人脑胶质瘤中P16的表达及其意义

[目的]检测人脑胶质瘤中P16表达水平,探讨P16在判断胶质瘤恶性程度以及预测预后方面的意义.[方法]采用S-P免疫组化法检测84例胶质瘤P16的表达水平;结合临床资料,分析胶质瘤的P16表达及其与肿瘤恶性程度、复发和死亡之间的关系.[结果]①32例低级别胶质瘤中P16蛋白平均阳性细胞百分率为25.45%±19.78%,52例高级别胶质瘤中平均阳性细胞百分率为10.45%±11.11%,两组均数比较,差异有统计学意义(P＜0.01).②低级别胶质瘤中P16蛋白阳性率高于高级别胶质瘤中阳性率,两组阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).③1年后复发组的P16蛋白阳性率低于未复发组的阳性率(P＜0.01),两年后死亡组的P16蛋白阳性率低于未死亡组的阳性率(P＜0.01),差异均有统计学意义.[结论]①P16蛋白表达水平随胶质瘤病理分级的增高而下降.②P16蛋白表达水平越低,预后越差.③P16蛋白的表达水平可作为预测脑胶质瘤恶性程度与预后的指标.     

抑癌基因P16在脑胶质瘤中的表达及意义

目的：研究抑癌基因Ｐ１６在脑胶质瘤发生过程中的作用及作用机理;方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化方法对５２例病人脑胶质细胞中抑癌基因Ｐ１６的表达进行了研究;结果：５２例胶质瘤中Ｐ１６蛋白阳性率为５３．８％（２８／５２）,其中Ｉ级胶质瘤的阳性率高,为９０％（９／１０）,依次为Ⅱ级７１．４％（１０／１４）,Ⅳ级３７．５％（３／８）,Ⅲ级最低为３０％（６２／２０）;结论：抑癌基因Ｐ１６的表达在胶质瘤的病理分级与恶     

脑胶质瘤及其颅内病变P16基因失活方式的研究

脑胶质瘤及其颅内病变Ｐ１６基因失活方式的研究何正文夏家辉曹亚刘运生袁贤瑞方加胜曹美鸿已有的研究认为，Ｐ１６基因失活方式主要是纯合缺失，而点突变比较罕见［１］。这与原有的抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ等的失活方式主要是点突变明显不同。这种不同究竟是Ｐ１６基因的一...     

脑胶质瘤中P16,P15蛋白表达的研究

目的：研究脑胶质瘤发生、演化及预后与Ｐ１６、Ｐ１５蛋白表达的关系。方法：采用免疫组织化学技术对４５例石蜡标本中Ｐ１６、Ｐ１５蛋白进行了检测。结果：Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中Ｐ１６、Ｐ１５蛋白表达阴性率（６０％、６５％）高于Ⅰ～Ⅱ级（２８％、２０％）,Ｐ〈０．０５、Ｐ〈０．０１。结论：胶质瘤发生、演化及恶性程度可能与Ｐ１６、Ｐ１５蛋白阴性表达有关;Ｐ１６、Ｐ１５蛋白阴性表达在一定程度上反映了胶质瘤细胞的恶性生     

P16基因改变与脑胶质瘤生物学特性相关性的研究

目的 研究ｐ１６基因改变与脑胶质瘤恶性程度分级及肿瘤细胞增殖活性之间的关系。方法检测４１例不同级别脑胶质瘤标本和７例正常脑组织ｐ１６基因改变和ＰＣＮＡ蛋白表达情况。结果 实验组ｐ１６基因缺失和突变２２例（５３．７％）,ｍＲＮＡ和蛋白表达缺失分别为２３例（５６．１０％）、２７例（６５．８５％）,三者改变非一对一关系。ｐ１６基因改变和ＰＣＮＡ指数随脑胶质瘤恶性程度级别增高呈上升趋势（Ｐ〈０．０５）。Ｐ     

