核心蛋白聚糖对哮喘小鼠气道重塑的影响

目的研究核心蛋白聚糖(decorin)对哮喘小鼠气道重塑的影响,探讨decorin在哮喘治疗中的价值。方法将30只雌性昆明系小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘气道重塑组(B组)及decorin干预组(C组),每组10只。B组和C组小鼠用卵蛋白致敏并反复激发哮喘,C组给予decorin干预。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子β1(TGF-β1)水平;苏木精-伊红染色观察肺组织切片病理改变;Masson染色测定气道胶原沉积程度;图像分析软件测定气道重塑指标;免疫组化法观察肺组织TGF-β1的表达。结果 B组小鼠血清及BALF中TGF-β1水平、气道管壁总厚度、气道内壁厚度、气道平滑肌厚度和胶原沉积以及肺组织TGF-β1表达均较A组显著增高(F=32.36～785.57,t=-18.01～-7.86,P<0.01),而C组较B组显著降低(t=5.58～9.57,P<0.01)。结论 decorin可减轻哮喘小鼠气道重塑。     

慢性哮喘小鼠EGFR的表达及地塞米松对其的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在慢性哮喘气道重建中的作用. 方法:建立小鼠慢性哮喘模型,致敏前1 h气道内滴入地塞米松2 mg/kg,最后一次激发24 h后处死动物,常规病理切片观察小鼠肺内炎症情况、气管壁厚度及气道平滑肌厚度,ELISA法测定肺泡灌洗液中TGF-α的浓度,RT-PCR观察小鼠肺部EGFR mRNA的表达,免疫组化及Western Blot观察EGFR蛋白的表达. 结果:慢性哮喘组小鼠气道支气管及血管周围大量炎症细胞聚集、气管壁及气道平滑肌增厚、肺泡灌洗液中TGF-α浓度增高,肺组织EGFR mRNA及EGFR蛋白的表达增高(P<0.01). 哮喘小鼠致敏前使用地塞米松可减轻气道炎症,减少气管壁及气道平滑肌的增厚,肺泡灌洗液中TGF-α浓度、肺组织磷酸化EGFR蛋白的表达较慢性哮喘组均有所下降(P<0.01). 结论:慢性哮喘小鼠出现气道重建,早期使用地塞米松可以预防气道重建,降低BALF中TGF-α的浓度、抑制肺组织EGFR的表达和活化.     

苦味受体激动剂苦精对哮喘气道炎症及重塑的影响

目的 观察苦精对哮喘小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、气道上皮下胶原纤维及气道炎症的影响.方法 45只BALB/c小鼠分为3组,每组15只.A组:正常对照;B组:哮喘模型组;C组:哮喘加苦精干预1周.采用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织α-SMA的沉积,用马松(Masson)染色方法观察小鼠气道胶原纤维的沉积,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠气道炎性程度,并对其进行计算机图像半定量分析.结果 C组小鼠肺内细支气管壁α-SMA、胶原纤维沉积、气道炎症程度较B组明显减少,图像半定量分析结果与B组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 苦精可以改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑.     

麻黄-甘草药对抑制过敏性哮喘的效应及机制初探

目的 研究麻黄-甘草药对对过敏性哮喘的影响,并初步探讨其作用机制。方法 建立屋尘螨（HDM）诱导的过敏性哮喘模型,造模同时给予麻黄-甘草药对提取物（MG）。使用无创肺功能仪检测小鼠气道反应性,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肺组织的胶原沉积情况,进行血液嗜酸性粒细胞（EOS）计数,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1及血清IgE的表达,免疫组化检测肺组织E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结果 MG可显著降低气道高反应性,抑制BALF及肺组织IL-4、IL-5和IL-13的表达,降低血液EOS及血清IgE的表达,并且减轻肺组织的炎症浸润及胶原沉积。进一步结果表明MG可抑制肺组织TGF-β1的表达,上调E-cadherin以及下调N-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达。结论 MG能够通过抑制支气管上皮间质转化,从而缓解气道的炎症状态以及改善哮喘的气道重塑,进而发挥对过敏性哮喘的治疗作用。      

