体外添加黄芪注射液对人精子膜拮抗脂质过氧化的作用

目的 :观察体外添加黄芪注射液对弱精子症患者精子膜脂质过氧化的拮抗作用。方法 :应用计算机辅助精子分析仪 (CASA)和丙二醛 (MDA)及超氧化物歧化酶 (SOD)检测试剂盒 ,分别分析体外添加黄芪注射液 (A组 )对 30例弱精子症患者精子运动参数的影响 ,检测精子悬液MDA含量及总SOD(TSOD)力 ,并进行相关分析 ,同时设立空白对照组进行对比观察。结果 :A组的精子活率 (Mot)、前向运动精子百分率、曲线速度 (VCL)、平均路径速度 (VAP)和精子头摆幅度 (ALH)较空白对照组显著提高 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;A组精子悬液的MDA含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ,TSOD活力与对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。A组MDA含量与Mot、前向运动精子百分率、VAP和ALH间均有显著性负相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :体外添加黄芪注射液对弱精子症患者精子具有拮抗脂质过氧化作用 ,为临床应用黄芪减少递质对精子的损害提供理论基础。     

少和/或弱精子症患者血浆同型半胱氨酸的测定及意义

目的:检测少精子症和/或弱精子症患者空腹血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平,并探讨其临床意义。方法:86例少精子症和/或弱精子症患者分为3组:少精子症组(n=21),弱精子症组(n=32),少弱精子症组(n=33);对照组(n=19)为精子密度及活力正常的健康男性精液。分别进行精液常规分析和空腹血浆同型半胱氨酸水平测定。结果:3组患者血浆Hcy水平均显著高于健康对照组(P<0.05),3组患者间血浆Hcy水平无显著性差异(P>0.05)。血浆中Hcy水平与3组患者的a级精子百分率、(a+b)级精子百分率及密度之间均呈负相关(r=-0.303、-0.339、-0.433,P<0.05)。结论:人血浆Hcy水平升高可能会直接或间接地影响精子发生,与少和/或弱精子症密切相关。     

精子Tektin-2基因单核苷酸多态性与特发性弱精子症的相关性研究

目的探讨Tektin-2基因的单核苷酸多态性(SNP)位点rs12043423与特发性弱精子症的相关性。方法采用病例对照法,随机选取特发性弱精子症患者192例作为弱精子症组,另募集同期208例精子活力正常的不育男性作为不育症组和213例精液正常的已生育男性作为正常对照组,所有研究对象均进行精液分析,对三组患者Tektin-2基因的SNP位点rs12043423进行基因分型,比较三组间的基因型和等位基因频率,并且进行与特发性弱精子症的关联分析。结果(1)弱精子症组Tektin-2基因的SNP位点rs12043423的CC基因型频率显著低于正常对照组及不育症组,TT基因型频率则显著增加(P<0.05),而CT基因型频率在三组间的分布频率无显著性差异(P>0.05)。弱精子症组C等位基因的分布频率显著低于正常对照组和不育症组,而T等位基因的频率显著高于正常对照组和不育症组(P<0.05)。不育症组和正常对照组比较,不同基因型的分布频率及等位基因的频率在两组间均无显著性差异(P>0.05)。(2)弱精子症组与正常对照组比较,Tektin-2基因突变(杂合子[CT]和纯合子[TT])的发生率为61.5%vs.50.2%,TT基因型与弱精子症的风险因素分析结果为[OR=1.968,95%CI(1.041,3.723),P=0.035];弱精子症与不育症组比较,Tektin-2基因突变(CT+TT)的发生率为61.5%vs.51.5%,TT基因型与弱精子症的风险因素分析结果为[OR=1.918,95%CI(1.014,3.630),P=0.043]。结论Tektin-2基因rs12043423的多态性位点TT基因型和T等位基因增加特发性弱精子症的易感性,在特发性弱精子症的发展中可能是危险因素。     