脑胶质瘤P53及P16基因的免疫组化研究及其相关性分析

目的　探讨P5 3、P1 6蛋白在脑胶质瘤发生发展中的作用及其与临床病理特征的相关性。方法　对已明确诊断的 4 8例脑胶质瘤利用LSAB免疫组化法检测P5 3、P1 6蛋白的表达。结果　P5 3蛋白阳性率为 4 1 .7% ,P1 6表达缺失率为6 0 .4 %。在高级别 (Ⅲ、Ⅳ级 )的胶质瘤中P5 3表达率及P1 6缺失率分别为 6 3.2 %、84 .2 % ,均明显高于低级别 (Ⅱ级 )的肿瘤2 7.6 %、4 4 .8% (P <0 .0 5 )。在P5 3阳性表达的病例中常伴有P1 6的缺失表达 (6 5 .0 % ) ,而且大多出现在Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中(75 % ,9/ 1 2 )。两种分子的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及发病部位无相关性。结论　P1 6、P5 3基因异常不仅参与胶质瘤的形成 ,同时对其发展也起一定的促进作用 ;P1 6、P5 3在胶质瘤中的异常表达与肿瘤的分化程度相关     

P16蛋白在小儿脑胶质瘤细胞中的表达

目的 探讨P16蛋白免疫组织化学检测在小儿脑胶质瘤中的意义及其应用价值。方法 选自103例1～14岁小儿脑胶质瘤手术切除标本及20例儿童颅脑损伤手术减压患者的脑组织，应用兔抗P16(C-20)多克隆抗体进行免疫组织化学检测对比研究。结果 正常脑组织P16蛋白表达为阴性，胶质瘤Ⅰ级为16．7％，Ⅱ级为81．3％，Ⅲ级、Ⅳ级大于90％；P16蛋白表达强度与病理组织学分级呈正相关。结论 P16蛋白在脑胶质瘤细胞转化和癌变过程中起着重要作用，其免疫组织化学检测不仅对区分肿瘤良恶性、判断预后有一定价值；而且对选择合理的治疗方案也有参考意义。     

p16基因对脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探索ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的关系。方法采用脂质转染的方法．将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞株Ｕ２５１,观察ｐ１６基因长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对照。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长情况、细胞周期及细胞对顺铂（ｃｉｓ－ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ,ＣＤＤＰ）敏感性的变化进行分析。结果外源ｐ１６基因的高水平表达显著掏了胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长,克隆形成率减少,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了Ｇ１期阻滞,同时,细胞对顺铂的敏感性降低,化疗药物诱导的凋亡细胞数减少。结论外源野生型ｐ１６基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,同时降低Ｕ２５１细胞对顺铂的化疗敏感性。ｐ１６基因转染后对顺铂诱导凋亡作用的抑制可能是其主要机制。     

C-myc及P16在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨C-myc、P16蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达情况及其与肿瘤恶性程度之间的关系。方法应用免疫组织化学方法检测60例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中C-myc、P16蛋白的表达情况。结果 C-myc、P16蛋白阳性染色主要位于脑胶质瘤细胞的胞浆或胞核中,各自的表达强度与脑胶质瘤的组织学分级相关。结论 C-myc蛋白在脑胶质瘤组织中呈过度表达;P16低表达在人脑胶质瘤的恶性进展中起重要作用;联合检测两者在脑胶质瘤的诊断及其恶性程度的评价具有重要意义。     

抑癌基因p16原核表达载体的构建及其表达的研究

为获取具有生物学活性的ｐ１６蛋白，采用定向克隆方法将双酶切克隆质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－ｐ１６得到的ｐ１６ｃＤＮＡ片段连接到双酶切的原核表达载体ｐＢＶ２２０上，转化大肠杆菌ＴＧ１得到含重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｐ１６的工程菌，温度诱导表达后，经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测证实含有ｐ１６蛋白。结果表明，ｐ１６原核表达载体构建成功并表达出ｐ１６非融合蛋白。     