气道平滑肌细胞TGF-β1表达与COPD气道重塑关系

目的探讨气道平滑肌细胞转化生长因子β1(TGF-β1)表达在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑中的作用。方法非COPD、COPD男性肺癌病人各15例,取其肺叶切除后的外周肺组织,苏木精-伊红染色,光镜下观察气道重塑情况并应用图像处理系统进行形态定量;应用免疫组织化学方法检测支气管平滑肌细胞中TGF-β1的表达。结果 COPD组肺支气管管壁厚度占外径的百分比(WT%)和支气管壁横断面积占支气管总面积的百分比(WA%)均明显高于非COPD组,差异有显著性(t=10.93、15.35,P<0.01)。COPD组支气管平滑肌细胞的TGF-β1表达高于非COPD组,差异有显著意义(t=17.67,P<0.01)。一秒钟用力呼气容积占预计值的百分率(FEV1.0)%与WT%、WA%、TGF-β1均呈负相关(r=-0.787、-0.899、-0.846,P<0.01);TGF-β1与WT%、WA%呈正相关(r=0.837、0.915,P<0.01)。结论 COPD气道重塑的病理特征主要为小气道平滑肌不规则增生和细胞外基质沉积,TGF-β1在COPD的发病中起重要作用。     

TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化

[摘要] 目的 探讨TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化,及其在哮 喘发病中的可能机制。方法　以卵蛋白雾化复制哮喘模型, 在激发哮喘2 、4、8周后处死,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平, 用免疫组织化学染色法检测支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4、Smad7的蛋白表达,同时用图像分析法测量大鼠气道形态学参数。结果　大鼠哮喘激发后2 周开始出现气道平滑肌增厚, 随着激发时间的延长,其气道平滑肌逐渐增厚。同时,哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4的蛋白表达以及TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平逐渐升高, 而Smad7的蛋白表达逐渐下降,呈现一定的动态变化。结论　哮喘气道重塑的改变是一个动态的过程,TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中呈现动态变化过程,其中TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4与气道重塑呈正相关,而Smad7则与气道重塑呈负相关。     

肺康颗粒对慢阻肺模型大鼠气道重塑及转化生长因子β_1的影响

[目的]观察肺康颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道重塑及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响.[方法]将清洁级SD大鼠40只随机分为正常对照组、COPD模型组,肺康颗粒高、低剂量组(剂量分别为13、3.25g·kg-1·d-1),每组10只.采用熏香烟、气道内多次滴入脂多糖及灌服番泻叶法复制大鼠COPD肺脾两虚型模型.光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学变化并测量肺组织小气道管壁厚度;采用免疫组织化学法并结合图像分析技术测定大鼠肺组织、肺泡巨噬细胞、支气管黏膜上皮TGF-β1的表达.[结果]与正常对照组比较,模型组大鼠小气道管壁厚度及支气管肺组织TGF-β1的表达均有显著性升高(P<0.05);肺康颗粒高、低剂量组上述指标均显著低于模型组(P<0.05);但肺康颗粒高、低剂量组间支气管肺组织TGF-β1表达无显著性差异(P>0.05).模型组大鼠气道和肺组织出现慢性炎症改变和结构破坏,肺康颗粒高、低剂量组对上述病理变化有明显改善作用.[结论]肺康颗粒治疗COPD的作用与其能在一定程度上改善模型大鼠的气道重塑,降低TGF-β1的表达有关.     