重组人生长激素应用于特发性弱精子症的临床疗效和安全性观察

目的:观察重组人生长激素治疗特发性弱精子症的临床疗效和安全性。方法:采用随机对照实验设计,按WHO的标准诊断为特发性弱精子症40例患者,随机均分为应用组和对照组。在常规治疗下,应用组加用重组人生长激素,每次4U,隔日晚上皮下注射,对照组不加用重组人生长激素;疗程3个月。治疗前后按WHO标准进行精液分析,同时监测性激素、甲状腺功能、肝肾功能、血脂、血糖等指标。最终应用组18例,对照组18例完成本观察。结果:精子存活率应用组提高了(28.60±32.89)%,对照组提高了(8.42±25.87)%,差异有显著性(P<0.01);(a+b)级精子,应用组提高了(18.56±21.19)%,对照组提高了(8.12±24.34)%,差异有显著性(P<0.05);精子密度、精子总量的改善应用组较对照组差异有显著性(P<0.05)。结论:重组人生长激素对特发性弱精子症有辅助治疗效果、安全性高、能提高精子密度和精子总数。     

刺五加注射液与茶碱、咖啡因体外对精子运动功能影响的比较研究

目的:比较刺五加注射液与茶碱、咖啡因体外对精子运动功能的影响。方法:由12例弱精子症患者通过手淫获得并经上游优化处理的精子分别与一定浓度的刺五加注射液(10g/L)、咖啡因(7mmol/L)和茶碱(3mmol/L)一起孵化0h、1h、3h后,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子的运动参数(精子活动率、前向性运动百分率、直线运动速度、曲线运动速度)。结果:刺五加注射液在体外能显著提高人精子活动率,前向性运动精子百分率,精子直线运动速度和曲线运动速度,其改善精子运动功能优于茶碱和咖啡因,差异均有显著性(P<0.05)。结论:中药刺五加注射液在体外能显著改善人精子的运动功能。     

不同浓度黄芪、丹参、黄体酮注射液对精子内Ca2+作用研究

目的 通过精子体外添加黄芪、丹参、黄体酮注射液,研究其对精子内Ca2+浓度的影响.方法 28例标本采自本院门诊,随机分成:空白组,黄芪组,丹参组和黄体酮组,共4组.各组均加入等量的、各浓度试剂,Flu03-AM被动扩散进入细胞后,被酯酶水解放出Flu03,Flu03与钙离子络合,受波长488 nm的激光激发而产生荧光,其荧光值与Ca2+呈正相关,应用流式细胞仪(FCM)及激光共聚焦(LSCM)测定精子内Ca2+浓度.结果 (1)FCM检测黄体酮、黄芪组精子内Ca2+的荧光强度,分别与丹参、空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明体外添加黄体酮、黄芪注射液可以使精子内Ca2+浓度增加;(2)黄芪组高、中浓度荧光强度明显增强;黄芪组低浓度荧光强度明显较弱,与高、中浓度组比较,有统计学意义(P<0.05):(3)LSCM测定黄芪组、黄体酮组,与丹参组比较差异有统计学意义(P<0.05);丹参组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 黄体酮能促进Ca2+内流和细胞内Ca2+浓度增加;高浓度、中浓度黄芪能促进精子内Ca2+水平的增加,与黄体酮作用效果相同;丹参不能引起精子细胞内Ca2+浓度的改变.     

CATSPER1蛋白与特发性弱精子症关系的研究

目的:探讨CATSPER1蛋白在特发性弱精子症发病中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离精子,免疫细胞化学技术检测CATSPER1蛋白在特发性弱精子症患者精子中的定位及表达变化;同时用蛋白印迹技术检测CATSPER1蛋白在正常对照组及轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中表达的差异,进行统计学分析。结果:CATSPER1蛋白定位于精子鞭毛主段;与正常对照组相比,CATSPER1在弱精子症患者中的表达下降,差异具有显著性(t=2.188,P=0.042);CATSPER1蛋白在正常对照组、轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中的相对含量分别为(0.806±0.266)、(0.669±0.207)、(0.505±0.214)、(0.295±0.162),与对照组相比,CATSPER1蛋白相对表达量在各弱精子症组均存在不同程度的下降,差异存在显著性(P<0.05)。前向运动精子(a+b级)百分率与CATSPER1蛋白的含量成正相关(r=0.633,P=0.000)。结论:CATSPER1蛋白表达下降或异常可能是导致特发性弱精子症发生的一个环节。     