人白细胞介素-16真核表达载体的构建及其对Th2型肿瘤细胞的促逆转作用

构建人IL-16真核表达载体,分析其对Th2型肿瘤细胞的逆转作用。方法用RT- PCR技术从人外周血单个核细胞中获取IL-16cDNA,插入PUC-18T载体并测序,构建并鉴定真核表达载体PcDNA3-IL-16,转染KarpasT淋巴瘤细胞,分析阳性克隆中IFNγ,IL-2,IL-4,IL-6,IL-13,TNFα和IL-16等细胞因子的表达状况。结果序列测定显示所克隆的人IL-16cDNA与基因库中所登录的序列完全一致,EcoRI和BamHI双酶切及PCR鉴定显示所构建的真核表达载体PcDNA3-IL-16完全正确,RT-PCR显示转染PcDNA3-IL-16的KarpasT淋巴瘤细胞高表达IL-16mRNA,同时,Th1类细胞因子IFNγ表达明显增高,Th2类细胞因子IL-4,IL-6,IL-13表达降低,MTT法显示KarpasT淋巴瘤细胞的增殖受到明显抑制。结论成功构建了真核表达载体PcDNA3-IL16,转染KarpasT淋巴瘤细胞后使其细胞因子类型由Th2型向Th0型逆转,且生长受到明显抑制,表明向肿瘤细胞转染人IL-16是一种有用的肿瘤生物治疗方法。     

hBMP-2真核表达载体的构建及转染兔骨髓间充质干细胞的表达

目的:构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒并检测其在兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形成蛋白-2(hBMP2)基因片段,构建成pcDNA3.1-hBMP2重组质粒.转染兔骨髓间充质干细胞并通过RT-PCR和免疫组化检测其表达.结果:本实验构建的重组质粒目的基因片段为hBMP2-cDNA.经RT-PCR和免疫组化证实,转染pcDNA3.1-hBMP2后的兔骨髓间充质干细胞内有大量hBMP2 mRNA的转录和蛋白的表达.结论:本实验成功构建hBMP2真核表达质粒并在骨髓间充质干细胞中得到表达,为进一步研究用BMP2基因转染的方法来加速牵张成骨新骨形成奠定了基础.     

人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建

目的：构建含人IL-21基因的重组腺病毒表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤研究奠定基础。方法：从人外周血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,将其连接到进入载体pENTR1A,然后经LR重组转入到腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST中,构建含IL-21基因的腺病毒载体（Ad-IL-21）,并进行测序鉴定和PCR鉴定。结果：Ad-IL-21表达载体测序结果与GenBank中IL-21基因序列一致,Ad-IL-21经PCR扩增出IL-21基因片段。结论：成功构建携带人IL-21基因的重组腺病毒表达载体。     

PTEN基因在脑胶质瘤中的表达

目的探讨抑癌基因PTEN在脑胶质瘤组织中的表达情况及其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测45例胶质瘤组织与23例正常脑组织PTEN基因外显子1-9、5-8 mRNA表达情况。结果在45例脑胶质瘤组织中,外显子1-9 PTEN mRNA相对表达量为0.40±0.19,外显子5-8 PTEN mRNA相对表达量为0.38±0.16。在正常脑组织中,外显子1-9 PTEN mRNA相对表达量为0.58±0.21,外显子5-8 PTENmRNA相对表达量为0.64±0.17。脑胶质瘤组织和正常脑组织中PTEN mRNA表达水平有显著性差异(t=3.61、6.21,P<0.01)。PTEN mRNA的表达水平与病人性别、年龄无关(t或t′=0.18~0.70,P>0.05)。但随着临床分期的增高其表达水平明显降低(t或t′=4.16、4.69,P<0.01)。结论PTEN mRNA表达水平的异常在脑胶质瘤的发生和发展过程中起着重要作用。     