α-平滑肌肌动蛋白在呼吸道合胞病毒感染小鼠肺组织中的表达及意义

目的:通过检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺组织的动态表达,观察α-SMA在RSV感染后肺组织的变化,探讨α-SMA是否参与了RSV感染小鼠的发病过程。方法:随机将48只雌性BALB/c小鼠分成对照组(24只)及RSV感染组(24只),其中RSV感染组小鼠鼻腔滴入RSV 100μl,对照组小鼠鼻腔滴入生理盐水100μl,分别在四个时间点(第4天、第8天、第14天、第28天)处死小鼠,留取肺组织,进行HE染色及Masson染色,免疫组化检测肺组织α-SMA的表达。结果:①Masson染色法计算气道外周胶原沉积面积百分比:对照组各时间点气道外周胶原沉积面积百分比比较无统计学差异(P>0.05);RSV感染组各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。RSV感染组在感染的第4天、第8天及第14天气道外周胶原沉积面积百分比逐渐增加,与对照组相应时间点两两比较,差异有统计学意义(P<0.05),感染第28天与对照组相应时间点比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②肺组织α-SMA表达:对照组小鼠肺组织α-SMA各时间点两两比较,表达无差异无统计学意义(P>0.05);RSV感染组小鼠肺组织α-SMA平均光密度值在第4天、第8天和第14天呈逐渐上升趋势,第14天时达高峰,至第28天下降,各时间点两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RSV感染组小鼠肺组织α-SMA表达与对照组比较,第4天、第8天、第14天RSV感染组与对照组各相应时间点相比较差异有统计学意义(P<0.05),感染第28天与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:α-SMA参与了RSV感染小鼠气道炎症及胶原沉积过程。     

吸入糖皮质激素对哮喘大鼠气道重塑的影响

目的研究糖皮质激素对气道重塑指标α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、OVA组即哮喘模型组和布地奈德组各10只。采用免疫组化法测定肺组织中α-SMA的表达水平;酶联免疫吸附法测定成纤维细胞提取物中I型胶原的表达强度;并研究布地奈德(BUD)干预治疗后气道重塑指标α-SMA和I型胶原的表达水平。结果①OVA组肺中支气管的α-SMA的表达较正常对照组增强(P<0.05);布地奈德组肺中支气管的α-SMA的表达较OVA组减弱(P<0.05)。②OVA组的成纤维细胞(LF)提取物中的I型胶原含量高于正常对照组(P<0.05);布地奈德组肺中支气管的I型胶原含量低于OVA组(P<0.05)。结论布地奈德降低α-SMA和I型胶原的表达,能抑制气道重塑的发生。     

地塞米松对哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨地塞米松干预对哮喘小鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖及转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法建立哮喘小鼠气道重塑模型,实验分为对照组、哮喘组和地塞米松组。测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞（EOS）计数及活性TGF-β1表达的变化,行HE染色及PCNA、TGF-β1免疫组化染色,图像分析测定管腔基底膜周长（Pbm）、气管壁总面积（WAt）、气道平滑肌面积（WAm）、ASMC核数（N）及TGF-β1在ASMC的灰度值。结果哮喘组EOS计数明显升高,出现管壁、平滑肌层明显增厚及ASMC增殖等气道重塑的特征,与TGF-β1的表达呈正相关。地塞米松组与哮喘组比较炎症反应减轻,管壁、平滑肌层增厚及ASMC增殖减少（P均小于0.05）,TGF-β1表达减弱（P〈0.05）。与对照组间比较差异无显著性（P均大于0.05）。结论反复的变应原吸入可导致气道重塑尤其是ASMC增殖,TGF-β1在ASMC增殖中可能具有重要作用,地塞米松干预可减缓气道重塑尤其是ASMC增殖的发生。     

哮喘大鼠血清、支气管肺泡灌洗液及肺组织中转化生长因子-β1与哮喘气道重塑

目的 观察哮喘大鼠模型血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量及肺组织中TGF-β1的表达,分析其相关性及与哮喘气道重塑的关系,为临床哮喘的诊断和治疗提供理论依据.方法 Wistar大鼠随机分为2组,正常对照组和哮喘模型组,每组20只.用卵蛋白(OVA)致敏和激发制成哮喘大鼠模型,用Elisa法测定血清及BALF中TGF-β1的含量,免疫组化法测定肺组织中TGF-β1的表达,Masson染色观察胶原沉积的情况,计算机图像分析系统评价呼吸性细支气管平滑肌厚度及上皮损伤程度评分等气道重塑指标.结果 造模后,与对照组相比模型组血清中TGF-β1的含量明显减低(P<0.05);BALF中TGF-β1的含量增加(P<0.01);肺组织中TGF-β1的表达增多(P<0.01).哮喘大鼠气道黏膜上皮损害、气道平滑肌厚度、气道胶原蛋白的沉积较对照组明显增加.结论 BALF中TGF-β1的含量增加、肺组织中TGF-β1的表达增加,加重了哮喘气道重塑;血清中TGF-β1含量减少,提示可以通过检测血清中TGF-β1为哮喘的诊断提供依据、间接了解气道重塑.     

