促红细胞生成素对视网膜神经元的保护作用

促红细胞生成素(EPO)是红细胞生成的重要调节蛋白.EPO受体(EPO-R)属于细胞因子受体超家族.近来研究证实,EPO及其受体在神经系统也有表达,具有神经保护和促进神经元再生的双重作用.在眼科,虽然EPO和EPO-R在晶状体、角膜上皮、光感受器的内段、内核层、神经节细胞层均有表达,但近年来的研究重点是其对视神经的保护作用.研究表明,EPO可以通过抑制凋亡保护视网膜神经节细胞.因此,EPO的神经保护作用对治疗青光眼、视网膜色素变性等疾病有一定的实际意义.     

促红细胞生成素对视网膜神经节细胞保护作用的研究进展

青光眼是一组由病理性眼压升高导致进行性视网膜神经节细胞凋亡和视野缺损的眼病,通过延缓视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）凋亡进度对受损视神经进行保护是青光眼研究领域的重要方向。近几年在对视神经保护的药物研究中,促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）受到广泛关注。EPO 通过与红细胞膜表面的促红细胞生成素受体（erythropoietin receptor, EPOR）结合,抑制不同的细胞信号转导通路（如 HIF-1／iNOS 通路、RhoA ／ROCK 通路等）,从而抑制细胞内诱导凋亡发生的 Bax／Bcl-2等复合物的形成,发挥视神经保护作用。（国际眼科纵览,2016,40：155-160）     

促红细胞生成素缓释微球玻璃体腔注射对视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨乳酸/羟基乙酸共聚物（PLGA）装载的促红细胞生成素（EPO）缓释微球（EPO-PLGA微球）经玻璃体腔注射对大鼠视神经挫伤模型中受损视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用.方法 选取成年SD大鼠,建立视神经挫伤模型.建模后分别经玻璃体腔内注射含10 IU EPO的PLGA微球（EPO-PLGA组）、10 IU EPO（EPO组）、5 μl空白PLGA（PLGA组）、5 μl PBS（PBS组）,另设未治疗组不予玻璃体腔注药.术后5 d和2周,做视网膜切片,对各组RGC凋亡情况行TUNEL检测;术后23 d,DiI上丘逆标RGC,并于术后4周处死大鼠,视网膜铺片观察各组RGC存活情况;每组各个时间点分别处死6只SD大鼠.采用方差分析对结果进行比较.结果 TUNEL检测显示,术后5 d和2周,各组均可见TUNEL阳性细胞,其中EPO-PLGA组和EPO组TUNEL阳性细胞显著减少,其细胞凋亡率明显少于PLGA组、PBS组及未治疗组.术后4周,视网膜铺片RGC计数显示,正常SD大鼠RGC密度为（2387.7±164.9）个/mm^2,未治疗组为（748.3±58.8）个/mm^2,EPO-PLGA组为（1296.7±157.6）个/mm^2,EPO组为（1418.5±154.9）个/mm^2,PLGA组为（821.7±52.1）个/mm^2,PBS组为（804.4±86.4）个/mm^2;可见EPO-PLGA组和EPO组较未治疗组细胞密度显著增高,具有明显的RGC保护作用（P均＜0.01）,而EPO-PLGA组和EPO组间差异无统计学意义（P=0.065）.结论 EPO-PLGA缓释微球与EPO具有等效的RGC保护作用,这为进一步观察EPO-PLGA缓释微球的长效神经保护作用奠定了基础.     

促红细胞生成素及其受体与视神经视网膜疾病

促红细胞生成素（EPO）具有促进红系祖细胞增生和分化的作用,其在光诱导性视网膜变性、视网膜缺血一再灌注损伤、急慢性高眼压、视神经损伤、多发性硬化性视神经炎、糖尿病视网膜病变（DR）、早产儿视网膜病变（ROP）等视神经视网膜疾病模型中的神经保护作用也受到了关注。就EPO及其受体在视网膜的分布、其在视神经视网膜病变模型中的表达情况及其对视网膜神经元的保护作用和机制方面的研究进展进行综述。     

促红细胞生成素对中枢神经系统及视网膜神经元的保护作用

传统认为促红细胞生成素是调节红细胞生成重要激素。近来研究表明促红细胞生成素同时具备非常重要的促进神经元生长和神经元保护作用。我们就促红细胞生成素对中枢神经系统及视网膜神经元的保护作用作一综述     

