠静脉血栓形成TXB2、6-keto—PGFa的影响

目的观察全蝎纯化液对大鼠静脉血栓形成血栓素B2（TXB2）、6酮-前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）的影响,阐述全蝎纯化液抗静脉血栓形成的作用机制。方法SD大鼠随机分为空白对照组、模型组与全蝎纯化液大、中、小剂量组,采用结扎大鼠腹腔主静脉造成静脉血栓模型,观察其对血栓重量及TXB2、6-keto—PGF1a等凝血指标的影响。结果全蝎纯化液大、中、小剂量组TXB。水平显著降低,6-keto—PGF1a水平明显上调,与空白对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,而与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。全蝎纯化液各剂量组能明显降低大鼠静脉血栓的重量,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论全蝎纯化液具有明显的抑制血栓形成的作用,提示其作用机制可能与血管内皮损坏及TXB2、6-keto—PGF1a含量有关。     

活血胶囊对兔动脉粥样硬化斑块血管内皮细胞生长因子和血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的:探讨活血胶囊对兔动脉粥样硬化斑块的作用及其稳定动脉粥样硬化斑块的机制。方法:53只健康雄性日本大耳白兔随机分为空白组及实验组。空白组喂普通饲料,实验组喂高脂饲料,10周末,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);随后将实验组兔分为4组:模型组,辛伐他汀(2.2 mg·kg-1·d-1),活血胶囊高(1.5 g·kg-1·d-1)、低剂量组(0.5 g·kg-1·d-1),同时继续喂高脂饲料。20周末,检测血清TC,TG,LDL-C,处死动物,取主动脉标本,测定内膜/中膜厚度比,用免疫组化法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF),血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)在动脉斑块中的表达。结果:与正常组比较,模型组血清TC,TG,LDL-C,内膜/中膜厚度比,VEGF,VCAM-1在动脉斑块中的表达显著升高,差异具有显著性(P<0.01);与模型组比较,活血胶囊组TC,TG,LDL-C,主动脉内膜/中膜厚度比均明显低于模型组(P<0.05);高剂量组与低剂量组比较,差异具有显著性(P<0.05);免疫组化染色发现模型组、活血胶囊高、低剂量组、辛伐他汀组均可见染成黄褐色的VEGF,VCAM-1阳性表达信号,主要存在于粥样斑块区,空白组家兔主动脉VEGF及VCAM-1阳性表达几乎为零,积分吸光度结果提示3个药物干预组表达均比模型组减少(P<0.01,P<0.05)。结论:活血胶囊可抑制VEGF,VCAM-1在兔胸主动脉的表达,抑制血管新生和炎症反应,这可能是该药延缓AS进程,稳定斑块的作用机制之一。     

七龙天对实验性肺动脉高压大鼠ET-1、NOS的影响

目的:观察七龙天对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠内皮素-1(ET-1)、血管内皮细胞一氧化氮合成酶(NOS)的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组(A)、模型组(B)、波生坦组(C)、七龙天低剂量组(D)、七龙天中剂量组(E)、七龙天高剂量组(F)。A组大鼠置于正常环境中饲养,B、C、D、E、F组均造模。采用常压低氧法制模,从制模第1天始给药,连续3周,A、B两组均给予蒸馏水3 m L/(只·d)。在直视下行右心导管术测定肺血流动力学参数,及RT-PCR法检测肺组织中NOS、ET-1 mRNA表达。结果:七龙天及波生坦均可明显降低大鼠肺动脉高压,且以七龙天高剂量组效果为佳,疗效呈药物剂量依赖表现。各组NOS、ET-1表达量与肺动脉压具有相关性,但二者在高剂量七龙天调节至正常范围时,肺动脉压仍未恢复正常水平。结论:不同剂量七龙天均可降低肺动脉高压,且高剂量七龙天疗效优于波生坦。其降压机制与降低NOS及ET-1表达量有关,但仍可能受其他炎症因子及血管新生因子影响。     

尼古丁对血管内皮细胞PAI-1表达水平的影响

目的研究尼古丁对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的影响。方法 HUVECs培养后接种于25 cm2培养瓶,随机分为对照组（培养液中不加任何干预）和尼古丁组（培养液中加入尼古丁,使其终浓度100μmol/L）,分别孵育12 h后收集各组细胞及细胞上清液,采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析法（ELISA）测定各组细胞上清液中PAI-1的抗原浓度;采用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组细胞PAI-1mRNA的表达水平。结果尼古丁组PAI-1含量在12h显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0.01）,且PAI-1 mRNA的表达显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0.01）。结论尼古丁损伤血管内皮细胞,显著上调HUVECs PAI-1 mRNA的转录和PAI-1蛋白的分泌,抑制内皮细胞的纤溶活性。     

鸢尾苷元对氧化损伤血管内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的:观察鸢尾苷元对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致氧化损伤血管内皮细胞(VEC)的保护作用及对MCP-1和ICAM-1mRNA表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用体外培养大鼠VEC,加入ox-LDL建立VEC氧化损伤模型,加入不同剂量的鸢尾苷元,通过MTT比色法观察细胞活力,并采用RT-PCR方法检测VECMCP-1和ICAM-1mRNA的表达情况。结果:鸢尾苷元对ox-LDL所致的VEC损伤具有明显的保护作用,并显著抑制ox-LDL诱导VECMCP-1和ICAM-1mRNA的过度表达。结论:鸢尾苷元抗VEC氧化损伤和抑制MCP-1,ICAM-1的过度表达是其抗动脉粥样硬化的重要作用机制。