百部生物碱对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的保护作用

对叶百部总生物碱及其主要成分新对叶百部碱对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的保护作用进行研究,并采用细胞模型初步探讨其作用机制。实验分为假手术组、模型组、总碱组(60 mg/kg)和新对叶百部碱低、高(10、20 mg/kg)剂量组,泼尼松(6.67 mg/kg)为阳性对照药,以肺组织羟脯氨酸含量、TGF-β1水平、炎性水平、胶原沉积和α-SMA表达等为指标考察其抗肺纤维化效果。结果表明,总碱和新对叶百部碱均能显著改善模型小鼠的肺组织炎症和损伤,降低羟脯氨酸含量和胶原沉积;新对叶百部碱能显著降低模型小鼠肺组织α-SMA表达和TGF-β1水平。初步机制研究表明,新对叶百部碱能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞中α-SMA的升高,表明抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化是其作用机制之一。     

荷包牡丹碱对哮喘小鼠肺组织α-SMA及气道重构的影响

目的 通过观察鼻内注射γ-氨基丁酸受体(GABAR)特异性拮抗剂荷包牡丹碱对慢性哮喘模型小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在转录水平及蛋白水平表达及气道重构的影响,探讨拮抗剂在哮喘气道重构中的治疗作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、拮抗剂干预组和激素干预组,用卵蛋白(OVA)致敏激发建立小鼠哮喘模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫组化的方法研究肺组织α-SMA的表达及气道形态学参数的改变.结果 ①与正常对照组比较,在激发哮喘后哮喘模型组肺组织α-SMA的表达升高(P＜0.05);与哮喘模型组相比较,各药物干预组α-SMA的表达均降低(P＜0.01);拮抗剂干预组和激素干预组比较,小鼠肺组织α-SMA表达无明显差异(P＞0.05);②与正常组比较,哮喘模型组支气管基底膜周径(Pbm)、管壁总面积(Wat)、内壁面积(Wai)及平滑肌面积(Wam)均增高(P＜0.05);与哮喘模型组比较,激素干预组气道形态学参数均下降(P＜0.01),拮抗剂组气道平滑肌面积和管壁总面积下降(P＜0.05),各药物干预组比较无明显差异(P＞0.05).结论 哮喘小鼠肺组织α-SMA过量表达与哮喘发生密切相关,荷包牡丹碱可以抑制慢性哮喘模型小鼠α-SMA的表达及气道形态结构改变,作用与吸入性皮质激素相似.提示GABAR通过上调α-SMA表达,促进气道平滑肌收缩及增生,参与气道重构的调节.     

银杏叶提取物对哮喘小鼠气道重塑的影响及机制

目的:探讨哮喘小鼠气道重塑与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系以及银杏叶的干预作用.方法:建立哮喘小鼠气道重塑模型,40只BALB/c小鼠按随机数字法分为4组:对照组,哮喘组,银杏叶干预组,地塞米松干预组.以鸡卵清蛋白(OVA)致敏并激发制备小鼠慢性哮喘模型.对肺组织切片行苏木精-伊红染色观察气道重塑情况.RT-PCR检测各组小鼠肺组织MMP-9 mRNA表达.结果:哮喘组动物出现管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等气道重塑的特征性改变,MMP-9 mRNA水平增高.地塞米松干预组和银杏叶干预组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显,MMP-9 mRNA水平表达降低,与对照组比较差异有统计学意义.结论:长期吸入变应原可导致气道重塑,MMP-9在气道重塑中发挥了作用,银杏叶的干预作用说明在血小板活化因子(PAF)和MMP-9之间可能存在某种联系.     