内源性促红细胞生成素对大鼠脱离视网膜光感受器细胞的保护作用

背景促红细胞生成素（EPO）对多种视网膜疾病模型中视网膜神经元具有一定的保护作用,但EPO对视网膜脱离（RD）后光感受器细胞是否具有保护作用尚不清楚。目的探讨内源性EPO对RD状态下光感受器细胞的保护作用及可能机制。方法利用视网膜下腔注射质量分数1．4％透明质酸钠建立大鼠RD模型,按每组情况各组玻璃体腔内分别单次注射PBS或不同剂量的外源性可溶性EPO受体（EPOsR）,采用计算机产生随机数字法将72只SD大鼠随机平均分为正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组。分别于造模后3d和14d用过量麻醉法处死大鼠并获得大鼠视网膜标本,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测光感受器细胞的凋亡情况,并分别采用Westernblot和免疫荧光法检测视网膜中caspase-3的活性,RD造模后14d进行组织病理学检查并测量外核层（ONL）厚度。结果RD造模后3d,RD组ONL出现凋亡细胞核,玻璃体腔注射EPOsR组光感受器细胞凋亡进一步增加,随着玻璃体腔注射EPOsR的剂量增加,ONL凋亡细胞核有增加趋势。Westernblot和免疫荧光检测结果均显示,各组视网膜caspase-3表达的条带灰度值分别为（0．15±0．04）、（0．49±0．03）、（0．50±0．07）、（0．63±O．03）、（0．69±0．04）、（0．83±0．04）,各组的总体差异有统计学意义（F=76．016,P=0．000）,RD＋EPOsR200ng组的caspase-3活性均强于其他各组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。RD造模后14d,正常对照组、RD组、RD＋PBS组、RD＋EPOsR2、20、200ng组的ONL厚度分别为（47．39±3．39）、（33．96±3．54）、（31．83±5．21）、（31．40±2．63）、（24．99±2．06）、（19．30e3．71）μm,总体差异有统计学意义（F=44．733;P=0．000）;EPOsR处理组ONL厚度明显薄于单纯RD组和RD＋PBS组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论RD状态下,EPOsR通过剂量依赖的方式诱导视网膜细胞的凋亡和caspase-3活性增强,而缺氧状态下视网膜神经上皮的内源性EPO表达增强可通讨抑制casDase-3活性和抗凋亡作用发挥对光感受器细胞的保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠急性缺血视网膜节细胞的保护作用

目的:探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemia reperfusion injury,RIR)中视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的保护作用。方法:成年雌性SD大鼠20只,采用夹闭视网膜动脉30min造成大鼠双眼缺血再灌注模型。所有大鼠均于建模前1h给予左眼rhEPO10U(6μL),右眼给予同等剂量眼用平衡盐液。按照建模后眼球取材时间不同(1,4,7,14d)分为4组,每组5只,均于取材前4d利用荧光金(fluorogold,FG)逆行标记大鼠RGC,视网膜铺片RGC计数,比较双眼存活RGC数量。结果:rhEPO治疗眼RGC存活数多于平衡盐液对照眼。结论:rhEPO对大鼠视网膜急性缺血后RGC具有保护作用。     

促红细胞生成素对视网膜保护作用的研究进展

红细胞生成素是由肾脏分泌的内源性细胞因子,近来研究发现,视网膜也存在红细胞生成素及其受体,并在视网膜缺血缺氧以及光损伤等均起保护作用.本文对红细胞生成素及其受体的产生、结构及其在视网膜缺血缺氧中的保护机制进行综述.     

促红细胞生成素及其衍生物的神经保护作用

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是促进骨髓红系祖细胞增殖和分化的主要刺激因子,安全治疗肾性贫血已有20a的历史。近年来,有研究表明在人和动物的神经系统EPO不仅是一个新的神经递质,而且是一个新的有发展前景的神经保护剂。这种由其受体(EPO-R)介导的神经保护作用已在多发性硬化,急性视网膜缺血再灌注,急性视神经损伤,慢性高眼压等大量的动物模型的体内外实验中得到证实。但其机制及相关的信号转导途径还有待于深入研究,其衍生物的发现也为临床新药物的开发提供了新的方向。     