膜联蛋白V真核表达载体的构建

目的：构建人膜联蛋白V基因真核表达载体,探讨人膜联蛋白V的生理功能。方法：PCR方法扩增含EcoRI及BamHI酶切位点的膜联蛋白V基因序列,对真核表达载体pcDNA3．1(-)和膜联蛋白V基因扩增产物进行双酶切,用连接酶将二者连接并转化到大肠杆菌BL21,重组质粒经测序鉴定,称为pcDNA3．1(-)AxV。结果：酶切琼脂糖电泳分析pcDNA3．1(-)AxV中含有膜联蛋白V基因,序列分析表明与文献报道的序列完全一致。结论：成功地构建了人膜联蛋白V基因的真核表达载体,为研究其生理作用奠定了基础。     

重组小鼠白介素-2基因在真核细胞中的转染表达

目的：在构建重组真核表达载体pIRESneo2／mIL-2的基础上,建立能够持续稳定表达mIL-2的哺乳类工程细胞。方法：运用分子克隆技术,将由RT-PCR获得的mIL-2cDNA片断插入真核表达质粒pIRESneo2构建成mIL-2重组表达载体pIRESneo2／mIL-2。通过脂质体转染法将pIRESneo2／mIL-2导入C2C12细胞。转染后第30天,用Western blots检测mIL-2表达情况。结果：经DNA测序证明mIL-2cDNA片断插入方向和碱基组成顺序均准确无误,Western blots检测转染真核重组表达载体pIRESneo2／mIL-2的C2C12细胞系表达mIL-2。结论：利用pIRESneo2／mIL-2构建的真核表达载体在C2C12细胞系中能够持续稳定表达mIL-2。     

HBx基因的克隆和序列分析及其真核表达载体的构建

目的：通过HBx基因的克隆、序列对比和进化树分析以及peDNA3．1（＋）-HBx真核表达载体的构建，为进一步研究HBx基因与肝癌发生发展的关系打下基础。方法：用Oliga6．0结合Primer Premier5．0软件设计特异性引物，通过PCR方法从广西HBsAg阳性病人血清中（血清型Adrq^＋）分离得到的病毒株构建的HBxAg质粒中扩增HBx基因。用DNA star5．01和Vector NTI Suite8．0软件进行序列对比分析和进化树构建。经双酶切将HBx基因定向插入到pcDNA3．1（＋）质粒中。结果；成功克隆了基因型C型突变型HBx基因，并构建出真核表达载体pcDNA3．1（＋）HBx。新基因被GeneBank接受，在GeneBank上登录号为AY839630。序列对比和进化树分析表明．新克隆的基因与野生基因型C型有高度的同源性（97．80A），2．2％的变异。结论：从广西HBsAg阳性病人病毒株（血清型Adrq^＋）中发现了新的基因型C型突变型HBx基因（mutantgenotypeC）。peDNA3．1（＋）-HBx真核表达载体的构建，将为进一步研究HBx基因在树鼩实验性肝癌诱发过程中所起的作用打下基础。     

HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。     

大肠癌中p16蛋白的表达

①目的研究大肠癌中ｐ１６蛋白的表达与肿瘤分化程度及浸润转移等生物学行为的关系。②方法应用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测１０５例大肠癌组织中ｐ１６蛋白的表达。③结果大肠癌ｐ１６蛋白表达的阳性率为６０．０％，随大肠癌分化程度降低、浸润肠壁深度和Ｄｕｋｅｓ分期的进展，原发灶中ｐ１６蛋白表达阳性率降低，差异具有显著性（χ２＝６．４８～１２．８０，Ｐ＜０．０１，０．０５）。无区域淋巴结转移者ｐ１６蛋白阳性率为７６．９％，伴区域淋巴结或远处器官转移者ｐ１６蛋白阳性率为５０．０％，二者差异有显著性（χ２＝７．４０，Ｐ＜０．０５）。④结论ｐ１６蛋白能抑制大肠癌的浸润与转移，ｐ１６蛋白的表达水平可作为判断大肠癌病人预后的生物学指标。