石萆汤通过调节线粒体膜蛋白PHB保护线粒体膜电位增强精子功能的探究

目的通过对90例男性不育弱精子症患者及30例正常男性进行分组处理观察石萆汤治疗弱精子症的可能靶点,探究石萆汤治疗肾虚夹湿型弱精子症的分子生物学机制。方法选择2016年8月～2018年6月在福建中医药大学附属人民医院男科门诊就诊的男性不育弱精子症患者和生殖体检者共120例,其中30例正常组与30例弱精子症组患者暂时未接受治疗,60例治疗组患者给予石萆汤治疗16周。治疗前后采用Western blot检测患者精子线粒体膜蛋白PHB及JC-1流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果由Western blot结果,我们可以看到弱精子症组的患者精子线粒体膜蛋白PHB表达量明显低于正常组(P0.05);在给予石萆汤治疗16周后,治疗组患者精子线粒体膜蛋白PHB蛋白表达量显著高于弱精子症组(P0.05)。通过对3组患者精子JC-1染色后进行流式细胞仪检测发现弱精子症组患者精子线粒体膜电位(红色荧光散点)与正常组和治疗组相比偏向下移,提示弱精子组患者精子症线粒体膜电位降低。而经过石萆汤治疗16周后流式红色荧光散点上移差异具有统计学意义(P0.05)。结论石萆汤治疗肾虚夹湿型弱精子症可能是通过调控精子线粒体膜蛋白PHB表达进而改变精子线粒体膜电位,最终提高精子活力,增强精子功能,值得在今后临床中应用,同时线粒体膜蛋白PHB可对精子功能进行衡量,可在今后的临床检验中进行检测反映精子功能与状态。     

补肾解毒汤治疗死精子症60例疗效观察

目的:观察补肾解毒汤治疗死精子症的临床疗效。方法:将120例患者随机分为2组,治疗组60例用补肾解毒汤治疗,对照组给予维生素E治疗,2组均治疗1个月为1个疗程,连续治疗3个疗程后进行疗效判定。结果:精子活力治疗组前后比较,差异具有显著性(P<0.05),对照组治疗前后比较,差异无显著性意义(P>0.05)。2组治疗后精子活力比较,差异具有显著性意义(P<0.05),2组总有效率比较,差异具有显著性意义(P<0.05),治疗组优于对照组。结论:补肾解毒汤能显著地提高精子活力,对男性不育有较好的疗效。     

重组人睾丸精子结合蛋白对人精子运动参数的影响

目的:探讨重组人睾丸精子结合蛋白(TSBP)对体外培养人精子运动参数的影响。方法:将22例生育男性的精液经Percoll密度梯度离心后,分别与0.01mg/ml及0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外共同孵育1h或3h,同时设立对照组,Western印迹检测重组His6-TSBP与精子膜的结合情况,计算机辅助精液分析(CASA)系统测定重组His6-TSBP对精子运动参数的影响。将12例弱精子症患者的精液按同样方法处理,检测重组His6-TSBP对弱精子症患者精子运动参数的影响。结果:0.1mg/ml重组His6-TSBP与生育男性精子作用1h可以提高体外培养精子的前向运动百分率(a+b级精子百分率),培养3h后前向运动百分率和活率均有所提高,差异具有显著性(P<0.05);0.01mg/ml重组His6-TSBP对检测各指标均无显著性影响。0.1mg/ml重组His6-TSBP与弱精子症患者精子作用3h可以提高精子前向运动百分率(P<0.05),但对活率无显著影响。结论:0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外可以提高生育男性精子的前向运动百分率和活率及弱精子症患者精子的前向运动百分率。     

Effects of several Chinese herbal aqueous extracts on human sperm motility in vitro

The effects of six kinds of aqueous extracts of Chinese herbal medicine (Astragalus membranaceus, Acanthopanacis senticosi, Panax genseng and Ophiopogon japonicus, P. genseng and Aconitum carmichaeli, Salviae miltiorrhiae, Polyporus umbellatus polysaccharide) on sperm motility characteristics of 30 infertile male volunteers were studied in vitro with a computer-assisted sperm analysis at 15, 60 and 180 min after incubated with the drugs. The results showed that per cent viability, number of progressive motile spermatozoa, curvilinear velocity, average path velocity and amplitude of lateral head displacement were significantly enhanced by A. membranaceus (P < 0.05 or < 0.01), per cent viability, average path velocity and amplitude of lateral head displacement were significantly enhanced by A. senticosi (P < 0.05), but all the above were not affected by P. genseng and O. japonicus, P. genseng and A. carmichaeli, S. miltiorrhiae and P. umbellatus polysaccharide. It is suggested that A. membranaceus and A. senticosi can enhance the motility of human spermatozoa in vitro.     