重组人促红细胞生成素对慢性高眼压致大鼠视网膜神经元损伤的保护作用

目的:探讨玻璃体内注射重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对慢性高眼压所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:健康SD大鼠30只随机分为5组,每组6只,分别为损伤组I,损伤组Ⅱ、DMSO组、rHuEPO组和rHuEPO+Wortmannin(WM)组。各组均以右眼为实验眼,损伤组Ⅱ大鼠激光处理1d后处死,其余各组激光处理8wk后处死。损伤组用532nm激光烧灼大鼠角巩膜缘浅层静脉,阻断房水回流的方法建立大鼠慢性高眼压模型,采用Tono-pen眼压计测量眼压。DMSO组、rHuEPO组和rHuEPO+WM组大鼠均在激光处理后1d开始分别向玻璃体内注射DM-SO、rHuEPO和rHuEPO+WM,1次/wk。正常对照组选取损伤组左眼作为对照眼。用免疫组织化学法和TUNEL染色检测观察各组实验结果。结果:与正常对照组比较,各组视网膜神经节细胞层(retinal ganglion cell layer,RGCL)中促红细胞生成素受体(erythropoirtin receptor,EPOR)表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,各组RGCL中蛋白激酶B(AKT)表达无明显改变,差异无统计学意义,损伤组I和DMSO组RGCL中磷酸化蛋白激酶B(PAKT)表达也无明显改变,但rHuEPO组RGCL中PAKT表达增加(P<0.05)。与损伤组I和DMSO组比较,rHuEPO组RGCL中凋亡神经细胞数目减少(P<0.05)。与rHuEPO组比较,rHuEPO+WM组RGCL中AKT表达无明显变化,但PA-KT表达减少(P<0.05),凋亡神经细胞数目增加(P<0.05)。结论:rHuEPO对慢性高眼压所致的大鼠视网膜神经元损伤有保护作用,且rHuEPO通过PI-3K/AKT信号途径抑制神经细胞凋亡而发挥其视神经保护作用。     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔视网膜谷氨酸表达的影响

目的探讨全身应用重组人促红细胞生成素（rhEPO）对急性高眼压兔眼视网膜谷氨酸表达的影响。方法采用日本大耳白兔54只,其中6只兔设为正常对照组。其余48只兔采用生理盐水前房灌注加压法建立急性高眼压模型,其中24只兔皮下注射rhEPO为EPO组,另外24只兔为模型组。分别于造模后第1、3、7、14天免疫组织化学法观察视网膜谷氨酸的表达。结果正常组视网膜组织无谷氨酸表达。模型组兔眼视网膜出现谷氨酸阳性表达细胞,各观察时间点EPO组兔眼视网膜谷氨酸阳性表达细胞数较模型组减少,差异均有统计学意义（P〈0.01）。实验第14天,模型组视网膜谷氨酸阳性表达细胞数为（3.3±1.1）个/高倍视野,EPO组为（0.3±0.2）个/高倍视野,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论rhEPO可以下调兔眼急性高眼压引起的视网膜谷氨酸高表达,可能与rhEPO保护视网膜神经功能损害有关。     

Neuroprotective effect of edaravone in experimental glaucoma model in rats: a immunofluorescence and biochemical analysis

AIM: To evaluate the neuroprotective activity of systemically administered edaravone in early and late stage of experimental glaucoma in rats. METHODS: In this study, 60 Wistar albino rats were used. Experimental glaucoma model was created by injecting hyaluronic acid to the anterior chamber once a week for 6wk in 46 of 60 subjects. Fourteen subjects without any medication were included as control group. Edaravone administered intraperitoneally 3 mg/kg/d to the 15 of 30 subjects starting at the onset of glaucoma induction and also administered intraperitoneally 3 mg/kg/d to the other 15 subjects starting at three weeks after the onset of glaucoma induction. The other 16 subjects who underwent glaucoma induction was administered any therapy. Retinal ganglion cells (RGCs) have been marked with dextran tetramethylrhodamine (DTMR) retrograde at the end of the sixth week and after 48h, subjects were sacrificed by the method of cardiac perfusion. Alive RGC density was assessed in the whole-mount retina. Whole-mount retinal tissues homogenized and nitric oxide (NO), malondialdehyde (MDA) and total antioxidant capacity (TAC) values were measured biochemically. RESULTS: RGCs counted with Image-Pro Plus program, in the treatment group were found to be statistically significantly protected, compared to the glaucoma group (Bonferroni, P<0.05). The neuroprotective activity of edaravone was found to be more influential by administration at the start of the glaucoma process. Statistically significant lower NO levels were determined in the glaucoma group comparing treatment groups (Bonferroni, P<0.05). MDA levels were found to be highest in untreated glaucoma group, TAC levels were found to be lower in the glaucoma induction groups than the control group (Bonferroni, P<0.05). CONCLUSION: Systemic administration of Edaravone in experimental glaucoma showed potent neuroprotective activity. The role of oxidative stress causing RGC damage in glaucoma was supported by this study results.     