miR-23b-5p通过靶向下调FN1缓解支气管哮喘气道重塑

目的 探讨miR-23b-5p靶向下调纤维连接蛋白1 (FN1)对支气管哮喘（简称哮喘）气道重塑的影响。方法 将BALB/c小鼠随机分为正常对照组和哮喘组,每组6只。Masson染色观察气道壁周围胶原沉积水平。ELISA测定白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、血管内皮生长因子（VEGF）水平。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肺组织中miR-23b-5p表达水平。免疫组织化学染色、Western blotting检测FN1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织中的表达。TargetScan网站预测miR-23b-5p靶基因,双荧光素酶报告实验验证。转染miR-23b-5p模拟物和抑制剂于人支气管平滑肌细胞（HBSMC）后,Western blotting检测FN1表达水平。结果 与正常对照组相比,哮喘组小鼠气道上皮下胶原沉积,IL-6、TNF-α、TGF-β1、VEGF表达显著增高（P <0.001）,miR-23b-5p表达显著降低（P <0.05）。免疫组织化学染色、Western blott...     

木犀草素对哮喘气道重塑小鼠模型气道IL-13Rα2表达的影响

目的:观察木犀草素对哮喘小鼠气道重塑和气道IL-13Rα2表达的影响.方法:建立哮喘气道重塑模型,自第14天雾化吸入OVA前0.5 h,干预组分别腹腔注射地塞米松及木犀草素灌胃.OVA雾化结束后24 h,处死小鼠后肺组织石蜡切片HE染色观察气道形态学改变,IL-13Rα2免疫组化染色,并经计算机图像分析测定气道壁中含量,同时RT-PCR法测定IL-13Rα2、TGF-β1mRNA的表达.结果:①光镜下模型小鼠均有气道重塑病理改变,哮喘组明显,地塞米松干预组和木犀草素干预组较轻;②气道图像分析哮喘组支气管平滑肌的面积/气管腔的内周长(Warm/Pi)值、Wam/Pi值较空白对照组显著增加,地塞米松组和木犀草素干预组较哮喘组显著减轻;③免疫组化分析单位长度基膜气道壁平均IL-13Rα2阳性细胞数,哮喘组小鼠较正常组升高,地塞米松干预组和木犀草素干预组较哮喘组明显减少;④RT-PCR检测哮喘组小鼠气道壁IL-13Rα2及TGF-β1含量较正常组显著增加,地塞米松干预组和木犀草素干预组较哮喘组明显减少.结论:木犀草素可抑制气道壁的增厚和平滑肌增殖,减轻气道重塑,其作用的机制可能是通过抑制IL-13Rα2的表达实现的.     

D-松醇对慢性哮喘小鼠模型肺组织转化生长因子β1表达的影响

目的:观察D-松醇对慢性哮喘小鼠模型转化生长因子(TGF-β1)的影响?方法:18只BALB/c小鼠按随机原则分成正常对照组?哮喘模型组?D-松醇干预组,每组6只,末次抗原激发24 h后,检测各组小鼠的肺功能,HE染色观察气道炎症变化;Masson三色染色观察气道纤维化的改变;real-time PCR观察肺组织TGF-β1 mRNA的表达;采用ELISA观察支气管肺泡灌洗液中TGF-β1的表达?结果:哮喘模型组小鼠气道炎症?气道高反应性和气道重塑明显加重,而D-松醇能显著抑制慢性哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性,且D-松醇干预后哮喘模型小鼠肺组织TGF-β1 mRNA和肺泡灌洗液中TGF-β1表达也显著降低?结论:D-松醇能抑制慢性哮喘模型小鼠的气道重塑,其机制可能通过抑制肺组织TGF-β1的表达而实现?     