黄芪注射液对镉诱导大鼠精子畸形的拮抗作用

目的 :观察黄芪注射液拮抗氯化镉诱导的大鼠精子畸形作用。　方法 :将 30只SD雄性大鼠随机分成 5组 :低浓度黄芪组 (A1)、高浓度黄芪组 (A2 )、环磷酰胺组 (CP)、氯化镉组 (Cd)和对照组 (C)。预先连续 7d分别给A1组和A2 组大鼠腹腔黄芪注射液 5g/ (kg·d)和 10g/ (kg·d) ,Cd组和CP组大鼠分别腹腔注射等量蒸馏水作对照 ,之后连续 2 1dA1组、A2 组和Cd组大鼠分别同时腹腔注射氯化镉溶液 [0 .2mg/ (kg·d) ]。CP组大鼠给予 5 0mg/ (kg·d)腹腔注射染镉后第 2 2d处死大鼠 ,观察睾丸脏器系数、精子头计数、每日精子生成量、附睾尾精子计数和畸形率以及睾丸和附睾病理学。　结果 :A2 组睾丸脏器系数、睾丸精子头计数、每日精子生成量和附睾精子计数 [(5 .6 8±1.19)、(4 9.0 1± 8.78)× 10 6/g、(10 .2 5± 2 .30 )× 10 6/ (g·d)、(4 7.5 1± 2 2 .5 1)× 10 6/ml]明显高于Cd组 [(3.11± 0 .16 )、(37.5 9± 10 .6 3)× 10 6/g、(5 .31± 0 .32 )× 10 6/ (g·d)、(10 .89± 2 .4 5 )× 10 6/ml](P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;A2 组大鼠精子畸形率 [(7.0 4± 0 .12 ) % ]明显下降 ,与Cd组 [(17.81± 1.5 5 ) % ]相比 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。　结论 :黄芪注射液可拮抗氯化镉对生殖系统的损害作用 ,对防护     

体外rhTNF-a对人精子运动、线粒体功能影响的实验研究

~~体外rhTNF-α对人精子运动、线粒体功能影响的实验研究@边疆$三峡大学医学院男科学研究所!湖北宜昌443003 @郭贤坤$三峡大学医学院男科学研究所!湖北宜昌443003 @熊承良$华中科技大学同济医学院计划生育研究所!湖北武汉430030 @黎家华$三峡大学医学院病理学教研室!湖北宜昌443003 @田永红$华中科技大学同济医学院计划生育研究所!湖北武汉430030 @马华刚$华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心!湖北武汉430030 @张燕$三峡大学医学院男科学研究所!湖北宜昌443003 @聂勇$三峡大学医学院男科学研究所!湖北宜…     

人精子体外氧化损伤对线粒体tRNA~(LeuUUR)基因的影响

目的:探讨活性氧(ROS)对人类精子线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。方法:采用Percoll梯度离心法筛选具有正常生理功能的精子,作为正常精子模型,并分为损伤组20例和对照组20例,分别加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系或不予处理,37℃有氧环境中孵育60min。分别提取精子DNA,以Fpg酶切损伤碱基并采用接头介导PCR(LM-PCR)检测线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。采用Rhodamine(Rh123)荧光探针标记精子,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位,观察精子的功能。结果:与对照组相比,损伤组精子孵育后线粒体膜电位明显降低[(116.27±11.72)%vs(64.00±4.88)%,P<0.05]。Fpg酶切和LM-PCR显示精子线粒体tRNALeuUUR基因损伤。结论:ROS可能通过对精子线粒体tRNALeuUUR基因氧化损伤而影响精子功能(线粒体膜电位明显降低),从而引起不育。     

罗丹明/碘化吡啶双染法检测精子线粒体膜功能的研究

目的:探讨罗丹明/碘化吡啶(Rh123/PI)双染法检测精子线粒体膜功能的可行性及临床意义。方法:收集63例精液标本,按WHO精液分析标准分成正常组(n=31)与异常组(n=32)。精子用Rh123/PI染色,流式细胞仪(FCM)分析。结果:正常组与异常组精子Rh123+PI-、Rh123-/PI+、Rh123-/PI-百分率均存在统计学差异(P均<0.05);Rh123+PI-与精子活动率呈正相关(r=0.549,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈正相关(r=0.531,P=0.000),与d级精子百分率呈负相关(r=-0.586,P=0.000);Rh123-/PI+与精子活率负相关(r=-0.586,P=0.000),与(a+b)级精子百分率负相关(r=-0.594,P=0.000),与d级百分率精子正相关(r=0.585,P=0.000),Rh123-/PI-仅与异常组的密度有相关性(r=-0.563,P=0.001)。结论:运用Rh123/PI双染法鉴定精子的线粒体膜功能具有可行性,可用于评估男性生育力。     