青光眼视网膜神经节细胞损伤的研究进展

青光眼是严重损害视力的常见眼病,其病理基础是视网膜神经节细胞及其纤维的丧失。关于青光眼视网膜神经节细胞损伤的机制,迄今未明。以往曾有“机械学说”和“血流学说”等。近年来,随着分子生物学的发展,对青光眼视网膜神经节细胞损伤机制的研究进一步深入。综述了肝光眼视网膜神经节细胞超微结构、轴浆运输以及凋亡等几个方面的研究进展。     

灯盏细辛治疗青光眼多中心临床研究

目的:观察美尔瑞片(中草药灯盏细辛)对眼压控制后的青光眼是否具有视神经保护作用。方法:对99例(113眼)眼压已控制的原发性开角型青光眼及闭角型青光眼进行多中心、前瞻性、随机、双盲对照临床研究,观察口服美尔瑞片6mo后对视野的疗效,本研究采用VFDS视野缺损计分法,从0(无缺损)至20(所有检测点均不可测出)。结果:美尔瑞治疗组55例(66眼),安慰剂对照组44例(47眼),治疗前及治疗后2,4,6mo2组的眼压均<15mmHg,2组间同一时期眼压无显著性差异(P >0.05)。服美尔瑞2,4,6mo后VFDS净减值分别为0.44±1.60,1.27±2.16及1.42±2.37,呈现随治疗时间延长,视野缺损逐渐好转趋势。对照组2,4,6mo后VFDS净减计分值分别为-0.02±1.5,0.68±1.73和0.40±1.57。VFDS净减值两组间同一时期比较有显著性差异(P <0.05),治疗6mo后有高度显著性差异(P <0.01)。结论:灯盏细辛可用于治疗青光眼性视神经病变,有助于扩大/保持视野。     

促红细胞生成素对大鼠实验性视网膜脱离细胞凋亡的干预作用

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对实验性视网膜脱离大鼠细胞凋亡的干预作用。方法选用SD大鼠44只,随机分为正常对照组(4只)、生理盐水(normal saliue,NS)对照组20只和EPO治疗组(20只)。正常对照组不做任何处理,其他两组大鼠建立孔源性视网膜脱离模型。造模前4hEPO治疗组大鼠腹腔中注射EPO,NS对照组注射生理盐水。术后1h、6h、12h、24h、72h处死大鼠,每个时间点各取4只,摘取眼球,TUNEL染色,计算内核层、节细胞层及外核层细胞数,进行统计学分析。结果正常对照组大鼠视网膜层次结构清晰,各层排列整齐。NS对照组在脱离后12h连续层状结构紊乱,外节丢失增多,而EPO治疗组的连续层状结构存在,外节变性较轻。TUNEL染色结果显示EPO治疗组在视网膜脱离后1h、12h、24h、72h节细胞层及内核层凋亡细胞数[分别为(4.75±1.42)/目、(7.17±1.27)/目、(9.41±1.08)/目、(11.83±1.11)/目]少于NS对照组(7.83±1.70)/目、(9.67±1.56)/目、(12.42±1.31)/目、(15.25±1.22)/目,差异有统计学意义(均为P<0.001)。而外核层EPO治疗组在视网膜脱离后12h、24h、72h的凋亡细胞数[分别为(33.08±8.64)/mm2、(49.17±12.52)/mm2、(92.83±14.14)/mm2]少于NS对照组,差异有统计学意义(均为P<0.05),余时段2组间比较差异均无统计学意义。结论通过腹腔注射EPO能减少实验性视网膜脱离所致视网膜各层细胞的凋亡。     

视网膜脱离模型中外源性促红细胞生成素对其受体表达的影响

目的探讨外源性促红细胞生成素（EPO）对促红细胞生成素受体（EPOR）在脱离的视网膜中表达的影响。方法通过视网膜下腔注射质量分数1.4%透明质酸钠在60只SD大鼠的右眼建立视网膜脱离（RD）模型,12只正常SD大鼠为正常对照组。不同组RD模型眼（每组12只眼）玻璃体腔内分别注射PBS或100、200、400ng重组大鼠源性EPO。玻璃体注射后3d应用Westernblot法半定量检测各组SD大鼠脱离的视网膜中EPOR蛋白表达水平的变化并进行比较,应用免疫组织化学法定位检测脱离的视网膜中EPOR蛋白的表达。结果 Westernblot检测结果表明大鼠正常视网膜中EPOR表达量少,为0.28±0.02;造模后3d,EPOR在脱离的视网膜中表达量明显增加,为0.41±0.05,差异有统计学意义（P〈0.05）。RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组EPOR蛋白的表达量分别为0.39±0.03、0.41±0.03、0.43±0.07、0.44±0.05,明显高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但RD＋PBS组、RD＋EPO100ng组、RD＋EPO200ng组和RD＋EPO400ng组间EPOR蛋白的表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。RD组与RD＋不同剂量EPO组比较EPOR表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。免疫组织化学检测结果证实EPOR蛋白表达于视网膜各层,RD＋不同剂量的EPO处理组EPOR表达均强于正常对照组。结论 RD发生后补充外源性EPO对EPOR的表达并无影响。