补肺活血胶囊对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的干预作用及机制研究

目的 基于TGF-β1/Smads信号通路及蛋白酶与抗蛋白酶系统,探讨补肺活血胶囊对慢阻肺模型大鼠气道重塑的作用机制。方法 将40只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、补肺活血组和茶碱组。采用香烟烟雾暴露复合气道内滴注LPS的方法建立慢阻肺动物模型;实验自第21d起,补肺活血组予补肺活血胶囊（0.42g/kg）灌胃,茶碱组予茶碱缓释片（0.02g/kg）灌胃,连续40d。实验第61天取大鼠肺组织制作病理切片,HE染色观察大鼠肺组织病理学改变,Masson染色观察气道胶原沉积情况,免疫组化染色观察肺组织TGF-β1、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达,Western Bolt法检测TGF-β1、Smad2/3、Smad4、Smad7、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达。结果 与正常对照组相比,模型组大鼠气道上皮增厚,炎症细胞浸润,细胞外基质沉积,基底膜增厚,肺泡结构破坏,肺泡融合,肺泡间隔增厚,胶原纤维沉积明显;肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达升高,Smad7表达降低。与模型组相比,补肺活血组与茶碱组炎症细胞浸润减轻,胶原纤维沉积显著减少;肺组织TGF-β1、Smad2/3、Smad4、NE、α1-AT、MMP-9、TIMP-1蛋白表达降低,Smad7表达升高。与茶碱组相比,补肺活血组各指标均未见显著差异（P＞0.05）。结论 补肺活血胶囊可以通过调节TGF-β1/Smads信号通路、蛋白酶与抗蛋白酶平衡干预慢阻肺模型大鼠气道重塑。     

丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑及TGF-β1表达的影响

目的:探讨丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑的影响及其可能的作用机制.方法:将30只Balb/c小鼠随机分为哮喘组(A组),正常对照组(B组),丙酸氟替卡松治疗组(C组)3组,每组动物10只.A组小鼠于第1日及第15日以鸡卵白蛋白(OVA)致敏,从第1次致敏后第22日开始雾化吸入25g/L OVA激发并持续4 wk,建立哮喘气道重塑模型;B组用生理盐水以同样方法致敏并雾化吸入;C组于激发前30 min雾化吸入丙酸氟替卡松(0.17g/L),吸入时间每次10 min,其它程序与A组相同.制备小鼠肺组织病理切片,HE染色观察各组气道结构改变情况,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm);肺组织石蜡切片行TGF-β1免疫组化染色后计算机图像分析测定其灰度值.结果:光镜下可见A组小支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、平滑肌增厚,而C组上述改变较A组明显减轻.与B组比较,A组支气管管壁厚度[(17.43±1.10)μm2/μm],平滑肌厚度[(6.58±1.16)μm2/μm]显著升高(P＜0.01);与A组比较,C组支气管管壁厚度[(14.06±1.20)μm2/μm],平滑肌厚度[(4.41±1.00)μm2/μm]显著降低(P＜0.01).与B组比较,A组TGF-β1的灰度值(66.18±1.53)显著降低(P＜0.01);与A组比较,C组丙酸氟替卡松干预后TGF-β1的灰度值(72.05±1.65)显著升高(P＜0.01).结论:吸入丙酸氟替卡松能有效防治哮喘小鼠气道重塑,可能的机制是丙酸氟替卡松通过下调TGF-β1的表达干预了气道重塑.     

哮喘气道重塑与氧化应激的实验研究

目的探讨大鼠支气管哮喘模型的慢性气道炎症、气道重塑特征以及与氧化应激的关系。方法以卵蛋白为过敏原致敏,反复多次激发以模拟临床反复发作过程,建立大鼠慢性哮喘模型。64只SD大鼠随机分为正常对照组和哮喘组,每组再进一步划分4、8、12、16周4个时间段。观察指标:①肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞计数与分类;②肺组织病理观察:进行支气管周围炎性细胞浸润及杯状细胞增殖评分,测定支气管壁的平滑肌面积、胶原沉积面积,及肺组织TGF-β1的积分光密度值(IOD值);③测定12周大鼠肺组织匀浆MDA含量、SOD活性及肺组织TGF-β1蛋白含量。结果①各时间段哮喘组的BALF细胞计数与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。其中中性粒细胞百分比、黏液指数随时间推移呈增加趋势。②4周哮喘组即有气道管壁增厚、平滑肌增生、胶原沉积增多、管腔变小、TGF-β1的表达增多等气道重塑的特征,与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01),并随时间推移呈增加趋势,以16周哮喘组最明显。③与对照组比较,哮喘组的MDA含量、TGF-β1含量均明显升高(均P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01)。结论通过延长卵蛋白激发时间可以成功制备SD大鼠慢性哮喘气道重塑模型;哮喘气道重塑在早期即出现,中性粒细胞及氧化应激可能参与哮喘的气道重塑。