褪黑素在活性氧致精子线粒体功能损伤中的保护作用

目的 :探讨活性氧 (ROS)对精子线粒体功能的损伤以及褪黑素 (MLT)的保护作用。　方法 :采用Percoll梯度离心法选择具有正常生理功能的精子 ,作为本实验的正常精子模型。应用次黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶体系产生ROS ,在MLT存在与不存在情况下 ,与精子模型分别孵育 30和 6 0min后 ,采用酶组织化学方法分析精子线粒体部位的琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性 ,采用Rhodamine 1 2 3(Rh1 2 3)荧光探针标记精子 ,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位。　结果 :正常精子与ROS孵育后 ,精子线粒体膜电位明显降低 ,线粒体SDH活力降低极为显著 ;而MLT则减轻了ROS对精子线粒体功能的损伤。　结论 :ROS可通过对精子线粒体膜电位和SDH活力的影响 ,而导致精子线粒体功能损伤 ;MLT可通过其有效的抗氧化能力 ,保护精子对抗ROS对其线粒体功能的损伤     

Protection of melatonin against damage of sperm mito-chondrial function induced by reactive oxygen species

Aim: To study the mitochondrial function damage of sperm in-duced by reactive oxygen species (ROS) and the protection of melatonin (MLT) against the damage. Methods: Normal function spermatozoa were selected from semen samples by Percoll gradi-ent centrifugation technique. The ROS generated by the hypoxan-thine xanthine oxidase system was incubated with the normal sper-matozoa in the presence or absence of MLT (6 retool/L) for 30 and 60 minutes.     

金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌体外对人精子运动功能的影响

目的 :研究金黄色葡萄球菌 (SA)和表皮葡萄球菌 (SE)体外对人精子的运动功能有无直接影响。　方法 :将泌尿生殖系感染病人中分离培养的SA和SE制成活菌悬液 ,体外与 10例健康成年男性手淫获得并经上游优化处理的精子孵育。按细菌 /精子比 5 0∶1分别孵育 0、2、4h后 ,采用计算机辅助的精子分析系统检测人精子活率、运动参数 (前向性运动百分率、直线速度、曲线速度、平均路径速度 )和精子形态及凝集情况。　结果 :SA与精子体外孵育 2、4h后 ,精子活率和运动参数明显降低 (P <0 .0 5 )。SE体外对精子的活率和运动功能则无明显影响。　结论 :SA与精子的比例为 5 0∶1,体外孵育 2h后 ,能显著降低精子活率和抑制精子运动功能。SE对精子运动功能无直接影响。     

黄芪对高能冲击波致肾损伤保护性作用的实验研究

目的　探讨黄芪对高能冲击波致肾损伤的保护作用及可能机理。　方法　将 4 5只家兔随机分为 3组 :黄芪组、异搏定对照组和生理盐水假治疗组 ,行高能冲击波前 3d分别静脉注射黄芪注射液 2 .4g/kg、异搏定 0 .4mg/kg、生理盐水 2 0ml,观察家兔血、肾组织匀浆中损伤相关因子 (ET 1、MDA)和损伤保护相关因子 (SOD)及肾组织细胞情况。　结果　冲击后异搏定组和黄芪组血和组织匀浆中ET 1、MDA升高幅度均显著低于假治疗组 (P均 <0 .0 5 ) ,且 1周恢复正常水平 ;黄芪组血和组织匀浆中MDA值冲击后并无明显升高 (P >0 .0 5 ) ,肾组织匀浆ET 1值亦无明显升高 (P =0 .132 )。冲击后异搏定组和黄芪组SOD值降低幅度显著小于假治疗组 (P均 <0 .0 5 ) ,且黄芪组血中该低谷值提前至 2 4h。肾组织细胞学观察异搏定组损伤明显轻于假治疗组 ,而黄芪组较异搏定组更轻、恢复更快。　结论　黄芪对高能冲击波致肾损伤具有保护作用。